河南工業(yè)大學(xué)生物化學(xué)考研第01章緒論第02章蛋白質(zhì)的構(gòu)件----氨基酸

1、第一節(jié)第一節(jié). . 蛋白質(zhì)的組成與結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的組成與結(jié)構(gòu)l主要由主要由C、H、O、N四種元素組成。四種元素組成。l大多數(shù)蛋白質(zhì)還含有大多數(shù)蛋白質(zhì)還含有S，l有些結(jié)合蛋白質(zhì)含有有些結(jié)合蛋白質(zhì)含有 p 、Fe、Cu、Mg、Zn等等l樣品中蛋白質(zhì)含量樣品中蛋白質(zhì)含量/含氮量稱作含氮量稱作蛋白質(zhì)系數(shù)蛋白質(zhì)系數(shù)。 蛋白質(zhì)的平均含氮量接近蛋白質(zhì)的平均含氮量接近16% 蛋白質(zhì)含量蛋白質(zhì)含量=蛋白氮蛋白氮x 6.25動物蛋白質(zhì)系數(shù)為動物蛋白質(zhì)系數(shù)為6.25，植物在，植物在5.7左右左右一、依據(jù)蛋白質(zhì)的外形分類一、依據(jù)蛋白質(zhì)的外形分類球狀蛋白質(zhì)、纖維狀蛋白質(zhì)。球狀蛋白質(zhì)、纖維狀蛋白質(zhì)。球狀蛋白質(zhì)：球狀蛋白質(zhì)：g

2、lobular protein外形接近球外形接近球形或橢圓形，溶解性較好，能形成結(jié)晶，形或橢圓形，溶解性較好，能形成結(jié)晶，大多數(shù)蛋白質(zhì)屬于這一類。大多數(shù)蛋白質(zhì)屬于這一類。纖維狀蛋白質(zhì)：纖維狀蛋白質(zhì)：fibrous protein分子類似纖分子類似纖維或細棒。又可分為可溶性纖維狀蛋白質(zhì)維或細棒。又可分為可溶性纖維狀蛋白質(zhì)和不溶性纖維狀蛋白質(zhì)。和不溶性纖維狀蛋白質(zhì)。二、依據(jù)蛋白質(zhì)的組成分類二、依據(jù)蛋白質(zhì)的組成分類按照蛋白質(zhì)的組成，可以分為按照蛋白質(zhì)的組成，可以分為簡單蛋白簡單蛋白(simple protein) 和結(jié)和結(jié)(綴綴)合蛋白合蛋白(conjugated protein) 。簡單蛋白簡單蛋

3、白又稱為單純蛋白質(zhì)；這類蛋白質(zhì)只含由又稱為單純蛋白質(zhì)；這類蛋白質(zhì)只含由-氨基酸組成氨基酸組成的肽鏈，不含其它成分。的肽鏈，不含其它成分。1，清蛋白和球蛋白清蛋白和球蛋白：albumin and globulin廣泛存在于廣泛存在于動物組織中。清蛋白易溶于水，球蛋白微溶于水，易溶動物組織中。清蛋白易溶于水，球蛋白微溶于水，易溶于稀酸中。于稀酸中。2，谷蛋白谷蛋白(glutelin)和醇溶谷蛋白和醇溶谷蛋白(prolamin)：植物蛋白，：植物蛋白，不溶于水，易溶于稀酸、稀堿中，后者可溶于不溶于水，易溶于稀酸、稀堿中，后者可溶于7080乙醇中。乙醇中。3，魚精蛋白和組蛋白魚精蛋白和組蛋白：堿性蛋白

4、質(zhì)，存在與細胞核中。：堿性蛋白質(zhì)，存在與細胞核中。4，硬蛋白硬蛋白：存在于各種軟骨、腱、毛、發(fā)、絲等組織：存在于各種軟骨、腱、毛、發(fā)、絲等組織中，分為角蛋白、膠原蛋白、彈性蛋白和絲蛋白。中，分為角蛋白、膠原蛋白、彈性蛋白和絲蛋白。結(jié)合蛋白結(jié)合蛋白由簡單蛋白與其它非蛋白成分結(jié)合而成，由簡單蛋白與其它非蛋白成分結(jié)合而成，糖蛋白糖蛋白：由簡單蛋白與糖類物質(zhì)組成。如細胞膜中：由簡單蛋白與糖類物質(zhì)組成。如細胞膜中的糖蛋白等。的糖蛋白等。脂蛋白脂蛋白：由簡單蛋白與脂類結(jié)合而成：由簡單蛋白與脂類結(jié)合而成 如血清脂蛋白如血清脂蛋白核蛋白核蛋白：由簡單蛋白與核酸結(jié)合而成。如細胞核中：由簡單蛋白與核酸結(jié)合而成。如

