高級(jí)生物化學(xué)專題二：模擬酶

1、專題之二專題之二模擬酶的基礎(chǔ)知識(shí)及進(jìn)展模擬酶的基礎(chǔ)知識(shí)及進(jìn)展一，天然酶促反應(yīng)的特點(diǎn)及作用機(jī)理1，天然酶促反應(yīng)的特點(diǎn)2,酶的促作用機(jī)理 1），酶與底物結(jié)合的作用力：靜電吸引力氫鍵范德華力疏水相互作用。2），酶高效催化的機(jī)理：鄰近效應(yīng)多元催化；微環(huán)境效應(yīng)誘導(dǎo)契合底物變形二，對(duì)酶活性中心功能團(tuán)的模擬二，對(duì)酶活性中心功能團(tuán)的模擬酶酶有有結(jié)結(jié)合合中中心心和和催催化化中中心心酶底物鑰匙與鎖的關(guān)系，反應(yīng)進(jìn)行不能與結(jié)合中相配，反應(yīng)不能進(jìn)行酶與底物的結(jié)合存在有別構(gòu)效應(yīng)酶與底物的結(jié)合存在有別構(gòu)效應(yīng)負(fù)效應(yīng)正效應(yīng)酶催化中心的組成酶的名稱酶的名稱氨基酸的總數(shù)氨基酸的總數(shù) 活性中心活性中心胰凝乳蛋白酶胰凝乳蛋白酶 245

2、組組57，門，門102，絲，絲195枯草桿菌蛋白酶275組61，絲221碳酸酐酶258組93-組95組117牛胰核糖核酸酶124組12，組119，賴41羧肽酶307谷270，酪245，組196，組69谷72胰凝蛋白酶對(duì)肽鍵的水解機(jī)理（第一步）第一步：咪唑基從絲氨酸的羥基上取質(zhì)子胰凝蛋白酶的水解機(jī)理（第二步）絲氨酸上負(fù)氧離子進(jìn)攻酰胺上羰基，水解得胺，胺立即為附近的羧基所質(zhì)子化成“鹽”。胰凝蛋白酶的水解機(jī)理（第三步）水進(jìn)攻所生成的酯的羧基，水解成酸及絲氨酸的負(fù)離子，負(fù)離子又被咪唑基的氫所質(zhì)子化。完成循環(huán)。酶高效催化的機(jī)理及實(shí)例酶高效催化的機(jī)理及實(shí)例姜勇21200504084一一.決定酶高效催化的機(jī)

3、理決定酶高效催化的機(jī)理1.底物和酶的靠近(proximity)與定向(orientation) 在化學(xué)反應(yīng)中，反應(yīng)速度與反應(yīng)物的濃度成正比，若在酶促反應(yīng)系統(tǒng)中的催化場(chǎng)所酶的活性中心，增加底物濃度，反應(yīng)速度也會(huì)隨之增加。酶促反應(yīng)加速的原因之一，就是使底物分子集中于酶的活性中心，大大提高這個(gè)區(qū)域底物的有效濃度，從而加速酶促反應(yīng)速度。 曾測(cè)過某酶促反應(yīng)中，溶液中的底物濃度為0.001mol/L,而在活性中心的底物濃度竟達(dá)到10mol/L，比溶液中高出一萬倍！因此在酶活性中心區(qū)域的高底物濃度決定了高的反應(yīng)速度。二二. .溶菌酶（溶菌酶（lysozyme) ) 溶菌酶存在于雞蛋清和動(dòng)物的眼淚中，其生物學(xué)

4、功能是催化某些細(xì)菌細(xì)胞壁的多糖水解，從而溶解細(xì)菌的細(xì)胞壁。 溶菌酶是第一個(gè)用X-射線法闡明其全部結(jié)構(gòu)和功能的酶。是1922年倫敦細(xì)菌學(xué)家弗萊明(Fleming)首次發(fā)現(xiàn)的。1.底物、溶菌酶及酶和底物復(fù)合物的結(jié)構(gòu) 溶菌酶的底物 溶菌酶通過水解某些細(xì)菌細(xì)胞壁的多糖組份來溶解細(xì)胞壁，細(xì)胞壁的多糖由兩種糖組成: N-乙酰氨基葡萄糖 (NAG) N-乙酰氨基葡萄糖乳酸(NAM)溶菌酶的最適小分子底物溶菌酶的最適小分子底物溶菌酶的結(jié)構(gòu)溶菌酶的結(jié)構(gòu) 溶菌酶由129個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成，是一個(gè)單鏈蛋白，分子內(nèi)含有四對(duì)二硫鍵?；钚灾行牡陌被釟埢荊lu35和Asp52 。雞蛋蛋清溶菌酶的氨基酸序列雞蛋蛋清溶菌酶的

