仁康醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物操作

1、武岡市展輝醫(yī)院 微生物檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序 展輝醫(yī)院檢驗(yàn)科 微生物檢驗(yàn)操作程序（SOP）（第一版）制作人： 劉新平啟用日期：2011年5月28日 目 錄微生物室工作崗位職責(zé)4微生物檢驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控操作程序（SOP）4微生物室標(biāo)本接收程序（SOP）8微生物室標(biāo)本接種程序（SOP）9病原微生物污染處理程序（SOP）10血液及骨髓培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）11痰（咽拭）培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）12尿液培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）13膽汁培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）14腦脊液培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）15膿液及傷口分泌物培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）16糞便培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）17穿剌液培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SO

2、P）19生殖系統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)程序（SOP）20細(xì)菌常規(guī)鑒定程序（SOP）21細(xì)菌涂片染色程序（SOP）28革蘭陽(yáng)性球菌的鑒定30 葡萄球菌屬的鑒定30 微球菌屬的鑒定32 鏈球菌屬的鑒定32 腸球菌屬的鑒定33 氣球菌屬的鑒定34革蘭陰性球菌的鑒定35奈瑟菌屬細(xì)菌的鑒定35韋榮球菌屬細(xì)菌鑒定35革蘭陽(yáng)性桿菌的鑒定36 李斯特菌屬與丹毒絲菌屬的鑒定36棒狀桿菌屬的鑒定36諾卡菌屬的鑒定37 紅球菌屬的鑒定38芽胞桿菌屬的鑒定38腸桿菌科的細(xì)菌鑒定38弧菌屬的鑒定39氣單胞菌屬的鑒定40不動(dòng)桿菌屬的鑒定40莫拉菌屬的鑒定41金黃桿菌屬的鑒定41假單胞菌屬的鑒定41嗜血桿菌屬的鑒定42放線桿菌屬的鑒定4

3、2產(chǎn)堿桿菌屬的鑒定43布魯菌屬的鑒定43軍團(tuán)菌屬的鑒定43彎曲桿菌科細(xì)菌的鑒定43消化球菌屬和消化鏈球菌屬的鑒定44擬桿菌屬及梭桿菌屬的鑒定44厭氧無(wú)芽胞革蘭陽(yáng)性桿菌的鑒定44梭狀芽胞桿菌屬的鑒定45臨床真菌的檢驗(yàn)及鑒定46 毛癬菌屬的鑒定46小孢子菌屬的鑒定46 念珠菌屬的鑒定47隱球菌屬的鑒定47曲霉菌屬的鑒定48毛霉屬和根霉菌屬的鑒定48鐮孢霉屬的鑒定48馬爾尼菲青霉菌的鑒定48莢膜組織胞漿菌的鑒定49申克孢子絲菌的鑒定49微生物藥敏試驗(yàn)程序49藥敏質(zhì)控程序51醫(yī)院環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測(cè)53空氣含菌量的監(jiān)測(cè)53工作人員手細(xì)菌監(jiān)測(cè)54物體表面細(xì)菌的監(jiān)測(cè)54消毒劑的監(jiān)測(cè)55無(wú)菌物品的監(jiān)測(cè)55血液培養(yǎng)

4、儀BacT/ALERT 3D Select操作程序 56ATBTM接種操作程序56微生物鑒定/藥敏鑒定ATBTM操作57微生物室工作崗位職責(zé)1、負(fù)責(zé)全院臨床各科細(xì)菌檢驗(yàn)標(biāo)本的驗(yàn)收，各種微生物檢測(cè)；細(xì)菌培養(yǎng)手工和上機(jī)分析鑒定及藥敏試驗(yàn)；支原體和衣原體檢測(cè)；院感監(jiān)測(cè)及其室內(nèi)室間質(zhì)控工作等。各項(xiàng)操作嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)化操作程序（SOP）進(jìn)行。2、每天檢查細(xì)菌自動(dòng)分析儀工作是否正常；觀察培養(yǎng)箱溫度、室內(nèi)濕度、冰箱溫度是否符合要求，并做好記錄。查看培養(yǎng)基、各種生化管、試劑、藥敏紙片、染色液等是否滿(mǎn)足檢測(cè)要求，并及時(shí)更新或配制。3、檢查細(xì)菌培養(yǎng)申請(qǐng)單及原始登記本，確定標(biāo)本接種是否正確。觀察培養(yǎng)基、血液增菌培養(yǎng)瓶

5、生長(zhǎng)狀況，如發(fā)現(xiàn)有細(xì)菌生長(zhǎng)立即進(jìn)行移種，并涂片革蘭染色，將細(xì)菌的染色特性及形態(tài)做好記錄，及時(shí)通知臨床醫(yī)生。4、檢測(cè)分析細(xì)菌，挑取可疑菌落涂片革蘭染色鏡檢，將菌落純分于血平板，做生化鑒定和藥敏試驗(yàn)或上機(jī)分析鑒定，并及時(shí)發(fā)放檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告。5、做好菌種的保存，對(duì)一些難得的菌株、標(biāo)準(zhǔn)菌株等要定期移種，一般一月一次，低溫保存；做好移種記錄，并做好生物安全防護(hù)。6、定期做好所用藥敏紙片的質(zhì)控，每周一次并有記錄；3-6個(gè)月畫(huà)一次質(zhì)控圖并有分析；對(duì)檢驗(yàn)樣本的數(shù)量、樣本的陽(yáng)性率、各種細(xì)菌的耐藥性、各類(lèi)細(xì)菌檢出構(gòu)成的百分比進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，并打印成文統(tǒng)一保存。7、經(jīng)常保持室內(nèi)的清潔衛(wèi)生，生活垃圾與醫(yī)療垃圾要分裝處理；每天

6、下班對(duì)室內(nèi)空氣進(jìn)行消毒處理；生物安全防護(hù)嚴(yán)格執(zhí)行醫(yī)院醫(yī)務(wù)人員職業(yè)暴露防護(hù)制度。微生物檢驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控操作程序（sop）一、目的：規(guī)范微生物檢驗(yàn)及室內(nèi)質(zhì)量控制，保證細(xì)菌檢測(cè)及藥敏結(jié)果的可靠性。二、程序的更改：該標(biāo)準(zhǔn)操作程序的更改，可由任一使用本程序的操作人員提出，并報(bào)請(qǐng)專(zhuān)業(yè)組長(zhǎng)及科主任批準(zhǔn)簽字后生效。三、控制方法(一)對(duì)實(shí)驗(yàn)室人員的要求每個(gè)實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員數(shù)要充足，且要具備良好的職業(yè)道德。凡參加細(xì)菌檢驗(yàn)的技術(shù)人員，要有一定的理論知識(shí)和實(shí)踐能力水平。要有廣泛的基礎(chǔ)訓(xùn)練教育，而且要在一位有經(jīng)驗(yàn)的微生物學(xué)家的監(jiān)督下，進(jìn)行實(shí)際工作的嚴(yán)格訓(xùn)練，對(duì)新工作人員，除教會(huì)基本原理和操作外，還應(yīng)對(duì)其進(jìn)行職業(yè)道德教育。(

