斑蝥臨床應用及炮制研究ppt課件

1、斑蝥臨床運用及炮制研討斑蝥臨床運用及炮制研討20212021版版 飲片規(guī)范研討課題飲片規(guī)范研討課題 中藥飲片質(zhì)量規(guī)范平臺建立子課題中藥飲片質(zhì)量規(guī)范平臺建立子課題河南中醫(yī)學院河南中醫(yī)學院 張振凌張振凌 趙麗娜趙麗娜 王一碩王一碩 田連起田連起 石延榜石延榜 概述v斑蝥入藥始載于斑蝥入藥始載于，為芫青科昆蟲南方大，為芫青科昆蟲南方大斑蝥斑蝥Mylabris phalerata Pallas 或黃黑小斑蝥或黃黑小斑蝥Mylabris cichorii Linnaeus 的枯燥體的枯燥體1。v辛、熱；有大毒。具有破辛、熱；有大毒。具有破血消癥，攻毒蝕瘡，引赤血消癥，攻毒蝕瘡，引赤發(fā)泡的作用。發(fā)泡的作用

2、。v由于斑蝥素具有毒性，常由于斑蝥素具有毒性，常引起臨床中毒，從古至今引起臨床中毒，從古至今均需求炮制均需求炮制主主 要要 內(nèi)內(nèi) 容容斑蝥臨床運用研討斑蝥臨床運用研討1斑蝥藥材及飲片中斑蝥素含量研討斑蝥藥材及飲片中斑蝥素含量研討3斑蝥藥材及飲片中總斑蝥素含量研討斑蝥藥材及飲片中總斑蝥素含量研討4 斑蝥藥材及飲片中無機元素比較研討斑蝥藥材及飲片中無機元素比較研討7斑蝥藥材及飲片質(zhì)量規(guī)范的研討斑蝥藥材及飲片質(zhì)量規(guī)范的研討5堿制法及堿制斑蝥飲片質(zhì)量規(guī)范研討堿制法及堿制斑蝥飲片質(zhì)量規(guī)范研討61斑蝥米炒炮制工藝的研討斑蝥米炒炮制工藝的研討21.臨床運用及藥理研討臨床運用及藥理研討v含有的斑蝥素含有的斑蝥

3、素(Cantharidin, C10H12O4)具有較強具有較強的抗腫瘤活性，并且不降低白細胞，同時具有較強的抗腫瘤活性，并且不降低白細胞，同時具有較強的刺激；是重要的皮膚發(fā)泡劑。因此具有重要的藥的刺激；是重要的皮膚發(fā)泡劑。因此具有重要的藥用價值。用價值。v1.1、治療癌癥、治療癌癥 v斑蝥及提取物以及斑蝥素的衍生物等對治療原發(fā)性斑蝥及提取物以及斑蝥素的衍生物等對治療原發(fā)性肝癌療效顯著，明顯優(yōu)于手術(shù)治療或放療。肝癌療效顯著，明顯優(yōu)于手術(shù)治療或放療。v斑蝥及斑蝥素的衍生物對乳腺癌、食道癌、肺癌、斑蝥及斑蝥素的衍生物對乳腺癌、食道癌、肺癌、賁門癌、腸癌、等也有一定療效。賁門癌、腸癌、等也有一定療效

4、。 v1.2、治療神經(jīng)性皮炎、疥癬、瘰疬、治療神經(jīng)性皮炎、疥癬、瘰疬v 外用刺激皮膚發(fā)泡外用刺激皮膚發(fā)泡2.藥理研討藥理研討2.1抗腫瘤機制抗腫瘤機制 斑蝥素及其衍生物，分子量小，易入細胞內(nèi)，產(chǎn)生細胞毒作用，具有較強斑蝥素及其衍生物，分子量小，易入細胞內(nèi)，產(chǎn)生細胞毒作用，具有較強的抗腫瘤作用，作用機制主要有：的抗腫瘤作用，作用機制主要有：抑制腫瘤細胞的增殖，誘導腫瘤細胞的凋亡；抑制腫瘤細胞的增殖，誘導腫瘤細胞的凋亡；抑制腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移；抑制腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移；抑制癌細胞脫氧核糖核酸抑制癌細胞脫氧核糖核酸(DNA)復制，添加放、化療的敏感性。并且具有復制，添加放、化療的敏感性。并且具有免

5、疫加強和升高白細胞作用，這種獨特的作用，早期能夠由加速骨髓成免疫加強和升高白細胞作用，這種獨特的作用，早期能夠由加速骨髓成熟或釋放所致，后期那么能夠與促造血干細胞的增殖并向粒一單核系祖熟或釋放所致，后期那么能夠與促造血干細胞的增殖并向粒一單核系祖細胞不斷分化有關。細胞不斷分化有關。2.2 抗纖維化和抗氧化損傷作用：抗纖維化和抗氧化損傷作用：不同濃度的斑蝥素均能改動成纖維細胞的形狀，抑制細胞增殖，成纖維細不同濃度的斑蝥素均能改動成纖維細胞的形狀，抑制細胞增殖，成纖維細胞數(shù)目明顯下降，形狀變得不規(guī)那么，陳列混亂，代謝產(chǎn)物添加。從而胞數(shù)目明顯下降，形狀變得不規(guī)那么，陳列混亂，代謝產(chǎn)物添加。從而證明斑

6、蝥素能抑制證明斑蝥素能抑制NIH/373細胞的增殖，并且呈劑量依賴性。細胞的增殖，并且呈劑量依賴性。2.3 抗炎、抗病毒、抗菌、促雌激素樣作用?？寡?、抗病毒、抗菌、促雌激素樣作用。第二部分第二部分 斑蝥米炒炮制工藝的研討斑蝥米炒炮制工藝的研討05版版規(guī)定米斑蝥的炮規(guī)定米斑蝥的炮制方法為取凈斑蝥與米拌炒，至制方法為取凈斑蝥與米拌炒，至米呈黃棕色，取出，除去頭、翅、米呈黃棕色，取出，除去頭、翅、足。足。斑蝥為毒性中藥，該炮制方法較斑蝥為毒性中藥，該炮制方法較為籠統(tǒng)，僅靠顏色對炮制程度進為籠統(tǒng)，僅靠顏色對炮制程度進展判別，沒有量化詳細的工藝參展判別，沒有量化詳細的工藝參數(shù)，飲片企業(yè)很難按此消費出平數(shù)

7、，飲片企業(yè)很難按此消費出平安、可控、穩(wěn)定的產(chǎn)品。安、可控、穩(wěn)定的產(chǎn)品。根據(jù)傳統(tǒng)的炮制根據(jù)傳統(tǒng)的炮制閱歷，結(jié)合現(xiàn)代閱歷，結(jié)合現(xiàn)代炮制設備，量化炮制設備，量化斑蝥米炒炮制工斑蝥米炒炮制工藝的參數(shù)，進展藝的參數(shù)，進展中試消費，制定中試消費，制定SOP，符合中藥，符合中藥現(xiàn)代化的要求?，F(xiàn)代化的要求。 米斑蝥規(guī)范操作米斑蝥規(guī)范操作規(guī)程規(guī)程SOPSOP入鍋入鍋溫度溫度 200同時入鍋同時入鍋炒制炒制24min米呈黃棕色、米斑蝥完好米呈黃棕色、米斑蝥完好紅外測溫儀紅外測溫儀滾筒滾筒內(nèi)壁內(nèi)壁溫度溫度300鐵鍋鐵鍋電加熱炒藥機電加熱炒藥機大米炒制大米炒制2min后，后，入斑蝥炒制入斑蝥炒制3minv米炒斑蝥米炒

