液相色譜分析概論

1、12講 課 提 綱3第一章 色譜基礎(chǔ)45678正相分配色譜反相分配色譜9按分離過(guò)程物理化學(xué)原理分類(lèi)的各種液相色譜法的比較10液相色譜與氣相色譜的比較液相色譜與氣相色譜的比較11四、高效液相色譜法的特點(diǎn)1213續(xù)前14二、定性參數(shù)15RtRR0ttt1617四、分離參數(shù)2121RRRR12122()()/2ttttRW WW W（一）分離度（resolution,R)1.分離度定義與含義182.基本分離方程式221() ()41knRkabca柱效項(xiàng)b-柱選擇項(xiàng)c柱容量項(xiàng)1920smmkm21（一）影響板高因素的討論22二、液相色譜法速率理論23討論：243.傳質(zhì)阻抗系數(shù)254.傳質(zhì)阻抗對(duì)板高的

2、影響2(/)mmpmCCdD流動(dòng)相的傳質(zhì)阻抗系數(shù)：2(/)msmpmCCdD靜止流動(dòng)相傳質(zhì)阻抗系數(shù)：pmmsmdDCC減小 ，增大，則降低及以提高柱效。2627（二）柱外效應(yīng)2222總柱內(nèi)柱外其他2HL溶質(zhì)分子通過(guò)色譜柱，所產(chǎn)生的離散程度與柱長(zhǎng)成正比：2822222()/edmsmsHL速率理論方程式中的板高（柱內(nèi)展寬的板高）：2. 柱外峰展寬（柱外效應(yīng)，外）222222柱外進(jìn)樣器連接管接頭檢測(cè)池其他29一、影響分離的因素一、影響分離的因素 （factors influenced separation）302. 流速流速3. 固定相及分離柱固定相及分離柱 氣相色譜中的固定液原則上都可以用于液相

3、色譜，其選用原則與氣相色譜一樣。但在高效液相色譜中，分離柱的制備是一項(xiàng)技術(shù)要求非常高的工作，一般很少自行制備。31第二章 HPLC儀器的簡(jiǎn)介及工作原理32第一節(jié) 高效液相色譜儀33HPLC結(jié)構(gòu): 輸液系統(tǒng)輸液系統(tǒng); 進(jìn)樣系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng); 分離系統(tǒng)分離系統(tǒng); 檢檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)系統(tǒng); 梯度洗脫裝置梯度洗脫裝置; 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)34第二節(jié) 系統(tǒng)介紹35第二節(jié) 系統(tǒng)介紹36泵圖37第二節(jié) 系統(tǒng)介紹38第二節(jié) 系統(tǒng)介紹39進(jìn)樣系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)40使用手動(dòng)進(jìn)樣器是要注意以下事項(xiàng)：v進(jìn)樣針：應(yīng)選用液相專(zhuān)用的平頭針。v進(jìn)樣量：要么小于定量環(huán)體積的一半，要么滿刻度進(jìn)樣（需要推進(jìn)35倍定量環(huán)體積的樣品）v進(jìn)樣動(dòng)作

4、：在Load狀態(tài)下動(dòng)作要平緩，以防樣品沖出。進(jìn)樣后先切換到Inject狀態(tài)再拔針，以防倒吸或產(chǎn)生氣泡。41v清洗進(jìn)樣口：在Inject狀態(tài)清洗進(jìn)樣口。v廢液口：廢液管的出口應(yīng)于進(jìn)樣口水平，以防樣品倒流泄露或產(chǎn)生虹吸。自動(dòng)進(jìn)樣器： 是由計(jì)算機(jī)自動(dòng)控制定量閥，按預(yù)先編制的操作程序工作。取樣、進(jìn)樣、復(fù)位、樣品管路清洗和樣品盤(pán)的轉(zhuǎn)動(dòng)，全按程序自動(dòng)進(jìn)行。42第二節(jié) 系統(tǒng)介紹43分離部分分離部分44四、檢測(cè)器四、檢測(cè)器45第二節(jié) 系統(tǒng)介紹46檢測(cè)系統(tǒng) 47可變波長(zhǎng)檢測(cè)器示意圖48光電二極管陣列吸光度檢測(cè)器光電二極管陣列吸光度檢測(cè)器49示差折光檢測(cè)器示差折光檢測(cè)器5051熒光檢測(cè)器熒光檢測(cè)器52d. 熒光檢

