艾滋病初篩中心實驗室標準操作程序(SOP)

1、艾滋病篩查實驗室標準操作程序(SOP編號：LZFBYHIV實驗室名稱：萊州市婦幼保健院艾滋病篩查實驗室實驗室編碼：NO355實施日期：2014年3月20日前言：本標準操作程序（SOP根據(jù)全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范2004的要求，由萊州市艾滋病篩查實驗室全體人員參與編寫。主要起草人：姜子明王永彬，審核人：綦洪敏。根據(jù)全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范2004的要求，實驗室編寫了相關(guān)的SOP文件，以適應(yīng)HIV抗體檢測的相關(guān)需要。為全社會的艾滋病檢測工作提供科學的、準確的檢測服務(wù)。一些相關(guān)的制度及規(guī)范，可以為實驗提供準確的結(jié)果并為實驗人員及環(huán)境提供良好的保護作用。本標準操作程序（SOP覆蓋了實驗室全部工作內(nèi)容，主要

2、包含以下內(nèi)容：一、樣品的采集、運輸、接收、登記、保存、處理（編號：LZFBYHIV-01）二、檢測方法和步驟（編號：LZFBYHIV-02）三、儀器的使用、維護、校準（編號：LZFBYHIV-03）四、實驗中的質(zhì)量控制（編號：LZFBYHIV-04）五、結(jié)果解釋與報告（編號：LZFBYHIV-05）六、保密程序（編號：LZFBYHIV-06）七、檢測數(shù)據(jù)的記錄與保存（編號：LZFBYHIV-07）八、追蹤與處理（編號：LZFBYHIV-08）九、實驗室的清理與消毒（編號：LZFBYHIV-09）十、實驗室的安全防護（編號：LZFBYHIV-10）本標準操作程序（SOP至編寫完成并審核通過之日起

3、開始實施，每年由實驗室主管負責組織崗位人員進行修訂。所有崗位人員要在所從事工作的SOP文件上簽名并認真閱讀掌握相關(guān)內(nèi)容。審核人（簽字：審核日期年月日1/32目錄樣品的采集、運輸、接收、登記、保存、處理1樣品接收、登記、運輸及處理辦法42樣品采集5二、檢測方法和驟71 檢測程序72艾滋病抗體初篩檢測常用的方法83萬泰試劑檢測方法和步驟9三、儀器的使用、維護、校準101儀器使用制度102儀器設(shè)備的管理、使用、維修、報廢制度113儀器的使用、維護及校準方法與記錄表樣124儀器檔案14四、實驗中的質(zhì)量控制151質(zhì)控血清的制備和保存152質(zhì)控圖的建立與應(yīng)用16五、結(jié)果解釋與報告191 HIV抗體篩查報告

4、192 HIV抗體陽性送檢單193自愿咨詢檢測報告單19六、保密程序20七、檢測數(shù)據(jù)的記錄與保存211原始記錄212/32212結(jié)果登記表樣3數(shù)據(jù)記錄的保存21八、追蹤與處理22九、實驗室的清理與消毒231 HIV實驗室消毒方法232 HIV實驗室消毒規(guī)范233 HIV實驗室廢棄物處理規(guī)范244 HIV實驗室廢棄物處理登記表樣25十、實驗室的安全防護261實驗室安全制度262實驗室分區(qū)273實驗人員安全防護274標本的安全防護29十一、樣品編碼的操作程序3031/32SOP文件一、樣品的接收、登記、處理編號：LZFBYHIV-01編寫姜子明王永彬編寫日期2014-03-10審核綦洪敏修訂日期2

5、014-03-20目的掌握樣品接收、運送宀中卄田及處理的正確方法應(yīng)用范圍樣品接收、運送及處理1. 樣品接收、運送及處理辦法1.1樣品接收1.1.1由經(jīng)過培訓的、穿戴防護衣的實驗人員在具有處理感染源設(shè)備的實驗室內(nèi)接收。裝標本的包裹或容器須消毒。1.1.2核對樣品與送檢單，檢查樣品管有無破損或溢漏。若發(fā)現(xiàn)有破損或溢漏的應(yīng)立即將尚存的標本移入新管中，對破損或溢漏的樣品管進行消毒，同時報告有關(guān)領(lǐng)導。1.1.3檢查樣品的狀況，記錄有無嚴重溶血、微生物污染、血脂過多以及黃疸等情況。如果污染過重或者認為樣品不能被接受，則應(yīng)將樣品安全廢棄。并要將樣品情況立即通知送樣人。1.1.4打開標本容器時要小心，以防內(nèi)容

6、物潑濺。樣品處理時若內(nèi)容物有可能濺出，則應(yīng)在生物安全柜中戴手套進行。同時應(yīng)戴口罩、防護眼鏡，以防皮膚或粘膜污染。1.1.5接收樣品時應(yīng)填寫樣品接收單。樣品接收登記表樣（見附件1）1.2樣品運送1.2.1實驗室間傳遞的樣品應(yīng)為血清或血漿，除特殊情況外一般不運送全血。1.2.2應(yīng)采用WH提出的三級包裝系統(tǒng)第一層容器：裝樣品，要求防滲漏。樣品應(yīng)置于帶蓋的試管內(nèi)，試管上應(yīng)有明顯的標記，標明樣品的編號或受檢者姓名、種類和采集時間。在試管的周圍應(yīng)墊有緩沖吸水材料，以免碰碎。隨樣品應(yīng)附有送檢單，送檢單應(yīng)與樣品分開放置。第二層容器：要求耐受性好、防滲漏、容納并保護第一層容器，可以裝若干個第一層容器。將試管裝入

