《沙門氏菌培訓》PPT課件

1、（Salmonella）1;.簡介簡介 沙門氏菌病是公共衛(wèi)生學上具有重要意義的人畜共患病之一。沙門氏菌病是公共衛(wèi)生學上具有重要意義的人畜共患病之一。 其病原沙門氏菌屬腸道細菌科，包括引起食物中毒，導致胃腸炎、其病原沙門氏菌屬腸道細菌科，包括引起食物中毒，導致胃腸炎、傷寒和副傷寒的細菌。傷寒和副傷寒的細菌。 除可感染人外，還可感染很多動物包括哺乳類、鳥、爬行類、魚、除可感染人外，還可感染很多動物包括哺乳類、鳥、爬行類、魚、兩棲類及昆蟲。兩棲類及昆蟲。2;.特性 沙門氏菌革蘭氏陰性、兩端鈍圓的短桿菌（比大腸桿菌細）。（沙門氏菌革蘭氏陰性、兩端鈍圓的短桿菌（比大腸桿菌細）。（0. 0.7 71.5m

2、1.5m）（2 25m5m）散在。）散在。 無莢膜和芽孢，都具有周身鞭毛（除雞白痢沙門氏菌、雞傷寒沙門無莢膜和芽孢，都具有周身鞭毛（除雞白痢沙門氏菌、雞傷寒沙門氏菌外），能運動，大多數(shù)具有菌毛，能吸附于宿主細胞表面或凝集豚氏菌外），能運動，大多數(shù)具有菌毛，能吸附于宿主細胞表面或凝集豚鼠紅細胞。鼠紅細胞。3;.培養(yǎng)特性 A A 需氧及兼性厭氧菌。需氧及兼性厭氧菌。 B B 在普通瓊脂培養(yǎng)基上生長良好，培養(yǎng)在普通瓊脂培養(yǎng)基上生長良好，培養(yǎng)24h24h后，形成中等大小、圓形、表后，形成中等大小、圓形、表面光滑、無色半透明、邊緣整齊的菌落，其菌落特征亦與大腸桿菌相似（無面光滑、無色半透明、邊緣整齊的菌

3、落，其菌落特征亦與大腸桿菌相似（無糞臭味）。糞臭味）。 C C 鑒別培養(yǎng)基（麥康凱、鑒別培養(yǎng)基（麥康凱、SSSS、伊紅美藍）：一般無色菌落。、伊紅美藍）：一般無色菌落。 D D 三糖鐵瓊脂斜面：斜面為紅色，底部變黑并產(chǎn)氣。三糖鐵瓊脂斜面：斜面為紅色，底部變黑并產(chǎn)氣。 4;.生化特性1 1）發(fā)酵葡萄糖，麥芽糖，甘露醇和山梨醇產(chǎn)氣。）發(fā)酵葡萄糖，麥芽糖，甘露醇和山梨醇產(chǎn)氣。2 2）不發(fā)酵乳糖、蔗糖和側(cè)金盞花醇。）不發(fā)酵乳糖、蔗糖和側(cè)金盞花醇。3 3）不產(chǎn)吲哚、）不產(chǎn)吲哚、V-PV-P反應陰性。反應陰性。4 4）不水解尿素和對苯丙氨酸不脫氨。）不水解尿素和對苯丙氨酸不脫氨。 傷寒沙門氏菌、雞傷寒沙門

4、氏菌及一部分雞白痢沙門氏菌發(fā)酵糖不產(chǎn)氣，傷寒沙門氏菌、雞傷寒沙門氏菌及一部分雞白痢沙門氏菌發(fā)酵糖不產(chǎn)氣，大多數(shù)雞白痢沙門氏菌不發(fā)酵麥芽糖。大多數(shù)雞白痢沙門氏菌不發(fā)酵麥芽糖。5;.血清學特性 沙門氏菌具有復雜的抗原結(jié)構(gòu)。沙門氏菌具有復雜的抗原結(jié)構(gòu)。 一般沙門氏菌具有菌體一般沙門氏菌具有菌體( (O)O)抗原、鞭毛抗原、鞭毛( (H)H)抗原和表面抗原抗原和表面抗原(Vi(Vi莢膜或包莢膜或包膜抗原膜抗原) )三種抗原。三種抗原。6;.傳播途徑傳播途徑 肉的污染肉的污染 肉及其制品的沙門氏菌檢出率美國為肉及其制品的沙門氏菌檢出率美國為20%25%20%25%、英國為、英國為9.9%9.9%、日本檢

