無(wú)菌檢驗(yàn)驗(yàn)證方案

1、類(lèi) 別： 編 號(hào)： 部 門(mén)： 頁(yè) 碼： 無(wú)菌檢驗(yàn)方法驗(yàn)證版 次： 新訂 替代: 制 定 人: 年 月 日審批會(huì)簽: 批 準(zhǔn) 人： 年 月 日生效日期： 年 月 日1. 驗(yàn)證目的1.1 確認(rèn)所用的檢查方法適用于一次性活檢鉗的無(wú)菌檢查。1.2 確認(rèn)檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性、重復(fù)性和可操作性及檢查方法的完整性。2. 驗(yàn)證范圍適用于我公司生產(chǎn)的一次性活檢鉗無(wú)菌檢驗(yàn)。3. 檢驗(yàn)依據(jù) 中國(guó)藥典2010版 附錄 無(wú)菌檢查法ISO11737-2:2009 醫(yī)療器械的滅菌 微生物學(xué)方法 第一部分：確認(rèn)滅菌過(guò)程的無(wú)菌試驗(yàn) GB/T14233.2-2005 醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法 第2部分：生物學(xué)試驗(yàn)方法

2、4. 驗(yàn)證器材4.1檢驗(yàn)環(huán)境：無(wú)菌檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級(jí)下的局部100級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行操作。4.2設(shè)備：醫(yī)用凈化工作臺(tái)、生物安全柜、無(wú)菌檢查膜過(guò)濾器、電動(dòng)吸引器、電熱干燥箱、霉菌培養(yǎng)箱、數(shù)顯生化培養(yǎng)箱、壓力蒸汽滅菌器、電子天平、pH計(jì)、冰箱、恒溫水浴鍋、顯微鏡等。4.3 培養(yǎng)基及稀釋液：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基、改良馬丁培養(yǎng)基、pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液、0.1%蛋白胨水溶液、營(yíng)養(yǎng)瓊脂。4.4 其他實(shí)驗(yàn)材料：微孔濾膜（孔徑0.45um，直徑約50mm）、無(wú)菌過(guò)濾杯、無(wú)菌剪刀、無(wú)菌鑷子、無(wú)菌鉗子、無(wú)菌手套、吸管（1ml和10ml）、酒精燈、三角燒瓶、接種環(huán)、培養(yǎng)皿。5.驗(yàn)證方案5

3、.1原理：活檢鉗的形狀為不溶物，為微生物轉(zhuǎn)移更徹底，特選用無(wú)菌檢查法中的薄膜過(guò)濾法。5.2 設(shè)備器材：驗(yàn)證中所用器材、設(shè)備已通過(guò)國(guó)家計(jì)量單位鑒定合格并有鑒定證書(shū)。5.3 培養(yǎng)基：驗(yàn)證中所用培養(yǎng)基以通過(guò)培養(yǎng)基靈敏度實(shí)驗(yàn)檢測(cè)合格。 5.4 操作步驟：5.4.1 供試品的取樣按照GB/T 2828.1-2003相關(guān)規(guī)定進(jìn)行逐批取樣。5.4.2 將所需物品，供試品表面消毒，通過(guò)傳遞窗，紫外線照射半小時(shí).無(wú)菌室紫外線消毒半小時(shí)。5.4.3 操作人員用洗手液、自來(lái)水清洗雙手，關(guān)閉紫外燈，換拖鞋，脫外衣放入衣柜，穿潔凈白大衣，進(jìn)入緩沖間，再用洗手液、純化水清洗雙手，用75%乙醇對(duì)手進(jìn)行消毒，穿戴無(wú)菌衣、帽、

4、口罩、手套等。 5.4.4 進(jìn)入菌檢室，打開(kāi)醫(yī)用潔凈工作臺(tái)風(fēng)機(jī)，運(yùn)行至少15分鐘以上。 5.4.5 將所需物品由傳遞窗取出，兩只消毒液桶分別放置于菌檢潔凈工作臺(tái)一側(cè)，其余物品放置于傳遞窗一側(cè)的方形桌上，剝?nèi)ヅＦぜ埻獍b。 5.4.6 醫(yī)用潔凈工作臺(tái)內(nèi)點(diǎn)燃酒精燈。打開(kāi)3個(gè)養(yǎng)瓊脂平板，置于醫(yī)用潔凈工作臺(tái)的不同位置。 5.4.7 取供試品，在醫(yī)用潔凈工作臺(tái)內(nèi)，打開(kāi)包裝袋，小心將供試品取出，將其剪成約10cm的小段，浸入500ml 0.1%無(wú)菌蛋白胨水溶液中，充分振搖作為供試液。5.4.8 將供試液平均轉(zhuǎn)入三個(gè)薄膜過(guò)濾器的濾杯中，開(kāi)啟電動(dòng)吸引器開(kāi)關(guān)進(jìn)行過(guò)濾，用pH7.0蛋白胨-氯化鈉緩沖液每次100m