5、氨基酸序列溶菌酶和底物結(jié)合的空間構(gòu)象從表面構(gòu)象看，酶的結(jié)構(gòu)不很緊密，大多數(shù)極性氨基酸殘基分布在分子的表面，非極性氨基酸殘基分布在分子的內(nèi)部。整個(gè)酶分子中有一狹長(zhǎng)的凹穴。最適底物正好與酶分子的凹穴相結(jié)合，凹穴中的Glu35和Asp52 是活性中心的氨基酸殘基。 底物底物D D糖環(huán)構(gòu)象發(fā)生變化糖環(huán)構(gòu)象發(fā)生變化 C3C4C5C2C1OC3C4C5C2C1O 溶菌酶底物溶菌酶底物D糖糖環(huán)變形模型圖環(huán)變形模型圖 椅式：椅式：C5、C1、C2 和和 O不在同一平面不在同一平面 C3C4C5C2C1OC5向前移動(dòng)，向前移動(dòng)， O原子向后移動(dòng)原子向后移動(dòng)半椅式：半椅式：C5、C1、C2 和和 O在同一平面上在

6、同一平面上 GluGlu3535的羧基起的羧基起廣義酸堿催化廣義酸堿催化，向底物，向底物D D糖環(huán)和糖環(huán)和E E糖環(huán)糖環(huán)之間的糖苷鍵上的氧原子提供之間的糖苷鍵上的氧原子提供一個(gè)質(zhì)子一個(gè)質(zhì)子，氧原子與，氧原子與D D糖環(huán)糖環(huán)C C1 1的糖苷鍵斷開，的糖苷鍵斷開，D D糖環(huán)的糖環(huán)的C C1 1 帶上正電荷成為正碳離子。帶上正電荷成為正碳離子。AspAsp5252上的上的-COO-COO- -起著協(xié)調(diào)起著協(xié)調(diào)糖苷鍵斷裂糖苷鍵斷裂和穩(wěn)定和穩(wěn)定正碳離子正碳離子的作的作用。用。 最后，來自環(huán)境中的水分子上的最后，來自環(huán)境中的水分子上的H+與與Glu35的的-COO-結(jié)結(jié)合，水分子上的合，水分子上的HO-

7、與正碳離子結(jié)合，至此，一次反應(yīng)完與正碳離子結(jié)合，至此，一次反應(yīng)完成，細(xì)胞壁打開一個(gè)缺口。經(jīng)多次重復(fù)作用，細(xì)菌的細(xì)胞成，細(xì)胞壁打開一個(gè)缺口。經(jīng)多次重復(fù)作用，細(xì)菌的細(xì)胞壁溶解。壁溶解。對(duì)酶活性中心模擬的研究結(jié)果 諸多實(shí)驗(yàn)認(rèn)為： 當(dāng)模擬的分子中有Asp、Ser及His并處在適當(dāng)?shù)奈恢镁陀写呋饔?。例如：?組-組-苯丙-苯丙-門-組-絲-門-絲-苯丙-門-苯丙-組-苯丙三，對(duì)酶作用方式的模擬主要在仿金屬方面做了大量工作：氧還蛋白酶活性中心的模擬物固氮酶活性中心模擬物左圖為福州模型；右圖為廈門模型固氮酶活性中心模擬物左圖為Schrauzer模型；右圖為大冢模型四，膠束催化 膠束催化分二類：其一為膠束催