5、查進口、日本檢查進口家禽的污染率為家禽的污染率為10.3%10.3%，國內(nèi)肉類沙門氏菌檢出率在，國內(nèi)肉類沙門氏菌檢出率在1.1%39.5%1.1%39.5%。 蛋的污染蛋的污染 蛋及其制品沙門氏菌檢出率為蛋及其制品沙門氏菌檢出率為3.9%-43.7%3.9%-43.7%，由于吃蛋引起鼠傷寒病的病例報告，由于吃蛋引起鼠傷寒病的病例報告逐漸有增加的趨勢。逐漸有增加的趨勢。 環(huán)境污染環(huán)境污染 食品在加工、運輸、出售過程中往往被沙門氏菌污染。沙門氏菌在糞便、土食品在加工、運輸、出售過程中往往被沙門氏菌污染。沙門氏菌在糞便、土壤、食品、水中可生存壤、食品、水中可生存5 5個月至個月至2 2年之久。年之久

6、。 傳播問題傳播問題 恢復期患者和無癥狀的帶菌者也是常見的傳染源?；謴推诨颊吆蜔o癥狀的帶菌者也是常見的傳染源。7;.沙門氏菌檢測標準 GB 4789.4-20108;.增菌和選擇性培養(yǎng)增菌和選擇性培養(yǎng)9;.25g樣品225ml BPW36 818h培養(yǎng)1ml BPW增菌液+10ml SCTTB增菌液在42、SC增菌液在36各培養(yǎng)1824小時1ml BPW增菌液+10ml TTB分別從TTBTTB和SCSC增菌液中取1環(huán)，接種到BS和HE瓊脂上培養(yǎng)BS瓊脂在36培養(yǎng)4048小時HE瓊脂在36培養(yǎng)1824小時分別從BS和HE瓊脂上挑選可以菌落進行TSI初步生化鑒定10;.可疑菌落判定可疑菌落判定H

7、E瓊瓊脂脂BS瓊瓊脂脂XLD瓊脂瓊脂科瑪嘉顯色瓊脂科瑪嘉顯色瓊脂陰性陰性科瑪嘉顯色瓊脂科瑪嘉顯色瓊脂陽性陽性11;.生化試驗生化試驗1、先從BS、HE或XLD或顯色培養(yǎng)基上挑取可疑菌落。2、接種至TSI，先在斜面上劃線，然后再底層穿刺。4、將TSI和NA至于 36，1824h培養(yǎng)3、將接種TSI完畢的接種針不要滅菌，直接在營養(yǎng)瓊脂平板上劃線。12;.根據(jù)上表中可理解為只有在斜面和底層產(chǎn)堿、不產(chǎn)H2S、不產(chǎn)氣的情況下可不進行生化鑒定，直接判定為非沙門氏菌，其余任何情況均需進行生化鑒定。TSI鑒定13;.三糖鐵生化試驗三糖鐵生化試驗底層產(chǎn)H2S底層產(chǎn)酸斜面產(chǎn)堿斜面底層產(chǎn)酸產(chǎn)堿底層產(chǎn)酸斜面產(chǎn)堿底層產(chǎn)

8、H2S產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)H2S只在只在TSITSI產(chǎn)堿的情況下產(chǎn)堿的情況下可判定無沙門氏菌，可判定無沙門氏菌，其余任何情況均需進其余任何情況均需進行生化鑒定行生化鑒定14;.生化試驗生化試驗1、準備一只、準備一只2ml無菌生理鹽水試管、酒精燈、接種環(huán)、生化鑒定套裝無菌生理鹽水試管、酒精燈、接種環(huán)、生化鑒定套裝 。2、從營養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑菌落，接種至生理鹽水中，制成、從營養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑菌落，接種至生理鹽水中，制成0.5個個麥氏濁度。麥氏濁度。3、依次在各個安瓿（、依次在各個安瓿（bu）瓶中滴加菌懸液）瓶中滴加菌懸液3滴。滴。4、在賴氨酸脫羧酶肉湯及對照和氰化鉀及對照中個滴加無菌石蠟覆、