8、斑蝥SOPSOPv1 1 適用范圍適用范圍v本規(guī)范適用于飲片車間生斑蝥、米炒斑蝥的操本規(guī)范適用于飲片車間生斑蝥、米炒斑蝥的操作。作。v2 2 職責職責v操作工：嚴厲按本操作工：嚴厲按本SOPSOP進展生斑蝥、米炒斑蝥操進展生斑蝥、米炒斑蝥操作。作。v3 3 內(nèi)容內(nèi)容v3.1 3.1 生斑蝥、米炒斑蝥前的預備生斑蝥、米炒斑蝥前的預備v3.1.13.1.1稱量器具、紅外測溫儀、電熱炒藥機等處稱量器具、紅外測溫儀、電熱炒藥機等處于完好、清潔形狀，消費器具齊全。于完好、清潔形狀，消費器具齊全。v3.1.23.1.2任務間壓差、溫度、相對濕度符合消費工任務間壓差、溫度、相對濕度符合消費工藝要求。藝要求。

9、v3.1.33.1.3以上要求均滿足后，方可消費。以上要求均滿足后，方可消費。v3.2 3.2 領料領料 v操作人員領取斑蝥、大米，核對品名、數(shù)量等。操作人員領取斑蝥、大米，核對品名、數(shù)量等。如有不符，嚴禁進入消費崗位，并按相關規(guī)定如有不符，嚴禁進入消費崗位，并按相關規(guī)定處置。處置。v3.3 3.3 凈制：凈制：v操作人員將斑蝥過操作人員將斑蝥過2 2號篩，篩除雜質(zhì)，去除頭、號篩，篩除雜質(zhì)，去除頭、足、翅，即為生斑蝥。足、翅，即為生斑蝥。v3.4 3.4 稱量：稱量：v稱取生斑蝥除頭、足、翅稱取生斑蝥除頭、足、翅250g, 250g, 根據(jù)生斑根據(jù)生斑蝥每蝥每10kg10kg用大米用大米2kg

10、2kg，稱取大米，稱取大米50g50g。v3.5 3.5 米炒：米炒：v將電熱炒藥機溫度設定在將電熱炒藥機溫度設定在400400，開機，用紅外，開機，用紅外測溫儀監(jiān)測滾筒內(nèi)壁底溫度，待滾筒內(nèi)壁溫度測溫儀監(jiān)測滾筒內(nèi)壁底溫度，待滾筒內(nèi)壁溫度升至升至300300，立刻投入大米，并開場計時，將大，立刻投入大米，并開場計時，將大米炒米炒2min2min后立刻投入生斑蝥，繼續(xù)炒制后立刻投入生斑蝥，繼續(xù)炒制3min3min，停頓炒制，立刻出鍋，此時大米為棕黃色，放停頓炒制，立刻出鍋，此時大米為棕黃色，放涼。揀去大米。炒制過程共涼。揀去大米。炒制過程共5min5min，用紅外測溫，用紅外測溫儀監(jiān)測滾筒內(nèi)壁溫度

11、范圍在儀監(jiān)測滾筒內(nèi)壁溫度范圍在280-320280-320。v3.6 3.6 稱量：稱重米斑蝥，計算收率。稱量：稱重米斑蝥，計算收率。v3.7 3.7 包裝：將米斑蝥定量包裝，貼上標簽，注包裝：將米斑蝥定量包裝，貼上標簽，注明品名、批號、消費日期等。明品名、批號、消費日期等。v3.8 3.8 清場：消費操作終了，及時清場，將渣滓清場：消費操作終了，及時清場，將渣滓妥善處置，確保現(xiàn)場沒有殘留物。妥善處置，確保現(xiàn)場沒有殘留物。 米炒斑蝥米炒斑蝥SOP驗證驗證 由浙江中醫(yī)藥大學中藥飲片廠消費出由浙江中醫(yī)藥大學中藥飲片廠消費出9 9批批樣品，闡明本操作規(guī)程可行。樣品，闡明本操作規(guī)程可行。 第三部分第三

12、部分 斑蝥藥材及飲片中斑蝥素含量研討斑蝥藥材及飲片中斑蝥素含量研討近年來相繼近年來相繼有多篇文章有多篇文章 報道了采用報道了采用HPLCHPLC法測定法測定斑蝥素含量斑蝥素含量 缺陷：準確缺陷：準確度不高，重度不高，重現(xiàn)性差，運現(xiàn)性差，運用不普及用不普及建立斑蝥建立斑蝥素的素的HPLCHPLC含量測定含量測定方法方法 20052005版藥版藥典收載斑典收載斑蝥素的含蝥素的含量測定方量測定方法為法為GCGC法法斑蝥不同部位及米炒炮制前后斑蝥素含量比較研討斑蝥不同部位及米炒炮制前后斑蝥素含量比較研討 藥材藥材 大、小凈斑蝥大、小凈斑蝥 根據(jù)大小斑蝥的特征進展挑揀，根據(jù)大小斑蝥的特征進展挑揀，分檔，

13、除去雜質(zhì)，其中一份除去頭、足、翅，即分檔，除去雜質(zhì)，其中一份除去頭、足、翅，即為大、小生斑蝥。粉碎成粗粉，備用。為大、小生斑蝥。粉碎成粗粉，備用。頭、足、內(nèi)外翅頭、足、內(nèi)外翅 因小斑蝥飲片的頭、足、內(nèi)外因小斑蝥飲片的頭、足、內(nèi)外翅不易剝離，應選大斑蝥進展各部位的剝離，粉翅不易剝離，應選大斑蝥進展各部位的剝離，粉碎成粗粉，備用。碎成粗粉，備用。米炒斑蝥米炒斑蝥 取凈斑蝥與米置鍋內(nèi)，用文火加熱，取凈斑蝥與米置鍋內(nèi)，用文火加熱，拌炒至米呈黃棕色，取出，去米。每拌炒至米呈黃棕色，取出，去米。每100g100g斑蝥，斑蝥，用米用米20g20g。規(guī)定藥材溫度。規(guī)定藥材溫度110110，加熱，加熱2min2

14、min。粉碎。粉碎成粗粉，備用。成粗粉，備用。斑蝥各部位分量比例表斑蝥各部位分量比例表樣品樣品頭重頭重% %足重足重% %內(nèi)翅內(nèi)翅重重% %外翅重外翅重% %頭、足、翅總頭、足、翅總重重% %胸腹部胸腹部重重% %1 15.805.808.278.271.951.9513.1913.1929.2129.2169.6269.622 25.815.819.169.161.581.5810.2510.2526.8026.8071.8271.823 36.196.197.367.362.272.2712.6312.6328.4528.4570.5270.524 45.635.637.7.35351.7