8、化；其二為膠束模擬酶。 如，含有咪唑的或含有硫醇的陽性離子表面活性劑用來膠束催化，或使對(duì)硝基苯酯的水解加速104倍五，高分子模擬酶高分子模擬的原理：識(shí)別系統(tǒng)和催化中心（一），環(huán)糊精(Cycloamylose) 1,CD組成和在工業(yè)上的用途 2，CD的制法與性質(zhì) 制法：淀粉糊化酶解沉淀 結(jié)構(gòu)見下圖CD的一般性質(zhì)-CD-CD-CD葡萄糖數(shù)葡萄糖數(shù)678分子量97311351297空洞內(nèi)徑（）5678910空洞深度（）787878晶體針狀棱柱狀棱柱狀水中溶解度14.518.523.225D（H2O）+150.5。+162.5。+177.4。堿顯色藍(lán)黃褐黃褐采用化學(xué)修飾可使CD有較多的疏水場(chǎng)3，利用，

9、利用CD進(jìn)行仿生反應(yīng)進(jìn)行仿生反應(yīng)取代苯酚乙酸酯加CD與未加CD的水解速率比值CDCDCDM-Br-22625054P-Br-1.72.241M-Cl-113137.8P-Cl-3.0103.8M-O2N-1035410.0P-O2N-A，水解酶的模擬，水解酶的模擬對(duì)CD進(jìn)行修飾可提高對(duì)取代苯酚乙酸酯水解速率B，裂解酶的模擬，裂解酶的模擬芐基乙酰乙酸在CD催化下脫羧機(jī)理示意圖(二)，褐藻多糖鈰配合物的水解酶模擬 1，褐藻多糖鈰配合物的水解模擬酶的研究意義 2，研究途徑 3，研究結(jié)果00.820.641.251.5A570nm褐藻糖膠鈰配合

10、物褐藻酸鈰配合褐藻淀粉鈰配合反應(yīng)條件：pH7.0,37下水解90min，BSA濃度為2.5mg.ml-1作圖數(shù)據(jù)是根據(jù)游離氨基酸及短肽與茚三酮反應(yīng)生成紫色，在570nm處的吸光值，該值是已減除BAS本身的水解及對(duì)照后的兩次測(cè)定平均值。五，磷酯鍵水解酶模擬物研究進(jìn)展五，磷酯鍵水解酶模擬物研究進(jìn)展（一），生物分子中鍵及鍵能1，共價(jià)鍵及鍵能鍵的類型鍵能(KJ/mol)鍵的類型鍵能(KJ/mol)O-H461C-N293H-H435C-S260P-O419N-O222C-H414S-S214N-H389C=O712C-O352C=N615C-C348C=C611S-H339P=O5022,其它鍵及鍵能

11、 A，配價(jià)鍵及鍵能 B,VanderWaals力 C，離子鍵及鍵能 (二)，DNA水解 1，HomogeneousCe4+complexesTheternaryofCe4+Pr+dextranhasmoreactivity,althoughhomogeneousCe4+complexeshascatalyticactivity(see,fig1)Retentiontime/minFig.1,SynergisticcatalysisbyCe4+/Pr3+/dextransystemforthehydrolysisofTPTtothymidine(T)Thereactionconditions:p

12、H7.0and50 for 10hA, Catalysis byCe4+/Pr3+/dextran;B,CatalysisbyCe4+/dextran;C,CatalysisbyPr3+/dextranabc2,Ce4+所引起的DNA裂解可獲得天然酶解無法得到的DNA片斷3，Ce4+對(duì)DNA水解的機(jī)理要回答二個(gè)問題：WhatistheactivecontainingCe4+speciesforDNAhydrolysis?WhyisCe4+overwhelminglymoreactivethanothermetalions?到目前為止，這些問題還沒有完全清楚?？赡艿臋C(jī)理是：3,Mechanism

13、ofDNAhydrolysisbyCe4+ Ce4+DNACe4+2（OH）24+OH-1對(duì)磷酸根的親核作用DNA水解 實(shí)驗(yàn)依據(jù)： 1，Ce4+對(duì)cAMP的水解時(shí)其活性部位是Ce4+形成了Ce4+2（OH）24+ 2，如果用下圖的didnucleotideanalogofTpT,用Ce4+水解，其水解速率比TpT快100倍Reference:ShigekawaH.etal.Corelevelphotoelectronspectroscopyonthelathanide-inducedhydrolysisofDNA,Nucleic Acids Symp Ser,1998,39:137138Lef