5、測(cè)器熒光檢測(cè)器（fluorescence detector）53第三章 固定相結(jié)構(gòu)54第三章 高效液相色譜的固定相 和流動(dòng)相55第三章 高效液相色譜的固定相 和流動(dòng)相5657第三章 高效液相色譜的固定相 和流動(dòng)相58第三章 高效液相色譜的固定相 和流動(dòng)相59二、液相色譜的流動(dòng)相二、液相色譜的流動(dòng)相 （mobile phases of LC）60二、液相色譜的流動(dòng)相二、液相色譜的流動(dòng)相 （mobile phases of LC）612. 流動(dòng)相類(lèi)別流動(dòng)相類(lèi)別623. 流動(dòng)相選擇流動(dòng)相選擇634. 選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題64656667第三章 高效液相色譜的固定相

6、 和流動(dòng)相68第四章 液相色譜儀定性、定量方法69702、利用紫外或熒光光譜定性 停泵做全波長(zhǎng)光譜掃描3、收集柱后留出組分，再用其他化學(xué)或物理方法定性如：紅外光譜、質(zhì)譜、核磁共振等714.2定量分析1. 外標(biāo)法(標(biāo)準(zhǔn)曲線法)用待測(cè)組分的純樣制標(biāo)準(zhǔn)曲線優(yōu)點(diǎn)：快速簡(jiǎn)單, 只要待測(cè)組分出峰且完全分離即可缺點(diǎn)：絕對(duì)法, 進(jìn)樣量,操作條件要不變 722. 內(nèi)標(biāo)法(外加標(biāo)準(zhǔn)法)不能全出峰或只需測(cè)某幾個(gè)組分時(shí)采用方法:準(zhǔn)確稱(chēng)取樣品,加入一定量?jī)?nèi)標(biāo)物,根據(jù)重量及峰面積求出某組分的含量Ws 內(nèi)標(biāo)物重量 As 內(nèi)標(biāo)物峰面積 Ai 被測(cè)物峰面積 fs 內(nèi)標(biāo)物重量校正因子 fi 被測(cè)物重量校正因子 W 樣品重 一般選

7、內(nèi)標(biāo)物為基準(zhǔn)，fs=1WfAWfAWWWsssiii%100%ssiiSifAfAWW73步驟:a.選內(nèi)標(biāo)物 b.測(cè)fw(i/s) (fi) c.稱(chēng)未知樣W. 內(nèi)標(biāo)物Ws,測(cè)Ai,As內(nèi)標(biāo)法的關(guān)鍵是選擇合適的內(nèi)標(biāo)物，內(nèi)標(biāo)法的關(guān)鍵是選擇合適的內(nèi)標(biāo)物，它必須符合下列條件：它必須符合下列條件：(1) 是樣品中原來(lái)不存在的純物質(zhì)，性質(zhì)與被測(cè)物相近，是樣品中原來(lái)不存在的純物質(zhì)，性質(zhì)與被測(cè)物相近，能完全溶解于樣品并且不與樣品發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。能完全溶解于樣品并且不與樣品發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。（2）內(nèi)標(biāo)物的峰應(yīng)盡量靠近被測(cè)組分的峰，或位于幾個(gè)）內(nèi)標(biāo)物的峰應(yīng)盡量靠近被測(cè)組分的峰，或位于幾個(gè)被測(cè)物之峰的中間并與這些色譜峰完全分離。被測(cè)物之峰的中間并與這些色譜峰完全分離。（3）內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量應(yīng)與被測(cè)物質(zhì)的質(zhì)量接近，能保持色）內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量應(yīng)與被測(cè)物質(zhì)的質(zhì)量接近，能保持色譜峰大小差不多。譜峰大小差不多。743. 純樣未標(biāo)準(zhǔn)，由比較加入該組分前后信號(hào)的變化計(jì)算被測(cè)組分的含量75第五章 建立高效液相色譜分析方法的一般步驟 76分