15、41.7410.2610.2624.9824.9874.3174.315 55.425.428.388.381.781.7810.2210.2225.8025.8073.7973.796 67.397.3911.2411.242.262.2611.3311.3332.2232.2266.7966.797 77.967.968.178.172.312.3111.8911.8930.3330.3367.8867.88平均分量平均分量比例比例% %6.316.318.568.561.981.9811.4011.4028.2628.2670.6870.68含量測定結(jié)果含量測定結(jié)果 斑蝥中頭足翅總重僅占

16、斑蝥中頭足翅總重僅占28.26%28.26%，而其所含斑蝥素在，而其所含斑蝥素在生品中占生品中占0.16%0.16%，且頭足翅很，且頭足翅很難完全粉碎，臨床不去頭足難完全粉碎，臨床不去頭足翅易引起病人惡心嘔吐，故翅易引起病人惡心嘔吐，故可以以為其為非藥用部位?？梢砸詾槠錇榉撬幱貌课?。 經(jīng)過比較可知，斑蝥素經(jīng)過比較可知，斑蝥素含量：生斑蝥飲片斑蝥藥含量：生斑蝥飲片斑蝥藥材米炒斑蝥。這闡明米炒材米炒斑蝥。這闡明米炒炮制使斑蝥中的斑蝥素含量炮制使斑蝥中的斑蝥素含量減少，毒性降低，同時由于減少，毒性降低，同時由于頭足翅中斑蝥素含量較低，頭足翅中斑蝥素含量較低，導致同等分量下斑蝥藥材中導致同等分量下斑蝥

17、藥材中的含量低于生斑蝥飲片中斑的含量低于生斑蝥飲片中斑蝥素含量。蝥素含量。 南方大斑蝥和黃黑小斑南方大斑蝥和黃黑小斑蝥中斑蝥素含量相差不明顯，蝥中斑蝥素含量相差不明顯，故可將兩者一同炮制。故可將兩者一同炮制。 第四部分第四部分 斑蝥藥材及飲片中總斑蝥素含量研討斑蝥藥材及飲片中總斑蝥素含量研討文獻報道以為芫菁科豆芫菁屬、斑芫菁屬昆文獻報道以為芫菁科豆芫菁屬、斑芫菁屬昆蟲中含有的斑蝥素分為游離和結(jié)合兩部分，蟲中含有的斑蝥素分為游離和結(jié)合兩部分，并且總斑蝥素遠遠高于游離斑蝥素的含量。并且總斑蝥素遠遠高于游離斑蝥素的含量。 規(guī)定的氯仿直接浸提法，沒有得到總斑蝥素的含量 結(jié)合斑蝥素在結(jié)合斑蝥素在酸水解條

18、件下酸水解條件下復原為游離的復原為游離的斑蝥素斑蝥素經(jīng)過預實驗，證明斑蝥中不僅含有氯仿浸提的經(jīng)過預實驗，證明斑蝥中不僅含有氯仿浸提的游離斑蝥素，還含有酸水解提取的結(jié)合斑蝥素。游離斑蝥素，還含有酸水解提取的結(jié)合斑蝥素。 藥材及飲片中藥材及飲片中總斑蝥素的研討總斑蝥素的研討總斑蝥素提取方法的調(diào)查總斑蝥素提取方法的調(diào)查0.5mol/LH2SO40.5mol/LH2SO4溶溶液調(diào)液調(diào)PHPH至至2 2左右左右樣品粗樣品粗粉粉0.4g0.4g蒸餾水蒸餾水10ml10ml提取液提取液上清液上清液離心離心7070水浴水浴加熱加熱30min30min酸液酸液至分液漏斗至分液漏斗至蒸發(fā)皿至蒸發(fā)皿5050水浴揮干

19、水浴揮干甲醇定容至甲醇定容至5ml容量瓶容量瓶超聲超聲15min15min氯仿萃取氯仿萃取4 4次次超聲處置超聲處置1515分鐘分鐘靜置靜置26h26h樣品粗樣品粗粉粉0.4g0.4g三氯甲烷三氯甲烷10ml10ml提取液提取液至分液漏斗至分液漏斗至蒸發(fā)皿至蒸發(fā)皿5050水浴揮干水浴揮干甲醇定容至甲醇定容至5ml容量瓶容量瓶鹽酸溶液鹽酸溶液PH=1PH=110ml10ml氯仿萃取氯仿萃取4 4次次靜置靜置26h26h超聲處置超聲處置1515分鐘分鐘第二法第二法第三法第三法第四法第四法結(jié)果結(jié)果 將上述四種方法所得供試品溶液，按色譜條件進樣，將上述四種方法所得供試品溶液，按色譜條件進樣，計算各樣品

20、中總斑蝥素的含量。計算各樣品中總斑蝥素的含量。提取方法提取方法第一法第一法第二法第二法第三法第三法第四法第四法總斑蝥素含量總斑蝥素含量% %1.371.371.601.601.601.601.611.61 為使斑蝥素轉(zhuǎn)移完全，對該法中三氯甲烷的萃取次數(shù)為使斑蝥素轉(zhuǎn)移完全，對該法中三氯甲烷的萃取次數(shù)及洗滌次數(shù)進展調(diào)查，結(jié)果闡明，萃取五次和洗滌五次轉(zhuǎn)及洗滌次數(shù)進展調(diào)查，結(jié)果闡明，萃取五次和洗滌五次轉(zhuǎn)移完全。移完全。 按照該法對藥渣進展提取，提取液中未檢測到斑蝥素，按照該法對藥渣進展提取，提取液中未檢測到斑蝥素，闡明提取完全。闡明提取完全。第四法正交設計實驗調(diào)查第四法正交設計實驗調(diào)查程度程度要素要素

21、A A鹽酸鹽酸PHPHB B超聲功率超聲功率(W)(W)C C 超聲時間超聲時間minminD D 三氯甲烷用量三氯甲烷用量mlml1 12 23 3PH=1PH=1PH=2PH=2PH=3PH=3300 300 400400500500101015152020101020203030要素程度表要素程度表 經(jīng)過預實驗，分別對鹽酸經(jīng)過預實驗，分別對鹽酸PHPH值、超聲功率、超聲時間、值、超聲功率、超聲時間、三氯甲烷用量四個要素，選用三氯甲烷用量四個要素，選用L9L93434正交實驗表對酸水正交實驗表對酸水解超聲法提取工藝進展挑選優(yōu)化。解超聲法提取工藝進展挑選優(yōu)化。 總斑蝥素提取方法總斑蝥素提取方

22、法L9L93434正交實驗及實驗結(jié)果正交實驗及實驗結(jié)果 實驗實驗號號因因 素素總斑蝥素含量總斑蝥素含量% %A A鹽酸鹽酸PHPH值值B B超聲功率超聲功率(W)(W)C C超聲時間超聲時間minminD D三氯甲烷用量三氯甲烷用量mlml1 11 (PH=1)1 (PH=1)1(300W)1(300W)1(10min)1(10min)1(10ml)1(10ml)1.321.322 21 12(400W)2(400W)2(15min)2(15min)2(20ml)2(20ml)1.291.293 31 13(500W)3(500W)3(20min)3(20min)3(30ml)3(30ml)1

23、.511.514 42 (PH=2)2 (PH=2)1 12 23 31.431.435 52 22 23 31 11.001.006 62 23 31 12 21.311.317 73 (PH=3)3 (PH=3)1 13 32 20.390.398 83 32 21 13 30.440.449 93 33 32 21 10.410.41K1K14.12 4.12 3.14 3.14 3.07 3.07 2.73 2.73 K2K23.74 3.74 2.73 2.73 3.13 3.13 2.99 2.99 K3K31.24 1.24 3.23 3.23 2.90 2.90 3.38 3.