14、t:DinucleotideanalogofTpT,wherethe5oxygenatomisreplacedbysulfur.Right:TheenergyprofilesforthehydrolysisofDNAatpH7inthepresence(theblueline)andtheabsence(theblackline)ofCe4+4，對(duì)PlasmidDNA的裂解作用，見磷酯鍵的非酶水解研究進(jìn)展；，References:J.ChemSocPerkinTrans21997:20692072;,需要注意的是，可水解Plasmid的結(jié)果，不可外推能水解線狀DNA。(三),Inorganic

15、catalysts 1,SynergisminbimetallicandtrimetalliccomplexesNovel catalysts should obtained by using multimetallic synergismEXPERIMENTRESULTS:A,X-raycrystallographicstudiestheenzymesinvolvedinphosphoesterhydrolysisoftenpossesstwo(ormore)metalionsattheiractivesitesthemetalionsandwaterboundsubstratecooper

16、atehydrolyzestablephosphoestersunderphysiologicalconditions.B,ThedinuclearZn2+complex(bottomfigure)isactiveforRNAhydrolysis,whereasfreeZn2+ionisinactive.C,AdinuclearLa3+complexforRNAhydrolysishasbeenalsoreported.D,ThetrinuclearZn2+complex(bottomfigure)isstillmore(tenfold)activethanthedinuclearcomple

17、x.Thecomplexalsoinducesboththesubstratespecificityandtheproductspecificity.InorganiccatalystsforphosphoesterhydrolysisLeft:AdinuclearZe2+complex;Right:AtrinuclearZe2+complexE,RNAhydrolysisbycombinationsofLa3+andhydrogenperoxidecanoccurandisascribedtotheformationofatrimericaggregateofthedinuclearcomp

18、lexLa(O-O3La).F,AmacrocyclicCu2+complexcleavesbothdouble-strandedandsingle-strandedportionsinhairpin-structuredRNAG,AmacrocyclicEu3+complexisactiveforphosphodiestertransesterification.2,ThecatalyticmechanismTherateofRNAhydrolysisbylanthanide()ionslinearlyincreaseswiththeequilibriumconcentrationofthe

19、bimetallichydroxo-clusterM2(OH)24+thedinuclearhydroxideistheactivespecies(thesameasCe4+inducedDNAhydrolysis)byacid/basecooperationinthedinuclearspeciesTheformationofthepenta-coordinatedintermediateanditsbreakdown.(四四)，Sequenceselective article ribonucleasesPreviously,mostofthesequenceselectiveartifi

20、cialribonucleasesreportedpossessthemolecularscissorsatthe5endsofDNAoligomersTheRNAfragmentsformedbythecatalyticscissionassociatewiththecomplementaryDNAoligomer(thefigureinnextpage)ThesecondRNAsubstratecannotboundtotheDNAThecatalyticturnoverishardtoachieve.1,Incorporationofmolecularscissorsintointern

21、alpositions Recently,molecularscissorshavebeenincorporatedintotheinsideofDNAstrandThecomplementaryregionintheRNAisdividedintotwosmallfragmentsSpontaneouslyremovedfromtheDNA(figurenextpicture).MagdaM,etalDNAconjugatewiththeDy3+-texaphyrincomplexsequence-selectiveRNAscissiongottenhighcatalyticturn-ove

22、rrate.O:molecularscissorsCatalyticturn-overinRNAhydrolysisbyasequence-selectiveartificialenzyme.(Left)ArtificialenzymespossessingthemolecularscissorswithintheNDAstrand.Whenthescissionoccurs,theRNAportioniscleavedintotwosmallfragmentsandisremovedfromtheDNA.(Right)WhenthescissorsareboundtotheendsofDNA

23、,however,theproductscannotberemovedfromtheDNAafterthescission.AsimilarstrategyhasbeenusedintheoligoamineDNAhybridsandtheCu2+complexDNAhybrids.InordertopreciselypredictscissionsitesmolecularmodelingmethodmolecularscissionandfixedintheRNA-DNAduplex.Thescopeoftheapplicationofsuchribozymemimicshasbeenwi

24、denedbecauseofthesestudies.2,useofmultinulearmetalcomplexesasmolecularscissorsAattractivetacticusedtodevelopartificialribonucleasesistouseamultinulearmetalcomplexasthemolecularscissors.WHY?ThedinulearZn2+complex,forexample,beingascribedtobimetallicsynergism(freeZn2+ionisvirtuallyinactive),canselecti

