口腔粘膜細(xì)胞基因組制備

1、關(guān)于口腔粘膜細(xì)胞基因組制備關(guān)于口腔粘膜細(xì)胞基因組制備現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一頁，共17頁目的：目的：現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二頁，共17頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三頁，共17頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四頁，共17頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五頁，共17頁v 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第六頁，共17頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第七頁，共17頁實(shí)驗(yàn)材料及試劑實(shí)驗(yàn)材料及試劑現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第八頁，共17頁主要試劑的功能主要試劑的功能v抽提緩沖液抽提緩沖液：由：由SDS、EDTA、蛋白酶蛋白酶K組成組成 SDS的作用是裂解細(xì)胞的作用是裂解細(xì)胞 EDTA 的作用是絡(luò)合掉鎂等二價(jià)金屬離子，防止的作用是絡(luò)合掉鎂等二價(jià)金屬離子，防止DNA酶對(duì)酶對(duì)DNA分子的降解作用。分子的降解作用。 蛋白

2、酶蛋白酶K的作用是水解蛋白質(zhì)。的作用是水解蛋白質(zhì)。v酚和氯仿酚和氯仿/異戊醇異戊醇：抽提分離蛋白質(zhì)：抽提分離蛋白質(zhì)v乙醇乙醇：沉淀：沉淀DNAvTE：溶解：溶解DNA現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第九頁，共17頁取材取材:用生理鹽水漱口后，口含生理鹽水用生理鹽水漱口后，口含生理鹽水1015ml約約23min，用，用15ml離心管（離心管（4000rpm 10min）收集細(xì)胞沉淀）收集細(xì)胞沉淀 （離心機(jī)的使用，平衡）（離心機(jī)的使用，平衡） 加入加入0.5ml抽提緩沖液，重懸沉淀抽提緩沖液，重懸沉淀 ，轉(zhuǎn)移至，轉(zhuǎn)移至1.5ml EP管管 （微量移液器的正確使用）（微量移液器的正確使用）混勻，混勻，65 溫育溫育30

3、min 加入等體積的飽和酚加入等體積的飽和酚(0.5ml)，充分顛倒混勻，充分顛倒混勻（不要震蕩?。ú灰鹗帲。?shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)（一人一組）：實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)（一人一組）： 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十頁，共17頁12000rpm 5min，上層水相轉(zhuǎn)移至，上層水相轉(zhuǎn)移至新的新的EP管管 （高速離心機(jī)的使用與安全意識(shí)）（高速離心機(jī)的使用與安全意識(shí)） 加入等體積氯仿加入等體積氯仿/異戊醇，顛倒混勻異戊醇，顛倒混勻12000rpm 5min，上層水相轉(zhuǎn)移到，上層水相轉(zhuǎn)移到新的新的EP管管 加入加入2倍體積倍體積95%的乙醇，顛倒混勻的乙醇，顛倒混勻12000rpm 10min 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十一頁，共1

4、7頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十二頁，共17頁棄上清，沉淀中加入棄上清，沉淀中加入75%乙醇乙醇 12000rpm 2min 輕輕棄去上清，打開輕輕棄去上清，打開EP蓋，室溫靜置蓋，室溫靜置510min 加入加入30 l0.1TE溶液，充分混勻后檢測(cè)結(jié)果溶液，充分混勻后檢測(cè)結(jié)果 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十三頁，共17頁分子醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)分子醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)v微量移液器的正確使用微量移液器的正確使用v離心機(jī)的正確使用離心機(jī)的正確使用v上課紀(jì)律上課紀(jì)律v撰寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告的規(guī)范撰寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告的規(guī)范現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十四頁，共17頁 定性分析：定性分析：DNA瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳 PCR-SSCP 多態(tài)性分析多態(tài)性分析現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十五頁，共17頁常見問題：常見問題： 1、提取的、提取的DNA不純：不純： 變性不充分；關(guān)鍵過程反應(yīng)時(shí)間過短；變性不充分；關(guān)鍵過程反應(yīng)時(shí)間過短； 離心時(shí)間或速度不夠。離心時(shí)間或速度不夠。 2、提取的、提取的DNA成涂布狀：成涂布狀： 操作過程中用力過猛，動(dòng)作粗暴；操作過程中用力過猛，動(dòng)作粗暴； 操作系統(tǒng)有污染。操作系統(tǒng)有污染。 3、與細(xì)胞器、與細(xì)胞器DNA分離不全；分離不全；