7、專用帶蓋的容器內(nèi)，容器的材料要易于消毒處理。第三層容器：放在一個運輸用外層包裝內(nèi)，應(yīng)易于消毒。在第三層容器外面要貼標簽（數(shù)量，收、發(fā)件人）。123血清和血漿樣品應(yīng)在2-8C條件下由專人運送。1.2.4運送感染性材料必須有記錄。125如分離血漿仍有困難，可直接將抗凝血-20C以下凍存，采用冰壺冷藏運輸，避免凍融。1.2.6特殊情況下如需對個別樣品進行復測，可以用特快專遞形式投寄，但必須按三級包裝系統(tǒng)將盛樣品的試管包扎好，避免使用玻璃容器，以保證不會破碎和溢漏。1.3處理：血清、血漿標本在檢測前或運送前需離心（3000轉(zhuǎn)/min15min）、滅活（56C30min）。保存期限已過的標本，需經(jīng)過焚燒

8、處理并有處理記錄。1.3.1 保存131.1用于抗體檢測的血清或血漿樣品，應(yīng)存放于-20C以下，短期（1周）內(nèi)進行檢測的樣品可存放于2-8C。1.3.2 廢棄處理標本一般保存1年以上，過期后進行處理。采用焚燒法，有處理記錄。2. 樣品的采集艾滋病檢測最常用的樣品是血液，包括血清、血漿和全血。唾液或尿液有時也可作為測試樣品。常用的血液樣品的采集和處理方法如下：2.1.1血清樣品采集和處理2.1.1.1用一次性注射器（或真空采血管）抽取足量靜脈血，室溫下自然放置12h,待血液凝固、血塊收縮后再用3000r/min離心15min,吸出血清備用。2.1.1.2如用濾紙片采樣，則手指或耳垂局部嚴格按常規(guī)

9、進行消毒，在刺破皮膚后,迅速把濾紙片沾上,切勿讓血液滴落在其它物體表面造成污染。采血后要待血樣干燥后再包裝送檢。2.1.2抗凝血樣品采集和處理2.1.2.1用加有抗凝劑的真空采血管（或一次性注射器抽取靜脈血,轉(zhuǎn)移至加有抗凝劑的試管）,反復輕搖,分離血漿和血細胞備用。2.1.2.2應(yīng)根據(jù)實驗要求選用適當?shù)目鼓齽?，如CD7CB+T淋巴細胞測定可選用K3EDTA或肝素或枸櫞酸鈉，HIV病毒分離、核酸定性/定量檢測可選用&EDTA或枸櫞酸鈉。2.1.2.3用于核酸定性檢測時，采集的抗凝全血應(yīng)在48h內(nèi)分離PBMC和血漿，否則應(yīng)在2448h內(nèi)分離血漿和血細胞。2.1.3采集樣品注意事項2.1.3

10、.1采集樣品原則上應(yīng)按臨床采血技術(shù)規(guī)范操作（試劑盒說明書有特殊要求除外）。2.1.3.1采集樣品時應(yīng)注意安全,建議采用真空采血管及蝶形針具,以避免直接接觸血液；直接接觸HIV感染者/艾滋?。ˋIDS）病人血液/體液的操作，應(yīng)戴雙層手套。SOP文件二、檢測方法和步驟編號：LZFBYHIV-02編寫姜子明王永彬編寫日期2014-03-10審核綦洪敏修訂日期2014-03-20目的熟練掌握HIV檢測方法、步驟應(yīng)用范圍HIV抗體檢測1.檢測程序2. 艾滋病抗體初篩檢測常用的方法HIV抗體檢測分為篩查試驗（包括初篩和復檢）和確認試驗。篩查試劑：必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準、由臨檢中心批批檢合格

11、、在有效期內(nèi)的試劑。篩查方法：（一）常用的篩查方法是酶聯(lián)免疫試驗（ELISA）:目前國內(nèi)外主要使用第三代（雙抗原夾心法）試劑?；瘜W發(fā)光法，使用與機器配套意大利索靈試劑。我實驗室使用第三代ELISA試劑，目前主要使用萬泰試劑（國家下?lián)埽?。（二）快速檢測（RT及其它檢測：1、明膠顆粒凝集試驗（PA；2、斑點EIA或稱斑點ELISA（dotEIA）；3、斑點免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗；4、艾滋病唾液檢測卡；5、其它快速篩查試驗方法：家庭HIV檢測、尿液檢測等。我實驗室主要有PA試劑。3. 萬泰試劑檢測方法和步驟方法：酶聯(lián)免疫（ELISA）步驟:1.樣品、試劑、酶標板條室溫平衡30分鐘。2. 配制

