基因工程和基因重組

1、如有幫助，歡迎下載支持！第十四章基因重組與基因工程內(nèi)容提要：細(xì)菌的基因轉(zhuǎn)移包括接合作用、轉(zhuǎn)化作用、轉(zhuǎn)導(dǎo)作用等。當(dāng)細(xì)胞與細(xì)胞或細(xì)菌通過菌毛相互接觸時，質(zhì)粒DNA<一個細(xì)胞轉(zhuǎn)移至另一個細(xì)胞，這種類型的DNA專移稱為接合作用。通過自動獲取或人為的供給外源DNA使細(xì)胞或培養(yǎng)的受體細(xì)胞獲得新的遺傳表型，這就是轉(zhuǎn)化作用。由病毒攜帶將宿主DNA>t段從一個細(xì)胞轉(zhuǎn)移至另一細(xì)胞的現(xiàn)象或機(jī)制，稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)作用。在接合、轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)座過程中，不同DN6子間發(fā)生的共價連接即為重組。重組DNA技術(shù)是在人們對自然界基因轉(zhuǎn)移和重組的認(rèn)識基礎(chǔ)上創(chuàng)立的新技術(shù)。為研究基因的結(jié)構(gòu)與功能，從構(gòu)建的基因組DNAC庫或cDNW

2、庫分離、擴(kuò)增某一感興趣的基因就是基因克隆或分子克隆，又稱重組DN徽術(shù)。一個完整的基因克隆過程應(yīng)包括：1.分，即目的基因的獲取及基因載體的選擇。目的基因指科學(xué)家感興趣的外源基因，其來源有幾種途徑：化學(xué)合成、PC敬術(shù)、基因組文庫或cDNAC庫中獲得。載體是目的基因的攜帶者，常用的載體有質(zhì)粒、噬菌體等。2.切，即限制性核酸內(nèi)切酶的應(yīng)用。限制性內(nèi)切酶是識別DNA勺特異序列，并在識別位點或其周圍切割雙鏈DNA勺一類內(nèi)切酶，是實現(xiàn)重組DN儆術(shù)的重要的工具酶。3.接，即將目的基因與載體連接形成重組體（或重組DNA。4,轉(zhuǎn)，即將重組體導(dǎo)入宿主菌（或細(xì)胞），根據(jù)采用的載體性質(zhì)不同，將重組體導(dǎo)入宿主菌的方法有轉(zhuǎn)化

3、、轉(zhuǎn)染及感染。5.篩，即重組體的篩選與鑒定，將重組體導(dǎo)入宿主菌后，通過適當(dāng)形式的培養(yǎng)板生長即可獲得一定的抗藥菌落。利用原位雜交，和Southern印跡或免疫學(xué)方法對抗藥菌落進(jìn)行篩選，獲得含目的基因的轉(zhuǎn)化子菌落，再經(jīng)擴(kuò)增、分離重組DNAI得基因克隆。重組DNA技術(shù)在疾病基因的發(fā)現(xiàn)，表達(dá)有藥用價值的蛋白質(zhì)，DNA診斷及疾病的預(yù)防等方面具有廣泛應(yīng)用價值，并促進(jìn)了當(dāng)代分子醫(yī)學(xué)的誕生和發(fā)展。一、選擇題A型題】1 .下列DNA序列屬于回文結(jié)構(gòu)的是（）A.ATGCCGTACGGCB.GAATTCCTTAAGC.GGCCGGCCGGCCD.TCTGACAGACTGECTAGGGGATCCC2.DNA經(jīng)限制性內(nèi)

4、切核酸酶切割后，斷端易于首尾相接，自行成環(huán)。這是因為存在著（）A.鈍性末端B,平端C.粘性末端D.5'端E.3'端3 .限制性內(nèi)切核酸酶的通常識別序列是（）A.粘性末端B.聚腺甘酸C.回文對稱序列D.RNA聚合酶附著點E.甲基化“帽”結(jié)構(gòu)4 .pBR322是（）如有幫助，歡迎下載支持!A.經(jīng)人工改造的大腸桿菌質(zhì)粒B.天然的大腸桿菌質(zhì)粒C.天然的酵母質(zhì)粒D.經(jīng)人工改造的大腸桿菌噬菌體E.經(jīng)人工改造的酵母質(zhì)粒5 .免疫球蛋白的生成是通過以下哪個過程（）A.轉(zhuǎn)化B.轉(zhuǎn)導(dǎo)C.轉(zhuǎn)染D.轉(zhuǎn)位E.溶原6 .常用載體-質(zhì)粒的特點（）A,是線形雙鏈DNAB.插入片斷的容納量比入噬菌體DNA大C.