24、38 方方 差差 分分 析析 表表 方差來源方差來源離差平方和離差平方和自在度自在度均值均值F F值值顯著性顯著性A A1.6321 1.6321 2 2 0.8160 0.8160 172.00 172.00 * * *B B0.0474 0.0474 2 2 0.0237 0.0237 4.99 4.99 D D0.0714 0.0714 2 2 0.0357 0.0357 7.52 7.52 誤差誤差C C0.0095 0.0095 2 2 0.0047 0.0047 綜合思索確定總斑蝥素最正確工藝為：綜合思索確定總斑蝥素最正確工藝為：A1B2C2D1A1B2C2D1。即：取三氯甲烷和。

25、即：取三氯甲烷和 PH=1 PH=1的鹽酸溶液各的鹽酸溶液各10ml10ml，超聲處置功率，超聲處置功率100W100W，頻率，頻率40kHz40kHz1515分鐘。分鐘。 驗證驗證 分別取同批次斑蝥藥材樣品粗粉分別取同批次斑蝥藥材樣品粗粉0.3g0.3g各各3 3份，精細稱份，精細稱定，按優(yōu)選的提取工藝提取總斑蝥素，結(jié)果得各批次含量定，按優(yōu)選的提取工藝提取總斑蝥素，結(jié)果得各批次含量的相對平均偏向為的相對平均偏向為0.76%0.76%，證明總斑蝥素采用此提取工藝，證明總斑蝥素采用此提取工藝提取可行。提取可行。 斑蝥素是一種酸酐，能與體內(nèi)的斑蝥素是一種酸酐，能與體內(nèi)的Na,MgNa,Mg等金屬元

26、素結(jié)合，構(gòu)成斑蝥等金屬元素結(jié)合，構(gòu)成斑蝥素鈉鹽或鎂鹽等。這些斑蝥酸的結(jié)合物在酸性環(huán)境中可以游離出斑蝥素鈉鹽或鎂鹽等。這些斑蝥酸的結(jié)合物在酸性環(huán)境中可以游離出斑蝥酸或者斑蝥素，故采用酸水解的方法提取總斑蝥素。酸或者斑蝥素，故采用酸水解的方法提取總斑蝥素。 實驗過程中發(fā)現(xiàn)斑蝥藥材粉末總是在酸水層，不在氯仿層，故可實驗過程中發(fā)現(xiàn)斑蝥藥材粉末總是在酸水層，不在氯仿層，故可以采用萃取的方式分取氯仿層提取液。并采用正交實驗設計優(yōu)選出總以采用萃取的方式分取氯仿層提取液。并采用正交實驗設計優(yōu)選出總斑蝥素的提取工藝。斑蝥素的提取工藝。 斑蝥不同部位及米炒前后總斑蝥素含量比較研討斑蝥不同部位及米炒前后總斑蝥素含量

27、比較研討 藥材藥材 斑蝥藥材、米炒斑蝥及斑蝥頭、足、內(nèi)外翅部斑蝥藥材、米炒斑蝥及斑蝥頭、足、內(nèi)外翅部分樣品同分樣品同“第二部分實驗第二部分實驗3 3中樣品。中樣品。供試品溶液的制備供試品溶液的制備按照實驗按照實驗1 1中優(yōu)選提取工藝制備中優(yōu)選提取工藝制備色譜條件色譜條件 流動相：甲醇水流動相：甲醇水(23:77)，流速流速1.0ml/min，檢測波長，檢測波長230nm，柱溫：，柱溫：30精細稱取斑蝥素對照品精細稱取斑蝥素對照品2.18mg2.18mg，置，置2ml2ml容量瓶內(nèi)，少量甲醇容量瓶內(nèi)，少量甲醇超聲使溶解后，加甲醇至刻度，搖勻，備用。超聲使溶解后，加甲醇至刻度，搖勻，備用。 對照品

28、溶液的制備對照品溶液的制備含量測定結(jié)果含量測定結(jié)果 斑蝥中頭足翅總重占斑蝥中頭足翅總重占28.2%28.2%，而其所含總斑蝥素，而其所含總斑蝥素占占0.61%0.61%，含量較低，進一，含量較低，進一步證明其為非藥用部位。步證明其為非藥用部位。 經(jīng)過比較可知，總斑經(jīng)過比較可知，總斑蝥素含量：生斑蝥飲片蝥素含量：生斑蝥飲片斑蝥藥材米炒斑蝥。與斑蝥藥材米炒斑蝥。與其斑蝥素含量趨勢一致。其斑蝥素含量趨勢一致。 這闡明米炒炮制不但這闡明米炒炮制不但使斑蝥素含量減少，而且使斑蝥素含量減少，而且總斑蝥素含量也減少，推總斑蝥素含量也減少，推測結(jié)合斑蝥素的存在。測結(jié)合斑蝥素的存在。 第五部分第五部分 斑蝥藥材

29、及飲片質(zhì)量規(guī)范研討斑蝥藥材及飲片質(zhì)量規(guī)范研討 本次質(zhì)量規(guī)范的制定，共搜集斑蝥藥材本次質(zhì)量規(guī)范的制定，共搜集斑蝥藥材1616批次，生斑蝥批次，生斑蝥1010批次，米炒斑蝥批次，米炒斑蝥1515批次。批次。 經(jīng)河南中醫(yī)學院生藥學科陳隨清教授鑒定分別為芫青科昆經(jīng)河南中醫(yī)學院生藥學科陳隨清教授鑒定分別為芫青科昆蟲南方大斑蝥蟲南方大斑蝥Mylabris phalerata Pallas Mylabris phalerata Pallas 或黃黑小斑蝥或黃黑小斑蝥Mylabris cichorii Linnaeus Mylabris cichorii Linnaeus 的枯燥體、去除頭足翅及雜質(zhì)的枯燥體、

30、去除頭足翅及雜質(zhì)的凈制加工品或米炒炮制加工品。的凈制加工品或米炒炮制加工品。 實驗實驗1.1.樣品的搜集與鑒定樣品的搜集與鑒定 編號編號樣品稱號樣品稱號規(guī)格等級規(guī)格等級批號批號產(chǎn)地產(chǎn)地樣品重樣品重g g提供單位提供單位1 1斑蝥斑蝥大小混裝大小混裝Y080822Y080822貴州貴州200200浙江中醫(yī)藥大學飲片廠浙江中醫(yī)藥大學飲片廠2 2斑蝥斑蝥大小混裝大小混裝Y080820Y080820云南云南200200浙江中醫(yī)藥大學飲片廠浙江中醫(yī)藥大學飲片廠3 3斑蝥斑蝥大小混裝大小混裝Y080821Y080821云南云南200200浙江中醫(yī)藥大學飲片廠浙江中醫(yī)藥大學飲片廠4 4斑蝥斑蝥大小混裝大小混