12、洗滌液，取濃縮洗滌液50ml,加去離子水1000ml（稀釋）備用。3. 取板條，放在板架上，撕去板條上的封條。4. 在確定的板孔中加入1001的標本或陰陽性對照，震蕩混勻。設(shè)1個空白對照，3個陰性對照，1個HIV-H陽性對照1個HIV-I陽性對照,并填寫加樣順序表。5. 在微板上蓋上貼膜（洗板前撕去貼膜），37C孵育60±2分鐘。6. 用洗板機洗板,每孔5次（程序已編好）。最后拍干。7.在每孔中加入1001酶標試劑，空白孔除外，37C孵育30士2分鐘8. 用洗板機洗板，每孔5次（程序已編好）。最后拍干。9. 每孔加入顯色劑AB各50卩l(xiāng)，輕輕振蕩混勻。10. 封板膜封板后37C閉光顯

13、色30士1分鐘。11. 每孔加入501終止液，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)，10分鐘內(nèi)比色12. 在450nm波長讀取每孔的吸光度，并打印結(jié)果。分析：符合以下條件的實驗成立：陰性對照平均值w0.10陽性對照平均值0.80結(jié)果分析：結(jié)果臨界值二陰性對照平均OD值+0.12SOP文件共3頁三崗位人員簽字編寫劉琪琛儀器的使用、維護、校準編寫日期2007-1-4修訂史建中編號：LZFBYHIV-03修訂日期2007-1-5目的對儀器的正確管理適用范圍HIV抗體檢測的所有儀器設(shè)備1.儀器使用制度儀器設(shè)備是實驗室檢測工作的物質(zhì)基礎(chǔ)和技術(shù)條件，是國有資產(chǎn)的組成部分，是重要的衛(wèi)生資源。儀器貼有紅、黃、綠三色標識，有

14、唯一編號。(1) 、用儀器前必須熟讀使用說明書或?qū)嶒炛笇?，熟練掌握儀器性能和使用方法,并在儀器負責人或教師的同意和指導下，才能開啟儀器。(2) 、儀器使用過程中必須嚴格遵守儀器的具體操作程序，不得擅自做與實驗無關(guān)的內(nèi)容。操作前要熟知使用注意事項。使用后，操作人應(yīng)認真檢查儀器狀態(tài)，擦凈儀器，斷電后方可離去，如有損壞要及時上報，檢修。(3) 、對儀器要經(jīng)常性的保養(yǎng)，定期檢查，認真填寫實驗記錄及儀器使用記錄。(4) 、實驗儀器不準隨便亂動，否則造成儀器設(shè)備損壞者，要追究其責任，認真處理。1.1安圖2010型酶標儀操作程序1.1.1檢測讀數(shù)前接通電源，打開電腦、打印機、酶標儀。1.1.2打開酶標儀工作

15、站，輸入密碼，選定檢測項目(若需重新設(shè)定檢測條件，要由儀器管理員設(shè)定)。1.1.3放入待測酶標板，開始檢測(酶標板放置要正確)。1.1.4保存、打印檢測數(shù)據(jù)。1.1.5檢測完畢后，關(guān)機，切掉電源。用75%勺乙醇對儀器表面擦拭消毒。1.2安圖2010型洗板機操作程序1.2.1洗板前接通電源。122開機，選擇清洗程序及所需通道，用50mL洗液灌洗管路。123灌洗完畢后，選擇洗板程序（提前由管理員設(shè)置完成）洗板。1.2.4整個實驗洗板完畢后，選擇清洗程序選蒸餾水清洗，用50mL蒸餾水清洗管路。1.2.5清洗完后，關(guān)機。切掉電源。用75%勺乙醇對儀器表面擦拭消毒。1.3水浴鍋操作程序1.3.1開機準備

16、1.3.2使用前檢查水浴鍋中是否有水，水浴鍋加水應(yīng)高于隔板，鍋內(nèi)放入被處理樣品不至于水溢出鍋體。1.3.3接通電源，打開水浴鍋體開關(guān)，把控溫設(shè)定數(shù)碼調(diào)至所需要的溫度上（37C）。1.3.4使用1.3.5用溫度計測定鍋內(nèi)溫度（與電子顯示比較），當溫度上升到設(shè)定的溫度值時開始計時，進行恒溫水浴加熱。1.3.6使用完畢，應(yīng)及時關(guān)閉鍋體開關(guān)，斷開電源。1.3.7注意及維護：1.3.7.1必須安裝地線。1.3.7.2禁止無水或水低于鍋內(nèi)隔板時加熱。1.3.7.3長期不使用最好把鍋內(nèi)水放掉，擦凈。1.3.7.4水浴鍋內(nèi)不得有雜物，保持鍋體內(nèi)外潔凈。1.3.7.5每周兩次更換鍋內(nèi)水，以保持水的潔凈。2. 儀

17、器設(shè)備的管理、使用、維修、報廢制度2.1計劃添置必要的儀器設(shè)備，按規(guī)定手續(xù)驗收、登記，并經(jīng)計量部門檢定發(fā)證后才能使用，并建立儀器臺帳。2.2使用大型儀器設(shè)備的檢定人員必須熟悉使用儀器的使用保養(yǎng)方法，并持有操作合格證；2.3使用儀器時先檢查儀器是否完好正常，按操作規(guī)程使用后進行登記，并注意做好儀器的清潔、保養(yǎng)工作；2.4每臺精密儀器必須按規(guī)定定期檢查，檢驗合格后才能繼續(xù)使用；2.5儀器不得“帶病”工作，發(fā)現(xiàn)故障應(yīng)及時報告以便組織維修；2.6精密儀器建專人保管使用制度，外來人員未經(jīng)批準和考核不得單獨操作使用；2.7儀器確已損壞，無法修復時，邀請有關(guān)專家報廢鑒定，填寫儀器報廢單，經(jīng)主任批準后，按資產(chǎn)