7、二)實(shí)驗(yàn)室操作手冊(cè)制定微生物檢驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化操作程序的手冊(cè)，內(nèi)容要全面，文字應(yīng)簡(jiǎn)練，間隔一定時(shí)間要進(jìn)行修改、刪舊補(bǔ)新。操作手冊(cè)一般包括以下內(nèi)容：實(shí)驗(yàn)室的規(guī)章制度：包括各級(jí)人員職責(zé)、權(quán)限及各項(xiàng)有效的制度，如標(biāo)本的接收、報(bào)告的發(fā)送、交接班、輪換、消毒隔離及安全制度等。樣品采集、運(yùn)送與處理；細(xì)菌檢驗(yàn)流程及檢測(cè)工具；檢驗(yàn)方法與質(zhì)控方法 ( 細(xì)菌分離、培養(yǎng)、鑒定與藥物敏感試驗(yàn) )；試劑和培養(yǎng)基質(zhì)量控制；儀器操作手冊(cè)；報(bào)告方式；臨床意義及參考數(shù)據(jù)；實(shí)驗(yàn)室安全。(三)儀器設(shè)備的質(zhì)控 1、高壓滅菌器及干熱滅菌器：使用滅菌器應(yīng)遵守儀器操作規(guī)程。物品滅菌時(shí)，應(yīng)同時(shí)放入監(jiān)控指標(biāo)。生物指標(biāo)應(yīng)用嗜熱脂肪芽胞桿菌懸液，裝入試

8、管或安培瓶，也可用紙帶。化學(xué)指標(biāo)用對(duì)熱敏感的染料標(biāo)記的變色帶子。滅菌時(shí)，將試管或安培瓶、紙條或變色帶等夾放在試驗(yàn)包裹中，以監(jiān)視滅菌效果。對(duì)大型滅菌器，監(jiān)視指標(biāo)應(yīng)放在不同位置。2、培養(yǎng)箱、水浴箱及冰箱：溫度要求：培養(yǎng)箱35±1；水浴箱37±0.5；冰箱4±2，冰格5±1；低溫冰箱20±2；超低溫冰箱80±10。溫度記錄：每天在工作開(kāi)始和結(jié)束時(shí)記錄溫度，這類(lèi)儀器要放入最高、最低溫度計(jì)監(jiān)視。3、二氧化碳培養(yǎng)箱：二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)的CO2含量控制在510之間。4、厭氧缸及厭氧培養(yǎng)箱：工作時(shí)應(yīng)保證絕對(duì)無(wú)氧，在使用時(shí)應(yīng)用化學(xué)和生物學(xué)兩種指標(biāo)進(jìn)行監(jiān)視

9、?；瘜W(xué)指標(biāo)用美藍(lán)或刃天青，無(wú)氧時(shí)均為無(wú)色；生物學(xué)指標(biāo)用諾維氏芽胞梭菌，如厭氧裝置有隙縫時(shí)，該細(xì)菌即不生長(zhǎng)。鈀粒應(yīng)新鮮并具有活性，用過(guò)鈀粒通過(guò)加熱1601.52小時(shí)，重新活化后使用。5、生物安全箱處理：對(duì)含有分枝桿菌和致病性真菌的標(biāo)本，或培養(yǎng)物是需要的。穿過(guò)通風(fēng)櫥表面的氣流，不應(yīng)小于30.38M/分，用于消除櫥內(nèi)污染的紫外線燈及濾過(guò)裝置，必須每隔3個(gè)月校正其性能一次，不合格者應(yīng)調(diào)換。6、接種環(huán)要求長(zhǎng)58cm，環(huán)直徑約3mm；尿定量接種環(huán)，應(yīng)定期檢驗(yàn)其容量是否準(zhǔn)確，否則應(yīng)予校準(zhǔn)；接種針長(zhǎng)58cm。臨床微生物實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)下表。表1 常用儀器設(shè)備的質(zhì)量控制儀器設(shè)備名稱(chēng)控制標(biāo)準(zhǔn)允許

10、范圍監(jiān)控方法和頻率光學(xué)顯微鏡每年 4 次或需要時(shí)，作清潔與調(diào)試培養(yǎng)箱35 ± 1 每天觀察記錄溫度二氧化碳培養(yǎng)菌每天觀察記錄溫度和溫度35 ± 1 二氧化碳濃度氣體5%-10%<10%冰箱每天觀察記錄溫度冷藏室4 ± 2 冷凍室-5 ± 1 低溫冰箱-20 ± 2每天觀察記錄溫度壓力蒸汽滅菌器 121 121 使用時(shí)觀察并記錄溫度、壓力，每周用嗜熱芽孢菌或每次用化學(xué)方法測(cè)試滅菌效果 隨著醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)科的不斷發(fā)展，許多自動(dòng)化儀器和微量生化反應(yīng)系統(tǒng)相繼進(jìn)入微生物實(shí)驗(yàn)室。給細(xì)菌和真菌的培養(yǎng)、鑒定與藥敏試驗(yàn)，帶來(lái)快速準(zhǔn)確的結(jié)果。對(duì)于這些儀器設(shè)備的質(zhì)

11、量控制，可根據(jù)廠商說(shuō)明書(shū)推薦的方法去做，確保測(cè)試系統(tǒng)的靈敏度和精密度。(四)培養(yǎng)基的質(zhì)控實(shí)驗(yàn)室每一次制備的培養(yǎng)基作為一批，標(biāo)明批號(hào)；商品培養(yǎng)基則以同一時(shí)間內(nèi)生產(chǎn)的，相同批號(hào)作為一批。如果同一批號(hào)不在同一個(gè)月內(nèi)使用，則培養(yǎng)基應(yīng)重新用標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行考核。因此，必須對(duì)培養(yǎng)基作以下三方面質(zhì)控。 1、一般性狀 培養(yǎng)基一般性狀包括外觀、厚度、 pH 值等。剛配制的液體培養(yǎng)基，其外觀應(yīng)透明、清亮、無(wú)混濁、無(wú)沉淀，顏色符合要求。新鮮的固體培養(yǎng)基應(yīng)具有特定的顏色，表面濕潤(rùn)但無(wú)水汽、平整、光潔無(wú)凹坑和氣泡。整塊平板厚薄均勻，一般厚度在3mm ，但 MH 平板的厚度不得小于4mm 。斜面的長(zhǎng)度不得超過(guò)試管長(zhǎng)度的23