31、裝Y081210Y081210不詳不詳2020陜西中醫(yī)學院陜西中醫(yī)學院5 5斑蝥斑蝥大小混裝大小混裝Y081212Y081212不詳不詳3030天津中醫(yī)藥大學天津中醫(yī)藥大學6 6斑蝥斑蝥大小混裝大小混裝Y081214Y081214不詳不詳2525江西中醫(yī)學院江西中醫(yī)學院7 7斑蝥斑蝥大小混裝大小混裝Y090115Y090115不詳不詳130130成都中醫(yī)藥大學成都中醫(yī)藥大學8 8南方大斑蝥南方大斑蝥大大Y080418AY080418A不詳不詳10001000河南中醫(yī)學院河南中醫(yī)學院9 9黃黑小斑蝥黃黑小斑蝥小小Y080418BY080418B不詳不詳10001000河南中醫(yī)學院河南中醫(yī)學院10

32、10斑蝥斑蝥大小混裝大小混裝Y090209Y090209廣西廣西100.8100.8市售市售1111斑蝥斑蝥大小混裝大小混裝Y090210Y090210鄭州鄭州9797市售市售1212斑蝥斑蝥大小混裝大小混裝Y090218Y090218洛陽洛陽96.396.3市售市售1313斑蝥斑蝥大小混裝大小混裝Y090221-1Y090221-1禹州禹州1 1100100市售市售1414斑蝥斑蝥大小混裝大小混裝Y090221-2Y090221-2禹州禹州2 2100100市售市售1515斑蝥斑蝥大小混裝大小混裝Y090221-3Y090221-3安國安國100100市售市售1616斑蝥斑蝥大小混裝大小混裝

33、Y090221-4Y090221-4亳州亳州100100市售市售斑蝥藥材樣品來源表斑蝥藥材樣品來源表生斑蝥樣品來源表生斑蝥樣品來源表編編號號樣品稱號樣品稱號規(guī)格等規(guī)格等級級批號批號產(chǎn)地產(chǎn)地樣品樣品重重g g提供單位提供單位1 1生斑蝥生斑蝥統(tǒng)貨統(tǒng)貨S080822S080822貴州貴州5050浙江中醫(yī)藥大學飲片廠浙江中醫(yī)藥大學飲片廠2 2生斑蝥生斑蝥統(tǒng)貨統(tǒng)貨S080820S080820云南云南1 1100100浙江中醫(yī)藥大學飲片廠浙江中醫(yī)藥大學飲片廠3 3生斑蝥生斑蝥統(tǒng)貨統(tǒng)貨S080821S080821云南云南2 2100100浙江中醫(yī)藥大學飲片廠浙江中醫(yī)藥大學飲片廠4 4大生斑蝥大生斑蝥統(tǒng)貨統(tǒng)

34、貨S080418AS080418A河南河南500500河南中醫(yī)學院河南中醫(yī)學院5 5小生斑蝥小生斑蝥統(tǒng)貨統(tǒng)貨S080418BS080418B河南河南500500河南中醫(yī)學院河南中醫(yī)學院6 6生斑蝥生斑蝥統(tǒng)貨統(tǒng)貨S090115S090115成都成都2020成都中醫(yī)藥大學成都中醫(yī)藥大學7 7生斑蝥生斑蝥統(tǒng)貨統(tǒng)貨S090221-1S090221-1禹州禹州1 1100100市售市售8 8生斑蝥生斑蝥統(tǒng)貨統(tǒng)貨S090221-2S090221-2禹州禹州2 2100100市售市售9 9生斑蝥生斑蝥統(tǒng)貨統(tǒng)貨S090221-3S090221-3安國安國100100市售市售1010生斑蝥生斑蝥統(tǒng)貨統(tǒng)貨S090

35、221-4S090221-4亳州亳州100100市售市售米炒斑蝥樣品來源表米炒斑蝥樣品來源表編編號號樣品稱號樣品稱號規(guī)格等級規(guī)格等級批號批號采購采購地地分量分量/g/g炮制消費單位炮制消費單位凈制米炒順序凈制米炒順序1 1米炒斑蝥米炒斑蝥大小混裝大小混裝080822080822貴州貴州200200浙江中醫(yī)藥大學飲片廠浙江中醫(yī)藥大學飲片廠米拌炒去頭足翅米拌炒去頭足翅2 2米炒斑蝥米炒斑蝥大小混裝大小混裝080820080820云南云南100100浙江中醫(yī)藥大學飲片廠浙江中醫(yī)藥大學飲片廠米拌炒去頭足翅米拌炒去頭足翅3 3米炒斑蝥米炒斑蝥大小混裝大小混裝080821080821云南云南200200浙

36、江中醫(yī)藥大學飲片廠浙江中醫(yī)藥大學飲片廠米拌炒去頭足翅米拌炒去頭足翅4 4米炒斑蝥米炒斑蝥大小混裝大小混裝081210081210陜西陜西1515陜西中醫(yī)學院陜西中醫(yī)學院去頭足翅米拌炒去頭足翅米拌炒5 5米炒斑蝥米炒斑蝥大小混裝大小混裝081212081212天津天津1212天津中醫(yī)藥大學天津中醫(yī)藥大學去頭足翅米拌炒去頭足翅米拌炒6 6米炒斑蝥米炒斑蝥大小混裝大小混裝081214081214江西江西1212江西中醫(yī)學院江西中醫(yī)學院去頭足翅米拌炒去頭足翅米拌炒7 7米炒大斑蝥米炒大斑蝥大大080418A080418A河南河南10001000河南中醫(yī)學院河南中醫(yī)學院去頭足翅米拌炒去頭足翅米拌炒8 8

37、米炒小斑蝥米炒小斑蝥小小080418B080418B河南河南10001000河南中醫(yī)學院河南中醫(yī)學院去頭足翅米拌炒去頭足翅米拌炒9 9米炒大斑蝥米炒大斑蝥大大090114-1090114-1貴州貴州143.7143.7浙江中醫(yī)藥大學飲片廠浙江中醫(yī)藥大學飲片廠去頭足翅米拌炒去頭足翅米拌炒1010米炒小斑蝥米炒小斑蝥小小090114-2090114-2貴州貴州52.652.6浙江中醫(yī)藥大學飲片廠浙江中醫(yī)藥大學飲片廠去頭足翅米拌炒去頭足翅米拌炒1111米炒大斑蝥米炒大斑蝥大大0901131-10901131-1云南云南67.267.2浙江中醫(yī)藥大學飲片廠浙江中醫(yī)藥大學飲片廠去頭足翅米拌炒去頭足翅米拌

