病理學(xué)技術(shù)第一次課1

1、病理學(xué)技術(shù)概況齊曉薇 副主任醫(yī)師江南大學(xué)附屬醫(yī)院病理學(xué)教研室病理學(xué)的定義lPathology 是病痛（是病痛（ pathos）的研究的研究(logos) l聯(lián)系基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床醫(yī)學(xué)的橋梁聯(lián)系基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床醫(yī)學(xué)的橋梁 l研究疾病狀態(tài)下細(xì)胞、組織和器官結(jié)構(gòu)和功能的研究疾病狀態(tài)下細(xì)胞、組織和器官結(jié)構(gòu)和功能的改變改變l通過各種手段解釋疾病，為臨床診斷，治療和疾通過各種手段解釋疾病，為臨床診斷，治療和疾病的預(yù)防提供依據(jù)病的預(yù)防提供依據(jù)2022-4-292病理學(xué)技術(shù) 病理學(xué)包括病理學(xué)理論和病理學(xué)技術(shù)。病理學(xué)技術(shù)是病理學(xué)包括病理學(xué)理論和病理學(xué)技術(shù)。病理學(xué)技術(shù)是“病理學(xué)之母病理學(xué)之母”。病理學(xué)的理論和技術(shù)被視為

2、一輛車的兩。病理學(xué)的理論和技術(shù)被視為一輛車的兩個輪子，缺一不可，互為依存，互相促進(jìn)，兩者的結(jié)合決個輪子，缺一不可，互為依存，互相促進(jìn)，兩者的結(jié)合決定著病理學(xué)的發(fā)展。定著病理學(xué)的發(fā)展。 病理學(xué)技術(shù)包括尸體解剖、大體標(biāo)本的制作、制片（石病理學(xué)技術(shù)包括尸體解剖、大體標(biāo)本的制作、制片（石臘切片、冰凍切片、半薄切片、超薄切片等）、組織化學(xué)臘切片、冰凍切片、半薄切片、超薄切片等）、組織化學(xué)方法，免疫組化技術(shù)、原位雜交、分子病理技術(shù)、電鏡技方法，免疫組化技術(shù)、原位雜交、分子病理技術(shù)、電鏡技術(shù)、圖像分析等。術(shù)、圖像分析等。 病理技術(shù)的發(fā)展促進(jìn)了病理學(xué)理論的進(jìn)步。病理技術(shù)的發(fā)展促進(jìn)了病理學(xué)理論的進(jìn)步。2022-

3、4-293病理學(xué)的發(fā)展器官病理學(xué)時代：lGiovanni Battista Morgagni （1682 ,1 1771,11） l意大利解剖學(xué)家l現(xiàn)代解剖病理學(xué)之父l編寫疾病的位置與原因，包含646例解剖記錄 l奠定了病理學(xué)發(fā)展的基礎(chǔ)l遺憾：沒有將病理與臨床聯(lián)系2022-4-294病理學(xué)的發(fā)展組織病理學(xué)時代組織病理學(xué)時代lRudolf Virchow （1821,10-1902,12) 德國醫(yī)生l現(xiàn)代病理學(xué)之父l編著細(xì)胞病理學(xué)l開創(chuàng)了細(xì)胞病理學(xué)時代2022-4-295病理學(xué)的發(fā)展現(xiàn)代病理學(xué)時代現(xiàn)代病理學(xué)時代(近400年歷史）l電子顯微鏡：細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的觀察l免疫病理學(xué)：免疫組化技術(shù)的應(yīng)用l分

4、子病理學(xué)：疾病遺傳和基因的研究l數(shù)字病理學(xué)：2022-4-296病理學(xué)技術(shù)l傳統(tǒng)病理學(xué)技術(shù)傳統(tǒng)病理學(xué)技術(shù) HE染色技術(shù) 組織化學(xué)染色 細(xì)胞病理學(xué)技術(shù) l現(xiàn)代病理學(xué)技術(shù)現(xiàn)代病理學(xué)技術(shù)2022-4-297傳統(tǒng)病理學(xué)技術(shù)l病理學(xué)技術(shù)的基礎(chǔ)和根本，是臨床和科研最常用的技術(shù)l全手工操作發(fā)展為自動化的機(jī)器：脫水機(jī)，包埋機(jī)，封片機(jī)，染色機(jī)，包埋盒和切片打號機(jī)，液基細(xì)胞制片技術(shù)l材料的優(yōu)化：塑料包埋盒，一次性切片刀l試劑的該進(jìn)：試劑的商業(yè)化，非污染環(huán)保試劑l低溫恒冷切片機(jī)替代二氧化碳制冷機(jī)等l（前三次課主要講述傳統(tǒng)病理學(xué)技術(shù)，包括組織切片技術(shù)、生物染料和蘇木精-伊紅染色方法染色技術(shù)和原理、常用的特殊染色方法）

