第四章 固定化技術(shù)

1、 第四章第四章 酶與細(xì)胞的固定化酶與細(xì)胞的固定化 Immobilized enzyme and cell第一節(jié)第一節(jié) 概述概述第二節(jié)第二節(jié) 固定化酶的制備固定化酶的制備第三節(jié)第三節(jié) 固定化酶的性質(zhì)及其影響因素固定化酶的性質(zhì)及其影響因素第四節(jié)第四節(jié) 固定化細(xì)胞固定化細(xì)胞第五節(jié)第五節(jié) 固定化輔酶和原生質(zhì)體固定化輔酶和原生質(zhì)體第六節(jié)第六節(jié) 固定化酶（細(xì)胞）的應(yīng)用固定化酶（細(xì)胞）的應(yīng)用 第一節(jié)第一節(jié) 概述概述1.1.酶酶是蛋白質(zhì)，穩(wěn)定性差（熱、酸堿、有是蛋白質(zhì)，穩(wěn)定性差（熱、酸堿、有機(jī)溶劑對(duì)其有影響）。機(jī)溶劑對(duì)其有影響）。2.2.3.3.產(chǎn)物中混雜酶蛋白產(chǎn)物中混雜酶蛋白, ,產(chǎn)物分離純化困難。產(chǎn)物分離

2、純化困難。 游離酶的缺點(diǎn)：游離酶的缺點(diǎn)： 一、什么是固定化酶一、什么是固定化酶/固定化細(xì)胞固定化細(xì)胞？水溶性酶水溶性酶水不溶性載體水不溶性載體水不溶性酶水不溶性酶/細(xì)胞細(xì)胞（固定化酶（固定化酶/細(xì)胞）細(xì)胞）固定化技術(shù)固定化技術(shù) 固定化生物技術(shù)固定化生物技術(shù) 是通過(guò)化學(xué)或物理的方法，用固體材料將是通過(guò)化學(xué)或物理的方法，用固體材料將游離的酶或細(xì)胞束縛或限制于一定區(qū)域內(nèi)，但游離的酶或細(xì)胞束縛或限制于一定區(qū)域內(nèi)，但仍具有催化活性、并可回收及重復(fù)利用的一類仍具有催化活性、并可回收及重復(fù)利用的一類技術(shù)。技術(shù)。 二、固定化酶和固定化細(xì)胞的特點(diǎn)二、固定化酶和固定化細(xì)胞的特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：(1)(1)可提高穩(wěn)定性

3、可提高穩(wěn)定性。(2)(2)能回收，能回收，易與產(chǎn)物分離，易與產(chǎn)物分離，可反復(fù)使用。可反復(fù)使用。缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：(1)(1)存在擴(kuò)散限制。適于催化小分子物質(zhì)存在擴(kuò)散限制。適于催化小分子物質(zhì)。(2)(2)酶活性下降酶活性下降。(3)(3)首次投入成本高。首次投入成本高。1 1、固定化酶的特點(diǎn)、固定化酶的特點(diǎn) 優(yōu)越性：優(yōu)越性： (1)(1)降低成本降低成本，省去酶的分離純化工作，省去酶的分離純化工作; ; (2) (2)既既可作為單一酶，也可作可作為單一酶，也可作為為復(fù)合酶系復(fù)合酶系 完成部分代謝過(guò)程。完成部分代謝過(guò)程。 局限性：局限性：(1)(1)細(xì)胞內(nèi)多種酶的存在，會(huì)形成不需要的副細(xì)胞內(nèi)多種酶的存在

4、，會(huì)形成不需要的副 產(chǎn)物。產(chǎn)物。(2)(2)細(xì)胞膜、細(xì)胞壁和載體都存在著擴(kuò)散限制細(xì)胞膜、細(xì)胞壁和載體都存在著擴(kuò)散限制 作用。作用。2 2、固定化細(xì)胞的特點(diǎn)、固定化細(xì)胞的特點(diǎn) 二、固定化方法二、固定化方法固定化方法固定化方法（一）酶的固定化方法（一）酶的固定化方法吸附法吸附法共價(jià)偶聯(lián)法共價(jià)偶聯(lián)法交聯(lián)法交聯(lián)法包埋法包埋法網(wǎng)格型網(wǎng)格型微微囊型囊型離子交離子交換吸附換吸附物理物理吸附法吸附法 依據(jù)帶電的酶或細(xì)胞和載體之間的靜電依據(jù)帶電的酶或細(xì)胞和載體之間的靜電作用，使酶吸附于惰性固體的表面或離子交作用，使酶吸附于惰性固體的表面或離子交換劑上。換劑上。1.1.吸附法（吸附法（adsorptionadso

5、rption） 根據(jù)吸附劑的特點(diǎn)分根據(jù)吸附劑的特點(diǎn)分: : 1 1）物理吸附法（）物理吸附法（physical adsortionphysical adsortion）作用力：作用力：氫鍵、疏水鍵氫鍵、疏水鍵常用載體：常用載體：氧化鋁、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃、氧化鋁、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃、 硅膠、羥基磷灰石、纖維素（有機(jī)吸附劑）等。硅膠、羥基磷灰石、纖維素（有機(jī)吸附劑）等。無(wú)機(jī)吸附劑的吸附容量一般很低，多在無(wú)機(jī)吸附劑的吸附容量一般很低，多在1mg蛋白蛋白/g吸附劑。吸附劑。有機(jī)吸附劑的吸附容量一般較高，有機(jī)吸附劑的吸附容量一般較高，2 2）離子結(jié)合法（）離子結(jié)合法（ion bindi

6、ngion binding）：離子交換劑的吸附）：離子交換劑的吸附容量一般大于物理吸附劑容量一般大于物理吸附劑作用力：作用力：離子鍵離子鍵常用載體：常用載體：DEAE-DEAE-纖維素、纖維素、DEAE-DEAE-葡聚糖凝膠、葡聚糖凝膠、CM-CM- 纖維素纖維素優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：條件溫和，操作條件溫和，操作簡(jiǎn)便，酶活力損失少。簡(jiǎn)便，酶活力損失少。缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：結(jié)合力弱，易解結(jié)合力弱，易解吸附吸附。 借助共價(jià)借助共價(jià)鍵將酶的活性鍵將酶的活性非必需側(cè)鏈基非必需側(cè)鏈基團(tuán)和載體的功團(tuán)和載體的功能基團(tuán)進(jìn)行偶能基團(tuán)進(jìn)行偶聯(lián)。聯(lián)。2.2.共價(jià)偶聯(lián)法（共價(jià)偶聯(lián)法（covalent binding covalent