5、含有抗藥性基因D,含有同一限制性內(nèi)切核酸酶的多個切口E.不隨細(xì)菌繁殖而進(jìn)行自我復(fù)制7 .基因工程的操作程序可概括為（）A.切、轉(zhuǎn)、接、篩、分B.轉(zhuǎn)、接、篩、分、切C.接、篩、分、切、轉(zhuǎn)D.篩、分、切、轉(zhuǎn)、接E.分、切、接、轉(zhuǎn)、篩8 .cDNA文庫指（）A.一個生物組織和細(xì)胞的全部基因信息B.一個生物組織和細(xì)胞的全部mRNA信息C.一個生物組織和細(xì)胞所表達(dá)的mRNA信息D.一個物種的全部mRNA信息E.一個物種的全部基因信息9 .限制性內(nèi)切核酸酶（）A.可將單鏈DNA任意切斷B.由噬菌體提取而得C.可將雙鏈DNA序列特異地切開D.可將兩個DNA分子連接起來E,不受DNA甲基化影響10 .在重組D

6、NA技術(shù)中，不常用的酶是（）A.限制性內(nèi)切核酸酶B.DNA聚合酶C.DNA連接酶D.反轉(zhuǎn)錄酶E.DNA解鏈酶11 .可作為重組DNA的目的基因的是（）A.mRNAB.tRNAC.rRNAD,基因組DNAE.mRNA和基因組DNA12 .以質(zhì)粒為載體，將外源基因?qū)胧荏w菌的過程稱（）A,轉(zhuǎn)化B,轉(zhuǎn)染C.感染13 .最常用的篩選轉(zhuǎn)化細(xì)菌是否含質(zhì)粒的方法是（A.營養(yǎng)互補(bǔ)篩選B.抗藥性篩選C.免疫學(xué)方法14 .“-互補(bǔ)篩選法屬于（A.抗藥性標(biāo)志篩選C.標(biāo)志補(bǔ)救篩選D.PCR篩選B.酶免檢測分析D.原位雜交篩選D,轉(zhuǎn)導(dǎo)E.轉(zhuǎn)移）E.分子雜交篩選E.免疫學(xué)方法15 .F因子從一個細(xì)胞轉(zhuǎn)移至另一個細(xì)胞的基因

7、轉(zhuǎn)移過程稱為（）A.轉(zhuǎn)化B,轉(zhuǎn)導(dǎo)C.轉(zhuǎn)染D,轉(zhuǎn)座E,接合16 .由插入序列和轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)的基因移位或重排稱為（）A.轉(zhuǎn)化B.轉(zhuǎn)導(dǎo)C.轉(zhuǎn)染D.轉(zhuǎn)座E,接合17 .發(fā)生在同源序列間的重組稱為（）A.位點特異的重組B.非位點特異的重組C.基本重組D.隨機(jī)重組E.人工重組18 .在重組DNA技術(shù)中催化形成重組DNA分子的是DNA（）A,聚合酶B,解鏈酶C.連接酶D.拓?fù)涿窫.內(nèi)切酶19 .在重組DNA技術(shù)領(lǐng)域所說的分子克隆是指（）A.建立單克隆抗體B.建立多克隆抗體如有幫助，歡迎下載支持!E.有性繁殖DNAE.自我表達(dá)能力C.構(gòu)建重組DNA分子D.無性繁殖DNA20 .無性繁殖依賴DNA載體的最基本性質(zhì)

