單基因病致病基因的鑒定PPT學習教案

1、會計學1單基因病致病基因的鑒定單基因病致病基因的鑒定2第1頁/共29頁3第2頁/共29頁4第3頁/共29頁5第4頁/共29頁6第5頁/共29頁7功能克隆：功能克?。簭牡鞍踪|著手進行基因克隆的策略。從蛋白質著手進行基因克隆的策略。定位克隆定位克?。涸诘鞍踪|產(chǎn)物未知的情況下進行基因克隆的在蛋白質產(chǎn)物未知的情況下進行基因克隆的策略。策略。蛋白蛋白酶消化、分離酶消化、分離氨基酸序列測定氨基酸序列測定設計合成寡核苷酸設計合成寡核苷酸篩選篩選cDNAcDNA文庫文庫不同多肽片段不同多肽片段家系資料家系資料連鎖分析連鎖分析獲得差異片段獲得差異片段染色體異常染色體異常篩選篩選cDNAcDNA文庫文庫 克隆全長

2、基因克隆全長基因精細定位精細定位消減克隆消減克隆第6頁/共29頁8第7頁/共29頁9第8頁/共29頁10第9頁/共29頁11甲甲 型型 血血 友友 病病遺傳方式：遺傳方式：XRXR發(fā)病率：發(fā)病率：1/10,0001/10,000（男）（男）病因：病因：FF基因遺傳性缺陷基因遺傳性缺陷 ( (缺失、點突變、插入、重復、倒位缺失、點突變、插入、重復、倒位) ) 基因定位：基因定位：Xq28Xq28 基因全長基因全長186kb186kb，含，含2626個外顯子個外顯子 臨床表現(xiàn)：外傷后出血不止，關節(jié)血腫臨床表現(xiàn)：外傷后出血不止，關節(jié)血腫第10頁/共29頁12 F F因子基因的功能克隆因子基因的功能克

3、隆功能克隆是從功能克隆是從蛋白質蛋白質著手進行基因克隆的策略。著手進行基因克隆的策略。因子因子 多肽多肽 不同多肽片段不同多肽片段蛋白酶消化蛋白酶消化分離分離氨基酸序列測定氨基酸序列測定設計合成寡核苷酸設計合成寡核苷酸篩選篩選cDNA文庫文庫第11頁/共29頁13通過動物模型鑒定疾病基因通過動物模型鑒定疾病基因第12頁/共29頁14第13頁/共29頁15第14頁/共29頁16第15頁/共29頁17基于染色體異常的基因定位基于染色體異常的基因定位第16頁/共29頁18連鎖分析連鎖分析第17頁/共29頁19確定致病基因確定致病基因o突變篩查：在家系中該突變與表型共分離是最主要的證據(jù)o表型拯救：有些

4、導致疾病的突變通常引起基因功能的喪失，而且其表型是可逆的。如果從一個患者的細胞中能夠發(fā)現(xiàn)基因突變的表型，我們就可以檢測轉染了候選基因野生型等位基因的表達載體是否能夠“拯救”突變并恢復正常的表型o建立疾病的小鼠模型：如果能夠在某一家系中確定一個致病基因，但又無法利用更多的無關患者來驗證，通過構建小鼠模型來驗證。對于功能喪失性突變導致的表型可以通過制作基因敲除（knock-out）小鼠。對于功能獲得性突變導致的表型或者突變效應不清楚的表型，可以制作突變基因敲入（knock-in）模型第18頁/共29頁20第19頁/共29頁21Duchenne型肌營養(yǎng)不良型肌營養(yǎng)不良（ Duchenne muscu

5、lar dystrophy, DMD）n遺傳方式：遺傳方式： XRn發(fā)病率：發(fā)病率：1/3400（男）（男）n臨床表現(xiàn)：雙下肢臨床表現(xiàn)：雙下肢肌無力、肌無力、Gower征、腓腸征、腓腸肌假性肥大、進行性肌萎縮（一般肌假性肥大、進行性肌萎縮（一般20歲）。歲）。n病因：病因：DMD基因突變，基因突變，抗肌萎縮蛋白（抗肌萎縮蛋白（dystrophin）。n基因定位：基因定位：，全長，全長2,400kb，含，含79個外顯子，個外顯子，是已知最大的致病基因。是已知最大的致病基因。第20頁/共29頁22Gower綜合征綜合征第21頁/共29頁23 DMD DMD基因的定位克隆基因的定位克隆定位克隆是在定位克隆是在蛋白質產(chǎn)物蛋白質產(chǎn)物未知的情況下進行基因克隆的策略未知的情況下進行基因克隆的策略。家系資料家系資料 精細定位精細定位 消減克隆消減克隆連鎖分析連鎖分析獲得差異片段獲得差異片段染色體異常染色體異常篩選篩選cDNA文庫文