5、細胞核中的核糖核蛋白等。的核糖核蛋白等。磷蛋白磷蛋白：與磷酸基結(jié)合：與磷酸基結(jié)合金屬蛋白金屬蛋白：與此同時：與此同時Fe Cu Zn Mn 等結(jié)合等結(jié)合血紅素蛋白血紅素蛋白：亞鐵原卟啉：亞鐵原卟啉黃素蛋白黃素蛋白：黃素核苷酸（：黃素核苷酸（FMN、FAD）l三、按功能分類三、按功能分類 p721. 酶類酶類 2. 調(diào)節(jié)蛋白調(diào)節(jié)蛋白 3. 轉(zhuǎn)運蛋白轉(zhuǎn)運蛋白 4.貯存蛋白貯存蛋白 5. 收縮和游動蛋白收縮和游動蛋白6. 結(jié)構(gòu)蛋白結(jié)構(gòu)蛋白7.支架蛋白支架蛋白(SH2組件組件)8. 保護和開發(fā)蛋白保護和開發(fā)蛋白l含有氨基的羧酸含有氨基的羧酸lR-CH(NH2)-COOHlR 代代 表表 氨氨 基基 酸

6、酸 之之 間間 相相 異異 的的 部部 分分 ， 叫叫 R 基基 (R group)， 又又 稱稱 為為 側(cè)側(cè) 鏈鏈 (sidechain) 。l無色晶體、溶于水無色晶體、溶于水 酪氨酸分子酪氨酸分子 l地地 球球 上上 天天 然然 形形 成成 的的 氨氨 基基 酸酸 有有 種種 以以 上上 ， 但但 是是 構(gòu)構(gòu) 成成 蛋蛋 白白 質(zhì)質(zhì) 的的 氨氨 基基 酸酸 只只 有有 20 種種 , 且都是且都是-氨基酸（可能還存在更多的）氨基酸（可能還存在更多的）。l提問：提問：什么是什么是-氨基酸？氨基酸？l答案：答案：l-C-C-C-C-COOHl l-C-C-C-C(NH2)-COOH -氨基酸氨

7、基酸 l-C-C-C (NH2)- C - COOH -氨基酸氨基酸 l-C-C (NH2)- C - C - COOH -氨基酸氨基酸旋光性：旋光性：可使偏振光平面發(fā)生旋轉(zhuǎn)可使偏振光平面發(fā)生旋轉(zhuǎn) 不對稱碳原子：不對稱碳原子：碳原子所連的碳原子所連的4個碳原子不相同個碳原子不相同 構(gòu)型構(gòu)型 ：不對稱碳原子周圍的取代基在空間上的排列不對稱碳原子周圍的取代基在空間上的排列20種氨基酸除甘氨酸外都具有旋光性種氨基酸除甘氨酸外都具有旋光性除甘氨酸除甘氨酸(Gly)外，外， -C都是不對稱碳原子，且都都是不對稱碳原子，且都為為L-構(gòu)型構(gòu)型構(gòu)型的改變需要共價鍵的的破壞與重新形成，與構(gòu)型的改變需要共價鍵的的