12、。應(yīng)經(jīng)常觀察貯存培養(yǎng)基的質(zhì)量是否合格。若試管內(nèi)液體培養(yǎng)基液面降低，表明水分蒸發(fā)，培養(yǎng)基濃縮。當(dāng)固體培養(yǎng)基發(fā)生顏色改變，表面干燥，出現(xiàn)裂紋或邊緣的瓊脂與平板或試管分離時(shí)，應(yīng)不再使用。培養(yǎng)基的pH 是細(xì)菌生長(zhǎng)的重要條件之一，一般而言合格培養(yǎng)基的 pH 應(yīng)在規(guī)定值上下 0.2 的范圍之內(nèi)。 2、無(wú)菌試驗(yàn) 新制備的培養(yǎng)基，要按批號(hào)隨機(jī)抽取一定數(shù)量的樣品作無(wú)菌試驗(yàn)。對(duì)于壓力蒸氣滅菌后傾注的固體培養(yǎng)基，抽樣后放35 ± 1 溫箱培養(yǎng) 24-48h ；滅菌后經(jīng)無(wú)菌操作分裝的液體培養(yǎng)基，要全部放入35 ± 1 溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h ；對(duì)有些無(wú)需高壓滅菌，只需煮沸消毒的選擇性培養(yǎng)基要取部分瓊脂，

13、放入無(wú)菌肉湯管培養(yǎng)24h；上述試驗(yàn)證實(shí)無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)時(shí)才算合格。若有細(xì)菌生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基制備過(guò)程中已受雜菌污染，除了尋找原因外，應(yīng)不再使用。 3、細(xì)菌生長(zhǎng)試驗(yàn) 所有的培養(yǎng)基在使用前除了做無(wú)菌試驗(yàn)外，還必須做細(xì)菌生長(zhǎng)試驗(yàn)以測(cè)定培養(yǎng)基性能是否符合要求。要用已知的標(biāo)準(zhǔn)菌株，按照 NCCLS 推薦的方法作質(zhì)控。質(zhì)控所需的標(biāo)準(zhǔn)菌株分2 種：一種是已知的可在某種培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，并產(chǎn)生典型生物學(xué)性狀的，對(duì)培養(yǎng)基中的某種物質(zhì)產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)的菌株；另一種是用已知的不能在某種培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，或?qū)ε囵B(yǎng)基中的某種物質(zhì)產(chǎn)生陰性生化反應(yīng)的菌株。表2 列出 10 種常用固體培養(yǎng)基的質(zhì)量鑒定標(biāo)準(zhǔn)及所需標(biāo)準(zhǔn)菌株。 無(wú)論是廠家的成品培養(yǎng)基

14、，還是實(shí)驗(yàn)室自制的培養(yǎng)基，都應(yīng)經(jīng)過(guò)上述三方面的檢驗(yàn)，才能證實(shí)其質(zhì)量是否合格。廠家應(yīng)將所做的試驗(yàn)內(nèi)容，形成書(shū)面的質(zhì)量鑒定送交客戶(hù)保存。實(shí)驗(yàn)室自行配制過(guò)程中應(yīng)對(duì)上述鑒定內(nèi)容有明確記載。此外，還應(yīng)對(duì)培養(yǎng)基配制原料的性狀、批號(hào)、失效期，以及配制過(guò)程各個(gè)環(huán)節(jié)的操作形成記錄。常用培養(yǎng)基的質(zhì)量鑒定見(jiàn)下表。表2 10種常用培養(yǎng)基的質(zhì)量鑒定表 培養(yǎng)基名稱(chēng) 質(zhì)控菌株 ATCC 鑒定標(biāo)準(zhǔn) 血平板 金黃色葡萄球菌化膿性鏈球菌肺炎鏈球菌大腸埃希菌 2592319615630525922 中度到大量生長(zhǎng)生長(zhǎng)， - 溶血生長(zhǎng)，溶血生長(zhǎng) 巧克力平板 流感嗜血桿菌腦膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌 102111309043096 生長(zhǎng)生長(zhǎng)

15、生長(zhǎng) 伊紅美藍(lán)平板 鼠傷寒沙門(mén)菌大腸埃希菌糞腸球菌 140282592229212 生長(zhǎng)，無(wú)色到琥珀色菌落生長(zhǎng)，藍(lán)黑菌落，金屬光澤部分抑制 麥康凱平板 大腸埃希菌奇異變形桿菌鼠傷寒沙門(mén)菌糞腸球菌 25922124531402829212 生長(zhǎng)，紅色菌落生長(zhǎng)， 無(wú)色菌落，遷徒現(xiàn)象部分抑制生長(zhǎng)，無(wú)色菌落部分抑制 SS 平板 鼠傷寒沙門(mén)菌福氏志賀菌糞腸球菌大腸埃希菌 14028120222921225922 生長(zhǎng)，無(wú)色菌落，有或無(wú)黑心生長(zhǎng)，無(wú)色菌落全部抑制部分或全部抑制 TCBS 平板 霍亂弧菌副溶血弧菌大腸埃希菌 94591780225922 生長(zhǎng)，黃色菌落生長(zhǎng)，藍(lán)色菌落部分或全部抑制 營(yíng)養(yǎng)瓊脂平

16、板沙保弱平板 福氏志賀菌白色念珠菌大腸埃希菌 120221023125922 中度到大量生長(zhǎng)生長(zhǎng)部分或全部抑制 羅氏培養(yǎng)基 結(jié)核分枝桿菌 H37R大腸埃希菌 2517725922 生長(zhǎng)部分或全部抑制 淋病選擇性培養(yǎng)基 淋病奈瑟菌奇異變形桿菌表皮葡萄球菌 430964307112228 生長(zhǎng)部分抑制部分抑制 常用培養(yǎng)基、染色液及生化反應(yīng)的種類(lèi)繁多，其相應(yīng)的質(zhì)控菌株也有數(shù)十余種，這些菌株應(yīng)來(lái)源于世界上專(zhuān)門(mén)保存菌種的權(quán)威機(jī)構(gòu)。如美國(guó)菌種保藏中心(ATCC)；英國(guó)的國(guó)家典型菌種保藏中心(NCTC)；或我國(guó)衛(wèi)生部藥檢生物制品檢定所菌種保藏中心(CMCC)等。下面介紹一下質(zhì)控菌株的保存方法(1)一般保存方

