培養(yǎng)基和試劑質量控制方法

1、會計學1培養(yǎng)基和試劑質量控制方法培養(yǎng)基和試劑質量控制方法 1.1 定義定義1.2.1 1.2.1 按組成成分分類按組成成分分類1.2.2 1.2.2 按狀態(tài)分類按狀態(tài)分類1.2.3 1.2.3 按用途分類按用途分類1.2.4 1.2.4 按制備方法分類按制備方法分類1.2 分類分類1.2.1 1.2.1 按組成成分分類按組成成分分類純化學培養(yǎng)基：純化學培養(yǎng)基：僅含有已知分子結構和純度的化僅含有已知分子結構和純度的化學成分的培養(yǎng)基。學成分的培養(yǎng)基。未定義和部分定義的化學培養(yǎng)基：未定義和部分定義的化學培養(yǎng)基：全部或部分由全部或部分由天然物質，加工過的物質或其他不純的化學物質天然物質，加工過的物質或

2、其他不純的化學物質構成的培養(yǎng)基。構成的培養(yǎng)基。分類分類定義定義舉例舉例增菌培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)基為微生物繁殖提供特定的生長環(huán)境，通常為液體為微生物繁殖提供特定的生長環(huán)境，通常為液體細分細分選擇性增菌選擇性增菌允許特定微生物繁殖，部分或全部抑制其他微生物生長允許特定微生物繁殖，部分或全部抑制其他微生物生長TTB、SC非選擇性增菌非選擇性增菌能使多種微生物生長的培養(yǎng)基能使多種微生物生長的培養(yǎng)基BHI、NB分離培養(yǎng)基分離培養(yǎng)基支持微生物生長的固體或半固態(tài)培養(yǎng)基支持微生物生長的固體或半固態(tài)培養(yǎng)基細分細分選擇性分離選擇性分離支持特定微生物生長而抑制其它微生物生長的分離培養(yǎng)基支持特定微生物生長而抑制其它微生物生

3、長的分離培養(yǎng)基XLD、BS非選擇性分離非選擇性分離對微生物沒有選擇性抑制的分離培養(yǎng)基對微生物沒有選擇性抑制的分離培養(yǎng)基NA計數培養(yǎng)基計數培養(yǎng)基能對微生物定量的選擇性或非選擇的培養(yǎng)基（注：可包含復蘇、增菌能對微生物定量的選擇性或非選擇的培養(yǎng)基（注：可包含復蘇、增菌等特性）等特性）MYP、PCA鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基（特異性培養(yǎng)基）（特異性培養(yǎng)基）能進行一項或多項生理或生化特性鑒定的培養(yǎng)基能進行一項或多項生理或生化特性鑒定的培養(yǎng)基麥康凱瓊脂麥康凱瓊脂鑒定培養(yǎng)基鑒定培養(yǎng)基能產生一個特定的鑒定反應而不需要進一步確證實驗的培養(yǎng)基能產生一個特定的鑒定反應而不需要進一步確證實驗的培養(yǎng)基蛋白胨水蛋白胨水確證培養(yǎng)

4、基確證培養(yǎng)基經復蘇、分離和增菌后，對微生物部分或完全鑒定或鑒別的培養(yǎng)基經復蘇、分離和增菌后，對微生物部分或完全鑒定或鑒別的培養(yǎng)基BGLB肉湯肉湯運輸培養(yǎng)基運輸培養(yǎng)基取樣后處理前保持微生物活性且不允許明顯增殖的培養(yǎng)基取樣后處理前保持微生物活性且不允許明顯增殖的培養(yǎng)基緩沖甘油緩沖甘油-氯化氯化鈉溶液鈉溶液保藏培養(yǎng)基保藏培養(yǎng)基一定時期內保護和維持微生物活性，防止長期保存造成不利影響，或一定時期內保護和維持微生物活性，防止長期保存造成不利影響，或使微生物在長期保存后容易復蘇的培養(yǎng)基使微生物在長期保存后容易復蘇的培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂斜面營養(yǎng)瓊脂斜面復蘇培養(yǎng)基復蘇培養(yǎng)基能使受損或應激的微生物修復，使其恢復生長能

5、力，但不一定促進微能使受損或應激的微生物修復，使其恢復生長能力，但不一定促進微生物繁殖的培養(yǎng)基生物繁殖的培養(yǎng)基懸浮培養(yǎng)基懸浮培養(yǎng)基將測試樣本的微生物分散到液相中，不產生增值或抑制作用的培養(yǎng)基將測試樣本的微生物分散到液相中，不產生增值或抑制作用的培養(yǎng)基磷酸鹽緩沖液磷酸鹽緩沖液PBS1.2.3 按用途分類質量保證質量保證培養(yǎng)基生產企培養(yǎng)基生產企業(yè)業(yè)提供文件提供文件質量保證質量保證培養(yǎng)基培養(yǎng)基使用者使用者2.1 脫水合成培養(yǎng)基脫水合成培養(yǎng)基制備流程制備流程2.2脫水合成培養(yǎng)基脫水合成培養(yǎng)基制備注意事項制備注意事項SC正常加熱 SC過度加熱指在均一固定的濃度中含有具活性的定量化菌種，經證明的標準物是指