8、是（A.青霉素抗性B.卡那霉素抗性C.自我復(fù)制能力D.自我轉(zhuǎn)錄能力21 .在已知序列的情況下獲得目的DNA最常見的是（）A.化學(xué)合成法B.篩選基因組文庫C.篩選cDNA文庫D.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)E.DNA合成儀合成22 .重組DNA技術(shù)領(lǐng)域常用的質(zhì)粒DNA是（）A.細(xì)菌染色體DNA的一部分B.細(xì)菌染色體外的獨立遺傳單位C.病毒基因組DNA的一部分D.真核細(xì)胞染色體DNA的一部分E.真核細(xì)胞染色體外的獨立遺傳單位23 .直接針對目的DNA進(jìn)行篩選的方法是（C.分子雜交D.分子篩E.電泳A.青霉素抗藥性B.氨芳青霉素抗藥性24 .“克隆”某一目的DNA的過程不包括（）A.基因載體的選擇與構(gòu)建B.外源基

9、因與載體的拼接C.重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞D.篩選并無性繁殖含重組分子的受體細(xì)胞E.表達(dá)目的基因編碼的蛋白質(zhì)25 .表達(dá)人類蛋白質(zhì)的最理想的細(xì)胞體系是（）A.E.coli表達(dá)體系C.酵母表達(dá)體系26.不能用作克隆載體的A.質(zhì)粒DNAC.細(xì)菌基因組DNAB.原核表達(dá)體系D.昆蟲表達(dá)體系DNA是（）B,噬菌體DNAD.腺病毒DNAE,哺乳類細(xì)胞表達(dá)體系E.逆轉(zhuǎn)錄病毒DNA27 .關(guān)于重組體的敘述，下列哪項是錯誤的（）A,包括外源性的目的基因C.重組體有獨立繁殖的能力E.目的基因和載體通過連接酶連接28 .基因組代表一個細(xì)胞或生物體的（B.包括載體D.重組體要回到細(xì)胞水平表達(dá)A.部分遺傳信息B.整

10、套遺傳信息C.可轉(zhuǎn)錄基因D.非轉(zhuǎn)錄基因E.可表達(dá)基因29 .下列常用于原核表達(dá)體系的是（）E.大腸桿菌E.rRNAErRNAA.酵母細(xì)胞B.昆蟲細(xì)胞C.哺乳類細(xì)胞D.真菌30 .構(gòu)建基因組DNA文庫時，首先需分離細(xì)胞的（）A.染色體DNAB.線粒體DNAC.總mRNAD.tRNA31 .構(gòu)建cDNA文庫時，首先需分離細(xì)胞的A.染色體DNAB.線粒體DNAC.總mRNAD.tRNA【X型題】1.限制性內(nèi)切核酸酶作用特性是（）A.在對稱序列處切開DNAB.DNA兩鏈的切點常不在同一位點C.酶切后產(chǎn)生的DNA片段多半具有粘性互補(bǔ)末端D.DNA兩鏈的切點常在同一位點E.限制酶通常識別4'6堿基

11、對，有些識別8個或8個以上堿基對2 .一般來說限制性內(nèi)切核酸酶（）A.只識別一種核甘酸序列如有幫助，歡迎下載支持!B.其識別不受DNA來源的限制C.不同生物的DNA經(jīng)同一限制性內(nèi)切核酸酶切割后產(chǎn)生相同末端D,對雙鏈DNA和單鏈DNA一視同仁E.可識別多種不同的核甘酸序列3 .經(jīng)限制性內(nèi)切核酸酶切割后的DNA可產(chǎn)生以下哪些情況（）A.產(chǎn)生帶有5'磷酸基團(tuán)的伸出股B.產(chǎn)生3'-OH的伸出股C.粘性末端D,鈍性末端E,以上均不對4 .大腸桿菌質(zhì)粒經(jīng)ECoRI切割后，可與經(jīng)ECoRI切割后的目的DNAt組結(jié)合，為得到重組體，需經(jīng)（）A.加熱B.混合C.退火D.RNA連接酶催化E.DNA

12、連接酶催化5 .有關(guān)載體和目的基因連接方法的敘述，正確的是（）A.平端切口可直接連接B.平端切口可采用“尾接法”C.載體與目的基因通過非共價鍵連接D.利用人工連接器也可連接E.需要DNA連接酶參與6 .自然界基因轉(zhuǎn)移可能伴發(fā)基因重組的有（）A.接合作用B.轉(zhuǎn)化作用C.轉(zhuǎn)導(dǎo)作用D.轉(zhuǎn)座E.以上都不是7 .在分子克隆中，目的DNA可來自（）A.原核細(xì)胞染色體DNA8 .真核細(xì)胞染色體DNAC.真核細(xì)胞mRNA反轉(zhuǎn)錄獲得的cDNAD.聚合酶鏈反應(yīng)E.人工合成的DNA8.從基因組DNA文庫或cDNA文庫分離、擴(kuò)增某一感興趣基因的過程就是（）A.基因克隆C.重組DNA技術(shù)9.可用作克隆基因載體的A.細(xì)菌