17、法：用高層瓊脂保存，使細(xì)菌處于代謝緩慢狀態(tài)，并按照各種細(xì)菌生長(zhǎng)的情況作定期移種。此方法是最簡(jiǎn)單的保存方法，最長(zhǎng)可保存一年細(xì)菌不會(huì)死亡。但細(xì)菌經(jīng)多次移種后，性狀可能發(fā)生變異。(2)低溫冰箱保存方法：取數(shù)環(huán)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)菌混懸于小牛血清或無(wú)菌脫纖維羊血0.51ml中，容器中加入無(wú)菌玻璃珠數(shù)枚，速凍后(液氮內(nèi))，貯存于40低溫冰箱中保存。需用時(shí)無(wú)菌鑷子取出一枚玻璃珠置培養(yǎng)基中，即可獲得新鮮菌種。這種方法可長(zhǎng)期保存細(xì)菌。(3)真空冷凍干燥法：該方法最為可靠，具有不改變菌種性狀，可長(zhǎng)期保存，對(duì)保存條件適應(yīng)性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。（五）試劑質(zhì)控臨床微生物實(shí)驗(yàn)室常用的試劑，包括染色液、診斷血清及各種生化反應(yīng)試劑等。各種

18、染色液配制后，必須用適應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)菌株作陽(yáng)性和陰性對(duì)照后方可使用；各種生化反應(yīng)試驗(yàn)的培養(yǎng)基及試劑，必須用化學(xué)純或分析純?cè)噭┡渲?，并且?yáng)性與陰性菌株作性能試驗(yàn)，再注明批號(hào)，按試劑性質(zhì)，分別予以避光冷藏，在有效期限內(nèi)使用；定期以陽(yáng)性與陰性菌株進(jìn)行監(jiān)控。1、染色液質(zhì)控 細(xì)菌室最常用的染色液是革蘭染色液和抗酸染色液。對(duì)自制的染色液，要求將整個(gè)配制過(guò)程的操作步驟形成記錄并保存；配好的染色液應(yīng)貼上寫(xiě)有染色液名稱(chēng)、配制日期、配制人的標(biāo)簽；初次使用時(shí)必須用革蘭陽(yáng)性球菌和革蘭陰性桿菌標(biāo)準(zhǔn)株作質(zhì)量鑒定，以證實(shí)染色液配制無(wú)誤；商品化染色液應(yīng)對(duì)試劑名稱(chēng)、批號(hào)、存放條件、失效期等說(shuō)明；廠家應(yīng)向客戶(hù)提供染色液鑒定的質(zhì)量保證書(shū)

19、。按照 CLIA88 的規(guī)定，染色液應(yīng)每周作一次質(zhì)量控制，用金黃色葡萄球菌 (ATCC25923) ，大腸埃希菌 (ATCC 25922) 作革蘭染色液的室內(nèi)質(zhì)控。用結(jié)核分枝桿菌 H37Ra(ATCC 25177) 對(duì)抗酸染色液進(jìn)行質(zhì)量鑒定。過(guò)期的染色液應(yīng)不再使用。 2.、常用生化試劑的質(zhì)控 隨著細(xì)菌鑒定儀和快速微量生化鑒定板條的普及，臨床微生物檢驗(yàn)常用的生化試劑種類(lèi)日趨減少，對(duì)這些試劑的質(zhì)控要求見(jiàn)表3。此外，應(yīng)注意在用試劑貯存時(shí)的避光、冷藏等要求，保證試劑的穩(wěn)定性。不要使用過(guò)期的試劑。 3、診斷血清的質(zhì)控 診斷血清是一種重要的細(xì)菌鑒定的試劑，應(yīng)從有資質(zhì)的生產(chǎn)單位購(gòu)買(mǎi)。驗(yàn)收時(shí)必須看清生產(chǎn)批號(hào)、

20、血清效價(jià)、透明度與色澤。初次使用時(shí)應(yīng)注意：工作濃度并與原用的診斷血清對(duì)照比較后再用于病人樣品的測(cè)試。試驗(yàn)中應(yīng)注意無(wú)菌操作，避免細(xì)菌污染。要經(jīng)常檢查貯存在4 冰箱中的各種血清，若發(fā)現(xiàn)混濁，出現(xiàn)絮狀，應(yīng)停止使用。為保證血清凝集反應(yīng)結(jié)果準(zhǔn)確，應(yīng)每3 個(gè)月對(duì)血清進(jìn)行一次質(zhì)控；不要使用過(guò)期的血清。 表3 常用試劑的質(zhì)量鑒定試劑名稱(chēng) 陽(yáng)性對(duì)照菌種 陰性對(duì)照菌種 監(jiān)控頻率 凝固酶血漿 金黃色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 每天 桿菌肽 A 群鏈球菌 B 群鏈球菌 每周 Optochin 紙片 肺炎鏈球菌  每周 10% 去氧膽酸鈉 肺炎鏈球菌  每周 三氯化鐵（馬尿酸鈉試驗(yàn)） B 群鏈球菌 A

21、群鏈球菌 每次 過(guò)氧化氫 金黃金葡萄球菌 A 群鏈球菌 每天 氧化酶 銅綠假單胞菌 大腸埃希菌 每天 甲基紅試劑 大腸埃希菌 產(chǎn)氣腸桿菌 每周 VP 試劑 產(chǎn)氣腸桿菌 大腸埃希菌 每周 三氯化鐵（苯丙氨酸脫氫酶試驗(yàn)） 奇異變形桿菌 大腸埃希菌 每周 “X ”因子條狀物 嗜沫嗜血桿菌 副流感嗜血桿菌 每周 “V ”因子條狀物 副流感嗜血桿菌 流感嗜血桿菌 每周 “X+V”因子條狀物 流感嗜血桿菌副流感嗜血桿菌  每周 芽管血清 白色念珠菌 熱帶念珠菌 每次 微生物室標(biāo)本接收程序（SOP）一、目的：確保送檢標(biāo)本合格及檢驗(yàn)結(jié)果的正確性和及時(shí)性。二、操作方法1接收標(biāo)本應(yīng)做好查對(duì)，對(duì)不合格標(biāo)本