8、破壞與重新形成，與氫鍵無關(guān)，氨基酸的氫鍵無關(guān)，氨基酸的L- 、D-型都是以甘油醛為標型都是以甘油醛為標準確定的。準確定的。2.1.1. 氨基酸的旋光性與構(gòu)型氨基酸的旋光性與構(gòu)型甘油醛甘油醛投影式和透視式投影式和透視式L-氨基酸的結(jié)構(gòu)通式 -碳原子的四面體結(jié)構(gòu)碳原子的四面體結(jié)構(gòu)L-絲氨酸絲氨酸D-絲氨酸絲氨酸L構(gòu)型與構(gòu)型與D構(gòu)型構(gòu)型脯氨酸脯氨酸(Pro)不含游離的氨基，為不含游離的氨基，為亞氨基酸亞氨基酸半胱氨酸半胱氨酸(Cys)和蛋氨酸和蛋氨酸(Met)含有含有S元素元素2.1.2. 常見的蛋白質(zhì)氨基酸常見的蛋白質(zhì)氨基酸alanine丙氨酸丙氨酸AlaAarginine 精氨酸精氨酸 ArgR

9、asparagine天冬酰氨天冬酰氨 Asn AsxNaspartic acid天冬氨酸天冬氨酸Asp AsxDcystine半胱氨酸半胱氨酸CysCglutamine谷氨酰胺谷氨酰胺Gln GlxQglutamic acid谷氨酸谷氨酸Glu GlxEglycine甘氨酸甘氨酸GlyGHistidine組氨酸組氨酸HisHisoleucine異亮氨酸異亮氨酸IleIle I Ileucine亮氨酸亮氨酸LeuLlysine賴氨酸賴氨酸LysKmethionine甲硫氨酸甲硫氨酸MetMphenylalanine 苯丙氨酸苯丙氨酸PheFproline脯氨酸脯氨酸ProPserine絲氨酸絲氨

10、酸SerSthreonine蘇氨酸蘇氨酸ThrTtryptophan色氨酸色氨酸TrpWtyrosine酪氨酸酪氨酸TyrYvaline纈氨酸纈氨酸ValV氨基酸的名稱與符號氨基酸的名稱與符號二十種氨基酸的結(jié)構(gòu)二十種氨基酸的結(jié)構(gòu)2.1.3. 不常見的蛋白質(zhì)氨基酸不常見的蛋白質(zhì)氨基酸l由常見的蛋白質(zhì)氨基酸經(jīng)化學(xué)修飾而成由常見的蛋白質(zhì)氨基酸經(jīng)化學(xué)修飾而成l常見的是羥基氨基酸和甲基氨基酸常見的是羥基氨基酸和甲基氨基酸鎖鏈素R-羥基谷氨酸羥基谷氨酸 存在于凝血酶原中存在于凝血酶原中存在于彈性蛋白中存在于彈性蛋白中4-羥脯氨酸羥脯氨酸 存在于膠原蛋白中存在于膠原蛋白中存在于肌球蛋白中存在于肌球蛋白中不常

11、見的蛋白質(zhì)氨基酸不常見的蛋白質(zhì)氨基酸2.1.4. 非蛋白質(zhì)氨基酸非蛋白質(zhì)氨基酸l各種生物分離到的氨基酸已達各種生物分離到的氨基酸已達250250種以上種以上l激素、代謝中間產(chǎn)物、毒素、抗菌素等激素、代謝中間產(chǎn)物、毒素、抗菌素等鳥氨酸鳥氨酸瓜氨酸瓜氨酸l按側(cè)鏈按側(cè)鏈(-R)的性質(zhì)，的性質(zhì)，常見的蛋白質(zhì)常見的蛋白質(zhì)氨基酸被氨基酸被分為四類：分為四類： 1. 1. 非極性非極性R R基氨基酸（共基氨基酸（共8 8種）：種）： 丙氨酸丙氨酸(Ala) (Ala) 纈氨酸纈氨酸(Val) (Val) 亮氨酸亮氨酸(Leu) (Leu) 異亮氨酸異亮氨酸(Ile) (Ile) 脯氨酸脯氨酸(Pro)(Pr

12、o) 色氨酸色氨酸(Trp) (Trp) 甲硫氨酸甲硫氨酸(Met) (Met) 苯丙氨酸苯丙氨酸(Phe)(Phe)2.2.無電荷的極性無電荷的極性R R基氨基酸（共基氨基酸（共7 7種）：種）：絲氨酸絲氨酸(Ser), (Ser), 蘇氨酸蘇氨酸(Thr), (Thr), 酪氨酸酪氨酸(Tyr), (Tyr), 半胱氨酸半胱氨酸(Cys), (Cys), 天冬酰胺天冬酰胺(Asn), (Asn), 谷氨酰胺谷氨酰胺(Gln)(Gln)甘氨酸甘氨酸(Gly)3.3.帶正電荷的極性帶正電荷的極性R R基氨基酸（共基氨基酸（共3 3種）：種）：賴氨酸賴氨酸(Lys), (Lys), 精氨酸精氨酸

