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文檔簡介
1、選修3現(xiàn)代生物科技專題知識(shí)點(diǎn)總結(jié)柏 玲 專題1 基因工程基因工程的概念基因工程是指按照人們的愿望,進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì),通過體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因技術(shù),賦予生物以新的遺傳特性,創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品?;蚬こ淌窃贒NA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的,又叫做DNA重組技術(shù)。概念分析基因工程技術(shù)的原理=基因重組目的:創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。操作水平:DNA分子水平屬于有性生殖(一)基因工程的基本工具1.“分子手術(shù)刀”限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)(1)來源:主要是從原核生物中分離純化出來的。(2)功能:能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列,并且使
2、每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開,因此具有專一性。(3)結(jié)果:經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式:黏性末端和平末端(回文結(jié)構(gòu)特點(diǎn))。2.“分子縫合針”DNA連接酶(1)兩種DNA連接酶(E·coliDNA連接酶和T4-DNA連接酶)的比較:相同點(diǎn):都縫合磷酸二酯鍵。區(qū)別:E·coliDNA連接酶來源于T4噬菌體,只能將雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來;而T4DNA連接酶能縫合兩種末端,但連接平末端的之間的效率較低。(2)與DNA聚合酶作用的異同:DNA聚合酶只能將單個(gè)核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯鍵。DNA連
3、接酶是連接兩個(gè)DNA片段的末端,形成磷酸二酯鍵。3.“分子運(yùn)輸車”載體(1)載體具備的條件:能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存。具有一至多個(gè)限制酶切點(diǎn),供外源DNA片段插入。具有標(biāo)記基因,供重組DNA的鑒定和選擇。大小合適,具有一定的安全性。(2)最常用的載體是質(zhì)粒,它是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單的、獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外,并具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。(3)其它載體: 噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒4在進(jìn)行基因工程操作中,真正被用作載體的質(zhì)粒,都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進(jìn)行過人工改選的。(二)基因工程的基本操作程序步驟:目的基因的獲取,基因表達(dá)載體的構(gòu)建,將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞,目的基因的檢測與鑒定第一
4、步:目的基因的獲取1.目的基因是指: 編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因 。2.原核基因采取直接分離獲得,真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反轉(zhuǎn)錄法和化學(xué)合成法。3.PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因(1)PCR是聚合酶鏈性反應(yīng)的縮寫,發(fā)明人:穆里斯等人原理:DNA雙鏈復(fù)制 實(shí)質(zhì):是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)。(2)過程:第一步:(變性)加熱至9095DNA解鏈;第二步:(復(fù)性)冷卻到5560,引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈;第三步:(延伸)加熱至7075,熱穩(wěn)定DNA聚合酶從引物起始互補(bǔ)鏈的合成。PCR利用DNAR 熱變性原理,PCR擴(kuò)增儀實(shí)質(zhì)上是一臺(tái)能夠自動(dòng)調(diào)控調(diào)控的儀器。4,獲取目的基因