22、或標(biāo)本與檢驗(yàn)單不符合的，應(yīng)及時(shí)與臨床聯(lián)系，直至標(biāo)本送檢合格并做好記錄。痰液標(biāo)本：先看外觀（膿性粘液狀），再直接涂片鏡檢，低倍鏡下白細(xì)胞25個(gè)、上皮細(xì)胞10個(gè)/每個(gè)視野，為合格痰液；應(yīng)無(wú)菌容器盛裝。無(wú)菌體液標(biāo)本：檢查盛裝器皿或試管必須消毒滅菌，標(biāo)本數(shù)量多少是否符合要求，是否有污染的可能；盡量在用藥前采集標(biāo)本。大便標(biāo)本：要取病變部位（膿、血粘液）盛裝消毒盒內(nèi)；容易干燥的標(biāo)本：如咽拭子、膿液拭子、泌尿生殖道拭子等采集后要及時(shí)送檢、接種。尿液標(biāo)本：要留取晨尿3-5ml于無(wú)菌瓶中，防止污染；厭氧菌培養(yǎng)的標(biāo)本，其送檢環(huán)境是否滿(mǎn)足；各種標(biāo)本做好原始單的登記。2標(biāo)本編號(hào)規(guī)則（1）BacT/ALERT3D60型

23、血培養(yǎng)編號(hào)按流水號(hào)+位置號(hào)。（2）接種平板常規(guī)標(biāo)本按流水號(hào)，每年從1開(kāi)始編號(hào)。（3）標(biāo)本涂片編號(hào)：涂片查找抗酸菌：T+編號(hào)；涂片找真菌、桿菌：B+編號(hào)；球菌涂片： C+編號(hào)。（4）院感標(biāo)本按每月從1編號(hào)。3標(biāo)本登記規(guī)則細(xì)菌室要有細(xì)菌培養(yǎng)登記本、傳染病登記本、各種涂片染色登記本，并在電腦上登記每天接受的標(biāo)本，和細(xì)菌培養(yǎng)鑒定及藥敏資料。登記內(nèi)容必須完整準(zhǔn)確，包括編號(hào)、患者姓名、性別、年齡、科室、床號(hào)、標(biāo)本來(lái)源、住院號(hào)、細(xì)菌名及各種藥敏結(jié)果。對(duì)法定傳染病的結(jié)果，要登在傳染病登記本上，并報(bào)告院防?？?。各項(xiàng)登記必須準(zhǔn)確登記年、月、日，方便查詢(xún)。對(duì)有特殊耐藥機(jī)制的細(xì)菌，必須準(zhǔn)確記錄其產(chǎn)酶結(jié)果。微生物室標(biāo)本

24、接種程序（SOP）一、目的：保證標(biāo)本正確接種到合適的培養(yǎng)基中，使細(xì)菌能得到充分的生長(zhǎng)和能分離出單個(gè)菌落，獲得純培養(yǎng)而供分析鑒定。二、操作方法1、右手持接種工具，在火焰上燒灼接種環(huán)變紅而滅菌。2、左手持標(biāo)本容器或試管，用接種環(huán)挑取標(biāo)本，采用分段劃線法接種于平皿上；無(wú)菌組織來(lái)源的標(biāo)本應(yīng)接種增菌液，放35培養(yǎng)箱中。當(dāng)從標(biāo)本器皿或平板上挑取菌落后，應(yīng)立即塞上試管塞或扣上平皿蓋以防污染。3、挑取標(biāo)本時(shí)，應(yīng)注意選擇反映感染的病理部分。如糞便挑取粘液膿血部分；純化細(xì)菌應(yīng)從原代培養(yǎng)基上挑取單個(gè)可疑菌落；從液體培養(yǎng)基中取菌，將接種環(huán)在培養(yǎng)液中蘸取一環(huán)即可，并編號(hào)記錄。4、接種時(shí)可根據(jù)標(biāo)本，以快速、提高陽(yáng)性率為前

25、題，采用不同的接種方法，選擇不同的培養(yǎng)基。5、接種后，應(yīng)在火焰上燒灼接種工具，所用工具應(yīng)放回原處。6、下表1是各種標(biāo)本細(xì)菌培養(yǎng)應(yīng)選擇的培養(yǎng)基。如尿液接種方法：在火焰上燒紅接種環(huán)，無(wú)菌手續(xù)挑取中段尿50ul，在血瓊脂平板和麥康凱平板中做分段劃線接種，放35培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。表4 各種標(biāo)本選擇的培養(yǎng)基標(biāo)本名稱(chēng)接種培養(yǎng)基尿液血平板（BM）、麥康凱（MCK）糞便麥康凱（MCK）、血平板、SS痰液、咽拭子、灌洗液血平板、巧克力平板、麥康凱（MCK）痰液、白帶等檢驗(yàn)真菌沙保羅培養(yǎng)基、血平板白帶、前列腺液巧克力平板（TM）、血平板傷口分泌物、膿汁血平板、麥康凱（MCK）血液、脊髓液專(zhuān)用血培養(yǎng)瓶腦脊液巧克力平板、

26、血平板、肉湯管注：巧克力平板接種后放入5%-10%CO2環(huán)境中35培養(yǎng)中培養(yǎng)。血培養(yǎng)瓶包括 PLUS+AEROBIC/F（細(xì)菌、真菌培養(yǎng)）PLUS+ANAEROBIC/F(厭氧菌培養(yǎng)) PEDC-PLUS/F(兒童血、腦脊液培養(yǎng)) MYCO/F-LYTIC（結(jié)核培養(yǎng)）病原微生物污染處理程序（SOP）1、廢棄標(biāo)本處理血液、穿剌液、腦脊液無(wú)菌手續(xù)抽取后，立即注入血培養(yǎng)瓶中送檢。用后的針頭放入利器盒中，注射器毀形裝入黃色塑料袋中統(tǒng)一焚燒處理。尿液、痰液用帶蓋的無(wú)菌瓶子盛放送檢，接種完后，標(biāo)本瓶子放進(jìn)帶蓋的污物桶中，統(tǒng)一焚燒處理。生殖道標(biāo)本、傷口分泌物等用無(wú)菌帶蓋棉簽試管送檢，接種后，標(biāo)本試管放入帶蓋