7、binding or covalent couplingor covalent coupling） 1 1）載體：）載體：親水載體優(yōu)于疏水載體親水載體優(yōu)于疏水載體 如如: :天然高分子衍生物天然高分子衍生物: : 纖維素纖維素 葡聚糖凝膠葡聚糖凝膠 親和性好，機(jī)械性能差親和性好，機(jī)械性能差 瓊脂糖瓊脂糖 合成聚合物：合成聚合物： 聚丙烯酰胺聚丙烯酰胺 甲基丙烯醇共聚物甲基丙烯醇共聚物 機(jī)械性能好，但有疏水結(jié)構(gòu)機(jī)械性能好，但有疏水結(jié)構(gòu) 聚苯乙烯聚苯乙烯2 2）偶聯(lián)方法：偶聯(lián)方法：偶聯(lián)偶聯(lián)成功與否成功與否取決于取決于：載體：載體：功能基功能基團(tuán)團(tuán)：芳香氨基，：芳香氨基，羥基羥基，羧甲基等。羧甲基等

8、。酶分子酶分子: :側(cè)鏈非必需基側(cè)鏈非必需基團(tuán)：團(tuán)：羧基，巰羧基，巰基，羥基，基，羥基，酚羥基酚羥基，咪唑基。，咪唑基。制備方法：制備方法： 由于載體上的功能基團(tuán)與酶分子上的側(cè)由于載體上的功能基團(tuán)與酶分子上的側(cè)鏈基團(tuán)間不具有直接反應(yīng)的能力，因此在偶鏈基團(tuán)間不具有直接反應(yīng)的能力，因此在偶聯(lián)反應(yīng)前，需先進(jìn)行載體聯(lián)反應(yīng)前，需先進(jìn)行載體活化，活化，在載體上引在載體上引進(jìn)某種活潑基團(tuán)，然后此活潑基團(tuán)再與酶分進(jìn)某種活潑基團(tuán)，然后此活潑基團(tuán)再與酶分子上某一基團(tuán)反應(yīng)形成共價(jià)結(jié)合。子上某一基團(tuán)反應(yīng)形成共價(jià)結(jié)合。 常用的偶聯(lián)反應(yīng)有：重氮化法、疊氮法、常用的偶聯(lián)反應(yīng)有：重氮化法、疊氮法、溴化氰法、烷基化法等。溴化氰

9、法、烷基化法等。 重氮法：重氮法： 這是帶這是帶芳香族氨基載體芳香族氨基載體的主要反應(yīng)，即的主要反應(yīng)，即載體先用亞硝酸處理成重氮鹽衍生物，然后再載體先用亞硝酸處理成重氮鹽衍生物，然后再在溫和的條件下和酶分子上相應(yīng)的基團(tuán)如酚羥在溫和的條件下和酶分子上相應(yīng)的基團(tuán)如酚羥基、咪唑基或氨基直接進(jìn)行偶聯(lián)。基、咪唑基或氨基直接進(jìn)行偶聯(lián)。n對(duì)含有羧甲基的載體，與肼基作用生成含有酰肼基團(tuán)的載對(duì)含有羧甲基的載體，與肼基作用生成含有酰肼基團(tuán)的載體，再與亞硝酸活化，生成疊氮化合物，最后與酶偶聯(lián)。體，再與亞硝酸活化，生成疊氮化合物，最后與酶偶聯(lián)。 肼解肼解 酯化酯化 疊氮化疊氮化(4)(4) 偶聯(lián)偶聯(lián) 溴化氰法：溴化氰

10、法： 帶帶羥基羥基的多糖類載體如纖維素、葡聚糖和瓊脂糖等常的多糖類載體如纖維素、葡聚糖和瓊脂糖等常用的反應(yīng)。在堿性條件下載體羥基和溴化氰反應(yīng)生成極活用的反應(yīng)。在堿性條件下載體羥基和溴化氰反應(yīng)生成極活潑的潑的亞氨基碳酸酯亞氨基碳酸酯，它在弱堿中可直接和酶的氨基進(jìn)行共，它在弱堿中可直接和酶的氨基進(jìn)行共價(jià)偶聯(lián)反應(yīng)。價(jià)偶聯(lián)反應(yīng)。 活化活化(2) 偶聯(lián)偶聯(lián)異脲鍵異脲鍵多鹵代物多鹵代物優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：酶與載體結(jié)合牢固，不會(huì)輕易脫落，酶與載體結(jié)合牢固，不會(huì)輕易脫落，可連續(xù)使用?？蛇B續(xù)使用。缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：反應(yīng)條件較激烈，易影響酶的空間反應(yīng)條件較激烈，易影響酶的空間構(gòu)象而影響酶的催化活性。構(gòu)象而影響酶的催化活性。 嚴(yán)

11、格控制反應(yīng)條件，提高反應(yīng)的專一性。嚴(yán)格控制反應(yīng)條件，提高反應(yīng)的專一性。 例如：例如：使反應(yīng)局限于使反應(yīng)局限于- -氨基，保護(hù)氨基，保護(hù)-氨基；氨基； 應(yīng)用可逆抑制劑或底物，封閉或牽制酶的活性中心與必需應(yīng)用可逆抑制劑或底物，封閉或牽制酶的活性中心與必需基團(tuán)，避免試劑影響酶的活性構(gòu)型和相應(yīng)基團(tuán)?；鶊F(tuán)，避免試劑影響酶的活性構(gòu)型和相應(yīng)基團(tuán)。 例如：例如：在進(jìn)行腺三磷酶在進(jìn)行腺三磷酶(ATPase(ATPase) )固定化時(shí)，可先用對(duì)羥固定化時(shí)，可先用對(duì)羥汞苯甲酸汞苯甲酸(PHMB)(PHMB)將酶的活性巰基保護(hù)起來(lái)，然后通過(guò)疊氮反將酶的活性巰基保護(hù)起來(lái)，然后通過(guò)疊氮反應(yīng)將酶偶聯(lián)于羧甲基纖維素上，在完成