5、2022-4-298現(xiàn)代病理學(xué)技術(shù)l 免疫組織化學(xué)技術(shù)：發(fā)展快，應(yīng)用廣，已成為臨床診斷，靶向藥物的免疫組織化學(xué)技術(shù)：發(fā)展快，應(yīng)用廣，已成為臨床診斷，靶向藥物的篩選以及科研的重要手段；盡管存在問題。篩選以及科研的重要手段；盡管存在問題。l 電鏡技術(shù)：包括透射電鏡，掃描電鏡，免疫電鏡等，用于腫瘤的分型，電鏡技術(shù)：包括透射電鏡，掃描電鏡，免疫電鏡等，用于腫瘤的分型，腎臟病的診斷，肌肉疾病的診斷等；科研。腎臟病的診斷，肌肉疾病的診斷等；科研。l 分子病理技術(shù)：近分子病理技術(shù)：近20年來發(fā)展最快，分子生物學(xué)技術(shù)與病理形態(tài)結(jié)合，年來發(fā)展最快，分子生物學(xué)技術(shù)與病理形態(tài)結(jié)合，用于疾病診斷和分類，靶向藥物的篩選

6、，病原體的檢測，遺傳學(xué)研究用于疾病診斷和分類，靶向藥物的篩選，病原體的檢測，遺傳學(xué)研究等。等。l 數(shù)字化病理：病理切片數(shù)字化病理：病理切片掃描技術(shù)，遠(yuǎn)程會診，圖像分析系統(tǒng)，檔案的數(shù)字化管理。 病理技術(shù)的進(jìn)步促使人類的認(rèn)識從大體、細(xì)胞、超微病理技術(shù)的進(jìn)步促使人類的認(rèn)識從大體、細(xì)胞、超微結(jié)構(gòu)、分子基因水平逐步深入。結(jié)構(gòu)、分子基因水平逐步深入。2022-4-2992022-4-2910免疫組化(pubmed檢索） 應(yīng)用免疫學(xué)（抗原抗應(yīng)用免疫學(xué)（抗原抗體反應(yīng)）和組織化學(xué)（化體反應(yīng)）和組織化學(xué)（化學(xué)反應(yīng)）的原理，對組織學(xué)反應(yīng)）的原理，對組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的某些切片或細(xì)胞標(biāo)本中的某些成份進(jìn)行原位定性、定

7、位成份進(jìn)行原位定性、定位甚至定量研究的技術(shù)。甚至定量研究的技術(shù)。 現(xiàn)代病理學(xué)技術(shù)免疫組織化學(xué)技術(shù)的應(yīng)用：免疫組織化學(xué)技術(shù)的應(yīng)用：l臨床診斷和鑒別診斷臨床診斷和鑒別診斷l(xiāng)腫瘤的分型腫瘤的分型l腫瘤起源的判斷腫瘤起源的判斷l(xiāng)靶向藥物的篩選靶向藥物的篩選l腫瘤生物學(xué)行為的判斷腫瘤生物學(xué)行為的判斷l(xiāng)病原體的檢測病原體的檢測l2022-4-29112022-4-2912分子病理分子病理(pubmed檢索）檢索）現(xiàn)代病理學(xué)技術(shù)分子病理學(xué)技術(shù)：分子病理學(xué)技術(shù)：lFISHlPCRl原位雜交原位雜交l基因測序基因測序分子病理學(xué)技術(shù)的應(yīng)用分子病理學(xué)技術(shù)的應(yīng)用l診斷與鑒別診斷診斷與鑒別診斷l(xiāng)腫瘤預(yù)后判斷腫瘤預(yù)后判斷