6、其濃度已經證明。ATCC菌株（進口）CMCC菌株（國產）注：ATCC菌株提供證書，可以自行到其網站下載。標準菌株標準菌株( (凍干菌種）凍干菌種） 轉種活化轉種活化標準儲備菌株標準儲備菌株（-80-80冰箱保存的培養(yǎng)物）冰箱保存的培養(yǎng)物） 轉種活化轉種活化儲備菌株儲備菌株（44冰箱保存的培養(yǎng)物）冰箱保存的培養(yǎng)物） 轉種活化轉種活化工作菌株工作菌株（用于培養(yǎng)基微生物質控的新鮮培養(yǎng)物）（用于培養(yǎng)基微生物質控的新鮮培養(yǎng)物）詳細請參考附錄C獲得標準菌株驗證和文件歸檔依據生產商指引進行復蘇在5%的血瓊脂、TSA或其它適合的固體培養(yǎng)基上進行分離驗證菌株的純度和特性符合用適合的培養(yǎng)基制備菌懸液分裝進行凍存或

7、凍干NO獲得儲存菌株YES通常懸浮于營養(yǎng)肉湯中適宜時間進行復蘇驗證菌落形態(tài)和革蘭氏染色或用生化試驗進行鑒定例如：TSB添加10%-15%甘油作為冷凍保護培養(yǎng)基在不高于-70低溫冷凍保存可延長保存的時間。禁止采用較高的溫度保存。標準儲備菌株迅速解凍在適合的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)=工作菌株驗證菌株的純度和形態(tài)NO制備用于測試的工作菌株符合YES在適合的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)驗證菌株的純度和形態(tài)符合YES接種到合適的培養(yǎng)基或凍存菌懸液=工作菌株貯存物或貯存培養(yǎng)物在適合的培養(yǎng)基上分離=工作菌株驗證純度制備用于測試的工作菌株YESNONO符合此流程更合適此流程更合適基本基本( (感官和理化感官和理化) )要求：要求

8、：分裝的量和分裝的量和/ /或厚度或厚度外觀、色澤和均一性外觀、色澤和均一性瓊脂凝膠的硬度瓊脂凝膠的硬度水分含量水分含量2020 -25-25 的的pHpH值值緩沖能力緩沖能力微生物要求：微生物要求：微生物污染測試（只適用微生物污染測試（只適用于即用型培養(yǎng)基）于即用型培養(yǎng)基）生長特性生長特性 1 1、生長率、生長率 2 2、選擇性、選擇性 3 3、特異性、特異性 4 4、抗菌試驗特性、抗菌試驗特性注：詳細參照注：詳細參照GB 4789.28GB 4789.28附錄附錄F F培培養(yǎng)基質量控制標準養(yǎng)基質量控制標準性能評價和結果解釋性能評價和結果解釋：1、所有測試菌株的性能測試達到標準，則該批培養(yǎng)基

9、的性能測試結果符合規(guī)定；、所有測試菌株的性能測試達到標準，則該批培養(yǎng)基的性能測試結果符合規(guī)定；2、基本要求基本要求和和微生物要求微生物要求均符合規(guī)定，則該批培養(yǎng)基可被接受。均符合規(guī)定，則該批培養(yǎng)基可被接受。質質構構儀儀水分測定儀水分測定儀電極式電極式pH計計選擇近期批次中質量良好的，或具有長期穩(wěn)定性的批次培養(yǎng)基或即用型培養(yǎng)基通?？蓾M足實驗室的培養(yǎng)基性能檢測要求培養(yǎng)基生產商自制培養(yǎng)基新培養(yǎng)基或新供應商產品其他特殊要求培養(yǎng)基性能測試第一法4.1定量方法懸浮培養(yǎng)基和運輸培養(yǎng)基非選擇性固體分離和計數培養(yǎng)基選擇性固體分離和計數培養(yǎng)基選擇性固體分離和計數培養(yǎng)基4.2半定量方法選擇性液體增菌培養(yǎng)基非選擇性液

10、體增菌培養(yǎng)基選擇性液體計數培養(yǎng)基非選擇性固體分離和計數培養(yǎng)基選擇性固體分離和計數培養(yǎng)基4.3定性方法Mueller Hinton血瓊脂鑒定培養(yǎng)基和實驗試劑懸浮培養(yǎng)基和運輸培養(yǎng)基非選擇性固體分離和計數培養(yǎng)基非選擇性液體增菌培養(yǎng)基選擇性液體計數培養(yǎng)基選擇性液體增菌培養(yǎng)基n非選擇性培養(yǎng)基和選擇性計數培養(yǎng)基上目標菌的生長率應不小于0.7；n選擇性分離培養(yǎng)基上目標菌的生長一般不小于0.5，最低應為0.1。接種水平為20CFU200CFU4.1 定量方法定量方法 非選擇性、選擇性固體計數和分離培養(yǎng)基非選擇性、選擇性固體計數和分離培養(yǎng)基PR = NS/NO=(132+139)/2(172+175)/2=0.