9、在賴氨酸脫羧酶肉湯及對照和氰化鉀及對照中個滴加無菌石蠟覆蓋。蓋。5、在、在36培養(yǎng)培養(yǎng)1824h。15;.菌懸液制備菌懸液制備ORORO.5個麥氏濁個麥氏濁度的菌懸液度的菌懸液依次在每個安瓿依次在每個安瓿瓶中滴加菌懸液瓶中滴加菌懸液23滴。滴。第一步第一步第二步第二步第三步第三步16;.生化試驗準備生化試驗準備色色氨氨酸酸肉肉湯湯賴賴氨氨酸酸脫脫羧羧酶酶肉肉湯湯氨氨基基酸酸脫脫羧羧酶酶肉肉湯湯尿尿素素酶酶氰氰化化鉀鉀培培養(yǎng)養(yǎng)基基氰氰化化鉀鉀培培養(yǎng)養(yǎng)基基對對照照甘甘露露醇醇山山梨梨醇醇半半乳乳糖糖苷苷17;.色氨酸色氨酸肉湯經(jīng)肉湯經(jīng)36，1824h培養(yǎng)后培養(yǎng)后滴加靛滴加靛基質(zhì)試基質(zhì)試劑，片劑，片

10、刻觀察刻觀察結(jié)果結(jié)果陽性為陽性為玫瑰紅玫瑰紅色。色。色氨酸色氨酸脫羧酶脫羧酶及對照及對照和氰化和氰化鉀及對鉀及對照轉(zhuǎn)種照轉(zhuǎn)種結(jié)束后結(jié)束后需滴加需滴加液體石液體石蠟覆蓋蠟覆蓋試驗管試驗管方可進方可進行培養(yǎng)。行培養(yǎng)。靛基靛基質(zhì)試質(zhì)試驗驗+時補時補做甘做甘露醇露醇山梨山梨醇試醇試驗，驗，試驗試驗陽性陽性后進后進行血行血清學清學鑒定鑒定TSI-時，時，進行進行ONPG試驗，試驗，ONPG陰陰性時性時進行進行血清血清學鑒學鑒定。定。H2S+、靛基質(zhì)、靛基質(zhì)- 、尿素、尿素-、KCN-、賴氨酸賴氨酸+后進行血清學鑒定。后進行血清學鑒定。生化試驗18;.色色氨氨酸酸吲吲哚哚試試驗驗陰陰性性符符合合賴賴氨氨酸

11、酸陽陽性性對對照照陰陰性性0NPG陰陰性性尿尿素素酶酶陰陰性性KCN及及對對照照陰陰性性甘甘露露醇醇山山梨梨醇醇陽陽性性符符合合符符合合符符合合符符合合符符合合血清學鑒定血清學鑒定19;.沙門氏菌的分類沙門氏菌屬分為兩個種：腸道沙門氏菌(種) 腸道亞種、薩拉姆亞種、亞利桑那亞種、雙相亞利桑那沙門氏菌、 豪頓沙門氏菌及因迪卡沙門氏菌 (6個亞種)邦戈爾沙門氏菌(種)20;.沙門氏菌的分類及命名沙門氏菌的分類及命名 -沙門氏菌的分類、命名沙門氏菌的分類、命名21;.沙門氏菌 抗原22;.O抗原抗原 也稱菌體抗原，是細胞壁的組成成分Vi抗原抗原 是一種特殊的菌體抗原，屬于K抗原群（如傷寒沙門氏菌、丙

12、型副傷寒沙門氏菌和都柏林沙門氏菌都含有Vi抗原）H抗原（即鞭毛抗原）抗原（即鞭毛抗原） H抗原與抗血清的反應成絮狀或絨狀。 大部分沙門氏菌H抗原都具有兩相。 第一相被稱為特異性相，第二相為非特異性相。O、H、Vi抗原抗原23;.vi抗原抗原 因與毒力有關而命名為因與毒力有關而命名為vi vi抗原?？乖?。 由聚由聚-n-n-乙酰乙酰-d-d-半乳糖胺糖醛酸組成。半乳糖胺糖醛酸組成。 不穩(wěn)定，經(jīng)不穩(wěn)定，經(jīng)6060加熱、石碳酸處理或人工傳代培養(yǎng)易破壞或丟失。加熱、石碳酸處理或人工傳代培養(yǎng)易破壞或丟失。 Vi Vi抗原存在于細菌表面，可阻止抗原存在于細菌表面，可阻止o o抗原與其相應抗體的反應?？乖c

