異構(gòu)體方法學(xué)研究

1、* *手性的概念：一種手性的概念：一種鏡像反射鏡像反射的對稱性的對稱性Mirror ImageMirror Image*OHCOOHHCH3OHCOOHHCH3* 兩種單一對映體兩種單一對映體 *手性藥物的現(xiàn)狀臨床藥物臨床藥物1850種種天然和半天然和半合成藥物合成藥物523種種化學(xué)合成化學(xué)合成藥物藥物1327種種非手性非手性6種種手性手性517種種非手性非手性799種種手性手性528種種以單個對映體以單個對映體給藥給藥509種種以外消旋體以外消旋體給藥給藥8種種以單個對映體以單個對映體給藥給藥61種種以外消旋體以外消旋體給藥給藥467種種*常用手性高效液相色譜法常用手性高效液相色譜法 手性固

2、定相法手性固定相法-手性色譜柱手性色譜柱 手性流動相添加法手性流動相添加法-手性試劑手性試劑-左氧氟沙星左氧氟沙星 手性衍生化試劑法手性衍生化試劑法*對映體除了偏振光的偏轉(zhuǎn)方向不同外，其它理化性質(zhì)完全相同，因而分離難度大。 手性色譜拆分方法：創(chuàng)造（或引入）手性環(huán)境，構(gòu)造非對映異構(gòu)體非對映異構(gòu)體，使藥物對映體間呈現(xiàn)理化特性的差異，從而實現(xiàn)藥物對映體的色譜分離。*含多個手性碳原子化合物，分子中所含手性碳含多個手性碳原子化合物，分子中所含手性碳越多，對映異構(gòu)體的數(shù)目越多。越多，對映異構(gòu)體的數(shù)目越多。B(R)A(S)A(R)B(S)A(R)B(R)A(S)B(S)對映體對映體非對映異構(gòu)體非對映異構(gòu)體*

3、 手性高效液相色譜法手性高效液相色譜法（Chiral HPLC) 手性衍生化試劑法（手性衍生化試劑法（CDR）（分析物）（分析物） 手性固定相法（手性固定相法（CSP） （固定相）（固定相） 手性流動相添加法（手性流動相添加法（CMP）（流動相）（流動相）*手性固定相法（手性固定相法（CSP） 原理：將手性試劑化學(xué)鍵合到原理：將手性試劑化學(xué)鍵合到固定相固定相上與藥物上與藥物對映體反應(yīng)形成對映體反應(yīng)形成暫時暫時的非對映體對復(fù)合物，這的非對映體對復(fù)合物，這種固定相稱作種固定相稱作CSP。 在在CSP表面所形成的非對映體對，可根據(jù)其穩(wěn)表面所形成的非對映體對，可根據(jù)其穩(wěn)定常數(shù)不同而獲得分離。（三點結(jié)合

4、模型）定常數(shù)不同而獲得分離。（三點結(jié)合模型） *手性固定相手性固定相吸附型吸附型電荷轉(zhuǎn)移型電荷轉(zhuǎn)移型蛋白質(zhì)類蛋白質(zhì)類環(huán)糊精類環(huán)糊精類多糖衍生物多糖衍生物 * 纖維素的單體D-葡萄糖以-1,4-糖苷鍵相連而成的線型聚合物，將羥基衍生化 成酯以增強(qiáng)手性識別能力。 由于水和鹵代烴都能溶解纖維素及其衍生物，故流動相大都為使用極性較小的非鹵代烴有機(jī)溶劑。 多糖及其衍生物類手性固定相多糖及其衍生物類手性固定相O*OOHOHO*OHO*OHOHO*OHO*OHOHO*OHO*OHOHO*OH*最常用的多糖型手性色譜柱 （Daicel ，大賽璐 ） 淀粉柱：Chiralpak AD、Chiralpak AS、

5、 纖維素柱：Chiralcel OD、Chiralcel OJOROOROORnsilica-gel*手性柱通用性差正相、反相不同手性柱使用注意事項不一致，應(yīng)用時一定要找負(fù)責(zé)人或者供貨商要說明書 手性柱使用說明*方法學(xué)驗證內(nèi)容： 準(zhǔn)確度（回收率） 精密度 重復(fù)性 中間精密度 專屬性 定量限和檢測限 線性 范圍 耐用性 *制劑-異構(gòu)體研究* 制劑生產(chǎn)工藝中或者輔料長期作用下產(chǎn)生異構(gòu)體 因此制劑也要求對異構(gòu)體進(jìn)行研究 0月、影響因素30天、加速6月、長期12月、長期24月 * 1.以異構(gòu)體限度濃度（常0.1%）為100%，與原料混合制備成混合溶液。原料濃度為供試溶液濃度不變。 制備幾個點： 定量限

6、濃度、10%（20%)、50%、100%、150% 每個點3份，自身對照法計算 2.要求：平均回收率80%-120%，RSD10%異構(gòu)體-原料-準(zhǔn)確度* 一.重復(fù)性 制備6份100%（異構(gòu)體限度濃度）回收率溶液，進(jìn)樣。 要求：RSD15%，建議10% 如果樣品本身含0.05%-0.1%異構(gòu)體，也可以不加對照品，直接制備6份供試溶液測試。 異構(gòu)體-原料-精密度* 二.中間精密度 方法同重復(fù)性，換人、儀器、時間。 要求：12份溶液RSD 20% 異構(gòu)體-原料-精密度* 二.中間精密度 方法同重復(fù)性，換人、儀器、時間。 要求：12份溶液RSD 20% 異構(gòu)體-原料-精密度*1.溶劑干擾2.各異構(gòu)體、

7、主峰的分離度3.未知雜質(zhì)干擾4.強(qiáng)制降解試驗* 高溫、光照（可共用影響因素高溫、光照試驗數(shù)據(jù)）異構(gòu)體-原料-專屬性* 二.中間精密度 方法同重復(fù)性，換人、儀器、時間。 要求：12份溶液RSD 20% 異構(gòu)體-原料-精密度* 異構(gòu)體-原料-檢測限/定量限？ 水-測PH分析不同觀點* 1.定量限 目前的做法： 制備S/N=10倍的供試品溶液，進(jìn)6針，RSD10% 建議：樣品制備方法描述照黃曉龍走，以便應(yīng)付某些客戶。 2.檢測限 制備S/N=3倍的供試品溶液，進(jìn)3針， 異構(gòu)體-原料-檢測限/定量限* 二.中間精密度 方法同重復(fù)性，換人、儀器、時間。 要求：12份溶液RSD 20% 異構(gòu)體-原料-精密度* 1.線性溶液制備： 定量限、10%（20%）、50%、80%、100%（限度濃度）、120%、150% 2. 要求：回歸線的相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.990，Y軸截距應(yīng)在100響應(yīng)值的25以內(nèi)，響應(yīng)因子的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于10%。 異構(gòu)體-原料-線性（范圍）*1.柱溫改變