8、l藥物的篩選藥物的篩選l.2022-4-2913分子病理在臨床中的應(yīng)用l 肺非小細(xì)胞癌肺非小細(xì)胞癌EGFR突變的檢測：突變的檢測：EGFR突變陽性者應(yīng)用絡(luò)氨酸激突變陽性者應(yīng)用絡(luò)氨酸激酶藥物（易瑞沙）有效，否則效果不佳酶藥物（易瑞沙）有效，否則效果不佳l 大腸癌大腸癌k-ras基因檢測：基因檢測：ras基因突變患者對西妥昔單抗（愛必妥）基因突變患者對西妥昔單抗（愛必妥）治療無效，患者預(yù)后差治療無效，患者預(yù)后差l 乳腺癌乳腺癌her-2基因檢測：基因檢測： her-2基因擴(kuò)增患者對曲妥珠單抗（赫賽基因擴(kuò)增患者對曲妥珠單抗（赫賽?。┯行?，否則效果不佳?。┯行?，否則效果不佳l 非小細(xì)胞肺癌非小細(xì)胞肺癌

9、ALK基因檢測：基因檢測：ALK基因發(fā)生重排患者對克唑替尼基因發(fā)生重排患者對克唑替尼有效，否則效果不佳有效，否則效果不佳l C-kit突變的檢測：突變的檢測：C-kit突變可用于選擇是否使用藥物突變可用于選擇是否使用藥物”格列衛(wèi)格列衛(wèi)l 血尿的診斷：檢測血尿的診斷：檢測9號，號，3號，號，17號，號，7號染色體可以輔助膀胱癌號染色體可以輔助膀胱癌的診斷和預(yù)測術(shù)后復(fù)發(fā)的可能的診斷和預(yù)測術(shù)后復(fù)發(fā)的可能l 淋巴瘤的分型：應(yīng)用淋巴瘤的分型：應(yīng)用FISH檢測可輔助淋巴瘤的分型，為臨床治檢測可輔助淋巴瘤的分型，為臨床治療提供依據(jù)。療提供依據(jù)。l .2022-4-2914電子顯微鏡技術(shù) 電子顯微鏡，包括透射

10、電鏡和掃描電鏡電子顯微鏡，包括透射電鏡和掃描電鏡 電鏡技術(shù)包括負(fù)染色技術(shù)、冷凍蝕刻技術(shù)、電鏡細(xì)胞化學(xué)電鏡技術(shù)包括負(fù)染色技術(shù)、冷凍蝕刻技術(shù)、電鏡細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、電鏡技術(shù)、電鏡X射線顯微分析技術(shù)、電鏡放射自顯影技術(shù)等射線顯微分析技術(shù)、電鏡放射自顯影技術(shù)等 主要用于腎小球腎炎的分型主要用于腎小球腎炎的分型 確定腫瘤細(xì)胞的組織發(fā)生、類型和分化程度確定腫瘤細(xì)胞的組織發(fā)生、類型和分化程度 掃描電鏡能夠直接觀察樣品的表面的結(jié)構(gòu)，血管腔面改變掃描電鏡能夠直接觀察樣品的表面的結(jié)構(gòu)，血管腔面改變2022-4-2915共聚焦激光掃描顯微鏡 （confocal laser scanning microscopy） 利用

11、計(jì)算機(jī)及圖像處理系統(tǒng)對組織，細(xì)胞及亞細(xì)利用計(jì)算機(jī)及圖像處理系統(tǒng)對組織，細(xì)胞及亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行斷層掃描，再現(xiàn)三維立體空間結(jié)構(gòu)，胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行斷層掃描，再現(xiàn)三維立體空間結(jié)構(gòu)，將形態(tài)學(xué)研究從平面圖像水平提高到三維立體水將形態(tài)學(xué)研究從平面圖像水平提高到三維立體水平；在觀察培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的同時，直接顯示平；在觀察培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的同時，直接顯示培養(yǎng)活體細(xì)胞內(nèi)的代謝變化。培養(yǎng)活體細(xì)胞內(nèi)的代謝變化。2022-4-2916生物芯片技術(shù) 基因芯片、蛋白質(zhì)芯片、細(xì)胞芯片、組織芯片、以及元件基因芯片、蛋白質(zhì)芯片、細(xì)胞芯片、組織芯片、以及元件型微陣列芯片、通道型微陣列芯片、生物傳感芯片等新型型微陣列芯片、通道型微陣列芯片、生物傳感芯片等新型生物芯片?？蓪ι镄酒??？蓪NA、RNA、多肽、蛋白質(zhì)、細(xì)胞、組織、多肽、蛋白質(zhì)、細(xì)胞、組織以及其它生物成分進(jìn)行高效快捷的測試和分析。以及其它生物成分進(jìn)行高效快捷的測試和分析。 2022-4-2917組織芯片 組織芯片又稱組織微列陣（組織芯片又稱組織微列