生化實(shí)驗(yàn)05凱氏定氮法2

1、會(huì)計(jì)學(xué)1生化實(shí)驗(yàn)生化實(shí)驗(yàn)05凱氏定氮法凱氏定氮法22345材料：材料：面粉面粉7. 混合指示劑（混合指示劑（pH變化范圍）變化范圍）6全自動(dòng)凱氏定氮儀全自動(dòng)凱氏定氮儀7三1. 樣品消化（已完成）樣品消化（已完成） 準(zhǔn)確稱取準(zhǔn)確稱取0.1-0.2g樣品（依其含氮量而定）至消化管中，樣品（依其含氮量而定）至消化管中，加入加入5mL濃硫酸和濃硫酸和0.3-0.5g混合催化劑，浸泡數(shù)小時(shí)后在管混合催化劑，浸泡數(shù)小時(shí)后在管口蓋一小漏斗，放在消煮爐上加熱消化。開始時(shí)溫度可稍低口蓋一小漏斗，放在消煮爐上加熱消化。開始時(shí)溫度可稍低，加熱至管口不再產(chǎn)生泡沫時(shí)可逐漸升溫，使消化管內(nèi)液體，加熱至管口不再產(chǎn)生泡沫時(shí)可

2、逐漸升溫，使消化管內(nèi)液體達(dá)到微沸，直到消化液褐色消失并全部變?yōu)榍宄和该鳛橹?。達(dá)到微沸，直到消化液褐色消失并全部變?yōu)榍宄和该鳛橹埂?在消化過(guò)程中，可分?jǐn)?shù)次加入少許在消化過(guò)程中，可分?jǐn)?shù)次加入少許H2O2以加速有機(jī)物氧以加速有機(jī)物氧化。如發(fā)現(xiàn)在消化管上部有黑色顆粒，應(yīng)小心轉(zhuǎn)動(dòng)消化管，化。如發(fā)現(xiàn)在消化管上部有黑色顆粒，應(yīng)小心轉(zhuǎn)動(dòng)消化管，用消化液將其沖洗下來(lái)。整個(gè)過(guò)程一般需用消化液將其沖洗下來(lái)。整個(gè)過(guò)程一般需3-4小時(shí)，均應(yīng)在小時(shí)，均應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行。通風(fēng)櫥中進(jìn)行。82. 定容：定容： 消化液冷卻后，沿管壁仔細(xì)加入消化液冷卻后，沿管壁仔細(xì)加入10mL左右無(wú)氨蒸餾水以左右無(wú)氨蒸餾水以沖洗管壁沖洗管壁冷卻后

3、轉(zhuǎn)入冷卻后轉(zhuǎn)入100mL容量瓶，再用少量無(wú)氨蒸餾水容量瓶，再用少量無(wú)氨蒸餾水沖洗消化管數(shù)次，洗滌液一并轉(zhuǎn)入容量瓶沖洗消化管數(shù)次，洗滌液一并轉(zhuǎn)入容量瓶冷卻后用無(wú)氨蒸冷卻后用無(wú)氨蒸餾水定容至刻度，混勻后備用。餾水定容至刻度，混勻后備用。3. 蒸餾蒸餾（1）儀器洗滌：）儀器洗滌：在蒸汽發(fā)生器在蒸汽發(fā)生器中加入中加入2/3體積蒸餾水體積蒸餾水關(guān)閉汽關(guān)閉汽水分離器閥和進(jìn)樣漏斗、并使管水分離器閥和進(jìn)樣漏斗、并使管道聯(lián)通道聯(lián)通打開冷凝管打開冷凝管打開電爐打開電爐加熱蒸汽發(fā)生器，用熱蒸汽通入加熱蒸汽發(fā)生器，用熱蒸汽通入儀器各部分清洗儀器各部分清洗15min。蒸汽蒸汽發(fā)生器發(fā)生器安全管安全管反應(yīng)管反應(yīng)管隔熱套隔