38、炒1212米炒小斑蝥米炒小斑蝥小小0901131-20901131-2云南云南41.241.2浙江中醫(yī)藥大學飲片廠浙江中醫(yī)藥大學飲片廠去頭足翅米拌炒去頭足翅米拌炒1313米炒大斑蝥米炒大斑蝥大大0901132-10901132-1云南云南167.1167.1浙江中醫(yī)藥大學飲片廠浙江中醫(yī)藥大學飲片廠去頭足翅米拌炒去頭足翅米拌炒1414米炒小斑蝥米炒小斑蝥小小0901132-20901132-2云南云南64.764.7浙江中醫(yī)藥大學飲片廠浙江中醫(yī)藥大學飲片廠去頭足翅米拌炒去頭足翅米拌炒1515米炒斑蝥米炒斑蝥大小混裝大小混裝090221-4090221-4亳州亳州1010亳州市售亳州市售去頭足翅米

39、拌炒去頭足翅米拌炒 由于斑蝥是毒劇藥材，臨床用量較少，幾乎一切中藥飲片由于斑蝥是毒劇藥材，臨床用量較少，幾乎一切中藥飲片企業(yè)在申報企業(yè)在申報GMPGMP認證過程中均沒有上報此消費種類，認證過程中均沒有上報此消費種類， 由于每次炮制量太小，飲片消費企業(yè)無法用炒藥機進展機由于每次炮制量太小，飲片消費企業(yè)無法用炒藥機進展機械化消費，無法經(jīng)過設備控制消費條件。械化消費，無法經(jīng)過設備控制消費條件。 除浙江中醫(yī)藥大學飲片廠消費的樣品和河南中醫(yī)學院炮制除浙江中醫(yī)藥大學飲片廠消費的樣品和河南中醫(yī)學院炮制的樣品，我們請各地中醫(yī)藥院校炮制教研室的專家教授們采購的樣品，我們請各地中醫(yī)藥院校炮制教研室的專家教授們采購

40、當?shù)厥惺勖壮雌坊虿少徤唑救思庸づ谥圃鞛闃悠穪碓?，但當?shù)厥惺勖壮雌坊虿少徤唑救思庸づ谥圃鞛闃悠穪碓?，但鑒于斑蝥是毒劇藥不能隨意購買，因此斑蝥的來源和數(shù)量遭到鑒于斑蝥是毒劇藥不能隨意購買，因此斑蝥的來源和數(shù)量遭到了限制。了限制。斑蝥藥材斑蝥藥材 南方大斑蝥南方大斑蝥 體型較大，呈長圓形，長體型較大，呈長圓形，長1.51.52.5cm2.5cm，寬，寬0.50.51cm1cm。頭及口器向下垂，有較大的復眼。頭及口器向下垂，有較大的復眼及觸角各及觸角各1 1對，觸角多已零落。背部具革質(zhì)鞘翅對，觸角多已零落。背部具革質(zhì)鞘翅1 1 對，對，黑色，有黑色，有3 3條黃色或棕黃色的橫紋；鞘翅下面有棕褐

41、色條黃色或棕黃色的橫紋；鞘翅下面有棕褐色薄膜狀透明的內(nèi)翅薄膜狀透明的內(nèi)翅2 2 片。胸腹部烏黑色，胸部有足片。胸腹部烏黑色，胸部有足3 3對。對。有特殊的臭氣。有特殊的臭氣。 黃黑小斑蝥黃黑小斑蝥 體型較小，長體型較小，長1 11.5cm1.5cm。南方大斑蝥南方大斑蝥 黃黑小斑蝥黃黑小斑蝥 偽品斑蝥偽品斑蝥實驗實驗2.2.斑蝥藥材及飲片性狀、顯微鑒別研討斑蝥藥材及飲片性狀、顯微鑒別研討 性狀鑒別性狀鑒別大生斑蝥大生斑蝥 小生斑蝥小生斑蝥生斑蝥生斑蝥 南方大斑蝥南方大斑蝥 體型較大，頭足翅偶有殘留。頭部體型較大，頭足翅偶有殘留。頭部去除后的斷面不整齊，邊緣黑色，中心土黃色。有特去除后的斷面不整

42、齊，邊緣黑色，中心土黃色。有特殊的臭氣。殊的臭氣。 黃黑小斑蝥黃黑小斑蝥 體型較小。體型較小。 米炒斑蝥米炒斑蝥 南方大斑蝥南方大斑蝥 體型較大，頭足翅偶有殘留。色烏體型較大，頭足翅偶有殘留。色烏黑發(fā)亮，頭部去除后的斷面不整齊，邊緣黑色，中心黑發(fā)亮，頭部去除后的斷面不整齊，邊緣黑色，中心灰黃色。質(zhì)脆易碎，有米炒后的焦香氣。灰黃色。質(zhì)脆易碎，有米炒后的焦香氣。 黃黑小斑蝥黃黑小斑蝥 體型較小。體型較小。 顯微鑒別顯微鑒別 剛毛剛毛 橫紋肌纖維橫紋肌纖維 復眼碎片復眼碎片 體壁碎片體壁碎片 氣管壁碎片氣管壁碎片主要特征主要特征 由于米炒斑蝥與生斑蝥、斑蝥藥材均為動物昆蟲，其根由于米炒斑蝥與生斑蝥、

43、斑蝥藥材均為動物昆蟲，其根本組織一樣，沒有根本區(qū)別，顯微鑒別很難區(qū)分，故沒有收本組織一樣，沒有根本區(qū)別，顯微鑒別很難區(qū)分，故沒有收載顯微鑒別項。載顯微鑒別項。 因因20052005年版藥典方法提取時間較長，取樣量較多易出現(xiàn)年版藥典方法提取時間較長，取樣量較多易出現(xiàn)脫尾等，故對脫尾等，故對20052005版藥典版藥典TLCTLC鑒別供試品溶液制備方法進展鑒別供試品溶液制備方法進展如下調(diào)查：如下調(diào)查： 對提取方法的選擇對提取方法的選擇 從左至右從左至右: : 1 1、斑蝥素、斑蝥素5ul5ul； 2 2、3 3、20052005藥典法提取樣品；藥典法提取樣品； 4 4、斑蝥素、斑蝥素3ul 3ul

44、 5 5、6 6、超聲法提取樣品、超聲法提取樣品 超聲法時間短、更便利，故采用超聲提取法。超聲法時間短、更便利，故采用超聲提取法。實驗實驗3.3.斑蝥藥材及飲片斑蝥藥材及飲片TLCTLC鑒別鑒別對取樣量的選擇對取樣量的選擇從左至右：從左至右：1 1 、2 2、3 3 、4 3g4 3g樣品；樣品；5 5、斑蝥素、斑蝥素5ul5ul； 6 6、7 2g7 2g樣品樣品 取樣量為取樣量為3g3g者，色譜中有拖尾景象，故將取樣量減少為者，色譜中有拖尾景象，故將取樣量減少為2g2g。對石油醚沸程的選擇對石油醚沸程的選擇從左至右：從左至右：1 1、6 6、斑蝥素、斑蝥素5ul5ul；2 2、3 3、石油