12、固定化以后，再用還應(yīng)將酶偶聯(lián)于羧甲基纖維素上，在完成固定化以后，再用還原劑使原劑使-SH-SH活化，這樣可得到高活性的固定化酶?；罨@樣可得到高活性的固定化酶。 3.3.交聯(lián)法（交聯(lián)法（crosslinkingcrosslinking） 借助雙功能試劑使酶分子之間發(fā)生交借助雙功能試劑使酶分子之間發(fā)生交聯(lián)的固定化方法。聯(lián)的固定化方法。雙功能試劑：雙功能試劑：常用的是戊二醛常用的是戊二醛 O OH C CH2 CH2 CH2 C H利用戊二醛兩個(gè)醛基利用戊二醛兩個(gè)醛基都可與酶蛋白分子的都可與酶蛋白分子的游離氨基反應(yīng)，形成游離氨基反應(yīng)，形成Schiff堿，從而使酶或堿，從而使酶或菌體蛋白交聯(lián)，制成

13、菌體蛋白交聯(lián)，制成固定化酶或固定化菌固定化酶或固定化菌體。體。 此法與共價(jià)偶聯(lián)法利用的均是共價(jià)鍵，此法與共價(jià)偶聯(lián)法利用的均是共價(jià)鍵，不同之處：不同之處：交聯(lián)法不使用載體。交聯(lián)法不使用載體。 交聯(lián)反應(yīng)既能發(fā)生在分子間，也可發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)既能發(fā)生在分子間，也可發(fā)生在分子內(nèi)。在分子內(nèi)。 酶濃度低時(shí)，交聯(lián)發(fā)生在分子內(nèi)，酶仍保酶濃度低時(shí)，交聯(lián)發(fā)生在分子內(nèi)，酶仍保持溶解狀態(tài)。持溶解狀態(tài)。 酶濃度高時(shí)，交聯(lián)發(fā)生在分子間，酶變?yōu)槊笣舛雀邥r(shí)，交聯(lián)發(fā)生在分子間，酶變?yōu)椴蝗軕B(tài)。不溶態(tài)。 缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：(1)(1)反應(yīng)條件激烈，酶分子的多個(gè)基團(tuán)反應(yīng)條件激烈，酶分子的多個(gè)基團(tuán)被交聯(lián)，酶活力損失大。被交聯(lián)，酶活力損失大。(2

14、)(2)制備的固定化酶顆粒較小，給使用制備的固定化酶顆粒較小，給使用帶來(lái)不便。帶來(lái)不便。 在沒(méi)有其它載體參與，僅通過(guò)酶分子間交聯(lián)在沒(méi)有其它載體參與，僅通過(guò)酶分子間交聯(lián)形成的固定化酶，顆粒很小，而且機(jī)械性能不佳，形成的固定化酶，顆粒很小，而且機(jī)械性能不佳，為克服這一缺點(diǎn)，一般可先將酶吸附于載體上，為克服這一缺點(diǎn)，一般可先將酶吸附于載體上，或者包埋于膠內(nèi)或微囊內(nèi)，然后再交聯(lián)制成固定或者包埋于膠內(nèi)或微囊內(nèi)，然后再交聯(lián)制成固定化酶化酶“網(wǎng)網(wǎng)”膜或膜或“網(wǎng)網(wǎng)”顆粒。這種方法又稱為雙顆粒。這種方法又稱為雙重固定化法。重固定化法。 4. 4. 包埋法（包埋法（entrapmententrapment） 將酶

15、用物理的方法包埋將酶用物理的方法包埋在各種載體（高聚物）內(nèi)。在各種載體（高聚物）內(nèi)。分為：分為：網(wǎng)格型：網(wǎng)格型：將酶包埋在高分子將酶包埋在高分子凝膠細(xì)微網(wǎng)格中。凝膠細(xì)微網(wǎng)格中。微囊型：微囊型：將酶包埋在高分子將酶包埋在高分子半透膜中。半透膜中。1）網(wǎng)格型包埋法網(wǎng)格型包埋法（gel (latticgel (lattic) entrapment) entrapment） 又稱凝膠包埋法又稱凝膠包埋法凝膠凝膠包埋條件包埋條件 酶活性酶活性強(qiáng)度強(qiáng)度天然凝膠天然凝膠瓊脂、海藻酸鈣、瓊脂、海藻酸鈣、卡拉膠、明膠卡拉膠、明膠溫和溫和不變不變差差合成凝膠合成凝膠聚丙烯酰胺、光聚丙烯酰胺、光交聯(lián)樹脂交聯(lián)樹脂聚合

16、反應(yīng)聚合反應(yīng) 部分失活部分失活 高高使用的多孔載體及其特點(diǎn)使用的多孔載體及其特點(diǎn) 以天然膠為載體：以天然膠為載體： 先將這些天然物，溶于含水介質(zhì)，然后再與酶液混和，先將這些天然物，溶于含水介質(zhì)，然后再與酶液混和，最后分別通過(guò)各種方法，使之膠化，制成膠包埋的球狀或片最后分別通過(guò)各種方法，使之膠化，制成膠包埋的球狀或片狀固定化酶。狀固定化酶。 如：如：明膠可以添加丁醇；角叉菜膠可以添加明膠可以添加丁醇；角叉菜膠可以添加KClKCl液，然后液，然后冷卻；海藻酸可添加氯化鈣，使之以膠的形式沉淀下來(lái)。冷卻；海藻酸可添加氯化鈣，使之以膠的形式沉淀下來(lái)。 以合成膠為載體（如聚丙烯酰胺凝膠）：以合成膠為載體（

17、如聚丙烯酰胺凝膠）： 先將酶和丙烯酰胺單體分散于水介質(zhì)中，然后加入聚合先將酶和丙烯酰胺單體分散于水介質(zhì)中，然后加入聚合促進(jìn)劑和促進(jìn)劑和N.N-N.N-甲叉雙丙烯酰胺聚合，酶即包埋于形成的凝甲叉雙丙烯酰胺聚合，酶即包埋于形成的凝膠中。膠中。海藻酸鈣凝膠包埋法：海藻酸鈣凝膠包埋法： 滴至滴至海藻酸鈉溶液海藻酸鈉溶液E (or cell) CaCl2 溶液中溶液中 IE(or IC) 卡拉膠包埋法：卡拉膠包埋法： 滴至滴至 卡拉膠卡拉膠E (or cell) 預(yù)冷預(yù)冷KCl 溶液中溶液中 IE (or IC)聚丙烯酰胺凝膠包埋法：聚丙烯酰胺凝膠包埋法： APAcr+ Bis+E (or cell)