5、的方法:從自然界中已有的特種中分離及人工合成。第二步:基因表達(dá)載體的構(gòu)建1.目的:使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并且可以遺傳至下一代,使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。2.組成:目的基因啟動(dòng)子終止子標(biāo)記基因(1)啟動(dòng)子:是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段,位于基因的首端,是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位,能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA,最終獲得所需的蛋白質(zhì)。(2)終止子:也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段 ,位于基因的尾端。(3)標(biāo)記基因的作用:是為了鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因,從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來。常用的標(biāo)記基因是抗生素基因。第三步:將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞_1.轉(zhuǎn)化的概念:是目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞
6、內(nèi),并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。2.常用的轉(zhuǎn)化方法:將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞:采用最多的方法是 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,其次還有 基因槍法和 花粉管通道法等。將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞:最常用的方法是 顯微注射技術(shù)。此方法的受體細(xì)胞多是 受精卵(也可以是卵細(xì)胞)。將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞:原核生物作為受體細(xì)胞的原因是 繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對較少 ,最常用的原核細(xì)胞是 大腸桿菌 ,其轉(zhuǎn)化方法是:先用 Ca2+ 處理細(xì)胞,使其成為 感受態(tài)細(xì)胞 ,再將 重組表達(dá)載體DNA分子 溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合,在一定的溫度下促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子,完成轉(zhuǎn)化過程。3.重組細(xì)胞導(dǎo)入受體細(xì)胞后,篩選
7、含有基因表達(dá)載體受體細(xì)胞的依據(jù)是標(biāo)記基因是否表達(dá)。第四步:目的基因的檢測和表達(dá)1.首先要檢測 轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因,方法是采用 DNA分子雜交技術(shù)?;蛱结槪菏侵赣梅派湫酝凰鼗驘晒夥肿拥葮?biāo)記的DNA分子2.其次還要檢測 目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA,方法是采用 用標(biāo)記的目的基因作探針與mRNA雜交。3.最后檢測 目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì),方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取 蛋白質(zhì),用相應(yīng)的 抗體進(jìn)行抗原抗體雜交。4.有時(shí)還需進(jìn)行 個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定。如 轉(zhuǎn)基因抗蟲植物是否出現(xiàn)抗蟲性狀。(三)基因工程的應(yīng)用1.植物基因工程:抗蟲、抗病、抗逆轉(zhuǎn)基因植物,利用轉(zhuǎn)基因改良植物的品質(zhì)。
8、抗蟲棉,抗鹽堿地的農(nóng)作物,耐寒的番茄,抗除草劑的玉米,富含賴氨酸的轉(zhuǎn)基因玉米2.動(dòng)物基因工程:提高動(dòng)物生長速度、改善畜產(chǎn)品品質(zhì)、用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)藥物。導(dǎo)入人的生長激素的鯉魚,比一般的鯉魚長的快且大。用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)藥物:乳腺生物反應(yīng)器(乳房生物反應(yīng)器)最令人興奮的是利用基因工程技術(shù),使哺乳動(dòng)物本身變成“批量生產(chǎn)藥物的工廠”大概過程:目的基因(蛋白基因+乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子) 顯微注射方法 導(dǎo)入哺乳動(dòng)物受精卵 母體子宮內(nèi) 能產(chǎn)生藥品蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物能產(chǎn)生如:抗凝血酶,血清白蛋白,生長激素,抗胰蛋白酶,等大量蛋白質(zhì)類藥品。3.基因治療:把正常的外源基因?qū)氩∪梭w內(nèi),使該基因表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮作用。基因診
