乙型肝炎病毒的生物危害評(píng)估報(bào)告

1、乙型肝炎病毒的生物危害評(píng)估報(bào)告1危害程度分類(lèi)1.1分類(lèi)等級(jí)根據(jù)中華人民共和國(guó)傳染病防治法，乙型肝炎病毒（HBV）屬于乙類(lèi)傳染病。在衛(wèi)生部2006年公布的人間傳染的病原微生物名錄中將其列為危害程度第三類(lèi)病原微生物。運(yùn)輸包裝僅病毒培養(yǎng)物為A類(lèi)，UN編號(hào)為UN2814。1.2實(shí)驗(yàn)室操作生物安全實(shí)驗(yàn)室級(jí)別要求根據(jù)人間傳染的病原微生物名錄要求：乙肝血清學(xué)檢測(cè)未經(jīng)培養(yǎng)的感染材料的操作，應(yīng)在級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL-2）實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。2背景資料2.1一般生物學(xué)特性乙型肝炎病毒屬嗜肝DNA病毒，有包膜，病毒顆粒為直徑42nm的圓球形。在病毒感染者的外周血中還有直徑22nm的圓形和管形顆粒。這種顆粒為乙型肝炎表

2、面抗原，沒(méi)有核酸，無(wú)傳染性。1）大球形顆粒：亦稱(chēng)Dane顆粒，它是一種由一個(gè)囊膜和一個(gè)含有DNA分子的核衣殼組成的病毒顆粒，直徑約42nm。核衣殼為20面體對(duì)稱(chēng)結(jié)構(gòu)。游離的核衣殼只能在肝細(xì)胞核內(nèi)觀察到。血中Dane顆粒濃度以急性肝炎潛伏期后期為最高，在疾病起始后則迅速下降。Dane顆粒表面含有HBsAg，核心中還含有雙股有缺口的DNA鏈和依賴(lài)DNA的DNA多聚酶。目前認(rèn)為Dane顆粒即完整的HBV。HBV DNA的兩鏈長(zhǎng)短不一，長(zhǎng)鏈（L）完整，為負(fù)鏈，長(zhǎng)度恒定，約3200個(gè)核苷酸。短鏈（S）為正鏈，長(zhǎng)度可變，約為長(zhǎng)鏈長(zhǎng)度的50100%，鏈的增生按5-3順序進(jìn)行。在不同分子中短鏈3端的位置是可變

3、的，而短鏈和長(zhǎng)鏈的5端位置固定點(diǎn)為粘性末端，通過(guò)250300個(gè)核苷酸堿基配對(duì)，以維持DNA分子的環(huán)狀結(jié)構(gòu)。在粘性末端兩側(cè)，兩鏈5端各有一個(gè)由11個(gè)bp組成的直接重復(fù)序列（Direct repeat DR）-5TTCACCTCTCC，該DR位于第1824個(gè)核苷酸者稱(chēng)DR1，位于第1590個(gè)核苷酸者稱(chēng)DR2，在病毒復(fù)制中起作用。2）小形球顆粒：直徑約22nm的小球形顆粒是HBV感染后血液中最多見(jiàn)的一種。它由HBsAg，即病毒的囊膜組成?；瘜W(xué)組成為脂蛋白，可按其特有的密度與正常血清蛋白部分分離。在此顆粒中未檢出達(dá)DNA多聚酶活性。目前認(rèn)為HBV的小顆粒不是HBV，可能是它感染肝細(xì)胞時(shí)合成過(guò)剩的囊膜而

4、游離于血循環(huán)中。3）管形顆粒：直徑約22nm，長(zhǎng)度可在100700nm之間。實(shí)際上它是一串聚合起來(lái)的小顆粒，但同樣具有HBsAg的抗原性。2.2對(duì)外界環(huán)境的穩(wěn)定性HBV對(duì)外界抵抗力環(huán)境抵抗力較強(qiáng)，對(duì)干燥、紫外線(xiàn)、75%乙醇等均有耐受性，60可存活2小時(shí)，30-32至少可存活6個(gè)月，20可存活5年。但100煮沸10分鐘；高壓蒸汽滅菌、0.5%過(guò)氧乙酸、5%次氯酸鈉等均能滅活病毒，因此，注射器具、醫(yī)療用具通過(guò)高溫消毒、煮沸或蒸汽消毒完全可以達(dá)到消毒目的。2.3傳播途徑及致病性乙型肝炎病毒通常是經(jīng)過(guò)腸道外途徑傳播,其典型的傳播途徑是輸入污染的血及血制品。HBV的傳染性很強(qiáng)，外科和口腔手術(shù)、針剌、使用