13、質(zhì)粒DNAB.分子克隆E.構(gòu)建cDNA文庫E.真核細(xì)胞基因組DNAE.感染D.構(gòu)建基因組DNA文庫DNA有（）C.病毒DNAD.酵母人工染色體B,噬菌體DNA10 .將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)菌的方法有（）A.接合B,轉(zhuǎn)座C.轉(zhuǎn)化D.轉(zhuǎn)染11 .下述操作可能用于DNA克隆過程的是（）A.DNA的制備和降解B.不同來源DNA的拼接C.核酸分子雜交D.細(xì)菌的生長和繁殖E.RNA的制備12 .關(guān)于質(zhì)粒DNA的敘述正確的是（）A.是基因組DNA的組成部分B.具有獨立復(fù)制功能C.可以賦予宿主細(xì)胞額外的生物學(xué)特性D.含有感興趣的目的DNAE.含有各種抗生素抗性基因13 .重組DNA時，外源基因又稱（）A.

14、目的基因B.目的RNAC.目的DNAD,外源RNAE,重組DNA14 .作為載體的質(zhì)粒應(yīng)具備下列哪些特點（）A.分子量相對小B.常用的質(zhì)粒載體有pBR322和pUC系列等C.用作基因工程載體的常是接合型質(zhì)粒如有幫助，歡迎下載支持！D.在復(fù)制子以外的適當(dāng)位置，存在幾個單一的限制性內(nèi)切核酸酶位點E.具有插入失活的篩選標(biāo)記15 .載體必需具備下列哪些特點()A.本身是一個復(fù)制單位，具有復(fù)制起點B.插入外源性DNA后并不影響載體本身的復(fù)制C.進(jìn)入細(xì)胞后用本身的酶系進(jìn)行復(fù)制D.易進(jìn)入受體細(xì)胞E.易于鑒定和篩選16 .DNA重組的步驟包括()A.用PCR技術(shù)合成大量的重組DNA17 用連接酶將外源性DNA

15、與載體連接C.通過轉(zhuǎn)化將重組DNA引入受體細(xì)胞D,培養(yǎng)細(xì)胞以擴(kuò)增重組DNAE.篩選出含有重組體的克隆二、填空題1 .通過自動獲取或人為地供給外源,使細(xì)胞或培養(yǎng)的受體細(xì)胞獲得新的,這就是轉(zhuǎn)化作用。2 .由和介導(dǎo)的基因移位或重排，稱為轉(zhuǎn)座。3 .基因重組包括、和等類型。4 .依賴整合酶，在兩個DNA序列的特異位點間發(fā)生的整合稱。5 .發(fā)生在同源序列間的重組稱為,又稱。6 .一個完整的基因克隆過程應(yīng)包括：目的基因的獲取，的選擇與改造，的連接，重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞，篩選出含感興趣基因的重組DNA轉(zhuǎn)化細(xì)胞。7 .限制性內(nèi)切核酸酶是一類識別的核酸酶。8 .科學(xué)家感興趣的外源基因又稱,其來源有幾種途徑

16、：化學(xué)合成、酶促合成cDNA、制備的基因組DNA及技術(shù)。9 .根據(jù)采用的克隆載體性質(zhì)不同，將重組DNA分子導(dǎo)入細(xì)菌的方法有、及感染。三、名詞解釋1. DNA克隆5.回文結(jié)構(gòu)2. cDNA文庫(cDNAlibrary)6.Vector3. 基因組DNA文庫(genomicDNAlibrary)7.目的基因4. Plasmid8.restrictionendonuclease四、簡答題1 .何謂DNA克??？試述DNA克隆的基本過程。2 .試述基因組文庫的定義和制備方法。3 .試述質(zhì)粒的特性及天然質(zhì)粒作為基因載體必須具備的條件。參考答案一、選擇題A型題】1.B2,C3.C4.A5.D6.C7.E8.