11、78XLDTSA鼠傷寒沙門氏菌132,139172,175福氏志賀氏菌130,135182,187PR = NS/NO=(130+135)/2(182+187)/2=0.72鼠傷寒沙門氏菌：鼠傷寒沙門氏菌：福氏志賀氏菌：福氏志賀氏菌：4.1 定量方法定量方法 非選擇性、選擇性固體計數和分離培養(yǎng)基非選擇性、選擇性固體計數和分離培養(yǎng)基4.1 定量方法定量方法 懸浮培養(yǎng)基和運輸培養(yǎng)基懸浮培養(yǎng)基和運輸培養(yǎng)基n每條有菌生長的劃線記為1分，如果僅一半的線有菌生長，記為0.5分，沒有生長或生長量少于劃線一半的，記為0分；n結果解釋：目標菌在培養(yǎng)基上應呈典型的生長，目標菌生長指數G大于6，培養(yǎng)基可接受；非選擇

12、培養(yǎng)基的G值通常較高。4.2 半定量方法半定量方法 非選擇性、選擇性固體計數和分離培養(yǎng)基非選擇性、選擇性固體計數和分離培養(yǎng)基完全被抑制。注：注：操作時用接種環(huán)而不用接種針，接種環(huán)完操作時用接種環(huán)而不用接種針，接種環(huán)完全浸入培養(yǎng)基中，取一滿環(huán)接種物，接觸容器全浸入培養(yǎng)基中，取一滿環(huán)接種物，接觸容器邊緣邊緣3 3次，去除多余液體。劃線時，接種環(huán)與瓊次，去除多余液體。劃線時，接種環(huán)與瓊脂表面的角度應為脂表面的角度應為2020-30-30，接種環(huán)壓在瓊脂，接種環(huán)壓在瓊脂表面的壓力和劃線速度前后一致，整個劃線應表面的壓力和劃線速度前后一致，整個劃線應快速連續(xù)，移取液體培養(yǎng)物時應將接種環(huán)伸入快速連續(xù)，移取

13、液體培養(yǎng)物時應將接種環(huán)伸入培養(yǎng)液下部分以防止環(huán)上產生氣泡或泡沫。培養(yǎng)液下部分以防止環(huán)上產生氣泡或泡沫。4.2 半定量方法半定量方法 選擇性固體計數和分離培養(yǎng)基選擇性固體計數和分離培養(yǎng)基 1 表示很輕微的混濁； 2 表示嚴重的混濁目標菌的濁度值應為2. 4.2 半定量方法半定量方法 非選擇性液體增菌培養(yǎng)基非選擇性液體增菌培養(yǎng)基4.2 半定量方法半定量方法 非選擇性液體增菌培養(yǎng)基非選擇性液體增菌培養(yǎng)基目標菌10CFU100CFU非目標菌1000CFU5000CFU接菌量1mL則表示待測液體培則表示待測液體培養(yǎng)基的生長率良好養(yǎng)基的生長率良好4.2 半定量方法半定量方法 選擇性液體增菌培養(yǎng)基選擇性液體

14、增菌培養(yǎng)基1mL非目標菌接種：在待測培養(yǎng)基中接種等量混合菌試管中的非目標菌。4.2 半定量方法半定量方法 選擇性液體增菌培養(yǎng)基選擇性液體增菌培養(yǎng)基4.2 半定量方法半定量方法 選擇性液體增菌培養(yǎng)基選擇性液體增菌培養(yǎng)基 1 表示很輕微的混濁； 2 表示嚴重的混濁。如需觀察產氣，記錄小導管收集氣體的體積比。u目標菌的濁度值應為2，產氣應為1/3或以上；u非目標菌的濁度值應為0或1，無產氣現象。4.2 半定量方法半定量方法 選擇性液體計數培養(yǎng)基選擇性液體計數培養(yǎng)基4.2 半定量方法半定量方法 選擇性液體計數培養(yǎng)基選擇性液體計數培養(yǎng)基非目標菌（特異性）：非目標菌（特異性）：有典型的菌落外觀、大小和形態(tài)