27、污物桶中，統(tǒng)一焚燒處理。涂片的玻片使用后，放入盛有2000mg/L含氯消毒液桶中，浸泡后煮沸30分鐘滅菌處理，清洗干凈。2、使用后的衛(wèi)生物品處理廢棄的塑料培養(yǎng)基、一次性衛(wèi)生用品、過(guò)期的菌株及痰盒放進(jìn)黃色塑料袋子集中放進(jìn)高壓鍋消毒后焚燒。檢驗(yàn)后帶菌玻璃培養(yǎng)皿，集中統(tǒng)一放進(jìn)高壓鍋消毒后，清洗干凈烤干再用。凡用于吸取菌液的吸嘴、吸管，一律放入2000mg/L含氯消毒液中浸泡后焚燒。3、被細(xì)菌污染操作臺(tái)面或地面的處理：應(yīng)立即用2000mg/L含氯消毒液擦拭或用2000mg/L含氯消毒液灑到污染點(diǎn)上，浸泡30分鐘后擦洗干凈。4、職業(yè)暴露后處理手被污染后應(yīng)立即浸泡到含氯消毒液中或用碘伏消毒處理。若眼睛或粘

28、膜污染，則用無(wú)菌生理鹽水沖洗，滴抗菌素眼藥水處理。無(wú)故剌傷，若被病原體污染，應(yīng)立即用碘伏消毒、口服抗菌素處理；并報(bào)告防?？朴嘘P(guān)部門(mén)，根據(jù)不同病原體采取相應(yīng)的應(yīng)急措施，包括預(yù)防接種和抗菌素治療等。血液及骨髓細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）1、標(biāo)本采集由病房護(hù)士在病人發(fā)熱初期或發(fā)熱高峰時(shí)抽取血液，采集血量510ml，為培養(yǎng)液的1/10為宜（兒童為35 ml）；骨髓1-3 ml。標(biāo)本采集注意事項(xiàng)，執(zhí)行臨床檢驗(yàn)標(biāo)本采集指南。注意嚴(yán)格無(wú)菌操作，標(biāo)本采集后應(yīng)立即注入血培養(yǎng)瓶充分混勻，防止凝固，并立即送檢。2、檢驗(yàn)程序圖1 血液、骨髓（增菌需、厭氧培養(yǎng)） 涂片染色鏡檢 分離培養(yǎng) 直接藥敏試驗(yàn) 3568小時(shí)血平

29、板和巧克力平板 血平板和麥康凱 初步報(bào)告（CO2培養(yǎng)及需氧培養(yǎng) ） （厭氧培養(yǎng)） 菌落觀察涂片染色鏡檢 純培養(yǎng) 血清學(xué)試驗(yàn) 生化反應(yīng) 藥敏試驗(yàn) 確定報(bào)告 3、機(jī)檢程序：培養(yǎng)瓶放入BacT/ALERT3D自動(dòng)細(xì)菌培養(yǎng)儀里，若有細(xì)菌生長(zhǎng)儀器自動(dòng)報(bào)警，取出移種血平板做進(jìn)一步培養(yǎng)分析鑒定。用一次性注射器以無(wú)菌技術(shù)抽取瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)物涂片，做革蘭氏染色，將染色特性結(jié)果電話(huà)通知臨床醫(yī)生。取生長(zhǎng)物移種血平板、麥康凱平板放35培養(yǎng)16-20小時(shí)。肉眼觀察血平板、麥康凱平板上的菌落特征并做革蘭氏染色。 若是革蘭陽(yáng)性球菌：根據(jù)血平板溶血生長(zhǎng)情況和涂片細(xì)菌形態(tài)做PC12測(cè)試板鑒定。若是革蘭陰性桿菌：作氧化酶試驗(yàn)，并做NC

30、21測(cè)試板鑒定。4、報(bào)告結(jié)果菌體鑒定到種或型及所測(cè)得的抗生素MIC試驗(yàn)結(jié)果。培養(yǎng)七天后如果陰性，BacT/ALERT3D儀器自動(dòng)報(bào)警，取出培養(yǎng)瓶盲傳血平板、巧克力平板、麥康凱平板及革蘭氏染色。有細(xì)菌就報(bào)××菌生長(zhǎng)；如無(wú)細(xì)菌則報(bào)告：“培養(yǎng)7天無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)”。痰（咽試）培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（sop）1、常見(jiàn)病原菌 表5 下呼吸道標(biāo)本培養(yǎng)常見(jiàn)病原菌 革蘭陽(yáng)性菌 革蘭陰性菌 金黃色葡萄球菌 腦膜炎奈瑟氏菌 化膿性鏈球菌 流感嗜血桿菌 肺炎鏈球菌 腸桿菌科細(xì)菌 結(jié)核分枝桿菌 非發(fā)酵菌 白喉棒狀桿菌 嗜肺軍團(tuán)菌 假絲酵母菌 擬桿菌 2、標(biāo)本采集：為清晨經(jīng)漱口的第一口痰，且新鮮深咳出者，收集時(shí)

31、應(yīng)避免受唾液污染；將痰吐入無(wú)菌帶蓋的痰杯中送檢。痰標(biāo)本肉眼觀察：顏色，粘度，有無(wú)血絲或膿性，若標(biāo)本為水狀且明顯是唾液，涂片鏡檢上皮細(xì)胞25，白細(xì)胞很少為不合格，重送標(biāo)本。3、檢驗(yàn)程序圖2 痰液 結(jié)核菌檢查 血平板及麥康凱 巧克力平板 涂片革蘭染色鏡檢抗酸染色 羅氏培養(yǎng)基 需厭氧各一 CO2培養(yǎng)1824小時(shí) 初步報(bào)告 菌落觀察和涂片染色 鑒定試驗(yàn) 藥敏試驗(yàn) 確定報(bào)告涂片革蘭氏染色檢查：挑選痰液中膿性或帶血部分，涂成均勻薄片，革蘭氏染色鏡檢。除了解痰標(biāo)本收集是否合格外，還可根據(jù)鏡檢所見(jiàn)發(fā)初步報(bào)告；如見(jiàn)排列成葡萄狀的G+C,可報(bào)告為“找到G+C,形似葡萄球菌”;如見(jiàn)到瓜子仁形或矛頭狀的尖端相背，成雙