18、IE (or IC) TEMED2 2）微囊型包埋法）微囊型包埋法（microencapsulationmicroencapsulation） 又稱半透膜包埋法又稱半透膜包埋法 是將酶包埋在各種高分子聚合物制成的小球內(nèi)，是將酶包埋在各種高分子聚合物制成的小球內(nèi)，制成固定化酶。由于固定化形成的酶小球直徑一般只制成固定化酶。由于固定化形成的酶小球直徑一般只有幾微米至幾百微米，所以也稱為微囊化法。有幾微米至幾百微米，所以也稱為微囊化法。 半透膜：直徑幾十微米到幾百微米，厚約半透膜：直徑幾十微米到幾百微米，厚約25nm25nm。 半透膜孔徑半透膜孔徑 80%80%活性?；钚?。 （三）酶的最適溫度三）酶

19、的最適溫度 最適溫度與酶穩(wěn)定性有關(guān)。最適溫度與酶穩(wěn)定性有關(guān)。 多數(shù)酶固定化后熱穩(wěn)定性上升，最適溫多數(shù)酶固定化后熱穩(wěn)定性上升，最適溫度也上升（有例外）度也上升（有例外）。 （四）酶的最適（四）酶的最適pHpH 帶負(fù)電荷載體帶負(fù)電荷載體 ：最適：最適pH pH 向堿性偏移。向堿性偏移。 帶正電荷載體帶正電荷載體 ：最適：最適pH pH 向酸性偏移。向酸性偏移。（四）酶的最適（四）酶的最適pH 酶經(jīng)固定化后，其作用的最適酶經(jīng)固定化后，其作用的最適pHpH常會(huì)發(fā)生常會(huì)發(fā)生偏移，影響固定化酶最適偏移，影響固定化酶最適PHPH的因素主要有兩個(gè)。的因素主要有兩個(gè)。 (1) (1) 載體性質(zhì)對(duì)最適載體性質(zhì)對(duì)最

20、適pHpH影響：影響：n帶負(fù)電荷載體帶負(fù)電荷載體 ：最適：最適pH 向堿性偏移。向堿性偏移。n 帶正電荷載體帶正電荷載體 ：最適：最適pH 向酸性偏移。向酸性偏移。 (2) (2) 產(chǎn)物性質(zhì)對(duì)最適產(chǎn)物性質(zhì)對(duì)最適pHpH影響；影響； 反應(yīng)產(chǎn)物為酸性：固定化酶最適反應(yīng)產(chǎn)物為酸性：固定化酶最適pHpH比游離酶比游離酶的最適的最適pHpH要高。要高。 反應(yīng)產(chǎn)物為堿性：固定化酶最適反應(yīng)產(chǎn)物為堿性：固定化酶最適pHpH比游離酶比游離酶的最適的最適PHPH要低。要低。 若酶催化反應(yīng)產(chǎn)物為中性時(shí)，固定化酶最適若酶催化反應(yīng)產(chǎn)物為中性時(shí)，固定化酶最適pHpH不變。不變。（五）底物特異性：（五）底物特異性： 固定化

21、酶底物特異性與游離酶相比，有一定變化，一般固定化酶底物特異性與游離酶相比，有一定變化，一般為：為：作用于小分子底物的酶類經(jīng)固定化后，專一性基本不變。作用于小分子底物的酶類經(jīng)固定化后，專一性基本不變。而既可作用大分子也可作用小分子底物的酶類經(jīng)固定化后專而既可作用大分子也可作用小分子底物的酶類經(jīng)固定化后專一性會(huì)發(fā)生變化。一性會(huì)發(fā)生變化。 如：如： 胰蛋白酶既可作用于高分子的蛋白質(zhì)，又可作用于低胰蛋白酶既可作用于高分子的蛋白質(zhì)，又可作用于低分子的二肽或多肽，固定在羧甲基纖維素上的胰蛋白酶，對(duì)分子的二肽或多肽，固定在羧甲基纖維素上的胰蛋白酶，對(duì)二肽或多肽的作用保持不變，而對(duì)酪蛋白的作用僅為游離酶二肽或

22、多肽的作用保持不變，而對(duì)酪蛋白的作用僅為游離酶的的3 3左右左右. . 以羧甲基纖維素為載體經(jīng)疊氮法制備的核糖核酸酶，當(dāng)以羧甲基纖維素為載體經(jīng)疊氮法制備的核糖核酸酶，當(dāng)以核糖核酸為底物時(shí)，催化速度僅為游離酶的以核糖核酸為底物時(shí)，催化速度僅為游離酶的2%2%左右，而以左右，而以環(huán)化鳥苷酸環(huán)化鳥苷酸cGMP為底物時(shí)，催化速度可達(dá)游離酶的為底物時(shí)，催化速度可達(dá)游離酶的50506060。 固定化酶的表觀米氏常數(shù)固定化酶的表觀米氏常數(shù)K Km m隨載體的帶電隨載體的帶電性能變化。性能變化。 固定化載體與底物電荷相反固定化載體與底物電荷相反, ,固定化酶的固定化酶的K Km m值降低。值降低。 固定化載體

23、與底物電荷相同固定化載體與底物電荷相同, ,固定化酶的固定化酶的K Km m值顯著增加。值顯著增加。（六）酶的動(dòng)力學(xué)特征（六）酶的動(dòng)力學(xué)特征 與固定化酶相比，固定化細(xì)胞的情與固定化酶相比，固定化細(xì)胞的情況比較復(fù)雜。況比較復(fù)雜。 （1 1）有活性升高的現(xiàn)象。）有活性升高的現(xiàn)象。（2 2）穩(wěn)定性的增加）穩(wěn)定性的增加 。（3 3）最適溫度和最適）最適溫度和最適pHpH常保持不變。常保持不變。二、固定化細(xì)胞的性質(zhì)二、固定化細(xì)胞的性質(zhì) 三、固定化酶（細(xì)胞）的評(píng)價(jià)指標(biāo)三、固定化酶（細(xì)胞）的評(píng)價(jià)指標(biāo)n固定化酶（細(xì)胞）的活力固定化酶（細(xì)胞）的活力n偶聯(lián)率及相對(duì)活力的測(cè)定偶聯(lián)率及相對(duì)活力的測(cè)定n固定化酶（細(xì)胞）

