苯酚硫酸法測定多糖

1、苯酚硫酸法測定黨參總糖1材料與方法11 材料與試劑，儀器 材料、試劑黨參（肉黨、普通紋黨、產(chǎn)于中寨的紋黨）；95乙醇；苯酚；濃硫酸均為分析純。 儀器與設(shè)備FA-2400分析天平，101A型電熱鼓風(fēng)干燥箱，Mb型可調(diào)式電熱板，電熱恒溫水浴鍋，SK5200H超聲清洗器，UV-9100紫外-可見分光光度計1.2 方法 供試品溶液的制備取黨參粉末2g，置圓底燒瓶中，加95乙醇3次（ml）每次2h,過濾，蒸干乙醇，殘渣用水溶解，在電熱板上加熱，提取3次（50.50.50ml）,每次2h，過濾，濾液置于50ml容量瓶中，加蒸餾水至刻度搖勻。 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制精密稱取105干燥至恒重的D-無水葡萄糖10mg置

2、于100 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度搖勻，得0.1mgmL的儲備溶液，備用。 5苯酚溶液的制備 精確量取6.3ml 80的苯酚溶液轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻后置于棕色試劑瓶中，備用。(實(shí)驗(yàn)室苯酚為師姐配好的80的溶液，避光密封保存于冰箱中，用時水浴加熱使其成為透亮的溶液) 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精確吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液0、1、2、3、4、5、6 mL，分別置于10 mL容量瓶中，以蒸餾水補(bǔ)至 10 mL搖勻，依次吸取2ml加入試管中，加入苯酚液1.0 mL和濃硫酸5.0 mL，混勻，在室溫放置30 min后，于波長490 nm處測定吸光度值。以吸光度值為縱坐標(biāo)，葡萄糖濃度為橫坐

3、標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。(10*10-2mg.ml*1/10=10*10-3mg.ml-1=10mg/ml.50.60) 樣品的測定準(zhǔn)確吸取供試品溶液0.1 mL加水定容至10mL，精確吸取此稀釋液2mL于試管中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備的方法測定吸光度值，并根據(jù)回歸方程，求得其濃度，計算樣品中總糖的含量。（黨參溶液的濃度=2/50*0.1/10=1/2500g.ml-1=1/2.5 mg.ml-1=400mg.ml-1）2 結(jié)果與分析2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程建立用紫外分光光度計，在4 9 0 n m 的波長處測定吸光度，以試劑空白參比實(shí)驗(yàn)。結(jié)果見表1標(biāo)液體積(ml)02468標(biāo)液多糖含量(mg)048

4、1216吸光度00.1710.3790.6660.992Y=0.062X-0.0542，r2=0.9826，以吸光度為縱坐標(biāo)葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖y = 0.062x - 0.0542R2 = 0.9826-0.200.20.40.60.811.205101520糖含量（mg）吸光度系列1線性 (系列1)2.2 樣品中多糖含量測定結(jié)果 按上述多糖含量測定方法測的樣品的吸光度，并按標(biāo)準(zhǔn)曲線測得的多糖含量占藥材總量如下表。肉黨1肉黨2紋黨1紋黨2中寨紋黨1中寨紋黨2吸光度0.3620.4870.6220.5790.8740.624占藥材含量百分比（）0.841.091.361.251.

5、371.35上圖所得的標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性不好，按此曲線藥材中所得糖含量也不高，并且當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液液為10ml時，測不出吸光度，所以改變標(biāo)液濃度濃度，取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液0、1、2、3、4、5、6 mL按上述方法重做，所得的吸光如標(biāo)液體積(ml)0123456標(biāo)液多糖含量(mg)024681012吸光度00.1980.5670.8021.0021.3911.579Y=0.135X-0.0185，r2=0.9937，以吸光度為縱坐標(biāo)葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖y = 0.135x - 0.0185R2 = 0.9937-0.200.20.40.60.811.21.41.61.8051015糖含量（mg）吸光度系列1線性 (系列1)樣品中多糖含量測定結(jié)果按上述多糖含量測定方法測的樣品的吸光度，并按標(biāo)準(zhǔn)曲線測得的多糖含量占藥材總量如下表。肉黨1肉