18、管理權(quán)限上報。2.8.儀器管理人員職責2.8.1 儀器管理人員應(yīng)熟悉儀器、設(shè)備的使用方法及特性，做好儀器設(shè)備的管理。2.8.2愛護儀器設(shè)備，正確使用，做好經(jīng)常性的維護保養(yǎng)工作。2.8.3定期對儀器進行檢測，發(fā)現(xiàn)故障及時安排維修，提高設(shè)備完好率。2.8.4嚴格遵守各項規(guī)章制度和工作流程，按照標準操作規(guī)程操作儀器。2.8.5努力學習業(yè)務(wù)知識，提高技術(shù)水平。2.8.6對新來實驗室的人員進行如何正確使用儀器的指導。2.8.7保持實驗室的整齊清潔、防火、防盜，保證儀器設(shè)備正常運轉(zhuǎn)。2.8.8保持實驗室的清潔衛(wèi)生，實驗室內(nèi)不得任意堆放雜物，廢物要及時清除，臨時有用的物品要堆放整齊。3. 儀器的使用、維護及

19、校準方法與記錄表樣（附件2）。詳見記錄。3.1 ELISA洗板機與酶標儀維護、校準每天：每次操作要按要求設(shè)立對照。核對酶標儀濾光片波長，檢查洗板機管道是否通暢，是否有漏液現(xiàn)象。每周：清潔儀器表面，保護光學零件，不沾灰塵。每月：洗滌時檢查各孔是否與相應(yīng)的沖洗頭對位良好，負壓是否符合規(guī)定要求，這是保證各孔洗滌均衡一致的前提。每年：檢查、清洗濾光片，如果濾光片出現(xiàn)破裂或霉點則要更換，根據(jù)儀器內(nèi)具有的校準程序或使用校準板，對濾光片的所用波長光密度的精密度進行校驗，測定20次，計算精密度。精密度應(yīng)該控制在廠家說明書中所規(guī)定的范圍（建議請廠方代表校驗）。校驗結(jié)果要有記錄，保留測定原始結(jié)果。根據(jù)實際使用情況

20、更換主要設(shè)備（如洗板機、全自動免疫分析系統(tǒng)）內(nèi)的所有液體裝置和管子（要求廠方代表維修）3.2 移液器（包括單頭和多頭移液器）維護、校準移液器是實驗室中重要的基本器具，一年至少應(yīng)該標定或校準一次，若發(fā)現(xiàn)移液器有異常情況，應(yīng)該立即進行標定。移液器標定方法包括吸取有色溶液進行光譜分析、吸取蒸餾水稱量校準、吸取放射性同位素計數(shù)校準，以及使用配套校準盒等等。特別要注意使用多頭移液器時，必須保證每一個加樣頭都能夠連續(xù)和準確的加樣。移液器的精密度可根據(jù)生產(chǎn)移液器廠家說明書中所規(guī)定的范圍進行校準。推薦在檢測過程中，每個加樣工序使用專用的移液器。用蒸餾水稱量標定移液器方法（參考芬蘭Labsystems移液器標定

21、方案）在一室溫為22C的小型工作室（無風）中，在萬分之一級別天平上放置一個小三角燒瓶，用待標定的移液器吸取蒸餾水（隔夜存放）加入小三角燒瓶內(nèi)底部，每次稱重后計量，去皮重后再加蒸餾水，連續(xù)加蒸餾水10次。加蒸餾水的量根據(jù)待標定的移液器不同規(guī)格而不同，見下表。移液器標定合格后，在移液器上貼上合格標簽，標明日期。在移液器標定記錄中填寫移液器規(guī)格、編碼、10次標定稱量、標定日期和標定人簽名。移液器10次標定稱量在所要求的重量范圍內(nèi)為合格移液器；不合格移液器要根據(jù)移液器生產(chǎn)廠家所推薦的方法進行校準稱重法校準移液器方案移液器規(guī)格蒸餾水量要求重量范圍0.510卩l(xiāng)2卩l(xiāng)1.752.25mg540卩l(xiāng)10卩l(xiāng)

22、9.810.2mg40200卩l(xiāng)70卩l(xiāng)69.470.6mg2001000卩l(xiāng)300卩l(xiāng)298.0302.0mg15ml2000卩l(xiāng)1990.02010.0mg210ml3500卩l(xiāng)3485.03515.0mg4.儀器檔案儀器檔案包括前期資料（儀器設(shè)備購置申請表、技術(shù)調(diào)研論證報告、招投標文件、訂貨合同、驗收記錄、裝箱單、儀器使用說明書、操作手冊等）使用資料（儀器操作作業(yè)指導書、歷年的使用記錄、歷年的檢定證書、歷年維護維修、故障、改裝記錄、期間核查記錄等）SOP文件共4頁四崗位人員簽字編寫劉琪琛實驗中的質(zhì)量控制編寫日期2007-1-4修訂史建中編號：LZFBYHIV-04修訂日期2007-1-5