25、velycutRNAatthesitewherethiscomplexisplaced.Aattractivefind:theconjugateofdinulearZn2+complexwiththeDNAoligomerexhibitsquiteahighsequenceselectivity,evenwhenconsiderableamountsoffreeZn2+ionsexistinthemixtures(seebottomfigure).DinuclearZe2+complexSelectivescissionZnZnZn六、稀土糖配合物的擬酶作用六、稀土糖配合物的擬酶作用（一）、稀

26、土元素（一）、稀土元素(REE)簡(jiǎn)介簡(jiǎn)介 稀土元素（稀土元素（Rare Earth Elements，簡(jiǎn)稱，簡(jiǎn)稱REE）或稀土（）或稀土（Rare Earth，簡(jiǎn)稱簡(jiǎn)稱RE）包括原子序數(shù)從）包括原子序數(shù)從51到到71的鑭系元素（的鑭系元素（Lanthanoid，簡(jiǎn)稱，簡(jiǎn)稱Ln）的）的15種元素和與種元素和與Ln同族的鈧（原子序數(shù)同族的鈧（原子序數(shù)21）和釔（原子序數(shù)）和釔（原子序數(shù)39）共）共17種元素。種元素。它們具有豐富的光、電、磁等物理特性和化學(xué)活性。鑭系元素（它們具有豐富的光、電、磁等物理特性和化學(xué)活性。鑭系元素（Ln）是?。┦窍⊥恋闹黧w，包括有土的主體，包括有15種元素：鑭（種元素：

27、鑭（La）、鈰）、鈰(Ce)、鐠、鐠(Pr)、釹、釹(Nd)、钷、钷(Pm)、釤釤(Sm)、銪、銪(Eu)、釓、釓(Gd)、鋱、鋱(Tb)、鏑、鏑(Dy)、鈥、鈥(Ho)、鉺、鉺(Er)、銩、銩(Tm)、鐿、鐿(Yb)、镥、镥(Lu)。 根據(jù)根據(jù)REE的化學(xué)性質(zhì)及電子結(jié)構(gòu)等特點(diǎn)，通常將其分為兩組；一組為的化學(xué)性質(zhì)及電子結(jié)構(gòu)等特點(diǎn)，通常將其分為兩組；一組為鈰組（也稱輕稀土，簡(jiǎn)稱鈰組（也稱輕稀土，簡(jiǎn)稱Ce），包括），包括La、Ce、Pr、Nd、Pm、Sm、Eu；其它的為釔組（也稱重稀土，簡(jiǎn)稱其它的為釔組（也稱重稀土，簡(jiǎn)稱Y），包括），包括Gd、Tb、Dy、Ho、Er、Tm、Yb、Lu、Y1。其中。

28、其中Ce、La、Nd、Pr和和Sm占稀土總量的占稀土總量的96%左右左右（鈰占（鈰占48%，鑭占，鑭占25%，釹占，釹占16%，鐠占，鐠占5%，釤占，釤占2%），其它），其它12種元素僅種元素僅占占4%。 近幾年研究發(fā)現(xiàn)，稀土離子在水解磷酸二酯鍵、近幾年研究發(fā)現(xiàn)，稀土離子在水解磷酸二酯鍵、肽鍵方面有很好的活性，在合成人工核酸酶、蛋肽鍵方面有很好的活性，在合成人工核酸酶、蛋白酶方面有很好的應(yīng)用，是分子生物學(xué)和生物化白酶方面有很好的應(yīng)用，是分子生物學(xué)和生物化學(xué)中重要的應(yīng)用工具。學(xué)中重要的應(yīng)用工具。 在生物大分子中普遍存在有肽鍵和磷酸二酯鍵，在生物大分子中普遍存在有肽鍵和磷酸二酯鍵，而這兩種鍵的鍵能

29、較高，它們?cè)跓o天然酶存在時(shí)，而這兩種鍵的鍵能較高，它們?cè)跓o天然酶存在時(shí)，中性溫和條件下水解非常緩慢。例如，中性溫和條件下水解非常緩慢。例如，GlyGly的中性溶液在的中性溶液在25下，下，350年才能有一半被水解，年才能有一半被水解，而磷酸二酯鍵則需而磷酸二酯鍵則需200萬年。萬年。 有機(jī)磷農(nóng)藥殘留及水解意義。有機(jī)磷農(nóng)藥殘留及水解意義。 （二）、開展稀土配合物水解模擬物的意義（二）、開展稀土配合物水解模擬物的意義（三）、稀土配合物的水解作用研究進(jìn)展（三）、稀土配合物的水解作用研究進(jìn)展1、稀土配合物的合成Schematicrepresentationofthestructuresofthecom