5、公用剃刀、牙刷等物品，皮膚微小操作污染含少量病毒的血液，均可成為傳染源。另外, 由于乙型肝炎患者和HBsAg攜帶者的精液、陰道分泌物均可檢出HBsAg，因此，兩性接觸傳播乙型肝炎的可能性是存在的。近來(lái)有人報(bào)告在急性乙型肝炎患者和慢性HBsAg攜帶者唾液標(biāo)本中檢測(cè)到HBsAg及Dane顆粒，因此，HBsAg隨唾液經(jīng)口傳播的途徑應(yīng)當(dāng)重視。孕婦在妊娠后期患急性乙型肝炎，新生兒易感染此病。2.4乙型肝炎預(yù)防、診斷和治療2.4.1預(yù)防措施1）健康教育：應(yīng)向群眾宣傳乙肝知識(shí)，認(rèn)清乙肝病毒傳播途徑的復(fù)雜性和乙肝在我國(guó)人群中的普遍性，樹(shù)立預(yù)防為主，自我保護(hù)意識(shí)。2）執(zhí)行新生兒乙肝疫苗計(jì)劃免疫，做好產(chǎn)前檢查，特

6、別是HBsAg伴有HBeAg的雙陽(yáng)母親新生兒，用乙肝疫苗聯(lián)合乙肝高效價(jià)免疫球蛋白注射以阻斷母嬰傳播。3）獻(xiàn)血員的篩選：獻(xiàn)血員必須做到每次獻(xiàn)血前檢測(cè)血清轉(zhuǎn)氨酶（ALT），以敏感的方法（ELISA）檢測(cè)HBsAg，兩項(xiàng)中任何一項(xiàng)陽(yáng)性均不得獻(xiàn)血。4）防止醫(yī)源性傳播，各級(jí)醫(yī)療衛(wèi)生單位，應(yīng)嚴(yán)格實(shí)行一人一針一管。2.4.2實(shí)驗(yàn)室檢查及其診斷乙型肝炎的臨床表現(xiàn)形式多樣，診斷的依據(jù)除病人癥狀，體征外，須根據(jù)流行病學(xué)，實(shí)驗(yàn)室檢查和或肝活檢等手段進(jìn)行綜合分析，動(dòng)態(tài)觀察診斷。1）流行病學(xué)資料：半年內(nèi)接受過(guò)血及血制品或曾有其他醫(yī)源性感染，生活中的密切接觸，尤其是性接觸。2）癥狀：近期出現(xiàn)的無(wú)其他原因可解釋的持續(xù)一周以

7、上的明顯乏力和消化道癥狀。3）體征：肝腫大，伴有觸痛或叩痛；皮膚，鞏膜黃染。4）肝功能檢查：谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）明顯增高。5）HBV標(biāo)記物檢查：乙型肝炎表面抗原（HBsAg）陽(yáng)性。2.4.3 治療病毒性肝炎目前還缺乏可靠的特效治療方法。各型肝炎的治療原則均以足夠的休息、營(yíng)養(yǎng)為主，輔以適當(dāng)藥物，避免飲灑、過(guò)勞或損害肝臟藥物。1）急性肝炎以一般及支持療法為主。休息與隔離應(yīng)強(qiáng)調(diào)早期臥床休息，至癥狀明顯減退，可逐步增加活動(dòng)。飲食飲食宜清淡，熱量足夠，蛋白質(zhì)攝入爭(zhēng)取達(dá)到每日11.5g/kg，適當(dāng)補(bǔ)充維生素B族和C，不強(qiáng)調(diào)高糖和低脂肪飲食。2）輕度慢性肝炎除一般及支持療法以外，還需要進(jìn)行對(duì)癥和抗病毒治療。