17、C9.C10.E11.D12.A13.B14.C15.E16.D17.C18.C19.D20.C21.D22.B23.C24.E25.E26. C27.C28.B29.E30.A31.C【X型題】1 ABCE2ABC3ABCD4BCE5ABDE6ABCD7ABCDE8ABC9ABCD10CDE11ABCDE12BC13AC14ABDE15ABDE16BCDE解析A型題】如有幫助，歡迎下載支持！1.B考察要點為回文結(jié)構(gòu)特點?；匚慕Y(jié)構(gòu)是指該DNA片段的堿基序列在其互補(bǔ)鏈上正讀、反讀都相同。6. C考察要點為質(zhì)粒的特點。常見錯誤選D或E。質(zhì)粒是存在于細(xì)菌染色體外的小型環(huán)狀雙鏈DNA分子，其本身是含有

18、復(fù)制功能的遺傳結(jié)構(gòu)，能在宿主細(xì)胞獨立自主地進(jìn)行復(fù)制，又依賴細(xì)菌的繁殖而復(fù)制。理想的質(zhì)粒對同一限制性內(nèi)切核酸酶只有一個切口。質(zhì)粒往往帶有一個或一個以上的抗藥性基因，根據(jù)質(zhì)粒賦予細(xì)菌的表型，可識別質(zhì)粒的存在，是篩選轉(zhuǎn)化子細(xì)菌的根據(jù)，這是質(zhì)粒作為載體的特性。質(zhì)粒的分子小于入噬菌體，能容納的插入片斷也較小。如pBR322只能容納小于10kb的外源基因。而入噬菌體可插入20kb以上的DNA片段。7. E考察要點是基因工程操作的基本原理。常見錯誤選A,基因工程是一項較為復(fù)雜的技術(shù)，其操作基本過程可簡單概括為：（1）分-分離提純載體和目的基因；（2）切-限制性核酸內(nèi)切酶的應(yīng)用（切割載體和目的基因）；（3）接

19、-將載體和目的基因連接成重組體；（4）轉(zhuǎn)-把重組體導(dǎo)入宿主菌；（5）篩-重組體的篩選與鑒定。8. C考察要點為cDNA文庫的概念。常見錯誤選B或D。cDNA文庫的建立首先是從特定組織或細(xì)胞中提取總的mRNA,然后經(jīng)反轉(zhuǎn)錄作用合成與mRNA互補(bǔ)的DNA（complementaryDNA,cDNA）,再復(fù)制成雙鏈cDNA片斷，與適當(dāng)載體連接后轉(zhuǎn)入受體菌，即獲得cDNA文庫。建立cDNA文庫所用的mRNA只來自某一特定組織或細(xì)胞，所以此文庫包含了一個生物組織或細(xì)胞所表達(dá)的各種mRNA信息。10. E重組DNA技術(shù)中常用的工具酶為考察要點。常見錯誤為選B或D或C。在重組DNA技術(shù)中的許多工作都涉及到對

20、DNA進(jìn)行切割和重組，或?qū)NA進(jìn)行修飾或合成。這些工作都是通過酶的作用來完成的。常用的一些基本工具酶：（1）限制性內(nèi)切核酸酶：它能識別雙鏈DNA內(nèi)部特異位點，并在準(zhǔn)確的位置上切割DNA,使較大的DNA分子成為一定大小的DNA片段；（2）DNA連接酶：將DNA片段與克隆載體共價連接構(gòu)建重組DNA分子；（3）反轉(zhuǎn)錄酶：用于以mRNA為模板合成cDNA,構(gòu)建cDNA文庫；（4） DNA-pol:禾1J用其5'f3'聚合活性及核酸外切酶活性，主要用于合成雙鏈cDNA的第二條鏈，填補(bǔ)3'末端，DNA序列分析及切口平移標(biāo)記DNA探針等。11. D考察要點為目的基因及其來源。常見錯