30、plexes,(a)M-D-glucose;(b)Pr-D-ribose。Schematicrepresentationofthestructuresofthecomplexes,(c)Nd-D-riboseand(d)M-D-maltose(M：ProrNd)。稀土離子對(duì)3-單核苷酸的斷裂作用要大于5-單核苷酸，斷裂機(jī)制為水解斷裂，并且不同稀土的斷裂作用大小為：重稀土輕、中稀土，Ce3+(空氣中)對(duì)3-核苷酸斷裂作用的增強(qiáng)同樣是由于反應(yīng)體系中產(chǎn)生的Ce4+所致。稀土離子對(duì)3-單核苷酸的斷裂機(jī)制，主要是由于RE同時(shí)與核苷酸中的2-OH及PO43-形成不穩(wěn)定的七元環(huán)結(jié)構(gòu)，斷裂依靠RE一OH親核進(jìn)

31、攻PO鍵來實(shí)現(xiàn)（四）、稀土配合物對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥的水解作用研究（四）、稀土配合物對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥的水解作用研究進(jìn)展進(jìn)展、多糖稀土配合物的結(jié)構(gòu)分析、多糖稀土配合物的結(jié)構(gòu)分析Fuc、Fuc-Ce與Ce的UV掃描圖Ce-Lam與Ce（）掃描圖Ce-Fuc、Ce及Fuc發(fā)射波譜Ce-Lam、Ce（）及Lam發(fā)射波譜七、多聚物的仿生催化研究進(jìn)展七、多聚物的仿生催化研究進(jìn)展1 1、概述概述仿生催化近幾十年發(fā)展很快，由此產(chǎn)生了很多生物分子器件。南京大學(xué)近二十年來研制了近30多件生物分子器件（傳感器），如免疫傳感器的檢測(cè)限可達(dá)1013mol/L（科技日?qǐng)?bào)，2002/9/5/11）。2 2、具有仿生催化的多聚物合成、具

32、有仿生催化的多聚物合成2.12.1、分子印跡聚合物合成分子印跡聚合物合成分子印跡聚合物合成是模擬天然酶的結(jié)構(gòu)進(jìn)行人工合成。分子印跡聚合物合成的理論：Fischerr “鎖和鑰匙”、Pauling的“抗原-抗體”以及Dickey的“專一性吸附”。2.2、分子印跡聚合物合成的原理、分子印跡聚合物合成的原理選擇帶有功能基的烯類單體與大量二烯類單體進(jìn)行共聚合，而功能基團(tuán)與印跡分子結(jié)合，然后除去印跡分子，得到具有除去印跡分子空間構(gòu)型的孔穴和功能基在孔穴內(nèi)精確排布的聚合物，從使這類聚合物在分離、分析、免疫測(cè)定、催化、及生物傳感器等方面應(yīng)用。2.3、分子印跡聚合物合成常用的方法、分子印跡聚合物合成常用的方法

33、自組裝方法：在自組裝法的制備中，印跡分子與聚合物單體在交聯(lián)聚合前先形成共價(jià)鍵結(jié)合的化合物，交聯(lián)聚合反應(yīng)完成后再將此共價(jià)鍵打開，將印跡分子脫掉，得到分子印跡聚合物。目前常用的結(jié)合共健包括：硼酸酯、縮醛酮、酯的螯合鍵等；常用的單體有：4-乙烯苯硼酸、4-乙烯苯甲醛、4-乙烯苯胺等。預(yù)組裝方法預(yù)組裝方法 預(yù)組裝方法預(yù)組裝方法中印跡分子與聚合物單體間預(yù)先自組織排列，通過非共價(jià)鍵結(jié)合（如離子鍵、氫鍵、疏水作用等）形成多點(diǎn)相互作用被固定下來，然后除去印跡分子，得到分子印跡聚合物。 常用的非共價(jià)型單體有常用的非共價(jià)型單體有：丙烯酸、甲基丙烯酸、丙烯酰胺、1-乙烯基吡啶等鏈引發(fā)方式：鏈引發(fā)方式：MIP制備過程