13、(Arg), (Arg), 組氨酸組氨酸(His)(His)4.4.帶負電荷的極性帶負電荷的極性R R基氨基酸（共基氨基酸（共2 2種）：種）：天冬氨酸天冬氨酸(Asp) (Asp) 谷氨酸谷氨酸(Glu)(Glu)非極性側(cè)鏈氨基酸非極性側(cè)鏈氨基酸甘氨酸甘氨酸丙氨酸丙氨酸纈氨酸纈氨酸亮氨酸亮氨酸異亮氨酸異亮氨酸蛋氨酸蛋氨酸(甲硫氨酸甲硫氨酸)苯丙氨酸苯丙氨酸色氨酸色氨酸脯氨酸脯氨酸極性不帶電側(cè)鏈氨基酸極性不帶電側(cè)鏈氨基酸絲氨酸絲氨酸蘇氨酸蘇氨酸半胱氨酸半胱氨酸脯氨酸脯氨酸天冬酰胺天冬酰胺谷氨酰胺谷氨酰胺酪氨酸酪氨酸帶正電荷側(cè)鏈氨基酸帶正電荷側(cè)鏈氨基酸賴氨酸賴氨酸精氨酸精氨酸組氨酸組氨酸帶負電荷

14、側(cè)鏈氨基酸帶負電荷側(cè)鏈氨基酸天冬氨酸天冬氨酸谷氨酸谷氨酸l蛋白質(zhì)的組成與結(jié)構(gòu)（三種分類方法）蛋白質(zhì)的組成與結(jié)構(gòu)（三種分類方法）2.1.6. 必需氨基酸必需氨基酸l人和動物維持正常生理功能所必需，而又人和動物維持正常生理功能所必需，而又不能自身合成的氨基酸稱為不能自身合成的氨基酸稱為必需氨基酸必需氨基酸（essential amino acids）。）。l必需氨基酸包括必需氨基酸包括賴氨酸、苯丙氨酸、蛋氨賴氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、蘇氨酸、酸、亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、蘇氨酸、色氨酸、組氨酸色氨酸、組氨酸和和精氨酸精氨酸，其中，其中組氨酸組氨酸和和精氨酸精氨酸，人雖然能合

15、成，但效率低，尤其，人雖然能合成，但效率低，尤其在嬰幼兒時期，需要由外界供給。在嬰幼兒時期，需要由外界供給。2.2 氨基酸的性質(zhì)氨基酸的性質(zhì)2.2.1.氨基酸的溶解性和光吸收氨基酸的溶解性和光吸收無色晶體，熔點較高（無色晶體，熔點較高（200200300300）溶于水而不溶于非極性的有機溶劑，但不同的溶于水而不溶于非極性的有機溶劑，但不同的氨基酸在水中的溶解度差別很大氨基酸在水中的溶解度差別很大 如亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸是疏水性的，其他氨基酸如賴氨酸、如亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸是疏水性的，其他氨基酸如賴氨酸、組氨酸、精氨酸是親水性的。組氨酸、精氨酸是親水性的。除除Gly外，都具有旋光性外，都

16、具有旋光性在可見光區(qū)沒有光吸收，三種芳香族氨基酸在可見光區(qū)沒有光吸收，三種芳香族氨基酸(色氨酸色氨酸Trp,酪氨酸酪氨酸Tyr,苯丙氨酸苯丙氨酸Phe)在紫外光在紫外光區(qū)有光吸收，最大吸收峰在區(qū)有光吸收，最大吸收峰在280nm處處。苯丙氨酸苯丙氨酸酪氨酸酪氨酸色氨酸色氨酸l2.2.2. 氨基酸的兩性解離氨基酸的兩性解離 氨基酸分子中既含有酸性的氨基酸分子中既含有酸性的-COOH，又含有，又含有堿性的堿性的-NH2。屬兩性離子。屬兩性離子(帶相反電荷的極帶相反電荷的極性分子叫做兩性離子或偶極離子性分子叫做兩性離子或偶極離子) -COOH的的 pK = 2左右；左右； -NH2的的pKa = 9左