8、休息無(wú)需絕對(duì)臥床休息，宜用動(dòng)靜結(jié)合的療養(yǎng)措施。處于活動(dòng)期的患者，應(yīng)以靜養(yǎng)為主；處于靜止期的患者，可從事力所能及的輕工作。癥狀消失，肝功能正常3個(gè)月以上者，可恢復(fù)其原來(lái)工作，但仍需隨訪(fǎng)12年。飲食應(yīng)適當(dāng)進(jìn)食較多的蛋白質(zhì)，避免過(guò)高熱量飲食。以防止肝臟脂肪變性。也不宜進(jìn)食過(guò)多的糖，以免導(dǎo)致糖尿病。對(duì)癥治療包括降低轉(zhuǎn)氨酶制劑，如聯(lián)苯雙脂、垂盆草、齊墩果酸等，具有非特異性降低ALT的作用。這些降酶藥物雖然可能具有護(hù)肝的作用，但停藥后容易產(chǎn)生ALT反跳。故在顯效后應(yīng)注意逐漸停藥。一般的非特異性護(hù)肝藥物，主要包括維生素類(lèi)（B族、C、E、K等），促進(jìn)解毒功能藥物如葡醛內(nèi)脂（肝泰樂(lè)）、還原型谷胱甘肽、維丙胺、硫

9、辛酸等，促進(jìn)能量代謝藥三磷酸腺苷（ATP）、促進(jìn)蛋白質(zhì)合成藥物（肝安、水解蛋白等）以改善微循環(huán)藥物（丹參、低分子右旋糖酐等）可作為輔助治療，但宜精簡(jiǎn)，避免使用過(guò)多藥物。抗病毒治療：a.干擾素慢性乙型肝炎時(shí)干擾素使用的指征為：HBV在活動(dòng)性復(fù)制中；肝炎處于活動(dòng)期；HBV DNA血濃度低；抗-HBc IgM 陽(yáng)性。使用干擾素治療時(shí)劑量應(yīng)偏大（300萬(wàn)600萬(wàn)U/次），療程應(yīng)偏長(zhǎng)（6個(gè)月1年）。干擾素一般僅能抑制HBV復(fù)制，使HBeAg和HBV DNA轉(zhuǎn)陰，而難以使HBsAg轉(zhuǎn)陰。b. 核苷類(lèi)似物 拉米夫定（lamivudine，3TC，TM）主要通過(guò)抑制HBV DNA逆轉(zhuǎn)錄酶的活性及抑制共價(jià)閉合環(huán)

10、DNA（covalently closed circle DNA,cccDNA）的合成而抑制HBV DNA的合成。它不抑制線(xiàn)粒體DNA和骨髓，無(wú)直接調(diào)節(jié)免疫作用，因而基本上無(wú)不良反應(yīng)。長(zhǎng)期（6個(gè)月以上）用藥可使HBV DNA發(fā)生變異而產(chǎn)生耐藥性。3從事實(shí)驗(yàn)室活動(dòng)的危險(xiǎn)性分析及相應(yīng)的預(yù)防措施3.1實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)活動(dòng)背景資料本實(shí)驗(yàn)室主要從事HBV/HCV/HIV 病毒及梅毒螺旋體的血清學(xué)檢測(cè)。HBV 抗體篩查實(shí)驗(yàn): 酶免法(ELISA)3.2可能危害在實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中，接收樣本時(shí)樣本包裝密封性不好造成樣本泄露；操作過(guò)程中如打開(kāi)容器蓋時(shí)樣本外濺，加樣、孵育、震蕩、分離保存血清等時(shí)由于操作不慎導(dǎo)致樣本濺出、

11、離心管破裂崩濺、氣溶膠等。實(shí)驗(yàn)室工作環(huán)境的污染，實(shí)驗(yàn)人員如果接觸污染的實(shí)驗(yàn)儀器表面、冰箱、加樣器、實(shí)驗(yàn)臺(tái)、門(mén)把手及實(shí)驗(yàn)廢棄物等均可能被感染。3.3預(yù)防及處置措施3.3.1預(yù)防避免職業(yè)性血液及體液暴露是實(shí)驗(yàn)室預(yù)防HBV傳播的主要措施。1) 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過(guò)程均應(yīng)在生物安全防護(hù)級(jí)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。2) 操作者在實(shí)驗(yàn)全過(guò)程包括樣品接收，都應(yīng)穿戴好一切生物安全防護(hù)裝備，一次性的口罩、帽子、乳膠手套，防護(hù)衣、必要時(shí)配戴防護(hù)鏡等，操作全過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP）。3) 盡量避免在實(shí)驗(yàn)室使用針頭、刀片、玻璃器皿等利器，以防刺傷。如果必須使用，在處理或清洗時(shí)應(yīng)采取措施防止刺傷或劃傷，并應(yīng)對(duì)用過(guò)的物品進(jìn)

