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文檔簡介

1、高效液相色譜柱效能的評定1. 實驗目的和要求1.1了解高效液相色譜儀的基本結構。1.2初步掌握高效液相色譜儀的基本操作方法。1.3 學習高效液相色譜柱效能的評定及分離度的測定方法。2. 實驗原理苯、萘、聯(lián)苯分子非極性部分的總表面積不同，締合能力不同，其保留時間也不同。通過計算色譜峰的理論塔板數(shù)以及各個化學物質(zhì)間的分離度評價色譜柱的效能。3. 實驗儀器與試劑3.1 儀器高效液相色譜儀（帶自動進樣器，或配置微量進樣器）分析天平3.2 試劑苯、萘、聯(lián)苯（均為分析純）甲醇（色譜純）純凈水4. 實驗步驟4.1 色譜條件色譜柱：C18，4.6×150mm，5m流動相：甲醇-水（80：20，v/v

2、）流速：1mL·min-1檢測波長：254nm柱溫：30進樣量：10L4.2 操作步驟l 分別精密配制含苯、萘、聯(lián)苯濃度均為約1mg·mL-1的3份對照品溶液各10mL。l 分別精密吸取上述對照品溶液各2mL置于10mL容量瓶中，加流動相稀釋，并定容至刻度，搖勻，得到含苯、萘、聯(lián)苯的混合對照品溶液。l 按照上述色譜條件操作，進樣，記錄色譜圖。l 計算各色譜峰的理論塔板數(shù)及各峰間分離度。4.3 實驗數(shù)據(jù)處理l 記錄實驗條件，測試各試樣后記錄苯、萘、聯(lián)苯的保留時間、峰寬、半峰寬，計算出各物質(zhì)對應的理論塔板數(shù)。根據(jù)保留時間與峰寬信息，計算相鄰物質(zhì)對間的分離度。組分試驗號tR（min）W（min）W1/2（min）n（塔板·m-1）苯12平均萘12平均聯(lián)苯12平均l 柱效計算式中：tR為峰值保留時間（min），W1/2為半峰寬（min），W為峰寬（min）l 分離度計算式中：tR1和tR2分別為相鄰兩組分的峰值保留時間（min）W1和W2分別為相鄰兩組分色譜峰的峰寬（min）5. 問題與討論5.1 如何用實驗方法判別色譜圖上苯、萘、聯(lián)苯的色譜峰歸屬？5.2 如何改變色譜條件，可以減小苯、萘、

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