17、左右（右（ pK 解離常數(shù)的負對數(shù)）解離常數(shù)的負對數(shù)） Arg: pKa = 12.5； Lys: pKa = 10.5； His: pKa = 6.0； Asp: pKa = 3.9； Glu: pKa = 4.3； Cys: pKa = 8.3； Tyr: pKa = 10.1； Ser: pKa = 13；Thr: pKa = 13CHCOOHH3NRH2NCOO-H3N+水溶后等電荷狀態(tài)總電荷 0加 酸H總電荷 “+”CHCOOHH3NRH2NCOO-H3N+OH-H2OH2N-總電荷 “-”氨基酸的兩性解離氨基酸的兩性解離氨基酸的等電點氨基酸的等電點l當(dāng)氨基酸所帶正電荷與所帶負電荷當(dāng)

18、氨基酸所帶正電荷與所帶負電荷相等時，溶液的相等時，溶液的PH值為這一種氨基值為這一種氨基酸的酸的等電點（等電點（PI）在酸性溶液中在酸性溶液中 在晶體狀態(tài)或水溶液中在晶體狀態(tài)或水溶液中 在堿性溶液中在堿性溶液中 即即等電點（等電點（pI）“ “ + ”+ ” “ “ 不帶電不帶電 ” “ ” “ ” ”pIpI等電點時的等電點時的pHpHH3NCHCOOHRH3NCHCOO-R+H2NCHCOO-ROH-H+OH-H+_ _212AHHAHKHAHAH AHHAKHAAH2K1 和K2分別代表碳原子上的-COOH和 -NH3 的表觀解離常數(shù)。共軛酸 共軛堿 共軛酸 共軛堿 H3NCHCOOHR

19、H3NCHCOO-R+H2NCHCOO-ROH-H+OH-H+pH = pKa + lgpH = pKa + lg（ AA- -/ HA / HA ）= pKa + lg= pKa + lg（ 堿堿/酸酸 ）l可計算出在任一可計算出在任一pHpH條件下一種氨基酸的各種離子的比例。條件下一種氨基酸的各種離子的比例。l氨基酸的帶電狀況與溶液的氨基酸的帶電狀況與溶液的pHpH值有關(guān)。值有關(guān)。l表：氨基酸的酸堿化學(xué)表：氨基酸的酸堿化學(xué)pH = pKa + lgpH = pKa + lg 質(zhì)子供體質(zhì)子供體 質(zhì)子受體質(zhì)子受體LgKPK 共軛堿pHpKa log 共軛酸 等電點時，即212AHHAHKHAH

20、AH AHHAKHAAH2=2121PKPKPI21KKH12KHAHAHHAHKA2 PHPIAAH時，當(dāng).2甘氨酸的滴定曲線甘氨酸的滴定曲線 PK1PK2PI- 2谷氨酸的滴定曲線谷氨酸的滴定曲線 PK1PK2PI- 2賴氨酸的滴定曲線賴氨酸的滴定曲線 PK2PK3PI 2組氨酸組氨酸氨 基 酸分 子 量-CO OHpKa-N H3+R 基 團pI蛋 白 質(zhì) 中出 現(xiàn) 的 幾 率 (% )*甘 氨 酸752.349.605.977.5丙 氨 酸892.349.696.019.0纈 氨 酸1172.329.625.976.9亮 氨 酸1312.369.605.987.5異 亮 氨 酸1312

21、.369.686.024.6脯 氨 酸1151.9910.966.484.6苯 丙 氨 酸1651.839.135.483.5酪 氨 酸1812.209.1110.075.663.5色 氨 酸2042.389.395.891.1絲 氨 酸1052.219.155.687.1蘇 氨 酸1192.119.625.876.0半 胱 氨 酸1211.968.1810.285.052.8蛋 氨 酸1492.289.215.741.7天 冬 酰 胺1322.028.805.414.4谷 氨 酰 胺1462.179.135.653.9天 冬 氨 酸1331.889.603.652.775.5谷 氨 酸147

