一輪復(fù)習(xí)微生物的培養(yǎng)

1、專題2 :微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用微生物包括哪五類：真菌原生動物特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡單結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡單, ,個體多數(shù)十分微小個體多數(shù)十分微小. .通常要用光學(xué)顯通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu). .且體且體內(nèi)一般不含有葉綠素內(nèi)一般不含有葉綠素. .不能進(jìn)行光合作用不能進(jìn)行光合作用. . 原核生物界 原生生物界真菌界病毒界一、基礎(chǔ)知識： (一)微生物 有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個橢圓形的休眠體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸3小時以后才死亡。芽孢又小又輕，

2、可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細(xì)菌.菌落： 單個或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一個單個或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的肉眼可見的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，子細(xì)胞群體，叫做菌落叫做菌落。 菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。菌落細(xì)菌的菌落特征因種而異 細(xì)菌的代謝類型 根據(jù)細(xì)菌所利用的能源和碳源的不同，將細(xì)菌分為兩大營養(yǎng)類型。根據(jù)細(xì)菌所利用的能源和碳源的不同，將細(xì)菌分為兩大營養(yǎng)類型。 自養(yǎng)菌自養(yǎng)菌: :分類分類, ,舉例舉例? ? 異養(yǎng)菌異養(yǎng)菌: : 腐生菌腐生菌 寄生菌

3、寄生菌 大部分病原菌大部分病原菌光合自養(yǎng)型光合自養(yǎng)型:光合細(xì)菌光合細(xì)菌化能自養(yǎng)型化能自養(yǎng)型:硝化細(xì)菌硝化細(xì)菌,鐵細(xì)菌鐵細(xì)菌,硫細(xì)菌硫細(xì)菌真菌（二）培養(yǎng)基 1.定義：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。2.營養(yǎng)組成：一般都含有營養(yǎng)組成：一般都含有水、碳源、氮源水、碳源、氮源和無機(jī)鹽。此外，還和無機(jī)鹽。此外，還需要滿足微生物生長對需要滿足微生物生長對PH、氧氣以、氧氣以特殊營養(yǎng)物質(zhì)特殊營養(yǎng)物質(zhì)的要求。的要求。誤認(rèn)為所有微生物培養(yǎng)基中均需加入誤認(rèn)為所有微生物培養(yǎng)基中均需加入“生長因子生長因子”點(diǎn)撥點(diǎn)撥碳源、氮源、水分、無機(jī)鹽、生長因子是微生物生長必需的五大營養(yǎng)成分，但碳

4、源、氮源、水分、無機(jī)鹽、生長因子是微生物生長必需的五大營養(yǎng)成分，但大多數(shù)培養(yǎng)基中都含碳源、氮源、水分、無機(jī)鹽四類物質(zhì)，可能不需額外添加大多數(shù)培養(yǎng)基中都含碳源、氮源、水分、無機(jī)鹽四類物質(zhì)，可能不需額外添加“生長生長因子因子(如維生素如維生素)”，這是因為許多微生物可自行合成這些生長因子，而對那些合成能這是因為許多微生物可自行合成這些生長因子，而對那些合成能力有限或不能合成生長因子的微生物力有限或不能合成生長因子的微生物(如乳酸菌如乳酸菌)，則需在培養(yǎng)基中添加諸如維生素等，則需在培養(yǎng)基中添加諸如維生素等生長因子。生長因子。3.培養(yǎng)基的類型和用途（1）按物理狀態(tài)分：固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基。其中固體培

5、養(yǎng)基用于固體培養(yǎng)基用于菌種保存及分離、鑒定菌落、活菌計數(shù)等，液體培養(yǎng)基常用于發(fā)酵工業(yè)。（2）按成分分：天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基: :根據(jù)細(xì)胞生存所需物質(zhì)的種類和數(shù)量，用人工方法模擬合成的。合成培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)鹽和其它一些輔助物質(zhì)。優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組分和含量相對固定;成本低 缺點(diǎn)缺點(diǎn)： 缺少某些成分，不能完全滿足體外細(xì)胞生長需要。 天然培養(yǎng)基：天然培養(yǎng)基：天然培養(yǎng)基有血清、血漿、和組織提取液（如雞胚和牛胚浸液）。優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：營養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好缺點(diǎn)缺點(diǎn)：來源受限;成分復(fù)雜，影響對某些實驗產(chǎn)物的提取和實驗結(jié)果的分析;易發(fā)生支原體污染;（