23、目的保證實驗正確性適用范圍HIV抗體檢測質(zhì)量控制1. 質(zhì)控血清的制備和保存1.1在每次實驗中必須包含有內(nèi)部對照質(zhì)控血清和外部對照質(zhì)控血清。內(nèi)部對照質(zhì)控血清指試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照血清。內(nèi)部對照是質(zhì)量控制的基礎(chǔ)。每一次檢測必須使用內(nèi)部對照，而且只能在同批號的試劑盒中使用。外部對照質(zhì)控血清是為了監(jiān)控檢測的重復性和穩(wěn)定性以及試劑盒批間或孔間差異而由實驗室設(shè)置的一套對照血清，包括強陽性、弱陽性和陰性對照血清。也可以只設(shè)置一個弱陽性對照，以該試劑盒臨界值（Cut-off）的2-3倍為宜。1.2外部對照質(zhì)控血清的制備HIV抗體陽性和陰性血清，56C30min滅活，3000r/min，離心15min。

24、弱陽性對照可以用HIV抗體陰性血清梯度稀釋HIV抗體強陽性血清并標定后得到。按一年使用量配制（可加入不影響檢測結(jié)果的防腐劑）用0.2卩m濾膜過濾除菌。1.3外部對照質(zhì)控血清的保存按一周實驗用量分裝、分類、標記、封口、-20C凍存于非自動除霜冰箱中。外部對照血清不可反復凍融，一旦融化后應(yīng)該存放2-8C,供一周內(nèi)使用。1.4外部對照質(zhì)控血清的使用每一次實驗必須使用外部對照質(zhì)控血清，以便監(jiān)控實驗的重復性和穩(wěn)定性。同時可以了解各批試劑盒的批間或孔間差異，繪制質(zhì)量控制圖1.5外部對照質(zhì)控物的質(zhì)量要求質(zhì)控物的管間或瓶間變異必須小于監(jiān)測系統(tǒng)預期的變異（cvv20%,并且質(zhì)控物的成分應(yīng)在穩(wěn)定狀態(tài)中。質(zhì)控物應(yīng)無

25、菌，并不含有影響ELISA反應(yīng)的防腐劑。2. 質(zhì)控圖的建立與應(yīng)用最常用的質(zhì)控圖是Levey-Jennings質(zhì)控圖,使用累計和技術(shù)或趨勢分析技術(shù)的圖形可提供系統(tǒng)偏移和漂移的狀況。2.1 建立質(zhì)控圖參數(shù)2.1.1 外部對照質(zhì)控物的平均值和標準差應(yīng)建立在實驗室常規(guī)使用方法對質(zhì)控物重復測定的基礎(chǔ)上。一般采用在不同批次檢測取得至少20個數(shù)據(jù)；如果僅做少量批次的檢測,也至少做5個批次的檢測,每個批次中不少于4個質(zhì)控物測定結(jié)果,以建立一個臨時性的平均值和標準差,當達到20批次數(shù)據(jù)后,替代臨時性的平均值和標準差。2.1.2算術(shù)平均值（）：代表一組S/CO值的平均值。為了統(tǒng)計學上有顯著性意義，應(yīng)該采用至少20

26、次（天）所測得的外部對照質(zhì)控血清S/CO值結(jié)果計算出平均值。2.1.3標準差（s）:是描述樣品與均數(shù)之間離散程度的一個指標，是與對照質(zhì)控血清S/CO值均值有關(guān)的預期范圍。一組S/CO值的標準差以s表示。2.1.4變異系數(shù)（cv）:是反映各次S/CO值相對于均值離散程度的一個指標，可以用來衡量檢測的重復性或精密度。2.1.5控制限：由實驗室根據(jù)對質(zhì)控物檢測結(jié)果的平均值和標準差來確定。例如12S質(zhì)控規(guī)則的控制限為外部對照S/CO平均值加減2個標準差；13S質(zhì)控規(guī)則的控制限為外部對照S/CO平均值加減3個標準差。2.2 繪制質(zhì)控圖質(zhì)控圖是把檢測數(shù)據(jù)與已確定的（計算出的）“控制限”進行比較的圖，包含一

27、條中心橫線和其上、下兩條平行的控制線，并按時間順序點入本實驗室每次試驗質(zhì)控血清的測定值。質(zhì)控圖的繪制步驟：2.2.1 在常規(guī)條件下，對同一批血清連續(xù)測定20次（天）或以上，獲得一組S/CO值，求均數(shù)（x）和標準差（s）,超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除。222將均值（x）和標準差（s）分別在質(zhì)控框架圖中標示出來。以S/CO值作縱座標（Y軸），每一次（天）試驗作橫座標（x軸），繪制質(zhì)控圖。2.2.3 從第21次起，將每次質(zhì)控血清的檢測結(jié)果依次點入該質(zhì)控框架圖中，檢驗進入質(zhì)控狀態(tài)。2.3 質(zhì)控規(guī)則及使用實驗室在報告實驗結(jié)果之前必須評價質(zhì)控數(shù)據(jù)，可通過圖形記錄的檢查或由計算機審核結(jié)果來決定。目前許多質(zhì)控

