CA1500操作要點及操作經(jīng)驗介紹

1、CA1500操作要點及經(jīng)驗介紹 周炳燁01概述Part One概述f1.使用目的：全自動血凝分析儀CA-1500用于凝血、抗凝和纖溶系統(tǒng)功能的檢測，為出血性和血栓性疾病的診斷與鑒別診斷、溶栓及抗凝治療的監(jiān)測與療效觀察提供有價值的指標。f2.檢測原理：凝固法、發(fā)色底物法和免疫分析法。概述f2.1.凝固法（散射比濁法加百分比終點法）f2.1.1散射比濁法CA-1500采用光學檢測法，將血漿凝固過程中的濁度變化轉(zhuǎn)變?yōu)樯⑸涔獾淖兓?，通過光電二極管將光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘枺幚砥鲹?jù)此繪制出凝固曲線，用百分比檢測法來確定凝固時間。 光源為發(fā)出660nm的鹵素燈， 散射光信號為900直角方向 的散射光。概述f

2、2.1.2 百分比檢測法：儀器把加入試劑后最初的散射光量設為0%，把反應結(jié)束后不再變化的散射光量設為100%。將與50%散射光量相對應的時間作為凝固終點報告，因為50%的部位單位時間內(nèi)散射光量的變化最為顯著，纖維蛋白單體的聚合速度最快。這種方法稱為“百分比終點法”。f2.2 發(fā)色底物法酶化學比色法：顯色物質(zhì)（對硝基聯(lián)苯胺 PNA）+底物+酶檢測物或酶活性相關(guān)檢測物。CA-1500透射光源只有405nm、575nm和800nm三種濾光片。概述f2.3 免疫分析法免疫透射比濁法：抗體包被大小均一、直徑15-60nm的乳膠顆粒，包被后的抗體與相應抗原結(jié)合后形成復合物體積增大，引起透射光的變化，由吸光

3、度的變化推算出所檢測物質(zhì)的含量。光源同上。f3.檢測參數(shù)f3.1 凝固法：PTAPTTFbgTT，外源性凝血因子（2、5、7、10），內(nèi)源性凝血因子（8、9、11、12）等。f3.2 發(fā)色底物法：ATIII、2PI、Plg、PC等。f3.3 免疫分析法：D二聚體，P-FDP,vWF。概述f4.檢測性能 PT: CV2% APTT: CV2% Fbg： CV4% TT: CV10% PC： CV10% DD等其它： CV5%02CA1500血凝儀日常操作流程Part TwoCA1500血凝儀日常操作流程一、開機：按下機器右邊的POWER按鈕 開機后機器進行自檢，當屏幕右上角顯示“Ready:”時

4、 可以進行試驗二、洗針：在主屏幕上選Rinse Probe 鍵，然后按Execute進 行洗針三、檢查消耗品：f1、準備反應杯：打開儀器上蓋裝反應杯的蓋子查看反應杯是否夠量，不足時，需及時添加。（一次性最多可放300個杯子）f2、準備試劑：按照儀器對試劑的要求，把每一項的試劑準備好，放到儀器內(nèi)相應位置（主菜單下選擇Set reagent），注意查看試劑的量和有效期。例如：Clean放在RINSE的位置。f3、查看儀器的洗液瓶和廢液瓶CA1500血凝儀日常操作流程四、準備標本：將樣本離心好，放入樣本架，再將樣本架放到儀器進樣器上。樣本離心要求 3000轉(zhuǎn)15分鐘五、輸入檢測項目：主菜單上的按下W

5、ork List鍵，進入工作菜單。 f輸入項目，直接點擊相應的實驗項目鍵。如：按下PT鍵菜單由“”變?yōu)椤?”（其他項目輸入方法相同）。f重復：按屏幕下菜單的Repeat鍵，在屏幕彈出的鍵盤上輸入相應測試數(shù)，儀器會自動重復與光標所在位置相同的測試信息。屏幕右側(cè)的光標移動鍵，（按NEXT或Pre表示翻到下一個界面，按“”表示向上移動光標，“ 或 ”顯示下一個界面試驗項目）f輸入樣本號： 按屏幕下菜單的ID No.Entry按順序輸入樣本的序號或病人的病歷號。f開始檢測：錄入完所有測試信息，按下屏幕右上角STAR鍵，開始檢測f查看結(jié)果：返回到主屏幕，檢測的項目如果由“”變?yōu)椤啊北砻鞔嗽囼炓呀?jīng)完成。f