32、排列短鏈狀，且有明顯莢膜的革蘭陽(yáng)性球菌時(shí)，可報(bào)告為：“找到革蘭氏陽(yáng)性球菌，形似肺炎鏈球菌等”。痰標(biāo)本的接種：分別將痰標(biāo)本接種于血平板、巧克力平板或麥康凱平板上。 培養(yǎng)：將血平板、麥康凱平板置于35培養(yǎng)箱培養(yǎng)；將巧克力平板置于5%10%CO2環(huán)境中，35培養(yǎng)箱培養(yǎng)1824小時(shí)。觀察培養(yǎng)基的生長(zhǎng)狀況，并定量每一種微生物的生長(zhǎng)情況，以多量、中量及少量記錄。觀察培養(yǎng)基的生長(zhǎng)情形后，可視需要取菌落作涂片，進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢。根據(jù)革蘭氏染色情況，挑取可疑菌落做生化鑒定或利用WalkAway-40SI儀鑒定板進(jìn)行鑒定和藥敏。若可能的話(huà)，可當(dāng)日發(fā)出部分報(bào)告或最后確定報(bào)告。若是正常菌群生長(zhǎng)，可報(bào)“無(wú)致病菌生長(zhǎng)”

33、；查出致病菌或條件致病菌，報(bào)告菌名和藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果。尿液培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（sop）1、檢驗(yàn)程序圖3 尿液涂片染色鏡檢 定量培養(yǎng) 分離培養(yǎng)（血平板、麥康凱） 淋球菌培養(yǎng) 菌落觀察 涂片染色 巧克力平板 涂片染色鏡檢 純培養(yǎng) 初步報(bào)告 5%-10%CO2 鑒定、藥敏試驗(yàn) 3518-24h 確定報(bào)告2、標(biāo)本的采集清潔外陰及尿道口周?chē)匀慌懦龅闹卸文蛞?3 ml，導(dǎo)尿及恥骨吸取膀胱尿液510ml裝于無(wú)菌容器，標(biāo)本收集后立即送檢。3、標(biāo)本的處理涂片檢查：以無(wú)菌操作吸取尿510ml，放入無(wú)菌試管內(nèi)，經(jīng)3000r/min離心10min后，傾去上清液，取其沉渣，涂片革蘭氏染色鏡檢。如發(fā)現(xiàn)有革蘭氏陰性雙球菌

34、，存在細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外或者有念珠菌等，即可發(fā)出鏡檢初步報(bào)告。尿定量培養(yǎng)（菌落計(jì)數(shù)）平板接種法：用定量加液器取尿液50ul，滴在平板培養(yǎng)基上，用接種環(huán)涂抹均勻，放35培養(yǎng)過(guò)夜，計(jì)數(shù)生長(zhǎng)的菌落數(shù)，乘以20，求出每ml的菌數(shù)。傾注平板法：首先將無(wú)菌生理鹽水9.9ml分裝在試管中，加入被檢尿0.1ml,充分混勻，使成100倍稀釋。取此液1ml放入直徑9cm滅菌平皿內(nèi)，同時(shí)加入已融化并冷至50的培養(yǎng)基與尿混勻，待凝固后置35培養(yǎng)，生長(zhǎng)菌落數(shù)乘以100即相當(dāng)于每ml中菌數(shù)。培養(yǎng)基選擇：血平板、麥康凱是基本培養(yǎng)基，一般的革蘭氏陽(yáng)性和陰性菌均可生長(zhǎng)。淋球菌培養(yǎng)：選用巧克力平板，并放入CO2環(huán)境中培養(yǎng)。結(jié)核桿菌培

35、養(yǎng)：選用羅氏培養(yǎng)基。3報(bào)告方式：如下情況需要進(jìn)行鑒定和抗生素敏感試驗(yàn)。革蘭陰性桿菌計(jì)數(shù)大于105cfu/ml；革蘭陽(yáng)性球菌計(jì)數(shù)大于104cfu/ml有診斷意義。導(dǎo)尿標(biāo)本的菌落計(jì)數(shù)超過(guò)103cfu/ml有臨床意義。以“恥骨抽取”所得到尿液上的任何微生物。與病人血液中所發(fā)現(xiàn)的微生物相同者。通過(guò)染色鏡檢，生化反應(yīng)或上機(jī)分析鑒定，最后報(bào)告細(xì)菌名稱(chēng)及藥敏試驗(yàn)結(jié)果。注： 在血平板，巧克力平板，麥康凱平板上的菌落特征及生長(zhǎng)情況都要記錄在“細(xì)菌培養(yǎng)登記薄”上。膽汁細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（sop）1膽汁培養(yǎng)常見(jiàn)的病原菌表6 膽汁培養(yǎng)常見(jiàn)病原菌 革蘭陽(yáng)性菌 革蘭陰性菌 腸球菌 大腸埃希菌 消化鏈球菌 肺炎克雷伯氏菌

36、 厭氧鏈球菌 變形桿菌 葡萄球菌 銅綠假單胞菌 傷寒及其它沙門(mén)菌1、標(biāo)本的采集：由臨床醫(yī)生在無(wú)菌操作下，抽取膽汁于無(wú)菌試管中送檢。膽汁標(biāo)本采集方法有三種，即十二指腸引流法，膽囊穿刺法及手術(shù)直接采取法。十二指腸引流法：無(wú)菌操作下用導(dǎo)管作十二指腸引流膽汁，分為A、B、C三部分。A液來(lái)自膽管，為橙黃或金黃；B液來(lái)自膽囊為棕黃綠色；C液來(lái)自肝膽道為檸檬色。B液做細(xì)菌培養(yǎng)意義較大。膽汁的接種量為培養(yǎng)液的1/10，無(wú)菌操作取B液5ml于培養(yǎng)瓶中輕輕混勻，放35溫箱中培養(yǎng)。2、標(biāo)本的處理涂片檢查：一般不作涂片檢查，當(dāng)臨床需要時(shí)，可將膽汁經(jīng)3000r/min離心10min后，取沉淀涂片，革蘭氏染色鏡檢。根據(jù)細(xì)

37、菌形態(tài)，排列及染色特性，發(fā)出初步報(bào)告。3、細(xì)菌檢驗(yàn)程序圖4 膽汁涂片染色 需氧培養(yǎng)（增菌） 厭氧培養(yǎng)鏡檢 血平板、麥康凱 血平板 涂片染色鏡檢，鑒定及藥敏試驗(yàn) 確定報(bào)告增菌培養(yǎng)：膽汁本身有抑菌作用，接種普通肉湯后，膽鹽稀釋降低抑菌作用，為提高陽(yáng)性檢出率，膽汁的接種量為肉湯的1/10。分離培養(yǎng)：移種血平板、麥康凱，采用分區(qū)劃線接種，35增菌培養(yǎng)24h72 h觀察有無(wú)菌生長(zhǎng)，無(wú)菌生長(zhǎng)則報(bào)告無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。結(jié)果觀察及鑒定：有細(xì)菌生長(zhǎng)，根據(jù)生長(zhǎng)細(xì)菌按常規(guī)或上機(jī)鑒定之。4、報(bào)告方式沙門(mén)氏菌感染在膽汁中檢出率較高，但必須以血清凝集試驗(yàn)為依據(jù)，報(bào)告血清型。正常膽汁應(yīng)是無(wú)菌的，如培養(yǎng)出細(xì)菌即為致病菌，應(yīng)報(bào)細(xì)菌的種