28、規(guī)則已被采用，常用的是12S和13S規(guī)則。2.3.1告警（12S）:當外部對照的S/CO值超出+2s范圍時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進一步觀察。若將12S做失控標準，有較高的假失控概率，所以一般不采用。2.3.2失控（13S）:當外部對照的S/CO值超出+3s范圍時，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實驗結(jié)果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差、隨機誤差或外部對照滴度下降造成。2.3.3位移：連續(xù)幾次（3?5次）外部對照S/CO值都落在均值的一側(cè)則稱為位移，提示實驗條件發(fā)生了較大的變化。2.3.4趨勢：連續(xù)幾次（5?7次）外部對照S/CO值幾乎按一個方向分布時稱為趨勢，通常由參數(shù)的緩慢改變引

29、起。質(zhì)控規(guī)則的使用應(yīng)檢出隨機誤差和系統(tǒng)誤差，即具有高的檢出分析誤差的能力，同時應(yīng)具有較低的假失控概率。考察試驗系統(tǒng)的可靠性應(yīng)采用多標準質(zhì)控方案，多規(guī)則質(zhì)控方法能提高誤差檢出，并具有低的假失控概率。其要點為：出現(xiàn)一次2s范圍的變化時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進一步觀察。出現(xiàn)下列情況時，應(yīng)暫停檢測查找原因：出現(xiàn)一次3s范圍的變化、連續(xù)兩次出現(xiàn)同一方向2s范圍的變化、連續(xù)四次出現(xiàn)同一方向的1s范圍的變化、連續(xù)10次結(jié)果都在1s范圍內(nèi)，但落在均值線的同一側(cè)。2.4 質(zhì)控圖的分析及失控處理實驗室應(yīng)建立質(zhì)控圖分析及失控情況處理程序。當質(zhì)控已有計劃并恰當?shù)貓?zhí)行時，要求可靠的平均值和標

30、準差用于計算質(zhì)控限，將假失控概率降到最低。當出現(xiàn)失控時進行如重復質(zhì)控測定或重新分析新的質(zhì)控物不是最有效的方法，必須找出問題原因，找出解除故障的方法，并消除原因，防止將來出現(xiàn)同樣的問題。2.4.1 繪制和分析質(zhì)控圖的要點242要在常規(guī)條件下建立質(zhì)控圖參數(shù)，用S/CO比值繪制質(zhì)控圖。對同一批質(zhì)控物連續(xù)測定得到20個數(shù)據(jù)，求均值()和標準差(s),超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除。2.4.3 由專人負責建立質(zhì)控圖，每月定期召開質(zhì)控分析會，討論本月的質(zhì)量控制情況。2.4.4 建議長期和穩(wěn)定地使用一種質(zhì)量好的試劑盒，更換不同廠家的試劑盒后，必須重新繪制質(zhì)控圖。改用新批號試劑盒也應(yīng)重新制作質(zhì)控圖。使用新批號或

31、不同廠家的試劑盒必須在質(zhì)控圖上注明使用日期。2.4.5 發(fā)現(xiàn)質(zhì)控結(jié)果失控，應(yīng)填寫報告單，上交質(zhì)量負責人，分析原因并決定是否發(fā)出檢測報告。2.4.6 使用新批次的外部對照質(zhì)控物時，必須重新繪制質(zhì)控圖。變異系數(shù)(cv)小于20，表示外部對照處于穩(wěn)定狀態(tài)。SOP文件共1頁五崗位人員簽字編寫劉琪琛結(jié)果解釋與報告編寫日期2007-1-4修訂史建中編號：LZFBYHIV-05修訂日期2007-1-5目的正確合理的方式給予結(jié)果適用范圍HIV抗體檢測初篩檢測結(jié)果為陰性者，出篩查報告。檢測結(jié)果為陽性者，需用同種試劑及另一種不同原理或不同廠家的試劑復檢。若兩種試劑均為陽性或一陰一陽，則填寫陽性送檢單，送省級確證實

32、驗室確證；若兩種試劑均為陰性則報告陰性結(jié)果,出篩查報告。抗-HIV陽性：極大可能為HIV感染，也可能屬于非特異反應(yīng)抗-HIV弱陽性：存在真陽性和假陽性兩種可能抗-HIV陰性：極大可能無HIV感染，不排除陽性的可能（存在感染因素下檢測時機不合適）通常的抗-HIV檢測結(jié)果的處理結(jié)果試劑1試劑2處理意見A+再次采樣，做確證實驗B士士或+再次采樣，做確證實驗C士一報告抗-HIV陰性D一不必復檢報告抗-HIV陰性1.HIV抗體篩查報告（附件3）2.HIV抗體陽性送檢單（附件4）3.自愿咨詢檢測報告單（附件5）SOP文件共1頁六崗位人員簽字編寫劉琪琛保密程序編寫日期2007-1-4修訂史建中編號：LZFB