4、熱套冷凝管冷凝管吸收瓶吸收瓶導(dǎo)管導(dǎo)管汽水分離器汽水分離器進(jìn)樣漏斗進(jìn)樣漏斗密封閥密封閥93. 蒸餾蒸餾（1）儀器洗滌）儀器洗滌 沖洗完畢，從加樣漏斗向蒸餾管加入無(wú)氨蒸餾水，清洗沖洗完畢，從加樣漏斗向蒸餾管加入無(wú)氨蒸餾水，清洗蒸餾反應(yīng)管蒸餾反應(yīng)管打開汽水分離器閥、夾緊蒸汽發(fā)生器與蒸餾打開汽水分離器閥、夾緊蒸汽發(fā)生器與蒸餾反應(yīng)管之間的橡皮管反應(yīng)管之間的橡皮管，由于冷卻減壓使得反應(yīng)瓶中廢液被，由于冷卻減壓使得反應(yīng)瓶中廢液被虹吸進(jìn)入隔熱套中虹吸進(jìn)入隔熱套中打開隔熱套下端的活塞閥排出廢液。打開隔熱套下端的活塞閥排出廢液。如此清洗如此清洗2-3次。次。 可將冷凝管下口浸入硼酸可將冷凝管下口浸入硼酸-指示劑混

5、合液中檢測(cè)清洗效果，指示劑混合液中檢測(cè)清洗效果，當(dāng)硼酸當(dāng)硼酸-指示劑混合液不變色時(shí)，表明蒸餾裝置清洗干凈指示劑混合液不變色時(shí)，表明蒸餾裝置清洗干凈 。103. 蒸餾蒸餾 （2）樣品蒸餾）樣品蒸餾 在三角瓶中裝入在三角瓶中裝入20mL硼酸硼酸-指示劑混合液（此時(shí)應(yīng)為紫指示劑混合液（此時(shí)應(yīng)為紫紅色，如變?yōu)樗{(lán)色，應(yīng)倒出重裝或清洗三角瓶）承接在冷紅色，如變?yōu)樗{(lán)色，應(yīng)倒出重裝或清洗三角瓶）承接在冷凝管下端出口，將出口浸入在溶液中凝管下端出口，將出口浸入在溶液中打開汽水分離閥隔打開汽水分離閥隔活塞活塞,打開蒸汽發(fā)生器與蒸餾反應(yīng)管之間的橡皮管夾打開蒸汽發(fā)生器與蒸餾反應(yīng)管之間的橡皮管夾準(zhǔn)確準(zhǔn)確吸取吸取10mL

6、樣品消化液通過(guò)加樣漏斗加入蒸餾瓶中樣品消化液通過(guò)加樣漏斗加入蒸餾瓶中通過(guò)漏通過(guò)漏斗加入斗加入10mL NaOH溶液溶液用少量無(wú)氨蒸餾水重復(fù)沖洗漏斗用少量無(wú)氨蒸餾水重復(fù)沖洗漏斗3次次塞緊漏斗塞，再在漏斗中加入少量蒸餾水密封漏斗塞緊漏斗塞，再在漏斗中加入少量蒸餾水密封漏斗關(guān)閉汽水分離閥，關(guān)閉汽水分離閥，開始蒸餾開始蒸餾觀察硼酸觀察硼酸-指示劑混合液顏色指示劑混合液顏色變化，從顏色變綠起再蒸餾變化，從顏色變綠起再蒸餾3-5min后，將三角瓶液面移離后，將三角瓶液面移離冷凝管下口約冷凝管下口約1cm 繼續(xù)蒸餾繼續(xù)蒸餾1min左右，結(jié)束蒸餾。左右，結(jié)束蒸餾。113. 蒸餾蒸餾 （3）空白蒸餾）空白蒸餾