21、誤為選E或A。目的基因本質(zhì)是DNA,所以A,B,C不是，而mRNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成的與其互補(bǔ)的cDNA可作為目的基因，答案E只有基因組DNA可作為目的基因。12.A考察要點是將外源DNA導(dǎo)入受體菌的方法。常見錯誤為選B或D?；蚬こ讨袑⑼庠碊NA導(dǎo)入宿主菌的方法，根據(jù)重組DNA時所采用的載體性質(zhì)不同有轉(zhuǎn)化（transformation）、轉(zhuǎn)染（transfection）及感染（infection）等不同手段。轉(zhuǎn)化是指以質(zhì)粒作為載體，將外源DNA導(dǎo)入受體菌，并使其獲得新的表型的過程。感染是以入噬菌體和真核細(xì)胞病毒為載體的重組DNA分子，在體外經(jīng)過包裝成為具有感染能力的病毒和噬菌體顆粒，感染適當(dāng)細(xì)胞，

22、并在細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)增。由噬菌體和細(xì)胞病毒介導(dǎo)的遺傳信息轉(zhuǎn)移也稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)（transduction）。轉(zhuǎn)染是由轉(zhuǎn)化和感染兩個詞構(gòu)成的新詞。指真核細(xì)胞主動攝取或被動導(dǎo)入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。13. B考察要點為質(zhì)粒的特點。常見錯誤：選A或C。B是針對載體攜帶某種或某些標(biāo)志基因和目的基因而設(shè)計的篩選方法。其特點是直接測定基因或基因表型。如質(zhì)粒攜帶有某種抗藥性標(biāo)志基因（如ampr,tet）,轉(zhuǎn)化后只有含這種抗藥性基因的轉(zhuǎn)化子細(xì)菌才能在含有該抗菌素的培養(yǎng)板上幸存并形成菌落，這樣就可直接將含質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化菌與非轉(zhuǎn)化菌區(qū)分開，是篩選含有質(zhì)粒轉(zhuǎn)化菌的最常用方法。標(biāo)志補(bǔ)救篩選，是利用克隆的基因在宿主菌表達(dá)產(chǎn)物

23、與宿主菌（營養(yǎng)突變株）的營養(yǎng)缺陷互補(bǔ)進(jìn)行篩選。免疫學(xué)方法是利用特異抗體與目的基因表達(dá)產(chǎn)物相互作用進(jìn)行篩選。其特異性強(qiáng)，靈敏度高，適用于選擇不為宿主菌提供任何選擇標(biāo)志的基因。免疫學(xué)方法又分為免疫化學(xué)方法和酶免檢測分析。分子雜交篩選是利用32P標(biāo)記的探針與轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上的轉(zhuǎn)化子DNA或克隆的DNA片斷進(jìn)行分子雜交，直接選擇并鑒定目的基因。PCR（ploymerasechainreaction）技術(shù)及酶切鑒定也是篩選和鑒定目的基因的方法。14. C考察要點為重組篩選的方法及原理。常見錯誤：選不出答案?！盎パa(bǔ)是指質(zhì)粒pUC18載體攜帶有細(xì)菌的LacZ基因，它編碼3半乳糖甘酶的一段由146個氨基酸

24、殘基組成的”片段（酶的N端）。而突變型細(xì)菌可表達(dá)該酶的3片段（酶的C端）。單獨存在的a及3片段均無3-半乳糖甘酶的活性，只有突變型細(xì)菌與pUC18載體同時共表達(dá)兩個片段時，突變型細(xì)菌內(nèi)才有完整的3-半乳糖甘酶活性，使特異性作用物變?yōu)樗{(lán)色化合物，這就是所謂的a互補(bǔ)。就是利用載體在細(xì)菌的表達(dá)與細(xì)菌的營養(yǎng)缺陷互補(bǔ)，所以這種篩選方法屬于標(biāo)志補(bǔ)救法。答案D是分子雜交篩選中的一種。如有幫助，歡迎下載支持！27.C重組體為目的基因與載體用連接酶連接而成，是利用細(xì)胞內(nèi)各種酶系復(fù)制、表達(dá)，沒有獨立的繁殖能力?！綳型題】5. ABDE考察要點為外源基因與載體的連接方式。常見錯誤：漏選A或D,多選0=目的(外源)基