33、YHIV-06修訂日期2007-1-5目的對受檢者以承諾有保密措施適用范圍HIV抗體檢測艾滋病抗體檢測人員及相關(guān)人員要時刻警記對實驗結(jié)果進行保密。實驗室人員對檢測情況及結(jié)果有保密的義務(wù)，未經(jīng)許可不得外傳，以免對被檢者及社會造成不必要的影響。若發(fā)生泄密事件造成不良后果者，根據(jù)情況嚴重程度追究其責任。實驗室一切記錄及檔案均由專人保管，不得外借，要對其加鎖加密。若由于失職造成泄密者，追究其責任。實驗室負責人要時刻提醒實驗室人員注意言行并宣貫保密制度，使實驗人員提高警惕。檢測-知情同意的原則結(jié)果-* 初篩陽性或可疑陽性的，初實驗人員外，不可傳告其他人員* 確證陽性的，以嚴格保密的原則報衛(wèi)生行政部門、用

34、適當方式通知本人經(jīng)本人同意的情況下可告知其配偶* 確證可疑陽性的，只通過咨詢告知本人或經(jīng)本人同意告知指定的家屬SOP文件共1頁七崗位人員簽字編寫劉琪琛檢測數(shù)據(jù)的記錄與保存編寫日期2007-1-4修訂史建中編號：LZFBYHIV-07修訂日期2007-1-5目的溯源性適用范圍HIV抗體檢測1.檢測數(shù)據(jù)的原始記錄原始記錄要求格式的規(guī)范化、記錄的原始性和完整性，數(shù)據(jù)和數(shù)據(jù)處理的正確性及溯源性。 、使用統(tǒng)一規(guī)格的原始記錄本（紙）和報告用紙； 、原始記錄要由實驗人員親自填寫，使用鋼筆，字跡要清楚，使用名詞、術(shù)語要簡明、真實。數(shù)據(jù)要更改時，應(yīng)將錯寫數(shù)據(jù)劃掉并在其上方改寫正確數(shù)據(jù)并簽字或蓋章； 、工作完畢，

35、必須及時進行數(shù)據(jù)處理，計算結(jié)果，發(fā)現(xiàn)數(shù)據(jù)有疑，要立即檢查原因，不能刪除或篡改與預期結(jié)果不符的數(shù)據(jù)； 、研究任務(wù)完成后，原始記錄應(yīng)整理清楚后歸檔，并嚴格做好保密工作； 、實驗人員對實驗情況及結(jié)果有保密的義務(wù)，未經(jīng)許可不得外傳（附件6、7、8）詳見各實驗原始記錄。2. 結(jié)果登記表樣（附件9）。詳見登記表記錄。3. 數(shù)據(jù)記錄的保存原始記錄包括實驗原始記錄表、打印數(shù)據(jù)、膜反應(yīng)條帶或其照片、檢測記錄表、標本登記記錄、標本保存記錄以及儀器設(shè)備維修和校準記錄等重要記錄都應(yīng)該妥善存檔保存15年以上。推薦同時使用計算機保存各種文件和記錄。內(nèi)含病人姓名的所有工作記錄一定要保密，參見規(guī)范。SOP文件共1頁八崗位人員

36、簽字編寫劉琪琛追蹤與處理編寫日期2007-1-4修訂史建中編號：LZFBYHIV-08修訂日期2007-1-5目的對窗口期內(nèi)受檢者追蹤服務(wù)適用范圍VCT及其他人群HIV抗體檢測窗口期：廣義的講，從病原體侵入機體到用現(xiàn)行的實驗室手段可以證明受到感染的期限稱為窗口期。狹義的講，HIV感染后至抗體檢出前的一段時間稱為窗口期。從一個人感染上HIV到相應(yīng)抗體產(chǎn)生需13個月，平均約45天，這段時期稱為“窗口期”。針對這類人群的檢測需要作好咨詢工作，了解其高危行為及行為接觸時間，判斷其窗口期并對其采取評估，進行追蹤檢測。VCT乍為艾滋病預防、治療、關(guān)懷和預防母嬰傳播等工作的切入點和樞紐，報務(wù)內(nèi)容包括檢測前咨

37、詢、HIV抗體檢測、檢測后咨詢、支持性咨詢以及相關(guān)治療、關(guān)懷等轉(zhuǎn)介服務(wù)。SOP文件共2頁九崗位人員簽字編寫劉琪琛實驗室的清理與消毒編寫日期2007-1-4修訂史建中編號：LZFBYHIV-09修訂日期2007-1-5目的人員、環(huán)境、標本的保護適用范圍HIV抗體檢測1. HIV常用的消毒方法1.1物理消毒方法高壓蒸汽消毒，121C，保持1520min;干燥空氣烘箱消毒（干烤消毒），140C，保持23h。1.2HIV常用的化學消毒方法HIV最常用的化學消毒劑是含氯消毒劑（次氯酸鈉，含有效氯2000-5000mg/L）、75沱醇和2%戊二醛，保持1030min。廢棄物缸：5000mg/L次氯酸鈉。生

38、物安全柜工作臺面和儀器表面：75%乙醇。溢出物：5000mg/L次氯酸鈉。污染的臺面和器具：2000mg/L次氯酸鈉，也可以用過氧化氫或過氧乙酸。器械可用2%戊二醛消毒。2. HIV實驗室消毒規(guī)范根據(jù)實驗室生物安全通用要求（GB19489-2004）和消毒技術(shù)規(guī)范（2002年版）的要求,制定HIV實驗室消毒規(guī)范.實驗結(jié)束后，實驗人員要對實驗室進行消毒處理。工作臺面消毒：用2000mg/L次氯酸鈉或稀釋后的84消毒液或其它含氯消毒液擦拭。地面、墻面消毒：用2000mg/L次氯酸鈉或稀釋后的84消毒液或其它含氯消毒液擦拭。儀器設(shè)備表面消毒：用75%的乙醇擦拭消毒。二級生物安全柜消毒：用福爾馬林熏蒸