7、用未加植物樣品的消化液（其余試劑都加入并按同樣方用未加植物樣品的消化液（其余試劑都加入并按同樣方法進(jìn)行消化）為空白液，按樣品消化液的蒸餾方法進(jìn)行蒸法進(jìn)行消化）為空白液，按樣品消化液的蒸餾方法進(jìn)行蒸餾。餾。4. 樣品及空白滴定樣品及空白滴定 樣品和空白蒸餾完畢后，分別用樣品和空白蒸餾完畢后，分別用0.01 mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，直到硼酸液滴定，直到硼酸-指示劑混合液變回淡紫紅色即為滴定終指示劑混合液變回淡紫紅色即為滴定終點(diǎn)，記錄滴定樣品和空白蒸餾液的鹽酸用量。點(diǎn)，記錄滴定樣品和空白蒸餾液的鹽酸用量。 （滴定空白蒸餾液的鹽酸用量一般為滴定空白蒸餾液的鹽酸用量一般為0.20mL）12

8、100100014)(STVWVBAC ） 13每次蒸餾前均需清洗蒸餾反應(yīng)瓶；在蒸餾過(guò)程中，不能同時(shí)關(guān)閉汽水分離閥和蒸汽發(fā)生器與蒸餾反應(yīng)管之間的橡皮管夾；141516（藍(lán)（藍(lán)色）色）17三1. 1. 樣品提取樣品提取 準(zhǔn)確稱取準(zhǔn)確稱取3g左右樣品放入研缽中，加入左右樣品放入研缽中，加入2%草酸草酸溶液約溶液約5mL研磨研磨勻漿液轉(zhuǎn)入勻漿液轉(zhuǎn)入50 mL容量瓶，用容量瓶，用草酸草酸洗滌研缽洗滌研缽3次，洗滌液一并轉(zhuǎn)入容量瓶中次，洗滌液一并轉(zhuǎn)入容量瓶中用用草酸草酸定容至刻度定容至刻度過(guò)濾過(guò)濾，收集濾液，備用。，收集濾液，備用。2.2.樣品滴定樣品滴定 取濾液取濾液10 mL至蒸發(fā)皿中，用至蒸發(fā)皿中

9、，用2,6-二氯酚靛酚溶液滴定二氯酚靛酚溶液滴定至粉紅色，并在至粉紅色，并在30s內(nèi)不褪色為止。記錄染料用量。內(nèi)不褪色為止。記錄染料用量。18三4.空白滴定空白滴定 取取2%草酸草酸10 mL至蒸發(fā)皿中，用至蒸發(fā)皿中，用2,6-二氯酚靛酚溶液滴二氯酚靛酚溶液滴定至粉紅色，并在定至粉紅色，并在30s內(nèi)不褪色為滴定終點(diǎn)，記錄染料用內(nèi)不褪色為滴定終點(diǎn)，記錄染料用量。量。3. 染料標(biāo)定染料標(biāo)定 取取10 mL標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)Vc溶液至蒸發(fā)皿中，用溶液至蒸發(fā)皿中，用滴定至粉紅色，并在滴定至粉紅色，并在30s內(nèi)不褪色為滴定終點(diǎn)。計(jì)算內(nèi)不褪色為滴定終點(diǎn)。計(jì)算1mL染料相當(dāng)于染料相當(dāng)于Vc的的mg數(shù)，即數(shù)，即滴定度（滴定度（A）。19100)(01STVWVAVV ）濃度標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)0(10VcVV20213. 蒸餾蒸餾（1）儀器洗滌）儀器洗滌 沖洗完畢，從加樣漏斗向蒸餾管加入無(wú)氨蒸餾水，清洗沖洗完畢，從加樣漏斗向蒸餾管加入無(wú)氨蒸餾水，清洗蒸餾反應(yīng)管蒸餾反應(yīng)管打開汽水分離器閥、夾緊蒸汽發(fā)生器與蒸餾打開汽水分離器閥、夾緊蒸汽發(fā)生器與蒸餾反應(yīng)管之間的橡皮管反應(yīng)管之間的橡皮管，由于冷卻減壓使得反應(yīng)瓶中廢液被，由于冷卻減壓使得反應(yīng)瓶中廢液被虹吸進(jìn)入隔熱套中虹吸進(jìn)入隔