25、因與載體連接方式：(1) 粘性末端連接：同一限制酶切割位點連接；不同限制酶切位點(即配伍末端)連接。(2) 平末端連接，限制酶切割DNAB產(chǎn)生的平端屬配伍末端，可彼此相互連接。(3) 平端切口加尾連接，即在DNA段末端加上同聚物序列，制造出粘性末端，經(jīng)退火作用完成連接，此方式屬粘性末端連接的一種特殊形式。(4) 人工連接器連接：指在平端DNM段或載體DNAC端接上人工合成的含有某些限制酶切位點的寡核甘酸片段，而后用相應(yīng)的限制酶切割產(chǎn)生粘性末端，在DNA!接酶的作用下形成共價結(jié)合的重組DN6子。二、填空題1 .DNA;遺傳表型2 .插入序列；轉(zhuǎn)座子3 .位點特異的重組；同源重組；轉(zhuǎn)座重組4 .位

26、點特異的重組5 .同源重組；基本重組6 .克隆基因載體；目的基因與載體7 .DNA特異序列；內(nèi)切8 .目的基因；PCR9 .轉(zhuǎn)化；轉(zhuǎn)染三、名詞解釋1 .應(yīng)用酶學(xué)的方法，在體外將目的基因與載體DNA吉合成具有自我復(fù)制能力的DNA子一一復(fù)制子，繼而通過轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞、篩選出含有目的基因的轉(zhuǎn)化子細(xì)胞，再進(jìn)行擴(kuò)增，提取獲得大量同一DN所子的過程。DNA隆又稱基因克隆或重組DNA2 .以mRNAj模板，利用反車t錄酶合成與mRNAi補(bǔ)的DNA(complementaryDNA,cDNA),再復(fù)制成雙鏈cDNA片段，與適當(dāng)載體連接后轉(zhuǎn)入受體菌，這些受體菌包含了細(xì)胞所表達(dá)的基因信息，稱為cDNAC庫。3

27、 .利用限制性內(nèi)切核酸酶將組織或細(xì)胞染色體DNA切割后，與適當(dāng)載體連接后轉(zhuǎn)入受體菌，這些受體菌包含了所有基因組DNA言息，稱基因組DNAt庫。(或存在于轉(zhuǎn)化細(xì)菌內(nèi)，由克隆載體所攜帶的所有基因組DNA片段的集合稱基因組DNA文庫)。4 .Plasmid即質(zhì)粒，是存在于細(xì)菌染色體外的小型環(huán)狀雙鏈DNA分子。質(zhì)粒分子本身是含有復(fù)制功能的遺傳結(jié)構(gòu)，能在宿主細(xì)胞獨立自主地進(jìn)行復(fù)制，并在細(xì)胞分裂時恒定地傳給子代細(xì)胞。質(zhì)粒帶有某些遺傳信息，所以會賦予宿主細(xì)胞一些遺傳性狀。因為質(zhì)粒DNA有自我復(fù)制功能及所攜帶的遺傳信息等特性，故可作為重組DN邂作的載體。5 .大部分限制性內(nèi)切核酸酶為II類酶，識別DNA位點的

28、核甘酸序列呈二元旋轉(zhuǎn)對稱，通常稱這種特殊的結(jié)構(gòu)順序為回文結(jié)構(gòu)。6 .Vector即基因載體，或稱克隆載體，是在基因工程中為“攜帶”感興趣的外源DNA實現(xiàn)外源DNA的無性繁殖或表達(dá)有意義的蛋白質(zhì)所采用的一些DNA分子，具有自我復(fù)制和表達(dá)的功能。其中，為使插入的外源DNA序列可轉(zhuǎn)錄、進(jìn)而翻譯成多肽鏈而特意設(shè)計的克隆載體又稱表達(dá)載體?？寺≥d體有質(zhì)粒DNA噬菌體DN用口病毒DNA它們經(jīng)適當(dāng)改造后仍具有自我復(fù)制能力，或兼有表達(dá)外源基因的能力。7 .應(yīng)用重組DNA技術(shù)有時是為分離、獲得某一感興趣的基因或DNA列，或是為獲得感興趣基因的表達(dá)產(chǎn)物一一蛋白質(zhì)。這些感興趣的基因或DN際列就是目的基因，又稱目的DNA8 .Restrictionendonuclease即限制性核酸內(nèi)切酶，就是識別DNA的特異序列，并在識別位點或如有幫助，歡迎下載支持!其周圍切割雙鏈DNA的一類核酸內(nèi)切酶。