6、按下Stored Date（儲存結(jié)果）鍵，出現(xiàn)已存儲結(jié)果界面，屏幕顯示已完成的測試的信息。如果查看反應曲線，按下邊菜單第一項Graph查看凝集趨勢、吸光度、錯誤信息等。CA1500血凝儀日常操作流程六、洗針： 當做完一批標本以后，需要洗針，按下“Rinse Probe” 然后按下“Execute”進行洗針。七、關(guān)機： 回到主屏幕下，在洗完針以后方可關(guān)機，切斷電源。 每24小時應關(guān)機一段時間，因為： 1.延長光源壽命；2.提高工作速度（軟件）； 3.維持負壓平衡；4.儀器的清潔維護需要，等。03標準曲線的制備Part Three標準曲線的制備在PT、APTT和Fbg三個檢測項目中，APTT報告結(jié)

7、果為秒數(shù)（儀器實測），不需要制備標準曲線；PT要報告PT%要報告活動度，所以需要制備標準曲線；Fbg報告結(jié)果為濃度，所以需要制備標準曲線。制備過程如下：（一）準備消耗品f1、準備反應杯：打開儀器上蓋裝反應杯的蓋子查看反應杯是否夠量，不足時，需及時添加。（一次性最多可放300個杯子）。同時放置一清潔樣本盤備用。f2、準備試劑：按照儀器對試劑的要求，把每一項的試劑準備好，放到儀器內(nèi)相應位置（主菜單下選擇Set reagent），注意查看試劑的量和有效期。例如：Clean放在RINSE的位置。做標準曲線之前最好更換新的緩沖液和試劑。f3、查看儀器的洗液瓶和廢液瓶標準曲線的制備（二）制備標準曲線（每次

8、制備一項）復溶一支標準品（1ml蒸餾水，室溫復溶1525min），放到樣本架的第一個位置上。在主菜單下按 SettinSetting 鍵， 出現(xiàn)Analysis setting鍵盤，進入分析設置菜單。 按 more 鍵 按 Param.setting 鍵出現(xiàn)參數(shù)設置界面，并按以下設置。標準曲線的制備PT%PT%： CalcItem CalcItem Units Number Format Curve Fit Units Number Format Curve Fit Calc.Parameter 1 Calc.Parameter 1 PT% PT% % XXX.X Log Line % XXX

9、.X Log Line Calc.Parameter 2 PT R XX.XXCalc.Parameter 2 PT R XX.XX Calc.Parameter 3 PT INR Calc.Parameter 3 PT INR XX.XX ISI Input XX.XX ISI Input Fbg CFbg C： CalcItem CalcItem Units Number Format Curve FitUnits Number Format Curve FitCalc. Parameter 1 Fbg C g/l X.XXX Log Line Calc. Parameter 1 Fbg

10、C g/l X.XXX Log Line OFF Calc. Parameter 2 OFF Calc. Parameter 2 OFF Calc. Parameter 3OFF Calc. Parameter 3 標準曲線的制備定標路線圖：main menu Standard Curve Select Tests Analysis Setting Calibrator 移動光標輸入標準血漿含量值，儀器將按照倍比稀釋方式自動稀釋 Enter 返回Main Menu Work List Standard Curve 選擇做標準曲線的項目 Return Start完成后：Main Menu Wor