45、醚、石油醚606090904 4、5 5、石油醚、石油醚30306060 兩種石油醚對斑蝥素斑點的分別度、拖尾情況均無影響，兩種石油醚對斑蝥素斑點的分別度、拖尾情況均無影響，但石油醚但石油醚30306060揮發(fā)性較好，故仍選用石油醚揮發(fā)性較好，故仍選用石油醚30306060。 取本品粉末取本品粉末2g2g，加三氯甲烷，加三氯甲烷20ml20ml，超聲處置功率，超聲處置功率400W400W，頻率頻率40KHz40KHz1515分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣用石油醚分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣用石油醚30306060洗洗2 2次，每次次，每次5ml5ml，小心傾去上清液，殘渣加三氯甲烷，小心傾去上清液，

46、殘渣加三氯甲烷1ml1ml使溶解，作為供試品溶液。使溶解，作為供試品溶液。供試品溶液的制備供試品溶液的制備 取斑蝥素對照品取斑蝥素對照品, ,加三氯甲烷制成每加三氯甲烷制成每1ml1ml含含5mg 5mg 的溶液，的溶液，作為對照品溶液。作為對照品溶液。對照品溶液的制備對照品溶液的制備 調(diào)查了不同展距對薄層斑點的調(diào)查了不同展距對薄層斑點的RfRf值的影響，為使值的影響，為使其適中應選擇其展距為其適中應選擇其展距為8cm8cm。 8cm6cm5cm對展距的選擇對展距的選擇 展開展開展開劑：三氯甲烷丙酮展開劑：三氯甲烷丙酮(49:1) (49:1) 顯色劑：顯色劑：0.10.1 溴甲酚綠乙醇溶液溴

47、甲酚綠乙醇溶液TLCTLC耐用性調(diào)查耐用性調(diào)查薄層板的選擇薄層板的選擇 分別對青島海洋化工廠消費的預制板分別對青島海洋化工廠消費的預制板1010* *20cm20cm、手工鋪制、手工鋪制板板1010* *20cm20cm、手工鋪制板、手工鋪制板1010* *10cm10cm進展調(diào)查，各板薄層進展調(diào)查，各板薄層斑點的分別度及拖尾情況良好。因選擇展距為斑點的分別度及拖尾情況良好。因選擇展距為6cm6cm，應選用寬，應選用寬度為度為10cm10cm的預制板。的預制板。 青島海洋預制板青島海洋預制板10*20cm 手工鋪板手工鋪板10*20cm 手工鋪板手工鋪板10*10cm 濕度的調(diào)查濕度的調(diào)查 根

48、據(jù)硫酸根據(jù)硫酸- -水溶液相對濕度表，配制水溶液相對濕度表，配制58.9%58.9%、26.2%26.2%濃度的濃度的硫酸水溶液，在密閉的枯燥器中分別呵斥相對濕度為硫酸水溶液，在密閉的枯燥器中分別呵斥相對濕度為20%20%、80%80%的環(huán)境，在不同濕度下薄層斑點的分別度及拖尾情況良好。的環(huán)境，在不同濕度下薄層斑點的分別度及拖尾情況良好。 不同濃度的硫酸水溶液不同濃度的硫酸水溶液相對濕度相對濕度% %202035358080硫酸濃度硫酸濃度% %58.958.951.051.026.226.2水溶液相對密度水溶液相對密度d425d4251.481.481.401.401.191.1920%36

49、%80%溫度的調(diào)查溫度的調(diào)查 分別在分別在441010冰箱、室溫條件下展開，冰箱、室溫條件下展開，在不同溫度下主斑點的分別度及拖尾情況良好。在不同溫度下主斑點的分別度及拖尾情況良好。 441010冰箱冰箱 1919室溫室溫 斑蝥有芫青科昆蟲南方大斑蝥斑蝥有芫青科昆蟲南方大斑蝥Mylabris phalerata Mylabris phalerata Pallas Pallas 或黃黑小斑蝥或黃黑小斑蝥Mylabris cichorii Linnaeus Mylabris cichorii Linnaeus 兩個種類，兩個種類，故對南方大斑蝥和黃黑小斑蝥兩個種類樣品分別進展鑒別。故對南方大斑蝥和

50、黃黑小斑蝥兩個種類樣品分別進展鑒別。 從左至右：從左至右：1 1、云南、云南1 1斑蝥藥材；斑蝥藥材；2 2、云南、云南2 2 米炒斑蝥；米炒斑蝥； 3 3、斑蝥素；、斑蝥素；4 4、 生小斑蝥；生小斑蝥； 5 5、米炒小斑蝥；、米炒小斑蝥；6 6、生大斑蝥；、生大斑蝥；7 7、米炒大斑蝥、米炒大斑蝥 結(jié)果顯示這兩個種類的鑒別情況一致。結(jié)果顯示這兩個種類的鑒別情況一致。 多來源種類的鑒別多來源種類的鑒別 定性鑒別定性鑒別 精細汲取上述斑蝥藥材、生斑蝥及米炒斑蝥各批樣品的供精細汲取上述斑蝥藥材、生斑蝥及米炒斑蝥各批樣品的供試品溶液及斑蝥素對照品溶液各試品溶液及斑蝥素對照品溶液各5l,5l,分別點

51、于同一硅膠分別點于同一硅膠G G薄層薄層板上。板上。 以氯仿以氯仿: :丙酮丙酮(49:1)(49:1)為展開劑，展開，展距為展開劑，展開，展距6cm6cm，晾干，噴，晾干，噴以以0.1%0.1%溴甲酚綠乙醇溶液，加熱至斑點顯色明晰。溴甲酚綠乙醇溶液，加熱至斑點顯色明晰。 供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯一樣顏色的供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯一樣顏色的斑點。斑點。 根據(jù)要求對根據(jù)要求對TLCTLC鑒別進展耐用性調(diào)查，其結(jié)果穩(wěn)定，重現(xiàn)鑒別進展耐用性調(diào)查，其結(jié)果穩(wěn)定，重現(xiàn)性高，故質(zhì)量規(guī)范中均收載性高，故質(zhì)量規(guī)范中均收載TLCTLC鑒別項。鑒別項。 但該但該TLCTLC色譜條件下

52、，僅顯斑蝥素色譜點，成分較單一，無色譜條件下，僅顯斑蝥素色譜點，成分較單一，無法區(qū)別斑蝥藥材、生斑蝥與米炒斑蝥。法區(qū)別斑蝥藥材、生斑蝥與米炒斑蝥。 按照中國藥典附錄按照中國藥典附錄 K K灰分測定法對各批次樣品進展總灰分灰分測定法對各批次樣品進展總灰分及酸不溶灰分測定。及酸不溶灰分測定。 實驗實驗4.4.斑蝥藥材及飲片水分、灰分和浸出物含量檢查斑蝥藥材及飲片水分、灰分和浸出物含量檢查按照中國藥典附錄按照中國藥典附錄 H H水分測定法第三法減壓枯燥法對各水分測定法第三法減壓枯燥法對各批次樣品進展水分的測定。批次樣品進展水分的測定。按照中國藥典附錄按照中國藥典附錄AA浸出物測定法中冷浸法測定各批次