6、3）選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基的比較選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基的比較種類種類制備方法制備方法原理原理用途用途舉例舉例選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入培養(yǎng)基中加入某某些化學(xué)物質(zhì)些化學(xué)物質(zhì)依據(jù)某些微生物對某些物質(zhì)或依據(jù)某些微生物對某些物質(zhì)或環(huán)境條件的嗜好、抗性而設(shè)計環(huán)境條件的嗜好、抗性而設(shè)計從眾多微生物中分從眾多微生物中分離所需的微生物，離所需的微生物，并增加其數(shù)目并增加其數(shù)目加入青霉素分離得加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌到酵母菌和霉菌鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入培養(yǎng)基中加入某某種指示劑或化學(xué)種指示劑或化學(xué)藥品藥品依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中的特定試劑或化物與培養(yǎng)基

7、中的特定試劑或化學(xué)藥品反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征學(xué)藥品反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征變化而設(shè)計變化而設(shè)計鑒別不同種類的微鑒別不同種類的微生物生物伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌可以鑒別大腸桿菌選選擇擇培培養(yǎng)養(yǎng)基基制制備備方方法法或或?qū)崒嵗x擇培養(yǎng)基的具體實例：選擇培養(yǎng)基的具體實例：1.1.加入青霉素的培養(yǎng)基：分離酵母菌、霉菌等真菌加入青霉素的培養(yǎng)基：分離酵母菌、霉菌等真菌2.2.加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基：分離金黃色葡萄球菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基：分離金黃色葡萄球菌3.3.只有尿素作為惟一氮源的培養(yǎng)基：分離出分解尿素的細(xì)菌只有尿素作為惟一氮源的培養(yǎng)基：分離出分解尿素的細(xì)菌4.4.不加氮源的無氮培養(yǎng)基

8、：分離固氮菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基：分離固氮菌5.5.只有纖維只有纖維素素作為惟一碳源的培養(yǎng)基作為惟一碳源的培養(yǎng)基 ：分離分解纖維素的細(xì)菌：分離分解纖維素的細(xì)菌6.6.不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基: : 分離自養(yǎng)型微生物分離自養(yǎng)型微生物（）消毒定義：消毒定義：指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物。（不包括芽孢和孢子）消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別 （2）滅菌的定義： 使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子，而達(dá)到完全無菌之過程。 滅菌消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最普通也是最重要的技術(shù)。條件條件結(jié)果結(jié)果常用方法常用方法應(yīng)

9、用范圍應(yīng)用范圍消毒消毒較為溫和的較為溫和的物理或化學(xué)物理或化學(xué)方法方法僅殺死物體表面或內(nèi)僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物部的部分微生物煮沸消毒法煮沸消毒法日常用品日常用品巴氏消毒法巴氏消毒法不耐高溫的液體不耐高溫的液體化學(xué)藥劑消毒法化學(xué)藥劑消毒法用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源滅菌滅菌強(qiáng)烈的理化強(qiáng)烈的理化因素因素殺死物體內(nèi)外所有的殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和微生物，包括芽孢和孢子孢子灼燒滅菌法灼燒滅菌法接種工具接種工具干熱滅菌法干熱滅菌法玻璃器皿、金屬用具玻璃器皿、金屬用具高壓蒸汽滅菌法高壓蒸汽滅菌法培養(yǎng)基及容器培養(yǎng)基及容器項目項目優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)缺點(diǎn)適用范圍適

10、用范圍平板劃線法平板劃線法可以觀察菌落特征，可以觀察菌落特征，對混合菌進(jìn)行分離對混合菌進(jìn)行分離不能計數(shù)不能計數(shù)適用于好氧菌適用于好氧菌稀釋涂布平稀釋涂布平板法板法可以計數(shù)，可以觀察可以計數(shù)，可以觀察菌落特征菌落特征吸收量較少，較吸收量較少，較麻煩，平板不干麻煩，平板不干燥效果不好，容燥效果不好，容易蔓延易蔓延適用于厭氧菌適用于厭氧菌和兼性厭氧菌和兼性厭氧菌不明確每次劃線操作中不明確每次劃線操作中“灼燒接種環(huán)灼燒接種環(huán)”的目的或誤認(rèn)為劃線結(jié)束后的目的或誤認(rèn)為劃線結(jié)束后“不必灼燒接種環(huán)不必灼燒接種環(huán)”平板劃線法純化大腸桿菌時不同階段灼燒接種環(huán)的目的不同平板劃線法純化大腸桿菌時不同階段灼燒接種環(huán)的目

11、的不同第一次操作：殺死接種環(huán)上原有的微生物。第一次操作：殺死接種環(huán)上原有的微生物。每次劃線之前：殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的每次劃線之前：殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端。菌種直接來源于上次劃線的末端。劃線結(jié)束后：殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操劃線結(jié)束后：殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。作者。（一一） 篩篩 選選 菌菌 株株原理原理 它的氮源只含有尿素，只有能合成分解尿素的脲酶的細(xì)菌才它的氮源只含有尿素，只有能合成分解尿素的脲酶的細(xì)菌才能生長。脲酶廣泛的存在于植物，微生物，動物中。能生長。脲酶廣