11、k List Standard Curve 按兩次Update儲存fPT試劑更換批號后需要更改 ISI值fFbg試劑更換批號后需重新定標04質(zhì)控樣本檢測Part Four質(zhì)控樣本檢測f編輯質(zhì)控文件：在儀器主菜單上按 QC鍵，再按下Select Group，此時會出現(xiàn)多個空白文件。選擇任一空白文件，點擊Group edit,再點擊 Input，選擇需要進行的質(zhì)控項目和編號，例如“QC01”（01-20代表不同質(zhì)控文件）。每一文件可儲存三個項目。f執(zhí)行質(zhì)控檢測：復溶一支質(zhì)控品，放到樣本架相應的位置。在儀器主菜單上按 Work List鍵，再按下ID No.Entry，在彈出的數(shù)字鍵盤上輸入“QC0

12、1”（01-20代表不同質(zhì)控文件）。選擇需做質(zhì)控的試驗項目，按STAR鍵開始檢測。質(zhì)控完成后，到主菜單，按QC查看質(zhì)控結(jié)果及圖形。05常見錯誤報警提示及處理Part Five常見錯誤報警提示及處理f1、Insufficient Reagent (試劑不足，“相應試劑位號碼”)-加入相應試劑f2、Insufficient Tube （反應杯不足）-加入反應杯f3、Empty Tube Trash Box （清空垃圾箱）-傾倒垃圾箱中的廢反應杯f4、Light Shield Open （遮光蓋打開）-關(guān)閉遮光蓋f5、Reagent Probe Crash （試劑針撞針）-檢查試劑瓶蓋是否去掉，（或

13、調(diào)整位置）f6、No Reactive Tube （沒有反應杯）-放入反應杯f7、No Sample (沒有標本)-在相應位置放入標本f8、Vacuum Pump Error（真空泵錯誤）-調(diào)整負壓f9、Waste Bottle is Full（廢液瓶滿了）-倒空廢液瓶當儀器報警時主屏幕左上角會出現(xiàn)“Alarm”，按下SYSMEX，可消除報警06PT測定原理及相關(guān)知識Part SixPT測定原理及相關(guān)知識f原理：在待檢血漿中加入過量的組織凝血活酶(兔腦、人腦、胎盤、肺組織等浸出液)和Ca2+ ，使凝血酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槟?，后者使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白。本試驗不僅反映凝血酶原水平，也是反映因子、X

14、 和纖維蛋白原在血漿中的水平，故是外源性凝血系統(tǒng)的篩選試驗。f試劑：1. 組織凝血活酶液 常用人或兔腦粉浸出液。2. 0.025 mol/ I.氯化鈣溶液。PT測定原理及相關(guān)知識f凝血酶原時間比值（PTR）的計算： PTR=待檢血漿的凝血酶原時間(s)/正常參比血漿的凝血酶原時間(s)f國際敏感度指數(shù)(international sensitivity index, lSI) 及計算f1.ISI：由于不同來源、不同制備方法的組織凝血活酶對結(jié)果影響很大，造成結(jié)果的可比性差，特別影響判斷口服抗凝劑的治療效果。世界衛(wèi)生組織(WHO) 提出以人腦凝血活酶67/40 批號作為標準品，并以國際敏感度指數(shù)(

15、international sensitivity index, lSI) 表示各種制劑與67/40 之間相互關(guān)系。67/40 為原始參考品，定lSI 為1. 0 。因此各種制劑必須標以lSI 值。f2.患者INR = PTRISI PT測定原理及相關(guān)知識參考區(qū)間f1. PT 值 男性10-13.7s，女性10 - 14. 3s，男女平均為(121)s; 待測者的測定值較正常對照值延長超過3 s以上才有臨床意義。f2. 凝血酶原時間比值( PTR )0. 82 - 1. 15 s (1. 00士0.05) S。f3. INR 依ISI不同而異。PT測定原理及相關(guān)知識注意事項：1.采血后宜在1 h內(nèi)完成，置4 冰箱保存不成超過4 h，-20下可置2周，-70下可放置6 個月。2. 水浴穩(wěn)定控制在(37 士1)，過高或過低均會影響結(jié)果。3. 抽血要順利，抗凝要充分，決不可有凝血塊，這將影響凝血酶原時間的準確性。4. 市場上供應的組織凝血活酶制劑應注明ISI值，選用lSI 2.0的組織凝血活酶為宜。5. 在紅細胞比容(Hct) 55%時，