9、斷:是指用基因探針,利用DAN分子雜交原理,鑒定被檢測樣本上的遺傳信息,從而達(dá)到檢測病癥的目的,如鐮刀形貧血癥,苯丙酮尿癥,癌癥基因治療:基因治療是把正?;?qū)氩∪梭w內(nèi),使該基因的表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮功能,從而達(dá)到治療病癥的目的,這是治療遺傳病的最有效的手段?;蛑委煱ǎ后w外基因治療和體內(nèi)基因治療微生物的基因工程:利用轉(zhuǎn)基因工程菌生產(chǎn)藥物:如細(xì)胞因子,抗體,疫苗,激素(胰島素),干擾素等,已形成工業(yè)化。工程菌:用基因工程的方法,使外源基因得到高效率表達(dá)的菌類細(xì)胞株系一般稱為工程菌。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物作器官移植的供體:最大的難題是解決免疫排斥問題(四)微生物在基因工程中的應(yīng)用研究工具酶主要來自微生物, 最重
10、要的目的基因供體庫之一, 目的基因的載體之一作用受體細(xì)胞, 提供用于發(fā)酵的工程菌?;蚬こ痰膬?yōu)點(diǎn):克服不同生物遠(yuǎn)緣雜交的障礙。目的性強(qiáng),能夠定向的改變生物的品質(zhì)。 縮短育種周期。(五)蛋白質(zhì)工程的概念蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ),通過基因修飾或基因合成,對現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造,或制造一種新的蛋白質(zhì),以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求。(基因工程在原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì))轉(zhuǎn)錄 翻譯專題2 細(xì)胞工程細(xì)胞工程:是指導(dǎo)應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的原理和方法,通過細(xì)胞水平或細(xì)胞器水平上的操作,按照人的意愿來改變細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)或獲得細(xì)胞產(chǎn)品的一門綜合科學(xué)技術(shù),根據(jù)操
11、作對象不同分為:植物細(xì)胞工程,動(dòng)物細(xì)胞工程操作水平:細(xì)胞水平的操作(一)植物細(xì)胞工程 (屬于無性繁殖)無性繁殖最大優(yōu)點(diǎn):保持優(yōu)良品種的遺傳特征。1.理論基礎(chǔ)(原理):細(xì)胞全能性(具有某種生物全部遺傳信息的任何一個(gè)細(xì)胞都具有發(fā)育成完整生物體的潛能,也就是說,每個(gè)生物細(xì)胞都具有全能性的特點(diǎn),)植物具有全能性的原因:分化的細(xì)胞,仍具有形成完整植株所需要的全部基因。全能性表達(dá)的難易程度:受精卵生殖細(xì)胞干細(xì)胞體細(xì)胞;植物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞理論上,生物的任何一個(gè)細(xì)胞都具有發(fā)育成完整植物的潛力,但是在生物的生長發(fā)育過程中,細(xì)胞并不會(huì)表現(xiàn)出全能性,而是分化成各種器官和組織,是因?yàn)樵谔囟ǖ臅r(shí)間和空間條件下,植物細(xì)胞工
12、程的基本技術(shù):植物組織培養(yǎng),植物體細(xì)胞雜交技術(shù)2.植物組織培養(yǎng)技術(shù)(1)過程:離體的植物器官、組織或細(xì)胞 脫分化 愈傷組織 再分化 試管苗 植物體 (外植體消毒) 生長素及細(xì)胞分裂素 (避光) 生長素及細(xì)胞分裂素(給光)植物全能性表達(dá)的條件:離體的,提供人為條件(營養(yǎng),激素,適宜的外界條件)愈傷組織:細(xì)胞排列疏松而無規(guī)則是一種高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞培養(yǎng)基:固體培養(yǎng)基,含有礦質(zhì)元素,碳源(蔗糖),氮源,植物激素,維生素(2)植物組織培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用:探究植物科學(xué)理論的重要手段,微型繁殖、培養(yǎng)脫毒苗、生產(chǎn)人工種子、培養(yǎng)新品種(單倍體育種)、轉(zhuǎn)基因植物的培養(yǎng),細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)。(3)地
13、位:是培育轉(zhuǎn)基因植物、植物體細(xì)胞雜交培育植物新品種的最后一道工序。3.植物體細(xì)胞雜交技術(shù)(1)過程:原生質(zhì)制備 細(xì)胞融合 雜種細(xì)胞篩選 細(xì)胞培養(yǎng) 組織培養(yǎng)技術(shù) 植物鑒定 植物再生(2)誘導(dǎo)融合的方法:物理法包括離心、振動(dòng)、電刺激等。化學(xué)法一般是用聚乙二醇(PEG)作為誘導(dǎo)劑。(3)去細(xì)胞壁:纖維素酶和果膠酶 等到雜種細(xì)胞再生出細(xì)胞壁即細(xì)胞雜交結(jié)束,意義:克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙。打破特種之間的生殖隔離,擴(kuò)大遺傳重組范圍。微型繁殖的優(yōu)點(diǎn):可以保持優(yōu)良品種的遺傳特性,可以高效快速地實(shí)驗(yàn)種苗的大量繁殖人工種子的優(yōu)點(diǎn):無性繁殖,完全保持優(yōu)良品種的遺傳特性,不受季節(jié)限制,方便運(yùn)輸及貯藏單倍體育種的優(yōu)點(diǎn)