13、其相應抗體的反應。vi vi抗抗原的抗原性弱。當體內(nèi)菌存在時可產(chǎn)生一定量抗體；細菌被清除后，原的抗原性弱。當體內(nèi)菌存在時可產(chǎn)生一定量抗體；細菌被清除后，抗體也隨之消失?？贵w也隨之消失。 故測定故測定vi vi抗體有助于對傷寒帶菌者的檢出?？贵w有助于對傷寒帶菌者的檢出。 新從患者標本中分離出的傷寒桿菌、丙型副傷寒桿菌等有此抗原。新從患者標本中分離出的傷寒桿菌、丙型副傷寒桿菌等有此抗原。24;.O抗原抗原 為脂多糖，性質(zhì)穩(wěn)定。為脂多糖，性質(zhì)穩(wěn)定。 比較耐熱，比較耐熱，100100不被破壞，也不易被酒精破壞；不被破壞，也不易被酒精破壞； O O抗原以阿拉伯數(shù)字表示，從抗原以阿拉伯數(shù)字表示，從1 1排

14、到排到6767，但刪去了，但刪去了9 9個抗原，現(xiàn)個抗原，現(xiàn)在有在有5858個抗原；個抗原； 凡含有群特異性共同抗原的菌型歸類為一個凡含有群特異性共同抗原的菌型歸類為一個O O群，以主要抗原群，以主要抗原來表示，某些次要抗原可以出現(xiàn)在多個群中。來表示，某些次要抗原可以出現(xiàn)在多個群中。25;.- -H H抗原抗原 H H抗原存在于鞭毛之中，為蛋白質(zhì)。抗原存在于鞭毛之中，為蛋白質(zhì)。 由肽鏈中氨基酸的排列順序及空間構(gòu)型決定其特異性。由肽鏈中氨基酸的排列順序及空間構(gòu)型決定其特異性。 不耐熱，經(jīng)加熱和用乙醇及堿處理易變性。不耐熱，經(jīng)加熱和用乙醇及堿處理易變性。 H H抗原常有兩相的變異?？乖Ｓ袃上嗟淖?/p>

15、異。 第一相為特異相，用小寫英文字母表示，如：第一相為特異相，用小寫英文字母表示，如：a a、b b、I I、e e、h h等。等。 第二相為非特異相，用阿拉伯數(shù)字表示，如：第二相為非特異相，用阿拉伯數(shù)字表示，如：1 1、2 2、5 5等。等。 但也有少數(shù)菌含有第一相中的抗原但也有少數(shù)菌含有第一相中的抗原e e、n n、x x等成分。等成分。26;.AF群群對應的對應的O價抗原價抗原27;. 沙門氏菌抗原表中符號意義：沙門氏菌抗原表中符號意義： _ 指溶原狀態(tài)下指溶原狀態(tài)下O O因子可以并存，和平共處。因子可以并存，和平共處。 指指O O因子不相容，只能有一種。因子不相容，只能有一種。 指指O

16、 O或或H H因子有存在或不存在的可能性因子有存在或不存在的可能性。28;.O10、O15、O15，O34價抗原不相容只存在一種。價抗原不相容只存在一種。都柏林沙門氏菌存在或都柏林沙門氏菌存在或不存在表面不存在表面Vi抗原?？乖Ｎ骱财疹D沙門氏菌、都柏林沙門氏菌屬于單相菌，單相菌，H抗原只存在第一項?？乖淮嬖诘谝豁?。H抗原第二項抗原第二項H1和和H2價價抗原抗原存在或不存在存在或不存在O1價抗原與其他抗原和價抗原與其他抗原和平共處，平共處，O5、O27價抗原價抗原存在或不存在。存在或不存在。29;.沙門氏菌菌型的表示方法血清型以數(shù)字和字母表示. 例如:查考夫曼-懷特沙門氏菌屬抗原表. 鼠鼠傷

17、寒沙門氏菌傷寒沙門氏菌: O O抗（抗（1 1，4 4，55，1212），）， 第第相相H H抗原（抗原（i i） 第第相相H H抗原抗原( 1,2( 1,2) )。 它的血清型應表示為:鼠傷寒沙門氏菌鼠傷寒沙門氏菌（ 1 1，4 4，55，1212：i i：1 1，2 2）30;.沙門氏菌的判定原則采用血清學的方法,按照考夫曼-懷特沙門氏菌屬抗原表解判定菌型.31;.考夫曼-懷特沙門氏菌屬抗原表 內(nèi)的O抗原可能存在或不存在。 內(nèi)的H抗原可能是罕見的，正常情況下一般不存在。菌名菌名原名原名O抗原抗原H抗原抗原第第1相相第第2相相基桑加尼沙門氏基桑加尼沙門氏菌菌S. kisangani1,4,5