22、2.199.674.253.226.2賴 氨 酸1462.188.9510.539.747.0精 氨 酸1742.179.0412.4810.764.7組 氨 酸1551.829.176.007.592.1* 在 200 多 種 蛋 白 質(zhì) 中 出 現(xiàn) 的 平 均 幾 率 。氨基酸的PK值和等電點p211.1.側(cè)鏈不含解離基團的中性氨基酸側(cè)鏈不含解離基團的中性氨基酸 p pI I = (p = (pK K1 1 + p + pK K2 2 )/2)/2 2.2.側(cè)鏈含有可解離基團的氨基酸側(cè)鏈含有可解離基團的氨基酸 酸性氨基酸：酸性氨基酸：pI = (pKpI = (pK1 1 + pK + p

23、KR R)/2 )/2 堿性氨基酸：堿性氨基酸：pI = (pKpI = (pK2 2 + pK + pKR R)/2)/2 半胱氨酸：半胱氨酸： pI = (pKpI = (pK1 1 + pK + pKR R)/2 )/2 l-R 有電性區(qū)別。有電性區(qū)別。l中性氨基酸中性氨基酸pI一般為一般為6.0l提問：提問：為什么偏酸性？為什么偏酸性？l答案：答案：-COOH解離程度略大于解離程度略大于-NH2的得電的得電子能力子能力l提問：提問：酸性氨基酸的酸性氨基酸的pI(更偏酸、更偏堿更偏酸、更偏堿）？）？l更酸更酸（3.0 左左 右）右）l 堿堿 性性 氨氨 基基 酸酸pI 更更 堿（堿（7.

24、610.7)( 只只 有有 三三 種）種）l 提提 問：問： 大大 多多 數(shù)數(shù) 氨氨 基基 酸酸 在在 中中 性水溶液性水溶液（pH=7） 時，時， 帶帶 電？電？不同氨基酸等電點（不同氨基酸等電點（pIpI）不同）不同提問：提問：為什么？為什么？l2.2.3. 氨基酸的化學(xué)反應(yīng)氨基酸的化學(xué)反應(yīng) 酰基化?；療N基化反應(yīng)烴基化反應(yīng)l丹磺酰氯丹磺酰氯(DNS-CL)與氨基酸反應(yīng)生成熒與氨基酸反應(yīng)生成熒光性質(zhì)強和穩(wěn)定的磺胺衍生物光性質(zhì)強和穩(wěn)定的磺胺衍生物用途用途：可以用來鑒定多肽或蛋白質(zhì)可以用來鑒定多肽或蛋白質(zhì)NH2末端氨基酸末端氨基酸.2,4-二硝基氟苯二硝基氟苯（FDNB ，Sanger試劑）在

25、弱堿性試劑）在弱堿性溶液中與氨基酸發(fā)生取代反應(yīng)，生成黃色化合物二溶液中與氨基酸發(fā)生取代反應(yīng)，生成黃色化合物二硝基苯基氨基酸。硝基苯基氨基酸。p48苯異硫氰酸酯苯異硫氰酸酯（ PITC）在弱堿性條件下，與氨基）在弱堿性條件下，與氨基酸反應(yīng)生成苯乙內(nèi)酰硫脲衍生物，此反應(yīng)又稱之酸反應(yīng)生成苯乙內(nèi)酰硫脲衍生物，此反應(yīng)又稱之Edman反應(yīng)反應(yīng)，氨基酸序列測定常用的反應(yīng)，氨基酸序列測定常用的反應(yīng) p502）羧基參加的反應(yīng)）羧基參加的反應(yīng)p23成酯與成鹽反應(yīng)成酯與成鹽反應(yīng)酰氯化與酰胺化反應(yīng)酰氯化與酰胺化反應(yīng)茚三酮在弱酸性溶液中與氨基酸共熱茚三酮在弱酸性溶液中與氨基酸共熱，具有游離具有游離氨基的氨基酸都生成紫色