14、:極大縮短了育種的年限,節(jié)約了大量的人力物力。(二)動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段:動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng),動(dòng)物細(xì)胞核移植,動(dòng)物細(xì)胞融合,生產(chǎn)單克隆抗體。其中動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是基礎(chǔ)技術(shù) 1. 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)(1)概念:動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織,將它分散成單個(gè)細(xì)胞,然后放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細(xì)胞生長和繁殖。(2)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的流程:取動(dòng)物組織塊(動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織)剪碎用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞制成細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行原代培養(yǎng)貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)。(3)細(xì)胞貼壁和接觸抑制:懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上,稱
15、為細(xì)胞貼壁。細(xì)胞數(shù)目不斷增多,當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互抑制時(shí),細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖,這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。(4)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要滿足以下條件無菌、無毒的環(huán)境:培養(yǎng)液應(yīng)進(jìn)行無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素,以防培養(yǎng)過程中的污染。此外,應(yīng)定期更換培養(yǎng)液,防止代謝產(chǎn)物積累對細(xì)胞自身造成危害。營養(yǎng):合成培養(yǎng)基成分:糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等。通常需加入血清、血漿等天然成分。溫度:適宜溫度:哺乳動(dòng)物多是36.50.5;pH:7.27.4。氣體環(huán)境:95%空氣5%CO2。O2是細(xì)胞代謝所必需的,CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。(5)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用:制備病
16、毒疫苗、 制備單克隆抗體、 檢測有毒物質(zhì)、 培養(yǎng)醫(yī)學(xué)研究的各種細(xì)胞。2.動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物(1)哺乳動(dòng)物核移植可以分為胚胎細(xì)胞核移植(比較容易)和體細(xì)胞核移植(比較難)。(2)選用去核卵(母)細(xì)胞的原因:卵(母)細(xì)胞比較大,容易操作;卵(母)細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)多,營養(yǎng)豐富。(3)體細(xì)胞核移植的大致過程是:(右圖)核移植胚胎移植(4)體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用:加速家畜遺傳改良進(jìn)程,促進(jìn)良畜群繁育; 保護(hù)瀕危物種,增大存活數(shù)量;生產(chǎn)珍貴的醫(yī)用蛋白; 作為異種移植的供體;用于組織器官的移植等。(5)體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題:克隆動(dòng)物存在著健康問題、表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷等。3.動(dòng)物細(xì)胞融合(1)動(dòng)