24、的半衰期固定化酶（細(xì)胞）的半衰期 固定化酶活力測(cè)定基本上與溶液酶相似，也以反應(yīng)初速度表固定化酶活力測(cè)定基本上與溶液酶相似，也以反應(yīng)初速度表示即每毫克干重固定化酶每分鐘轉(zhuǎn)化示即每毫克干重固定化酶每分鐘轉(zhuǎn)化1umol底物量或形成底物量或形成1umol產(chǎn)物的酶量為一個(gè)單位產(chǎn)物的酶量為一個(gè)單位(umol/mgmin)，對(duì)于酶管、，對(duì)于酶管、酶膜、酶板等，則以單位面積（酶膜、酶板等，則以單位面積（cm2）的初速度來(lái)表示。）的初速度來(lái)表示。 如攪拌速度過(guò)高，會(huì)由于固定化酶破碎而造成活力上升。如攪拌速度過(guò)高，會(huì)由于固定化酶破碎而造成活力上升。 (一一) 固定化酶固定化酶(細(xì)胞細(xì)胞)的活力的活力 (二二)偶聯(lián)

25、率及相對(duì)活力偶聯(lián)率及相對(duì)活力偶聯(lián)效率以載體結(jié)合蛋白量偶聯(lián)效率以載體結(jié)合蛋白量(或酶活力或酶活力)的百分?jǐn)?shù)表示。的百分?jǐn)?shù)表示。 相對(duì)活力相對(duì)活力=固定化酶總活力固定化酶總活力/ (加入酶的總活力加入酶的總活力-上清液中上清液中未偶聯(lián)酶活力未偶聯(lián)酶活力)100% ( (三三) )半衰期半衰期 在連續(xù)測(cè)定條件下，固定化酶在連續(xù)測(cè)定條件下，固定化酶( (細(xì)胞細(xì)胞) )的活力下降為最初活力一半所經(jīng)歷的連續(xù)的活力下降為最初活力一半所經(jīng)歷的連續(xù)工作時(shí)間，以工作時(shí)間，以t t1/21/2表示。表示。 是衡量穩(wěn)定性的一項(xiàng)重要指標(biāo)。是衡量穩(wěn)定性的一項(xiàng)重要指標(biāo)。第三節(jié)第三節(jié) 原生質(zhì)體固定化原生質(zhì)體固定化 一、概述一

26、、概述二、原生質(zhì)體制備二、原生質(zhì)體制備三、原生質(zhì)體固定化三、原生質(zhì)體固定化四、固定化原生質(zhì)體的應(yīng)用四、固定化原生質(zhì)體的應(yīng)用 一、概述一、概述1 1、基本概念：、基本概念：將微生物細(xì)胞和植物細(xì)胞去細(xì)將微生物細(xì)胞和植物細(xì)胞去細(xì)胞壁后，可得原生質(zhì)體，將此原生質(zhì)體用胞壁后，可得原生質(zhì)體，將此原生質(zhì)體用多多孔凝膠包埋孔凝膠包埋，即為固定化原生質(zhì)體。，即為固定化原生質(zhì)體。 2 2、固定化細(xì)胞的缺陷、固定化細(xì)胞的缺陷(1) (1) 只能用于生產(chǎn)胞外酶和其它能夠分泌到細(xì)胞只能用于生產(chǎn)胞外酶和其它能夠分泌到細(xì)胞外的產(chǎn)物。外的產(chǎn)物。(2) (2) 由于載體的影響，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和產(chǎn)物擴(kuò)散受到由于載體的影響，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和產(chǎn)

27、物擴(kuò)散受到一定限制。一定限制。3 3、固定化原生質(zhì)體的優(yōu)點(diǎn)：、固定化原生質(zhì)體的優(yōu)點(diǎn)：(1) (1) 促進(jìn)胞內(nèi)物質(zhì)分泌到胞外。促進(jìn)胞內(nèi)物質(zhì)分泌到胞外。(2) (2) 有利于氧的傳遞，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。有利于氧的傳遞，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。二、原生質(zhì)體制備二、原生質(zhì)體制備n1. 制備方法與過(guò)程：制備方法與過(guò)程： 主要使用對(duì)細(xì)胞壁有主要使用對(duì)細(xì)胞壁有專一性作用的酶專一性作用的酶。其制備過(guò)程為：。其制備過(guò)程為：n(1) 將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞收集起來(lái)，懸浮于將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞收集起來(lái)，懸浮于含有滲透含有滲透壓穩(wěn)定劑的高滲緩沖液中壓穩(wěn)定劑的高滲緩沖液中。n(2) 加入適宜的細(xì)胞壁水解酶，在一定條件下作用一加入適宜的

28、細(xì)胞壁水解酶，在一定條件下作用一段時(shí)間，使細(xì)胞壁破壞。段時(shí)間，使細(xì)胞壁破壞。n(3) 分離除去細(xì)胞壁碎片、未作用細(xì)胞、及胞壁水解分離除去細(xì)胞壁碎片、未作用細(xì)胞、及胞壁水解酶，從而得原生質(zhì)體。酶，從而得原生質(zhì)體。（4）活性鑒定）活性鑒定 二、原生質(zhì)體制備二、原生質(zhì)體制備2. 2. 制備原則與要點(diǎn)：制備原則與要點(diǎn)：(1) (1) 既要破壞細(xì)胞壁，又不能影響到細(xì)胞膜的完整性。既要破壞細(xì)胞壁，又不能影響到細(xì)胞膜的完整性。(2) (2) 不能使細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)受到破壞。不能使細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)受到破壞。 3 3、破壁使用的酶：預(yù)處理，抑制細(xì)胞壁的、破壁使用的酶：預(yù)處理，抑制細(xì)胞壁的主要根據(jù)細(xì)胞壁的主要成分不同而進(jìn)