26、化合物氨基的氨基酸都生成紫色化合物。脯氨酸是一個脯氨酸是一個亞氨基酸，生成黃色化合物。亞氨基酸，生成黃色化合物。紫色肽鍵肽鍵4）側(cè)鏈具有的反應(yīng)）側(cè)鏈具有的反應(yīng)p24形成二硫鍵 -成酯反應(yīng)3.1.3.1.分配層析分配層析 分配層析是利用混合物中各組分在兩種不同溶劑中的分配層析是利用混合物中各組分在兩種不同溶劑中的分配系數(shù)不同而使物質(zhì)分離的方法。分配系數(shù)不同而使物質(zhì)分離的方法。C CA A：一種物質(zhì)在：一種物質(zhì)在A A相（流動相）中的濃度相（流動相）中的濃度C CB B：一種物質(zhì)在：一種物質(zhì)在B B相（固定相）中的濃度相（固定相）中的濃度分配系數(shù)是指一種溶質(zhì)在兩種互不相溶的溶劑分配系數(shù)是指一種溶質(zhì)

27、在兩種互不相溶的溶劑中的溶解達到平衡時，該溶質(zhì)在兩種溶劑中所中的溶解達到平衡時，該溶質(zhì)在兩種溶劑中所具有濃度之比。不同的物質(zhì)因其在各種溶劑中具有濃度之比。不同的物質(zhì)因其在各種溶劑中的溶解度不同，因而也就有不同的分配系數(shù)。的溶解度不同，因而也就有不同的分配系數(shù)。分配層析中應(yīng)用最廣泛的多孔支持物是分配層析中應(yīng)用最廣泛的多孔支持物是濾紙，其次是硅膠、硅藻土、纖維素粉、濾紙，其次是硅膠、硅藻土、纖維素粉、淀粉和微孔聚乙烯粉等。淀粉和微孔聚乙烯粉等。一般分為：柱層析一般分為：柱層析、紙層析、薄層層析柱層析分離就是常說的過柱子，也叫柱色譜。柱層析分離就是常說的過柱子，也叫柱色譜。將固定相裝于柱內(nèi)，使樣品沿

28、一個方向移動而將固定相裝于柱內(nèi)，使樣品沿一個方向移動而達到分離。達到分離。常用于溶液中蛋白質(zhì)混合物的分級分離常用于溶液中蛋白質(zhì)混合物的分級分離填充物：填充物：親水性的不溶親水性的不溶 物質(zhì)，物質(zhì)，如如 纖維纖維 素、淀粉、素、淀粉、硅膠等。硅膠等。洗脫劑：洗脫劑：與水不互溶的溶劑，與水不互溶的溶劑，如苯酚、正丁醇如苯酚、正丁醇 等。等。 紙層析是以濾紙為隋性支持物。紙層析是以濾紙為隋性支持物。濾紙纖維和水有較強的親和力，濾紙纖維和水有較強的親和力，在一般條件下較難脫去，而濾紙在一般條件下較難脫去，而濾紙纖維與有機溶劑的親和力甚弱，纖維與有機溶劑的親和力甚弱，所以一般的紙層析實際上是所以一般的紙

29、層析實際上是以濾以濾紙纖維的結(jié)合水為固定相，以有紙纖維的結(jié)合水為固定相，以有機溶劑為流動相機溶劑為流動相溶劑前沿層析點原點溶劑前沿亮苯丙纈脯賴 離子交換層析是分離分析氨基酸的有效方法離子交換層析是分離分析氨基酸的有效方法 離子交換劑共價地結(jié)合許多可解離為陰離子或陽離離子交換劑共價地結(jié)合許多可解離為陰離子或陽離子的基團，可以與周圍溶液中的其它相反離子或離子化子的基團，可以與周圍溶液中的其它相反離子或離子化合物結(jié)合。合物結(jié)合。 當(dāng)把被分離的氨基酸混合物的溶液調(diào)至當(dāng)把被分離的氨基酸混合物的溶液調(diào)至pH3.0pH3.0時時, , 氨氨基酸都帶凈正電荷。但由于每種氨基酸的電離狀態(tài)不同，基酸都帶凈正電荷。但由于每種氨基酸的電離狀態(tài)不同，因而它們的凈正電荷的程度也不同，故被洗脫下來的速因而它們的凈正電荷的程度也不同，故被洗脫下來的速度也不相同。度也不相同。