17、物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交,是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。融合后形成的具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞,稱為雜交細(xì)胞。(2)動(dòng)物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的原理基本相同,誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法與植物原生質(zhì)體融合的方法類似,常用的誘導(dǎo)因素有聚乙二醇、滅活的病毒、電刺激等。(3)動(dòng)物細(xì)胞融合的意義:克服了遠(yuǎn)緣雜交的不親和性,成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物生物新品種培育的重要手段。(4)動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較:比較項(xiàng)目細(xì)胞融合的原理細(xì)胞融合的方法誘導(dǎo)手段用法植物體細(xì)胞雜交細(xì)胞膜的流動(dòng)性去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合離心、電刺激、振動(dòng),聚乙二醇等試劑誘導(dǎo)克服了遠(yuǎn)緣
18、雜交的不親和性,獲得雜種植株動(dòng)物細(xì)胞融合細(xì)胞膜的流動(dòng)性使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合除應(yīng)用植物細(xì)胞雜交手段外,再加滅活的病毒誘導(dǎo)制備單克隆抗體的技術(shù)之一4.單克隆抗體(1)抗體:一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。從血清中分離出的抗體產(chǎn)量低、純度低、特異性差。(2)單克隆抗體的制備過程:注入小鼠細(xì)胞融合分離抗原注入小鼠體內(nèi)B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)選擇培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)基體內(nèi)培養(yǎng)體外培養(yǎng)從腹水提取從培養(yǎng)液提取單克隆抗體(3)雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn):既能大量繁殖,又能產(chǎn)生專一的抗體。(4)單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn):特異性強(qiáng),靈敏度高,并能大量制備。(5)單克隆抗體的作用: 作為診斷試劑:準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原物質(zhì)的
19、細(xì)微差異,并跟一定抗原發(fā)生特異性結(jié)合,具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速的優(yōu)點(diǎn)。 用于治療疾病和運(yùn)載藥物:主要用于治療癌癥治療,可制成“生物導(dǎo)彈”,也有少量用于治療其它疾病。專題3 胚胎工程胚胎工程:是指對動(dòng)物早期胚胎或配子所進(jìn)行的多種顯微操作和處理技術(shù),如胚胎移植、體外受精、胚胎分割、胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)等技術(shù)。經(jīng)過處理后獲得的胚胎,還需移植到雌性動(dòng)物體內(nèi)生產(chǎn)后代,以滿足人類的各種需求。胚胎工程的許多技術(shù),實(shí)際是在體外條件下,對動(dòng)物自然受精和早期胚胎發(fā)育條件進(jìn)行的模擬操作。(一)體內(nèi)受精和早期胚胎發(fā)育1、精子的發(fā)生場所:睪丸(精巢) 時(shí)間:初情期-生殖機(jī)能衰退階段:精原細(xì)胞 有絲分裂 許多初級(jí)精母細(xì)胞 減
20、數(shù)第一次分裂 次級(jí)精母細(xì)胞 減數(shù)第二次分裂 成熟的精子 變形 精細(xì)胞變形:細(xì)胞核-精子頭的主要部分 高爾基體-頂體 中心體-尾 線粒體-鞘膜 其它物質(zhì)-原生質(zhì)滴-脫落精子的外形:似蝌蚪,分頭,頸,尾三部分。精子的大小與動(dòng)物的體型大小無關(guān)。2卵子的發(fā)生場所:卵巢 時(shí)間:性別分化以后(胎兒期)-(精子與卵子在發(fā)生時(shí)間上的差別是重要的區(qū)別)減數(shù)第一次分裂是在雌性動(dòng)物排卵前后完成的,其結(jié)果產(chǎn)生一個(gè)次級(jí)卵母細(xì)胞和第一極體,進(jìn)入輸卵管,準(zhǔn)備與精子受精(不同的動(dòng)物排卵的時(shí)間不同)。意思是排出的卵細(xì)胞是次級(jí)卵母細(xì)胞,不是成熟細(xì)胞。減數(shù)第二次分裂是在精子和卵子結(jié)合的過程中完成的,當(dāng)卵黃膜和透明帶的間隙可以觀察到
21、兩個(gè)極體時(shí),說明卵子已經(jīng)完成了受精,這是判斷卵子是否受精的重要標(biāo)志。3受精:場所:雌性的輸卵管內(nèi)完成的準(zhǔn)備階段1:精子獲能:剛排出的精子不能立即與卵子受精,必須在雌性動(dòng)物生殖道發(fā)生相應(yīng)的生理變化后,才能獲得受精能力準(zhǔn)備階段2:卵子的準(zhǔn)備:動(dòng)物排出的卵子成熟程度不同,但都在要輸卵管內(nèi)進(jìn)一步成熟,達(dá)到減數(shù)第二次分裂的中期,才具備與精子受精的能力。受精階段:過程主要包括:精子穿越放射冠,透明帶,進(jìn)入卵黃膜,原核形成和配子結(jié)合。過程:通過頂體反應(yīng)精子穿越放射冠(卵丘細(xì)胞群)-接觸透明帶后穿越透明帶接觸卵黃膜(發(fā)生透明帶反應(yīng))-精子與卵黃膜融合,精子進(jìn)入卵(卵黃膜封閉作用)-尾總脫離,核膜破裂形成雄原核