53、樣品浸出物測定法中冷浸法測定各批次樣品的水溶性浸出物、醇溶性浸出物。的水溶性浸出物、醇溶性浸出物。 因斑蝥及米炒斑蝥為毒劇藥材，不入湯劑多入丸散，且其有效成分斑因斑蝥及米炒斑蝥為毒劇藥材，不入湯劑多入丸散，且其有效成分斑蝥素易升華，在浸出物測定中，枯燥過程使斑蝥素升華，因此，無論醇浸蝥素易升華，在浸出物測定中，枯燥過程使斑蝥素升華，因此，無論醇浸出物、還是水浸出物都不包含游離斑蝥素成分，故未對其浸出物的含量進出物、還是水浸出物都不包含游離斑蝥素成分，故未對其浸出物的含量進展限制要求。展限制要求。 斑蝥作為生長在植物葉片上的成蟲，不易摻附雜質(zhì)，并且經(jīng)凈制斑蝥作為生長在植物葉片上的成蟲，不易摻附雜

54、質(zhì)，并且經(jīng)凈制去頭足翅和炒制后灰分含量沒有明顯改動，酸不溶性灰分含量有些降去頭足翅和炒制后灰分含量沒有明顯改動，酸不溶性灰分含量有些降低但并不穩(wěn)定，因此在質(zhì)量規(guī)范中未將灰分、酸不溶灰分的檢查作為檢查低但并不穩(wěn)定，因此在質(zhì)量規(guī)范中未將灰分、酸不溶灰分的檢查作為檢查工程。工程。 斑蝥中所含斑蝥素具有升華性，斑蝥中所含斑蝥素具有升華性，8484即開場升華，故無法用烘干法測即開場升華，故無法用烘干法測定其水分；甲苯法要求樣品量較多取樣量要約含有定其水分；甲苯法要求樣品量較多取樣量要約含有1 14ml4ml水分，而米斑水分，而米斑蝥為炒制品，水分含量較低，樣品需求幾十克；由于是毒劇藥，普通運蝥為炒制品，

55、水分含量較低，樣品需求幾十克；由于是毒劇藥，普通運用單位采購量、庫存量均少，本次浙江中醫(yī)藥大學飲片廠所提供的三批樣用單位采購量、庫存量均少，本次浙江中醫(yī)藥大學飲片廠所提供的三批樣品，其中一批為品，其中一批為100g100g，用甲苯法測定其水分含量樣品量就顯缺乏；氣相法，用甲苯法測定其水分含量樣品量就顯缺乏；氣相法測定需求專門的儀器設備；最后選用減壓枯燥法測定各批次樣品的水分含測定需求專門的儀器設備；最后選用減壓枯燥法測定各批次樣品的水分含量，結(jié)果證明斑蝥中水分含量較低，但減壓枯燥法本身準確度不高，因此量，結(jié)果證明斑蝥中水分含量較低，但減壓枯燥法本身準確度不高，因此質(zhì)量規(guī)范中均不設水分限制檢查。

56、質(zhì)量規(guī)范中均不設水分限制檢查。色譜條件色譜條件對照品溶液的制備對照品溶液的制備 精細稱取斑蝥素對照品精細稱取斑蝥素對照品2.18mg2.18mg，置，置2ml2ml容量瓶內(nèi)，加甲醇容量瓶內(nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，備用。至刻度，搖勻，備用。實驗實驗5.5.斑蝥藥材及飲片斑蝥素、總斑蝥素含量測定斑蝥藥材及飲片斑蝥素、總斑蝥素含量測定流動相：甲醇水流動相：甲醇水(23:77)(23:77)，流速流速1.0ml/min1.0ml/min，檢測波長，檢測波長230nm230nm，柱溫：，柱溫：3030供試品溶液的制備供試品溶液的制備斑蝥素斑蝥素 取本品粉末約取本品粉末約1g1g，精細稱定，置具塞錐形瓶中，

57、用三氯甲烷作溶劑，精細稱定，置具塞錐形瓶中，用三氯甲烷作溶劑，超聲處置功率超聲處置功率400W400W，頻率，頻率40kHz40kHz2 2次次30ml30ml，30ml30ml，每次，每次1515分鐘，提取分鐘，提取液濾過，用少量三氯甲烷分次洗滌容器，濾液和洗液濾入同一蒸發(fā)皿中，揮液濾過，用少量三氯甲烷分次洗滌容器，濾液和洗液濾入同一蒸發(fā)皿中，揮干，殘渣用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至干，殘渣用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至10ml10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻, ,即得。即得。總斑蝥素總斑蝥素 取本品粗粉約取本品粗粉約0.3g0.3g，精細稱定，置，精細稱定，置50ml50ml具塞錐形瓶

58、中，加三氯甲具塞錐形瓶中，加三氯甲烷烷10ml,10ml,再加鹽酸溶液再加鹽酸溶液PH=1PH=110ml10ml，超聲處置功率，超聲處置功率400W400W，頻率，頻率40kHz40kHz1515分鐘，置分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷振搖提取分鐘，置分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷振搖提取5 5次次10ml,10ml,5ml,3ml,3ml10ml,10ml,5ml,3ml,3ml，殘渣和容器用三氯甲烷洗滌，殘渣和容器用三氯甲烷洗滌5 5次，每次次，每次3ml3ml，合并三氯甲烷液，抽濾，容器用三氯甲烷洗滌合并三氯甲烷液，抽濾，容器用三氯甲烷洗滌5 5次，每次次，每

59、次3ml3ml，濾液和洗液置，濾液和洗液置同一蒸發(fā)皿中，揮干，殘渣用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至同一蒸發(fā)皿中，揮干，殘渣用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至10ml10ml容量瓶中，加甲醇至刻容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。度，搖勻，即得。 分別精細汲取對照品溶液和供試品溶液各分別精細汲取對照品溶液和供試品溶液各10l10l，注入液相色譜儀，測，注入液相色譜儀，測定，即得。定，即得。含量測定含量測定供試品溶液的制備供試品溶液的制備 根據(jù)以上實驗測定結(jié)果，將斑蝥藥材斑蝥素含量計算平根據(jù)以上實驗測定結(jié)果，將斑蝥藥材斑蝥素含量計算平均值，下浮均值，下浮20% 20% 為為0.51%0.51%，綜合思索規(guī)定斑蝥藥材中斑蝥素，綜

60、合思索規(guī)定斑蝥藥材中斑蝥素含量限制規(guī)范為不得少于含量限制規(guī)范為不得少于0.50%0.50%； 生斑蝥因去除了分量近生斑蝥因去除了分量近30%30%的頭足翅，而頭足翅斑蝥素的頭足翅，而頭足翅斑蝥素含量又很低，因此斑蝥素含量升高，故規(guī)定其斑蝥素含量含量又很低，因此斑蝥素含量升高，故規(guī)定其斑蝥素含量限制規(guī)范為不得少于限制規(guī)范為不得少于0.65%0.65%； 將米炒斑蝥飲片斑蝥素含量計算平均值為將米炒斑蝥飲片斑蝥素含量計算平均值為0.54%0.54%，上浮，上浮20%20%，為，為0.65%0.65%，規(guī)定米炒斑蝥中斑蝥素應不得高于，規(guī)定米炒斑蝥中斑蝥素應不得高于0.650.65、總斑蝥素含量計算平均