34、中的聚合反應(yīng)是通過自由基，一般以偶氮二異丁腈或偶氮二異庚腈為引發(fā)劑，在光照、加熱、加壓等條件下進(jìn)行。聚合方法：聚合方法：將印跡分子、功能單體、交聯(lián)劑和引發(fā)劑按一定比例溶解在惰性溶劑中，然后在真空條件下引發(fā)聚合一定時(shí)間，得到塊狀聚合物，經(jīng)粉碎、研磨、篩選得適度粒子，洗脫除去模板，真空干燥即成。Imprinted polymer catalysts for Imprinted polymer catalysts for the hydrolysis ofthe hydrolysis of -nitrophenyl nitrophenyl acetateacetateTransition state

35、 analogue of the hydrolysisDivinylbenzene(DVB) as a cross-linkerAzobis(isobutyronitrile AIBN) as a radical initator DVBAIBNPNAH2O-nitrophenyl nitrophenyl acetateacetateKinetic parameters for the hydrolysis of PNA catalyzed by the network polymersPolymerRatio(PNP:VI:DVB)102obs(min-1)P11:10:101.5P2P21

36、:10:201:10:202.32.3P31:10:301.6P4P40:10:200:10:201.11.1PNP:-nitrophenyl phosphate; VI:vinylimidazole; DVB:divinylbezeneXanthine oxidase biosensor for Xanthine oxidase biosensor for detection of the fish freshnessdetection of the fish freshness 原理：原理：魚死后體內(nèi)核酸開始分解而產(chǎn)生次黃嘌呤，且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷增加。因此，在魚類質(zhì)量變化早期，以次黃嘌呤

37、作為檢測(cè)指標(biāo)相當(dāng)靈敏且可靠。 以次黃嘌呤以次黃嘌呤+O2 黃嘌呤黃嘌呤 + H2O2 黃嘌呤黃嘌呤 + O2 尿酸尿酸+ H2O2黃嘌呤氧化酶黃嘌呤氧化酶432178圖圖 黃嘌呤氧化酶?jìng)鞲衅鹘M成黃嘌呤氧化酶?jìng)鞲衅鹘M成1酶電極；2反應(yīng)池；3磁力攪拌器；4-進(jìn)樣口；5蠕動(dòng)泵；6緩沖液；7廢液；8信號(hào)處理系統(tǒng)700720740760780800123456710minE(mV)傳感器對(duì)次黃嘌呤溶液的響應(yīng)曲線傳感器對(duì)次黃嘌呤溶液的響應(yīng)曲線次嘌呤的濃度（mg/L）從下到上依次為10，20，30，40，50魚肉樣品中次黃嘌呤含量測(cè)定結(jié)果魚肉樣品中次黃嘌呤含量測(cè)定結(jié)果方 法樣 品12345678分光光度法分

38、光光度法6.717.257.3114.1514.56傳感器法傳感器法9.7510.2510.3411.3610.0912.1819.7519.75殼聚糖鈰復(fù)合物微粒在蘋果汁殼聚糖鈰復(fù)合物微粒在蘋果汁生產(chǎn)的應(yīng)用研究生產(chǎn)的應(yīng)用研究 汪東風(fēng)、于麗娜、蘇琳汪東風(fēng)、于麗娜、蘇琳中國(guó)海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院中國(guó)海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院引引言言 我國(guó)果汁及果汁飲料的生產(chǎn)現(xiàn)狀及質(zhì)量與我國(guó)果汁及果汁飲料的生產(chǎn)現(xiàn)狀及質(zhì)量與安全的要求。安全的要求。目前果汁生產(chǎn)中常用的澄清及脫農(nóng)藥殘留技術(shù)。目前果汁生產(chǎn)中常用的澄清及脫農(nóng)藥殘留技術(shù)。殼聚糖及鈰配合物的功能。殼聚糖及鈰配合物的功能。殼聚糖鈰配