5、l沖洗濾膜三次，用平口鑷子夾取濾膜（過(guò)程保持濾膜的完整性），一張轉(zhuǎn)移到100ml改良馬丁培養(yǎng)基，另兩張轉(zhuǎn)入100ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，其中一只做陽(yáng)性對(duì)照，內(nèi)并用記號(hào)筆在各試管上做好標(biāo)記。5.4.9 用同批的沖洗液和浸提介質(zhì)各100ml通過(guò)兩個(gè)集菌儀過(guò)濾，同法一張加硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基100ml，另一張加改良馬丁培養(yǎng)基100ml分別作陰性對(duì)照。5.4.10 用記號(hào)筆在試管上標(biāo)明供試品名稱(chēng)、批次、檢驗(yàn)日期。 5.4.11 依照上述方法，在同一條件下，重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)步驟，作為平行樣品。 5.4.12 用0.1%新潔爾滅溶液或75%乙醇溶液對(duì)菌檢室醫(yī)用潔凈工作臺(tái)、地面進(jìn)行消毒。 5.4.13 操作人員離

6、開(kāi)菌檢室，換掉無(wú)菌衣、口罩、手套，穿著白大衣，更換拖鞋，進(jìn)入菌檢準(zhǔn)備間。 5.4.14 將菌檢實(shí)驗(yàn)物品由傳遞窗取出，將待加陽(yáng)性對(duì)照的供試品轉(zhuǎn)入陽(yáng)性對(duì)照間，置于生物安全柜內(nèi)并打開(kāi)風(fēng)機(jī)。制備金黃色葡萄球菌菌懸液（約含金黃色葡萄球菌50100cfu/ml），取1ml加入作為陽(yáng)性的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，作為陽(yáng)性對(duì)照。 5.5 培養(yǎng)條件： 凡硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)物，置于3035數(shù)顯生化培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，改良馬丁流體培養(yǎng)基培養(yǎng)物置于2328霉菌培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間均為14天。每天觀察結(jié)果并記錄。6.結(jié)果判定6.1 陽(yáng)性對(duì)照管中應(yīng)生長(zhǎng)良好，陰性對(duì)照管不得長(zhǎng)菌。否則，驗(yàn)證無(wú)效。6.2 若供

7、試品管均澄清，或雖顯渾濁但經(jīng)確證無(wú)菌生長(zhǎng)，判斷供試品符合規(guī)定；若供試品管中任何1管顯渾濁并確證有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效即生長(zhǎng)的微生物非供試品所含。6.3 當(dāng)符合下列至少一個(gè)條件時(shí)，方可判斷驗(yàn)證結(jié)果無(wú)效：6.3.1 無(wú)菌檢查試驗(yàn)所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無(wú)菌檢查的要求。6.3.2 回顧無(wú)菌試驗(yàn)過(guò)程，發(fā)現(xiàn)可能有引起微生物污染的因素。6.3.3 陰性對(duì)照管有菌生長(zhǎng)。 6.3.4 供試品管中生長(zhǎng)的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無(wú)菌試驗(yàn)中所使用的物品和無(wú)菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。6.4 驗(yàn)證若經(jīng)確認(rèn)無(wú)效，應(yīng)重試。重試時(shí)，重新取同量供試品，依法重試，若無(wú)菌生長(zhǎng)，判供試品驗(yàn)證方案有效，若有菌生長(zhǎng)，判定供試品驗(yàn)證方案無(wú)效。7.相關(guān)記錄產(chǎn)品名稱(chēng)規(guī)格型號(hào)生產(chǎn)批號(hào)滅菌批號(hào)檢驗(yàn)依據(jù)檢驗(yàn)日期檢驗(yàn)結(jié)果 天數(shù)培養(yǎng)基1234567891011121314硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基供試品1供試品2陽(yáng)性1陽(yáng)性2陰性改良馬丁培養(yǎng)基