38、、型及藥敏試驗(yàn)結(jié)果。腦脊液培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（sop）1、標(biāo)本的采集：在患者用藥前，由臨床醫(yī)師以無(wú)菌手續(xù)行腰椎穿刺，抽取腦脊液3-5ml，盛于無(wú)菌試管中，立即送檢（切不可置冰箱冷藏）。2、標(biāo)本的處理首先觀察腦脊液的外觀，除結(jié)核性腦膜炎，無(wú)菌性腦膜炎外；其他細(xì)菌引起的化膿性腦膜炎，腦脊液多呈明顯混濁。取腦脊液標(biāo)本以3000r/min離心10min，取沉淀物培養(yǎng)和涂片革蘭氏染色、抗酸及墨汁染色鏡檢，根據(jù)染色鏡檢發(fā)出初步報(bào)告。3、檢驗(yàn)程序圖5 腦脊液 涂片染色 巧克力平板 結(jié)核菌培養(yǎng) 沙保羅培養(yǎng)基 革蘭染色 血平板（增菌） 羅氏培養(yǎng)基 血平板黑汁染色 抗酸染色 5-10% CO2培養(yǎng) 需氧培養(yǎng) 25培

39、養(yǎng) 35培養(yǎng) 菌落形態(tài)， 若有菌生長(zhǎng)， 涂片染色 涂片染色 涂片染色鏡檢 鑒定、藥敏試驗(yàn) 鏡檢 確定報(bào)告培養(yǎng)基的選擇：可先將腦脊液接種肉湯增菌、巧克力平板及羅氏培養(yǎng)基，再用肉湯增菌后接種血平板、沙保羅平板等。結(jié)果觀察及鑒定：涂片染色鏡檢：革蘭氏陰性雙球菌，呈腎形兩凹面相對(duì)成一圓形成雙排列。本菌屬細(xì)菌氧化酶及觸酶陽(yáng)性，腦膜炎奈瑟菌能分解葡萄糖、麥芽糖，而淋病奈瑟氏菌只分解葡萄糖相鑒別。4、報(bào)告方式：如實(shí)報(bào)告鑒定結(jié)果及其藥敏結(jié)果。膿液及傷口分泌物培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)程序（sop）1、檢驗(yàn)程序圖6 膿液及傷口分泌物涂片染色 需氧培養(yǎng) 厭氧培養(yǎng) 結(jié)核菌培養(yǎng)革蘭氏染色 抗酸染色 分離培養(yǎng) 分離培養(yǎng) 增菌培養(yǎng)鏡檢 血

40、平板及巧克力平板 葡萄糖血平板 硫乙醇酸鈉肉湯 麥康凱平板 牛心腦浸液平板 皰肉增菌培養(yǎng)基 觀察菌落 涂片染色鏡檢 純培養(yǎng) 生化試驗(yàn) 藥敏試驗(yàn) 確定報(bào)告 2、標(biāo)本的采集創(chuàng)傷：用無(wú)菌鹽水清洗表面，用棉試子直接沾取膿液或分泌物。膿腫：消毒患部，無(wú)菌注射器抽取膿液2-5ml刺入無(wú)菌橡皮塞中送檢（注意厭氧菌的檢測(cè)）。檢查放線菌的標(biāo)本應(yīng)取多量膿液，要注意采集其中“硫磺顆?！边M(jìn)行鑒定。3、標(biāo)本的處理涂片檢查：膿液標(biāo)本均應(yīng)涂片進(jìn)行革蘭氏染色或抗酸染色，根據(jù)鏡下所見(jiàn)發(fā)出初步報(bào)告。4、培養(yǎng)檢查培養(yǎng)接種：標(biāo)本接種到血平板，麥康凱平板，置35培養(yǎng)，標(biāo)本接種到巧克力平板置5-10%CO2環(huán)境35培養(yǎng)16-24h。培養(yǎng)

41、基菌落觀察及鑒定：血平板，巧克力平板，麥康凱平板上生長(zhǎng)的細(xì)菌，按常規(guī)鑒定及藥敏試驗(yàn)。膿性標(biāo)本涂片見(jiàn)大量細(xì)菌，而培養(yǎng)不生長(zhǎng)者，應(yīng)考慮厭氧菌感染，應(yīng)做厭氧菌培養(yǎng)。5、報(bào)告方式：對(duì)無(wú)菌組織部位的感染，分泌物中分離到細(xì)菌，一般均有臨床意義，要及時(shí)鑒定和藥敏試驗(yàn)。報(bào)告細(xì)菌名稱(chēng)及藥敏試驗(yàn)結(jié)果。糞便細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（sop）1、引起感染性腹瀉的病原微生物有：細(xì)菌性，產(chǎn)毒素型腹瀉：包括霍亂弧菌、腸毒素型大腸埃希菌等；侵襲型腹瀉：包括志賀菌、腸致病大腸埃希菌和腸侵襲型大腸埃希菌等；食物中毒：包括沙門(mén)菌、金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌、蠟樣芽胞桿菌和肉毒梭菌等；偽膜性腸炎：包括艱難梭菌、葡萄球菌或真菌；慢性腹瀉：主要由結(jié)核桿菌、念珠菌引起。真菌性：念珠菌、毛霉菌等。引起腹瀉的致病菌見(jiàn)下表 表7 常見(jiàn)引起腹瀉的致病菌革蘭陽(yáng)性菌 革蘭陰性菌金黃色葡萄球菌 傷寒及其它沙門(mén)菌結(jié)核分支桿菌 志賀菌屬難辨梭菌 致病大腸埃希菌蠟樣芽胞桿菌 （ETEC、EPEC、EIEC、EHEC）白色念珠菌 弧菌屬菌種毛霉菌 氣單胞、鄰單胞菌種 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌 彎曲菌2、標(biāo)本采集：采集糞便標(biāo)本時(shí)，應(yīng)挑取有膿血或粘液部分35克，盛于消毒的廣口瓶、蠟質(zhì)紙盒或塑料盒內(nèi)及時(shí)送檢