39、合物微球狀樹脂應(yīng)用于蘋果汁生殼聚糖鈰配合物微球狀樹脂應(yīng)用于蘋果汁生產(chǎn)的意義。產(chǎn)的意義。1 1 、材料與方法、材料與方法1.11.1、 殼聚糖鈰配合物球狀樹脂的制備殼聚糖鈰配合物球狀樹脂的制備殼聚糖原料殼聚糖原料Ce (NHCe (NH4 4) )2 2(NO(NO3 3) )中國(guó)海洋大學(xué)專利TXA840掃描電鏡1.2 1.2 殼聚糖鈰配合物球狀樹脂的穩(wěn)定性殼聚糖鈰配合物球狀樹脂的穩(wěn)定性殼聚糖鈰配合物球狀樹脂殼聚糖鈰配合物球狀樹脂pHpH值（值（1.51.512.012.0）緩沖溶液體系緩沖溶液體系2525下恒溫振搖下恒溫振搖12h12h蒸餾水反復(fù)洗滌解離的鈰離子的測(cè)定解離的鈰離子的測(cè)定不同的溫

40、度不同的溫度（10108080）保溫振搖保溫振搖12h 12h12h 12h1.31.3殼聚糖鈰配合物球狀樹脂處理方式對(duì)果殼聚糖鈰配合物球狀樹脂處理方式對(duì)果汁質(zhì)量的影響汁質(zhì)量的影響原果汁原果汁 過過 CCGR CCGR 柱柱 與與CCGRCCGR混合振蕩混合振蕩 濾濾 液液 透光率，澄清度、可溶性固形物、透光率，澄清度、可溶性固形物、總糖含量、蛋白質(zhì)含量、氨基酸總糖含量、蛋白質(zhì)含量、氨基酸含量及含量及VcVc含量含量測(cè)定1.4 1.4 殼聚糖鈰配合物球狀樹脂在果汁殼聚糖鈰配合物球狀樹脂在果汁生產(chǎn)中的應(yīng)用生產(chǎn)中的應(yīng)用青島海升果業(yè)有限責(zé)任公司青島海升果業(yè)有限責(zé)任公司 可口可樂公司可口可樂公司提供提

41、供 的樹脂的樹脂殼聚糖鈰配合殼聚糖鈰配合物球狀樹脂物球狀樹脂 車間生產(chǎn)線超濾口蘋果汁車間生產(chǎn)線超濾口蘋果汁 果汁流出液果汁流出液 透光率、色值、吸光度、糖度、濁透光率、色值、吸光度、糖度、濁度和甲胺磷及甲基對(duì)硫磷殘留量度和甲胺磷及甲基對(duì)硫磷殘留量 測(cè)定2.結(jié)果與討論結(jié)果與討論 2.1 2.1 殼聚糖鈰配合物微球樹脂有效好的酸堿及熱穩(wěn)定性殼聚糖鈰配合物微球樹脂有效好的酸堿及熱穩(wěn)定性01231.5345789101112pH值鈰含量（mg/g）在在pH12.0pH12.0和和pH1.5pH1.5時(shí)，樹脂中的時(shí)，樹脂中的CeCe4 4含量與含量與pH7.0pH7.0相比，相比，分別減少較少。因此，有

42、較寬的分別減少較少。因此，有較寬的pHpH適宜范圍。適宜范圍。 012341020304050607080溫度（）鈰含量（mg/g） 在常溫范疇內(nèi)（在常溫范疇內(nèi)（10104040）CCGRCCGR中中CeCe4 4含量變化不大，含量變化不大，高于高于5050情況下使用該樹脂，其結(jié)構(gòu)可能遭到了破壞。情況下使用該樹脂，其結(jié)構(gòu)可能遭到了破壞。2.2 2.2 用用CCGRCCGR柱處理果汁，可明顯提高果柱處理果汁，可明顯提高果汁質(zhì)量汁質(zhì)量 總糖（g/100m）還原糖(mg/ml)蛋白質(zhì)(ug/ml）氨基酸(ug/ml)原果汁4.690.088.770.05152.080.33447.870.829過柱4.630.058.530.0475.300.30486.890.229混合3.780.058.520.0377.500.24434.211.399 蛋白質(zhì)有較大減少，過柱方式氨基蛋白質(zhì)有較大減少，過柱方式氨基酸增加較多；其它成分變化不大酸增加較多；其它成分變化不大 Vc(ug/ml)可溶物可溶物(Brix)(Brix)透過率（）透過率（）原果汁原果汁1.3850.0130.0134.259.9過柱過柱1.1391.1390.0350.03混合混合0.4800.4800.0230.095.40.2