15、。有典型的菌落外觀、大小和形態(tài)。4.3 定性方法定性方法 非選擇性、選擇性固體計數和分離培養(yǎng)基非選擇性、選擇性固體計數和分離培養(yǎng)基注：有時可以觀察到微生物生長后聚集成細胞團，沉積在試管或瓶子底部，發(fā)生這種情況時，小心振蕩試管后再進行觀察。4.3 定性方法定性方法 非選擇性、選擇性液體增菌和計數培養(yǎng)基非選擇性、選擇性液體增菌和計數培養(yǎng)基n結果觀察與解釋前后平板上目標菌的生長情況應均為良好。4.3 定性方法定性方法 懸浮培養(yǎng)基和運輸培養(yǎng)基懸浮培養(yǎng)基和運輸培養(yǎng)基片），平板翻轉后培養(yǎng)。注：調整菌懸液濁度與接種所有平板的時間不要超過15min。n結果觀察與解釋在無反射黑色背景下，觀察有無抑菌環(huán)。結果解釋

16、參照附錄F培養(yǎng)基質量控制標準。4.3 定性方法定性方法Mueller-Hinton血瓊脂血瓊脂 +：陽性，奇異變形桿菌，培養(yǎng)基變玫紅色； ：陰性，大腸埃希氏菌，培養(yǎng)基變黃色或不變色 blank + 4.3 定性方法定性方法鑒定培養(yǎng)基鑒定培養(yǎng)基4、培養(yǎng)基性能測試方法狀生長； ：陰性，蠟樣芽孢桿菌，沿穿刺線生長。 + 4、培養(yǎng)基性能測試方法4.3 定性方法定性方法鑒定培養(yǎng)基鑒定培養(yǎng)基況下，按順序加入指示劑， 在觀察結果。4、培養(yǎng)基性能測試方法4.3 定性方法定性方法鑒定培養(yǎng)基鑒定培養(yǎng)基質控菌株名稱斜面/底部腸炎沙門氏菌（右一）產堿（紅）/產酸（黃）福氏志賀氏菌產堿（紅）/產酸（黃）弗氏檸檬酸桿菌（

17、右二）產酸（黃）/產酸（黃）大腸埃希氏菌（左二）產酸（黃）/產酸（黃）產氣產H2S+-+-例：三糖鐵瓊脂v 滅菌后制成高層斜面?zhèn)溆胿 空白對照（左一）：橘紅色4、培養(yǎng)基性能測試方法4.3 定性方法定性方法鑒定培養(yǎng)基鑒定培養(yǎng)基產品質量檢驗報告產品質量檢驗報告產品產品 MSDS5、測試結果的記錄n培養(yǎng)基成分未充分混勻。n pH計未正確校準；n脫水培養(yǎng)基質量差.n脫水培養(yǎng)基質量差。n原料中的雜質。n制備容器或水中的有毒殘留物。濃度錯誤；n添加劑污染。能影響熒光現象的觀察含指示劑的培養(yǎng)基顏色異常含指示劑的培養(yǎng)基顏色異常不正常沉淀不正常沉淀含瓊脂培養(yǎng)基凝膠強度下降含瓊脂培養(yǎng)基凝膠強度下降 要 求1. 蒸

18、餾水或去離子水 2. pH在5.5-7.59、配制培養(yǎng)基用水的要求10、含瓊脂培養(yǎng)基水浴及復溶的要求 水浴時間不宜超過水浴時間不宜超過4h 如果不能在如果不能在4h內及時使用，應迅速冷卻，使其凝固，使用內及時使用，應迅速冷卻，使其凝固，使用前再進行復溶前再進行復溶 但不可多次復溶，否則會影響培養(yǎng)基的但不可多次復溶，否則會影響培養(yǎng)基的pH值，并導致凝值，并導致凝膠強度下降膠強度下降n第二步：在電爐上繼續(xù)加熱至沸騰第二步：在電爐上繼續(xù)加熱至沸騰THANK YOU!指在均一固定的濃度中含有具活性的定量化菌種，經證明的標準物是指其濃度已經證明。獲得標準菌株驗證和文件歸檔依據生產商指引進行復蘇在5%的血瓊脂、TSA或其它適合的固體培養(yǎng)基上進行分離驗證菌株的純度和特性符合用適合的培養(yǎng)基制備菌懸液分裝進行凍存或凍干NO獲得儲存菌株YES通常懸浮于營養(yǎng)肉湯中適宜時間進行復蘇驗證菌落形態(tài)和革蘭氏染色或用生化試驗進行鑒定例如：TSB添加10%-15%甘油作為冷凍保護培養(yǎng)基在不高于-70低溫冷凍保存可延長保存的時間。禁止采用較高的溫度保存。n非選擇性培養(yǎng)基和選擇性計數培養(yǎng)基上目標菌的生長率應不小于0.7；n選擇性分離培養(yǎng)基上目標菌的生長一般不小于0.5，