12、泛的存在于植物，微生物，動物中。 尿素被脲酶分解之后產(chǎn)生了，氨氣和二氧化碳，氨氣溶于水，尿素被脲酶分解之后產(chǎn)生了，氨氣和二氧化碳，氨氣溶于水，二氧化碳幾乎不溶于水。所以，溶液呈堿性。二氧化碳幾乎不溶于水。所以，溶液呈堿性。分解纖維素的微生物的分離分解纖維素的微生物的分離纖維素纖維素酶酶酶酶纖維二糖纖維二糖葡萄糖葡萄糖苷苷 酶酶葡萄糖葡萄糖 剛果紅能與纖維素形成剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)紅色復(fù)合物，而不與水解后的纖維二糖和葡萄糖合物，而不與水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)發(fā)生這種反應(yīng)。：由由微生物微生物分泌的一種復(fù)合酶，包括分泌的一種復(fù)合酶，包括酶酶、酶和葡酶和葡萄糖苷酶，由于它們的協(xié)同作用

13、，最終將纖維素分解成葡萄糖。萄糖苷酶，由于它們的協(xié)同作用，最終將纖維素分解成葡萄糖。1.菌株篩選原理的比較菌株篩選原理的比較土壤中分解尿素的細(xì)菌土壤中分解尿素的細(xì)菌分解纖維素的微生物分解纖維素的微生物選擇培養(yǎng)基的成分：尿素作為唯一的氮選擇培養(yǎng)基的成分：尿素作為唯一的氮源源鑒定方法：在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，鑒定方法：在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若若pH升高，指示劑變紅，說明細(xì)菌能分解升高，指示劑變紅，說明細(xì)菌能分解尿素尿素選擇培養(yǎng)基（選擇培養(yǎng)基（液體液體）的成分：纖維素作）的成分：纖維素作為唯一的碳源為唯一的碳源鑒定方法：剛果紅染色法，即剛果紅與鑒定方法：剛果紅染色法，即剛果紅與纖維素形成紅色復(fù)

14、合物，當(dāng)纖維素被分解纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被分解后，培養(yǎng)基出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的后，培養(yǎng)基出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈透明圈混淆兩種混淆兩種“對照組對照組”與與“重復(fù)組重復(fù)組”(1)兩種對照組作用比較兩種對照組作用比較判斷培養(yǎng)基中判斷培養(yǎng)基中“是否有雜菌污染是否有雜菌污染”，需將未接種的培養(yǎng)基同時進(jìn)行培養(yǎng)。，需將未接種的培養(yǎng)基同時進(jìn)行培養(yǎng)。判斷選擇培養(yǎng)基判斷選擇培養(yǎng)基“是否具有篩選作用是否具有篩選作用”，需設(shè)立牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)，需設(shè)立牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行接種后培養(yǎng)，觀察兩種培養(yǎng)基上菌落數(shù)目，進(jìn)行對比得出結(jié)論。行接種后培養(yǎng)，觀察兩種培養(yǎng)基上菌落數(shù)目，進(jìn)行對比得出結(jié)論。(2)

15、重復(fù)組的設(shè)置及作用重復(fù)組的設(shè)置及作用為排除偶然因素對實驗結(jié)果的干擾為排除偶然因素對實驗結(jié)果的干擾，在每一稀釋度下宜設(shè)置，在每一稀釋度下宜設(shè)置3個平板作重個平板作重復(fù)組，選擇菌落數(shù)均在復(fù)組，選擇菌落數(shù)均在30300且數(shù)目相差不大的三個平板，用且數(shù)目相差不大的三個平板，用“平均值平均值”代入計數(shù)公式予以計算菌落數(shù)。代入計數(shù)公式予以計算菌落數(shù)。微生物計數(shù)的方法專項歸納微生物計數(shù)的方法專項歸納(考綱最新添加內(nèi)容考綱最新添加內(nèi)容)1.間接計數(shù)法間接計數(shù)法(也叫活菌計數(shù)法也叫活菌計數(shù)法)：常用的是稀釋涂布平板法。常用的是稀釋涂布平板法。(1)原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣

16、品稀釋液原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少個活菌。中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少個活菌。(1)原理：利用特定細(xì)菌計數(shù)板或血球計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生原理：利用特定細(xì)菌計數(shù)板或血球計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量，物的數(shù)量，但不能區(qū)分細(xì)菌的死活。但不能區(qū)分細(xì)菌的死活。計數(shù)板是一塊特制的載玻片，上面有一個特定面計數(shù)板是一塊特制的載玻片，上面有一個特定面積積(1mm2)和高和高(0.1mm)的計數(shù)室，在的計數(shù)室，在1mm2的面積里又被劃分成的面積里又被劃分成25個個(或或16個個)中格，中格，每個中格進(jìn)一步劃分成每個中格進(jìn)一步劃分成16個個(或或25個個)小格，但計數(shù)室都是由小格，