22、,卵子完成減數(shù)第二次分裂,形成雌原核,兩核結(jié)合,受精結(jié)束。4、動(dòng)物胚胎發(fā)育的基本過程(1)卵裂期:特點(diǎn):細(xì)胞有絲分裂,細(xì)胞數(shù)量不斷增加,但胚胎的總體體積并不增加,或略有減小。 (2)桑椹胚:特點(diǎn):胚胎細(xì)胞數(shù)目達(dá)到32個(gè)左右時(shí),胚胎形成致密的細(xì)胞團(tuán),形似桑椹。是全能細(xì)胞。(3)囊 胚:特點(diǎn):細(xì)胞開始出現(xiàn)分化(該時(shí)期細(xì)胞的全能性仍比較高)。聚集在胚胎一端個(gè)體較大的細(xì)胞稱為內(nèi)細(xì)胞團(tuán),將來發(fā)育成胎兒的各種組織。中間的空腔稱為囊胚腔。(4)原腸胚:特點(diǎn):有了三胚層的分化,具有囊胚腔和原腸腔。胚胎發(fā)育(受精卵幼體)后,生物體進(jìn)行胚后發(fā)育(胎兒-性成熟)植物是從受精卵-種子,胚后發(fā)育從種子-開發(fā)結(jié)果(二)體
23、外受精和早期胚胎培養(yǎng)1 體外受精主要過程包括:卵母細(xì)胞的采集,精子的獲取,和受精 (1)卵母細(xì)胞的采集和培養(yǎng):主要方法:用促性腺激素處理,使其排出更多的卵子,然后,從輸卵管中沖取卵子,直接與獲能的精子在體外受精。第二種方法:從剛屠宰母畜的卵巢中采集卵母細(xì)胞;第三種方法是借助超聲波探測儀、腹腔鏡等直接從活體動(dòng)物的卵巢中吸取卵母細(xì)胞。采集的卵母細(xì)胞,都要在體外經(jīng)人工培養(yǎng)成熟后,才能與獲能的精子受精。(2) 精子的采集和獲能:假陰道法,手握法和電刺激法,在體外受精前,要對精子進(jìn)行獲能處理。培養(yǎng)法和化學(xué)誘導(dǎo)法兩種(把精子放在人工配制的獲能液中如肝素中)(3) 受精:獲能的精子和培養(yǎng)成熟的卵細(xì)胞在獲能溶
24、液或?qū)S玫氖芫芤褐型瓿墒芫^程。(4)胚胎的早期培養(yǎng):精子與卵子在體外受精后,應(yīng)將受精卵移入發(fā)育培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng),以檢查受精狀況和受精卵的發(fā)育能力。培養(yǎng)液成分較復(fù)雜,除一些無機(jī)鹽和有機(jī)鹽外,還需添加維生素、激素、氨基酸、核苷酸等營養(yǎng)成分,以及血清等物質(zhì)。當(dāng)胚胎發(fā)育到適宜的階段時(shí),可將其取出向受體移植或冷凍保存。不同動(dòng)物胚胎移植的時(shí)間不同。(牛、羊一般要培育到桑椹胚或囊胚階段才能進(jìn)行移植,小鼠、家兔等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物可在更早的階段移植,人的體外受精胚胎可在4個(gè)細(xì)胞階段移植。)2.胚胎移植(1)胚胎移植是指將雌性動(dòng)物的早期胚胎,或者通過體外受精及其它方式得到的胚胎,移植到同種的、生理狀態(tài)相同的其它雌性動(dòng)
25、物的體內(nèi),使之繼續(xù)發(fā)育為新個(gè)體的技術(shù)。其中提供胚胎的個(gè)體稱為“供體”,接受胚胎的個(gè)體稱為“受體”。(供體為優(yōu)良品種,作為受體的雌性動(dòng)物應(yīng)為常見或存量大的品種。)地位:如轉(zhuǎn)基因、核移植,或體外受精等任何一項(xiàng)胚胎工程技術(shù)所生產(chǎn)的胚胎,都必須經(jīng)過胚胎移植技術(shù)才能獲得后代,是胚胎工程的最后一道“工序”。(三)胚胎工程的應(yīng)用及前景1胚胎移植(1 ) 胚胎移植:的指將雌性動(dòng)物的早期胚胎,或者通過體外受精及其他方式得到的胚胎,移植到同種的,生理狀態(tài)相同的其他雌性動(dòng)物的體內(nèi),使之繼續(xù)發(fā)育為新個(gè)體的技術(shù)。胚胎移植是胚胎工程其他技術(shù)的最后一道工序(2) 胚胎移植的意義:大大縮短了供體本身的繁殖周期,充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個(gè)體的繁殖能力。應(yīng)用:良種畜群迅速擴(kuò)大,加速了育種工作和品種改良;胚胎移植不受時(shí)間和地域的限制,大量節(jié)省了購買種畜的費(fèi)用;一次多胎或一次雙胎;建立胚胎庫,保存品種資源和瀕危物種。(3) 生理學(xué)基礎(chǔ):動(dòng)物發(fā)情排卵后,同種動(dòng)物的供、受體生殖器官的生理變化是相同的。這就為供體的胚胎移入受體提供了相同的生理環(huán)境。早期胚胎在一定時(shí)間內(nèi)處于游離狀態(tài)。這就為胚胎的收集提供了可能。受體對移入子宮的外來胚胎不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)。這為胚胎在受體的存活提供了可能。供體胚胎可與受體子宮建立正常的生理和組織聯(lián)系,但供體胚胎的遺傳特性在孕育過程中不受影響。(4) 基本
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