12、行消毒處理。4）完成乙型肝炎病毒疫苗接種程序，并且進(jìn)行抗體檢測(cè)。5）經(jīng)過(guò)規(guī)范的生物安全培訓(xùn)，并經(jīng)過(guò)嚴(yán)格考核和取得上級(jí)主管部門(mén)人員許可；近期較深的開(kāi)放性傷口的人員應(yīng)該禁止或限制其進(jìn)入相關(guān)實(shí)驗(yàn)操作區(qū)。6）限制在妊娠早期的工作人員進(jìn)行病毒相關(guān)的感染性材料的操作。7) 如接觸物傳染性危險(xiǎn)大，可戴雙層（兩付）手套以增加保護(hù)。操作時(shí)手套破損，應(yīng)立即丟棄、洗手并戴上新手套。8) 禁止采用口腔吸液管，必須使用移液器來(lái)操作實(shí)驗(yàn)室的所有液體。9) 工作完畢，要對(duì)工作臺(tái)面消毒。工作臺(tái)面應(yīng)當(dāng)用0.1%0.2%次氯酸溶液消毒；用消毒液清洗后要干燥20min以上；10) 工作完畢，脫去手套后洗手，再脫去工作衣，用肥皂和流

13、動(dòng)水洗手。3.3.2處置措施1) 所有的血液、血清（血漿）均應(yīng)視為有潛在傳染性，都應(yīng)以安全的方式進(jìn)行操作。應(yīng)按操作未知的有傳染風(fēng)險(xiǎn)樣品一樣，小心存放、拿取和使用所有可能有傳染性的質(zhì)量控制和參考物質(zhì)。2) 接收樣本時(shí)，核對(duì)樣品與送檢單，檢查樣品管有無(wú)破損和溢漏，如發(fā)現(xiàn)溢漏應(yīng)立即將尚存留的樣品移出，若樣本外漏到標(biāo)本容器外面，應(yīng)立即用浸有5%含氯消毒液的多重軟布及擦拭標(biāo)本容器，必要時(shí)通知重新留取標(biāo)本。打開(kāi)標(biāo)本容器時(shí)要小心，以防內(nèi)容物潑濺。廢棄的標(biāo)本視為高危物質(zhì)放置到高壓滅菌鍋內(nèi)消毒，同時(shí)立即更換污染的手套，污染的手套也應(yīng)放到高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌。3) 在進(jìn)行操作時(shí)，若發(fā)生液體外濺，應(yīng)將被濺的地方用5%含

14、氯消毒液浸泡的物質(zhì)覆蓋，待消毒液起作用10-15分鐘后清理該地方，移走吸水性物質(zhì)。所有實(shí)驗(yàn)用品應(yīng)按污染物質(zhì)處理，放入高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌。4) 在離心過(guò)程中，若發(fā)生離心管破裂及樣本外濺，應(yīng)立即停止離心，待離心機(jī)自動(dòng)停止并發(fā)出提示信號(hào)30分鐘后，確保穿戴好一切防護(hù)用品后，方可打開(kāi)離心機(jī)蓋，用止血鉗子夾出離心的碎片，被樣本污染的地方，防置浸泡有5%含氯消毒劑的吸水性物質(zhì)，待消毒劑起作用后10-15分鐘再清理污染處，移走吸水性物質(zhì)，并用0.5%含氯消毒劑或2%戊二醛多次消毒污染處所有消毒處理用過(guò)的物品應(yīng)按高危物質(zhì)處理，放入高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌。4實(shí)驗(yàn)室職業(yè)暴露后的立即處理職業(yè)暴露發(fā)生后，應(yīng)立即報(bào)告。盡快地使