18、,12a1,2維也納沙門氏菌維也納沙門氏菌S. wien1,4.12,27b1,w埃森沙門氏菌埃森沙門氏菌S. essen4,12g, m-金斯敦沙門氏菌金斯敦沙門氏菌S. kingston1,4,5,12,27g, s, t1,2鼠傷寒沙門氏菌鼠傷寒沙門氏菌S. typhimurium1,4,5,12i1,2印地安納沙門氏印地安納沙門氏菌菌S. indiana1,4,12z1,732;.沙門氏菌的血清鑒定的方法用O、H 和Vi因子血清與待檢的菌株作玻片凝聚試驗。1. 1.先用先用O O因子血清確定菌株所屬的因子血清確定菌株所屬的 O O群及群及O O抗原的各種成分。抗原的各種成分。2. 2.

19、再用再用H H因子血清檢查其第因子血清檢查其第1 1相和第相和第2 2相的相的H H抗原以確定血清型?？乖源_定血清型。3. 3.必要時還要用必要時還要用ViVi血清檢查血清檢查( (目前有目前有3 3種種) )。33;.1. . 先用先用AFAF多價多價O O血清檢查，確定菌株是否在血清檢查，確定菌株是否在AFAF六個六個O O群的范圍內(nèi)。群的范圍內(nèi)。2. 2. 再用代表六個再用代表六個O O群的群的O O因子血清檢查，即因子血清檢查，即O2O2（A A）、）、O4O4（B B）、）、O7O7（C1C1）、）、O8O8（C2C2）、）、O9O9（D D）、）、O3O3，1010（E E）、）

20、、O11O11（F F）。）。3. 3. 確定確定O O群之后，分別用群之后，分別用HA(aHA(a、b b、c c、d d、i i、z10z10、z29z29）HBHB、HCHC、HDHD四種多價四種多價H H血清檢查。血清檢查。4. 4. 用用3.3.所確定的多價所確定的多價H H血清所包括的所有血清所包括的所有H H因子血清逐一檢查定為第因子血清逐一檢查定為第1 1相或第相或第2 2相相H H抗原?？乖?。5. 5. 檢出檢出第第1 1相相H H抗原而未檢出第抗原而未檢出第2 2相相H H抗原，或抗原，或檢出檢出第第2 2相相H H抗原而未檢出第抗原而未檢出第1 1相相H H抗原的，要用位

21、抗原的，要用位相變異的方法再檢查其另一個相。單相菌不必作位相變異檢查。相變異的方法再檢查其另一個相。單相菌不必作位相變異檢查。6. 6. 綜合綜合O O和和H H因子血清以及因子血清以及ViVi因子血清的檢查結(jié)果，按照考夫曼因子血清的檢查結(jié)果，按照考夫曼- -懷特沙門氏菌屬抗原表解判定懷特沙門氏菌屬抗原表解判定沙門氏菌的菌型。沙門氏菌的菌型。沙門氏菌的血清型鑒定步驟34;.位相變異的解釋將一個雙相沙門氏菌的菌株在瓊脂平板上劃線分離，所得的菌落中，有的有第將一個雙相沙門氏菌的菌株在瓊脂平板上劃線分離，所得的菌落中，有的有第1 1相相H H抗原，有的則有第抗原，有的則有第2 2相相H H抗原。若任

22、意挑取一個菌落在培養(yǎng)基上多次傳代，其后代又抗原。若任意挑取一個菌落在培養(yǎng)基上多次傳代，其后代又可出現(xiàn)部分是第可出現(xiàn)部分是第1 1相而另一部分是第相而另一部分是第2 2相的菌落。這種兩個相的相的菌落。這種兩個相的H H抗原可以交相產(chǎn)生抗原可以交相產(chǎn)生的現(xiàn)象稱為位相變異。的現(xiàn)象稱為位相變異。雙相菌初次分離時，單個菌落的純培養(yǎng)往往只有一個相雙相菌初次分離時，單個菌落的純培養(yǎng)往往只有一個相H H抗原，鑒別時常只能檢出抗原，鑒別時常只能檢出一個相，而測不出另一相。此時，可用已知相血清誘導的位相變異試驗來獲得未知一個相，而測不出另一相。此時，可用已知相血清誘導的位相變異試驗來獲得未知的另一個相的另一個相H H抗原。抗原。 35;.位相變異試驗的方法簡易平板法1. 1.配制配制0.70.8%0.70.8%的半固體瓊脂的半固體瓊脂培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。2. 2.在平板內(nèi)滴上一滴已知的第