29、行選擇。主要根據(jù)細(xì)胞壁的主要成分不同而進(jìn)行選擇。 細(xì)菌胞壁：細(xì)菌胞壁：青霉素預(yù)處理，主要成份為肽聚糖，使用酶青霉素預(yù)處理，主要成份為肽聚糖，使用酶為溶菌酶。為溶菌酶。 酵母胞壁：酵母胞壁：巰基乙醇預(yù)處理，主要成份為巰基乙醇預(yù)處理，主要成份為-葡聚糖，葡聚糖，使用酶為使用酶為-1.3-1.3-葡聚糖酶。葡聚糖酶。 霉菌胞壁：霉菌胞壁：曲拉通曲拉通100100預(yù)處理，主要成份為幾丁質(zhì)及纖維預(yù)處理，主要成份為幾丁質(zhì)及纖維素，使用酶為幾丁質(zhì)酶及蝸牛酶素，使用酶為幾丁質(zhì)酶及蝸牛酶 植物胞壁：植物胞壁：主要成份為纖維素、半纖維素、果膠，使用主要成份為纖維素、半纖維素、果膠，使用酶為纖維素酶和果膠酶等。酶為

30、纖維素酶和果膠酶等。 4 4、注意事項(xiàng)：、注意事項(xiàng)：(1)(1)加入適當(dāng)?shù)臐B透壓穩(wěn)定劑，防止原生質(zhì)體破裂。加入適當(dāng)?shù)臐B透壓穩(wěn)定劑，防止原生質(zhì)體破裂。原則：對(duì)菌體和產(chǎn)物無(wú)毒、不影響水解酶活性、最適原則：對(duì)菌體和產(chǎn)物無(wú)毒、不影響水解酶活性、最適PhPh種類：細(xì)菌種類：細(xì)菌: :無(wú)機(jī)鹽（無(wú)機(jī)鹽（NaClNaCl、KClKCl、氯化鈣、氯化鎂、硫酸鎂氯化鈣、氯化鎂、硫酸鎂等等）酵母：甘露糖醇、山梨糖醇酵母：甘露糖醇、山梨糖醇(2) (2) 應(yīng)選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞制備原生質(zhì)體，以獲得較高的應(yīng)選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞制備原生質(zhì)體，以獲得較高的原生質(zhì)體形成率?；钚詸z測(cè)：伊文思藍(lán)染死細(xì)胞原生質(zhì)體形成率。活性檢測(cè)：

31、伊文思藍(lán)染死細(xì)胞(3) (3) 加入胞壁溶解酶的種類、濃度、酶作用溫度、加入胞壁溶解酶的種類、濃度、酶作用溫度、pHpH值及作值及作用時(shí)間需經(jīng)過(guò)預(yù)試以確定最佳作用條件。用時(shí)間需經(jīng)過(guò)預(yù)試以確定最佳作用條件。酶解要點(diǎn)：酶解要點(diǎn)：酶濃度：酶濃度：0.5-1%0.5-1%；溫度：兼顧酶解溫度和菌體生；溫度：兼顧酶解溫度和菌體生長(zhǎng)溫度；定時(shí)輕輕攪拌反應(yīng)液；酶解終點(diǎn)。長(zhǎng)溫度；定時(shí)輕輕攪拌反應(yīng)液；酶解終點(diǎn)。四、固定化原生質(zhì)體的應(yīng)用四、固定化原生質(zhì)體的應(yīng)用1 1、固定化原生質(zhì)體的特點(diǎn)：、固定化原生質(zhì)體的特點(diǎn)： （1 1）固定化原生質(zhì)體由于解除了細(xì)胞壁這一擴(kuò)散屏障可增）固定化原生質(zhì)體由于解除了細(xì)胞壁這一擴(kuò)散屏障

32、可增加細(xì)胞膜的通透性。有利于氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的傳遞和吸收，加細(xì)胞膜的通透性。有利于氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的傳遞和吸收，也有利于胞內(nèi)物質(zhì)的分泌，可顯著提高產(chǎn)率。也有利于胞內(nèi)物質(zhì)的分泌，可顯著提高產(chǎn)率。 （2 2）固定化原生質(zhì)體由于有載體的保護(hù)作用，具有較好的）固定化原生質(zhì)體由于有載體的保護(hù)作用，具有較好的操作穩(wěn)定性和保存穩(wěn)定性，可反復(fù)使用或連續(xù)使用較長(zhǎng)的操作穩(wěn)定性和保存穩(wěn)定性，可反復(fù)使用或連續(xù)使用較長(zhǎng)的時(shí)間，利于連續(xù)化生產(chǎn)。在冰箱保存較長(zhǎng)時(shí)間后仍能保持時(shí)間，利于連續(xù)化生產(chǎn)。在冰箱保存較長(zhǎng)時(shí)間后仍能保持其生產(chǎn)能力。其生產(chǎn)能力。（3 3）固定化原生質(zhì)體易于和發(fā)酵產(chǎn)物分開，有利于產(chǎn)物的）固定化原生質(zhì)體易于和發(fā)酵

33、產(chǎn)物分開，有利于產(chǎn)物的分離純化，提高產(chǎn)品質(zhì)量。分離純化，提高產(chǎn)品質(zhì)量。（4) 4) 固定化原生質(zhì)體發(fā)酵的培養(yǎng)基中需要添加滲透壓穩(wěn)定固定化原生質(zhì)體發(fā)酵的培養(yǎng)基中需要添加滲透壓穩(wěn)定劑，以保持原生質(zhì)體的穩(wěn)定性。這些滲透壓穩(wěn)定劑在發(fā)劑，以保持原生質(zhì)體的穩(wěn)定性。這些滲透壓穩(wěn)定劑在發(fā)酵結(jié)束后，可用層析或膜分離技術(shù)等方法與產(chǎn)物分離。酵結(jié)束后，可用層析或膜分離技術(shù)等方法與產(chǎn)物分離。 2 2、固定化原生質(zhì)體的應(yīng)用、固定化原生質(zhì)體的應(yīng)用 (1(1）AAAA的生產(chǎn)的生產(chǎn) 19821982年日本東京工業(yè)大學(xué)以瓊脂年日本東京工業(yè)大學(xué)以瓊脂多孔醋酸纖維素多孔醋酸纖維素固定化黃色短桿菌原生質(zhì)體，用于生產(chǎn)谷氨酸的研究。固定化