15、用HBIG、乙型肝炎疫苗。 1) 皮膚針刺傷或切割傷：立即用肥皂和大量流水沖洗，過(guò)程中擠壓傷口盡可能擠出損傷處的血液，持續(xù)1520min后并用75%酒精或者0.5%碘伏進(jìn)行消毒。2) 皮膚污染：用水和肥皂沖洗污染部位，并用適當(dāng)?shù)南緞┙?，?5%乙醇或其它皮膚消毒劑。3) 粘膜污染：用大量流水或生理鹽水徹底沖洗污染部位。4) 衣物污染：盡快脫掉污染的衣物，進(jìn)行消毒處理。5) 污染物潑濺：發(fā)生小范圍污染物潑濺事故時(shí)，應(yīng)立即進(jìn)行消毒處理。發(fā)生大范圍污染物潑濺事故時(shí)，應(yīng)立即通知實(shí)驗(yàn)室主管領(lǐng)導(dǎo)和安全負(fù)責(zé)人到達(dá)事故現(xiàn)場(chǎng)查清情況，確定消毒的程序。5.職業(yè)暴露后預(yù)防與管理5.1職業(yè)暴露后的預(yù)防應(yīng)考慮幾個(gè)因

16、素：a.暴露源的HBsAg狀態(tài)、暴露者的乙型肝炎疫苗接種情況和疫苗反應(yīng)狀態(tài)。對(duì)未免疫接種的工作人員的血液或體液暴露，應(yīng)啟動(dòng)乙型肝炎疫苗接種。并對(duì)暴露者的乙型肝炎疫苗接種情況和疫苗反應(yīng)狀態(tài)進(jìn)行評(píng)估。推薦預(yù)防方案見(jiàn)表1。表1 暴露于HBV的推薦方案暴露者的免疫接種和抗體反應(yīng)狀況處理暴露源HBsAg陽(yáng)性暴露源HBsAg陰性暴露源不明確或未檢測(cè)未免疫接種注射乙型肝炎免疫球蛋白、乙型肝炎疫苗接種乙型肝炎疫苗接種乙型肝炎疫苗接種已免疫接種有反應(yīng)者不需處理不需處理不需處理已免疫接種但抗體反應(yīng)未知測(cè)試抗-HBs，如果有，不需處理；否則施與HBIG和疫苗增強(qiáng)不需處理測(cè)試抗-HBs，如果有，不需處理；否則施與疫苗

17、增強(qiáng)和在12個(gè)月后再檢測(cè)抗體滴度* HBIG（乙型肝炎免疫球蛋白），劑量200U，肌肉注射。* 有反應(yīng)者為HBsAg血清表面抗體陽(yáng)性的暴露者* 無(wú)反應(yīng)者為對(duì)免疫接種反應(yīng)不足的暴露者（檢測(cè)表面抗體為陰性）。當(dāng)需要應(yīng)用HBIG時(shí)，應(yīng)在暴露后盡可能快地使用（最好在24小時(shí)內(nèi)）。在暴露7天后HBIG的有效性不明確。當(dāng)需要應(yīng)用乙型肝炎疫苗時(shí)，也應(yīng)在暴露后盡可能快地使用（最好在24小時(shí)內(nèi)）；并且可與HBIG同時(shí)注射。乙型肝炎疫苗是安全的，接種乙型肝炎疫苗的最常見(jiàn)副反應(yīng)為注射點(diǎn)疼痛和輕度至中度發(fā)熱，嚴(yán)重副反應(yīng)的發(fā)生率非常低。對(duì)免疫球蛋白有過(guò)敏反應(yīng)史的暴露者不應(yīng)接受HBIG。妊娠和哺乳期婦女暴露者都可注射乙型肝炎疫苗接種和HBIG。5.2 職業(yè)暴露后的管理職業(yè)暴露事故的事故發(fā)生單位應(yīng)建立“醫(yī)務(wù)人員職業(yè)血液暴露登記表”，對(duì)職業(yè)暴露情況進(jìn)行登記、保存和上報(bào)。詳細(xì)記錄職業(yè)暴露發(fā)生的時(shí)間、地點(diǎn)及經(jīng)過(guò)；暴露方式；損傷的具體部位、程度；暴露物種類(lèi)（血液、血清或血漿）；處理方法及處理經(jīng)過(guò)