39、法消毒或75%的乙醇擦拭消毒。廢棄物消毒：用高壓蒸汽滅菌器消毒。然后焚燒。實驗室環(huán)境消毒：紫外線消毒。室內(nèi)消毒及事故處理實驗結(jié)束后,要對工作臺面消毒,如用消毒液清洗后要干燥20分鐘以上；操作時有標本、檢測試劑外濺時應(yīng)及時消毒，平時要保持環(huán)境整潔遇到意外事故，應(yīng)立即處理并分別以口頭和書面報告上級部門如工作人員皮膚被刺傷，可以用流動水局部清洗或用刺激性較輕的含氯創(chuàng)傷消毒劑浸泡皮膚創(chuàng)口；樣品或檢測試劑濺入眼內(nèi)立即用生理鹽水沖洗，濺入嘴內(nèi)，先吐出殘留的液體后，用水反復漱口遇有高危的意外事故發(fā)生，除進行局部處理外，同時應(yīng)立即采取預防措施，包括對其隨訪、HIV檢測休息并暫離開原崗位3個月,按醫(yī)囑服用抗HI

40、V藥物進行預防.3. 實驗室廢棄物處理規(guī)范廢棄物處置應(yīng)符合實驗室生物安全通用要求（GB19489-2004）和消毒技術(shù)規(guī)范（2002年版）。從艾滋病實驗室出來的所有廢棄物，包括不再需要的樣品、培養(yǎng)物和其它物品，均應(yīng)視為感染性廢棄物，應(yīng)置于專用的密封防漏容器中，安全運至消毒室，并在高壓消毒后再進行處理（焚燒）或廢棄。廢棄物品消毒處理血液標本置于合適容器內(nèi),加蓋蓋緊后運送,切勿污染盛器外部.如果盛器被污染,要用消毒液消毒.也可將血樣置于有蓋的塑料管內(nèi),外面套上塑料袋,封口,連同送檢單一并運送,有血液外溢時,立即用消毒液消毒.各種試劑和化學品均應(yīng)貼有標簽,放置于合適的位置.任何測試用的樣品和試劑不宜

41、置于桌面或架子的邊沿,以防滑落打破,污染環(huán)境.一旦污染,先在污染區(qū)外周圍倒入消毒液,逐漸向中心消毒處理.實驗室所有垃圾,包括用過的一次性手套和工作衣,置于專門污物袋內(nèi),經(jīng)高壓消毒滅菌后由專人統(tǒng)一安全處理,污染的非一次性工作衣應(yīng)先消毒后再洗滌.所有用過的實驗用品,尤其是血樣管和血液標本先在實驗室內(nèi)消毒,再移出清洗,待消毒后再用.所有尖銳物品應(yīng)置于不宜刺破的容器內(nèi),消毒后用合適的方式處理.常用的消毒劑和消毒方法與病毒性肝炎消毒法相同.3.1 實驗室必須按照國家公布的環(huán)境保護法規(guī)，處理好“三廢”（廢水、廢氣、廢渣），不得隨意亂倒、亂放、亂排；3.2 檢驗分析中廢液，只含一般酸、堿，要稀釋到符合標準后

42、排放，含有劇毒藥品的集中倒入廢液缸內(nèi)，經(jīng)化學處理后深埋或派放；3.3 用于生物樣品檢測的固態(tài)廢物需經(jīng)高壓蒸汽滅菌器消毒。然后焚燒。液態(tài)廢物倒入廢液缸內(nèi)加入適量的消毒液進行消毒后再處理。3.4 不遵守制度造成污染，要批評教育，造成人身危害的要追究責任事故至刑事責任3.5廢棄物處理要有登記。詳見記錄。4. 實驗室廢棄物處理登記表樣（附件10）。詳見登記記錄SOP文件共2頁十崗位人員簽字編寫劉琪琛實驗室的安全防護編寫日期2007-1-4修訂史建中編號：LZFBYHIV-10修訂日期2007-1-5目的人員、環(huán)境、標本的保護及安全作業(yè)適用范圍HIV抗體檢測1. 實驗室安全制度1.1實驗室由專人負責實驗室設(shè)備及人身的安全。1.2加強四防（防火、防盜、防水、防事故）。1.3來實驗室工作的人員，必須有實驗室工作人員在場或經(jīng)過上機操作培訓與考核。1.4實驗前要全面檢查安全，實驗要有安全措施。若儀器設(shè)備在運行中，實驗人員不得離開現(xiàn)場。1.5易燃、易爆物品必須存放在安全處，嚴禁帶電作業(yè)。1.6如遇火警，除應(yīng)立即采取必要的消防措施滅火外，應(yīng)馬上報警（火警電話為119），并及時向上級報告?；鹁獬笠⒁獗Ｗo現(xiàn)場。1.7如有盜竊和事故發(fā)生，立即米取措施，及時處理，不得隱瞞，應(yīng)及時報告主管和保