34、黃色短桿菌原生質(zhì)體，用于生產(chǎn)谷氨酸的研究。結(jié)果表明，由于解除了細(xì)胞壁的擴(kuò)散障礙，有利于谷氨結(jié)果表明，由于解除了細(xì)胞壁的擴(kuò)散障礙，有利于谷氨酸分泌到胞外，提高谷氨酸產(chǎn)率固定化原生質(zhì)體發(fā)酵酸分泌到胞外，提高谷氨酸產(chǎn)率固定化原生質(zhì)體發(fā)酵的谷氨酸產(chǎn)率為固定化細(xì)胞的的谷氨酸產(chǎn)率為固定化細(xì)胞的2.62.6倍可反復(fù)使用倍可反復(fù)使用6 6批。批。 (2) (2) 胞內(nèi)酶生產(chǎn)胞內(nèi)酶生產(chǎn) 19861986年，華南理工大學(xué)生物工程研究所用固定年，華南理工大學(xué)生物工程研究所用固定化枯草桿菌原生質(zhì)體生產(chǎn)堿性磷酸酶，使原來(lái)存在化枯草桿菌原生質(zhì)體生產(chǎn)堿性磷酸酶，使原來(lái)存在于細(xì)胞質(zhì)中的堿性磷酸酶，全部分泌到發(fā)酵液中，于細(xì)胞質(zhì)

35、中的堿性磷酸酶，全部分泌到發(fā)酵液中，提高產(chǎn)率提高產(chǎn)率36%36%，可連續(xù)使用，可連續(xù)使用3737天；用固定化黑曲霉原天；用固定化黑曲霉原生質(zhì)體生產(chǎn)葡萄糖氧化酶，使細(xì)胞內(nèi)的葡萄糖氧化生質(zhì)體生產(chǎn)葡萄糖氧化酶，使細(xì)胞內(nèi)的葡萄糖氧化酶酶90%90%以上分泌到發(fā)酵液中。以上分泌到發(fā)酵液中。 四 輔酶固定化n1 原因n有機(jī)輔因子中具有某些特殊的化學(xué)基團(tuán)，參與酶的催化反應(yīng)n有機(jī)輔因子在使用過(guò)程中要流失，并且不能自行再生n有機(jī)輔因子價(jià)格昂貴n工業(yè)上應(yīng)用全酶的關(guān)鍵是有機(jī)輔因子的保留和再生輔酶固定化的方法：n2 固定化方法與酶相似，一般采用溴化氰法，碳二亞胺法以及重氮偶聯(lián)法等共價(jià)偶聯(lián)，或?qū)⑵溥M(jìn)行適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)修飾后固

36、定在超濾器中。n3 輔酶固定化必須解決輔酶在多個(gè)酶之間傳遞的障礙。 輔酶的固定化輔酶的固定化輔酶固定化的形式：乙酰乙酰 -DL Ala L Ala +乙酸乙酸乙酰乙酰 -D Ala第三節(jié)第三節(jié) 固定化酶與固定化細(xì)胞的應(yīng)用固定化酶與固定化細(xì)胞的應(yīng)用 一、在工業(yè)生產(chǎn)上的應(yīng)用一、在工業(yè)生產(chǎn)上的應(yīng)用 1. 氨基酰化酶（氨基?；福ˋminoacylase） 世界上第一種工業(yè)化生產(chǎn)的固定化酶世界上第一種工業(yè)化生產(chǎn)的固定化酶泵泵儲(chǔ)罐反應(yīng)產(chǎn)物離心機(jī)離心機(jī)消消旋旋反反應(yīng)應(yīng)器器固定化固定化酶柱子酶柱子晶體 L-AlaL-Ala A-D-AlaA-L-Ala A-D-Ala 2.2.葡萄糖異構(gòu)酶葡萄糖異構(gòu)酶 世界

37、上生產(chǎn)規(guī)模世界上生產(chǎn)規(guī)模最大，應(yīng)用最為成功最大，應(yīng)用最為成功的一種固定化酶。的一種固定化酶。二、固定化酶在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用二、固定化酶在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用 1. 消血栓：消血栓：n纖溶酶是異源蛋白質(zhì)，在人體內(nèi)引起免疫纖溶酶是異源蛋白質(zhì)，在人體內(nèi)引起免疫反應(yīng)，無(wú)法長(zhǎng)期使用。反應(yīng)，無(wú)法長(zhǎng)期使用。n酶的不穩(wěn)定性使其在較短的時(shí)間內(nèi)失活。酶的不穩(wěn)定性使其在較短的時(shí)間內(nèi)失活。 用包埋法制備的酶固定化技術(shù)可克服上用包埋法制備的酶固定化技術(shù)可克服上述弊端，酶在囊中不能漏出，小分子物質(zhì)述弊端，酶在囊中不能漏出，小分子物質(zhì)能自由進(jìn)出。能自由進(jìn)出。2. 2. 人工腎：人工腎：原理：將病人血液中的尿素經(jīng)脲酶水解成原理：將病人血

38、液中的尿素經(jīng)脲酶水解成氨，再用活性炭吸附。即：用固定化脲酶氨，再用活性炭吸附。即：用固定化脲酶和微膠囊活性炭組成人工腎。和微膠囊活性炭組成人工腎。1.1.酶?jìng)鞲衅髅競(jìng)鞲衅?固定化酶和電化學(xué)傳感器的結(jié)合。固定化酶和電化學(xué)傳感器的結(jié)合。 優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：既有不溶性酶體系的優(yōu)點(diǎn)，又具有電化學(xué)既有不溶性酶體系的優(yōu)點(diǎn)，又具有電化學(xué)電極的高靈敏度；電極的高靈敏度；酶的專一反應(yīng)性，使其具有較高的選擇性，酶的專一反應(yīng)性，使其具有較高的選擇性，能夠直接在復(fù)雜試樣中進(jìn)行測(cè)定能夠直接在復(fù)雜試樣中進(jìn)行測(cè)定。 三、在分析檢測(cè)中的應(yīng)用三、在分析檢測(cè)中的應(yīng)用 19671967年年UpdikeUpdike等采用酶的固定化等采用酶

39、的固定化技術(shù)，將葡萄糖氧化酶固定在疏水膜技術(shù)，將葡萄糖氧化酶固定在疏水膜上，然后再和氧電極結(jié)合，組裝成了上，然后再和氧電極結(jié)合，組裝成了世界上第一個(gè)生物傳感器世界上第一個(gè)生物傳感器葡萄糖葡萄糖氧化酶電極氧化酶電極。 葡萄糖酶電極 酶電極示意圖D葡萄糖葡萄糖O2 D葡萄糖酸葡萄糖酸1，5內(nèi)酯內(nèi)酯H2O2半透膜酶膠層感應(yīng)電極GlucoseGluconic acidGlucose oxidaseOxygenHydrogen peroxideMembraneElectrode 根據(jù)反應(yīng)中消耗的根據(jù)反應(yīng)中消耗的O O2 2、生成的葡萄糖酸和、生成的葡萄糖酸和H H2 2O O2 2的量，的量，可以用氧電

40、極、可以用氧電極、pHpH電極和電極和H H2 2O O2 2電極來(lái)測(cè)定葡萄糖的含量。電極來(lái)測(cè)定葡萄糖的含量。 繼酶?jìng)鞲衅鳎ɡ^酶?jìng)鞲衅鳎╡nzyme sensorenzyme sensor）后，又出現(xiàn)：）后，又出現(xiàn)：n細(xì)胞器傳感器（細(xì)胞器傳感器（cell organelle sensorcell organelle sensor）n組織傳感器（組織傳感器（tissue sensortissue sensor）n微生物傳感器（微生物傳感器（microbe sensormicrobe sensor）n免疫傳感器（免疫傳感器（immunosensorimmunosensor）1）酶?jìng)鞲衅鞯脑恚┟競(jìng)?/p>

41、感器的原理n生物傳感器生物傳感器 由生物識(shí)別單元（如酶、微生物、由生物識(shí)別單元（如酶、微生物、抗體等）和物理轉(zhuǎn)換器相結(jié)合所構(gòu)成的抗體等）和物理轉(zhuǎn)換器相結(jié)合所構(gòu)成的分析儀器。分析儀器。生物識(shí)別元件生物識(shí)別元件(Biological recognition element)(Biological recognition element)n 是酶、抗原是酶、抗原( (體體) )、細(xì)胞器、組織、細(xì)胞器、組織切片和微生物細(xì)胞等生物分子經(jīng)固定切片和微生物細(xì)胞等生物分子經(jīng)固定化后形成的一種膜結(jié)構(gòu)，對(duì)被測(cè)定的化后形成的一種膜結(jié)構(gòu)，對(duì)被測(cè)定的物質(zhì)有選擇性的分子識(shí)別能力。物質(zhì)有選擇性的分子識(shí)別能力。 換能器換能器

42、(Transducer)(Transducer) 將識(shí)別元件上進(jìn)行的生化反應(yīng)中將識(shí)別元件上進(jìn)行的生化反應(yīng)中消耗或生成的化學(xué)物質(zhì)，或產(chǎn)生的光消耗或生成的化學(xué)物質(zhì)，或產(chǎn)生的光或熱等轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，并呈現(xiàn)一定的或熱等轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，并呈現(xiàn)一定的比例關(guān)系比例關(guān)系。酶?jìng)鞲衅鞴ぷ髟硎疽鈭D酶?jìng)鞲衅鞴ぷ髟硎疽鈭D酶?jìng)鞲衅髅競(jìng)鞲衅髦饕芍饕晒潭ɑ改ず妥儞Q器固定化酶膜和變換器組成：組成：固定化酶膜：固定化酶膜：選擇性地選擇性地“識(shí)別識(shí)別”并催化被檢測(cè)物質(zhì)并催化被檢測(cè)物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；變換器：變換器：把催化反應(yīng)中底物或產(chǎn)物的變量轉(zhuǎn)換成電把催化反應(yīng)中底物或產(chǎn)物的變量轉(zhuǎn)換成電信號(hào)，通過(guò)儀表顯示出來(lái)。信號(hào)

43、，通過(guò)儀表顯示出來(lái)。 2）酶?jìng)鞲衅鞯膽?yīng)用）酶?jìng)鞲衅鞯膽?yīng)用 n水質(zhì)監(jiān)測(cè)水質(zhì)監(jiān)測(cè) 用化學(xué)法測(cè)定酚時(shí)，硫化物、油類等用化學(xué)法測(cè)定酚時(shí)，硫化物、油類等可干擾其測(cè)定?？筛蓴_其測(cè)定。 從馬鈴薯中提純、經(jīng)吸附交聯(lián)得到從馬鈴薯中提純、經(jīng)吸附交聯(lián)得到的固定化多酚氧化酶與氧電極構(gòu)成酚傳感的固定化多酚氧化酶與氧電極構(gòu)成酚傳感器，可檢測(cè)大多數(shù)酚類化合物器，可檢測(cè)大多數(shù)酚類化合物。德國(guó)研發(fā)的環(huán)境廢水德國(guó)研發(fā)的環(huán)境廢水BODBOD分析儀分析儀醫(yī)療方面醫(yī)療方面葡萄糖傳感器和血糖測(cè)定儀葡萄糖傳感器和血糖測(cè)定儀 用葡萄糖氧化酶（用葡萄糖氧化酶（glucose glucose oxidase,GODoxidase,GOD）制成葡

44、萄糖傳感器，）制成葡萄糖傳感器，可測(cè)定血液中葡萄糖濃度?？蓽y(cè)定血液中葡萄糖濃度。 手掌型葡萄糖手掌型葡萄糖(glucose)(glucose)分析儀分析儀SBA-50SBA-50型單電極生物傳感分析儀型單電極生物傳感分析儀SBA-70型血糖乳酸自動(dòng)分析儀型血糖乳酸自動(dòng)分析儀n食品鮮度食品鮮度魚鮮度傳感器魚鮮度傳感器 在日本、加拿大等國(guó)廣泛用于魚類鮮在日本、加拿大等國(guó)廣泛用于魚類鮮度的測(cè)定。魚死后體內(nèi)度的測(cè)定。魚死后體內(nèi)ATPATP經(jīng)酶解依次形成經(jīng)酶解依次形成ADPADP、AMPAMP、IMPIMP、肌苷、次黃嘌呤和尿酸。、肌苷、次黃嘌呤和尿酸。鮮度可用鮮度可用K K值表示：值表示：K=K=肌苷肌苷+ +次黃嘌呤次黃嘌呤/ ATP +ADP+AMP+IMP +/ ATP +ADP+AMP+IMP +肌肌苷苷+ +次黃嘌呤次黃嘌呤+ +尿酸尿酸 大多數(shù)魚死后大多數(shù)魚死后5