生物選修一分解纖維素的微生物的分離學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1生物選修生物選修(xunxi)一分解纖維素的微生物一分解纖維素的微生物的分離的分離第一頁，共35頁。一、基礎(chǔ)知識(shí)一、基礎(chǔ)知識(shí)（一）纖維素和纖維素酶（一）纖維素和纖維素酶1 1、纖維素、纖維素纖維素是一種纖維素是一種(y zhn)(y zhn)由葡萄糖首尾相連而成的高由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì)。分子化合物，是地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì)。第1頁/共35頁第二頁，共35頁。2 2、纖維素的分布、纖維素的分布(fnb)(fnb) 棉花是自然界中纖維素含量最高的天然棉花是自然界中纖維素含量最高的天然(tinrn)(tinrn)產(chǎn)物，此外，木材、作物秸稈等

2、也富含纖產(chǎn)物，此外，木材、作物秸稈等也富含纖維素。但被利用的機(jī)會(huì)很少、效率低；維素。但被利用的機(jī)會(huì)很少、效率低； 科學(xué)家正致力于研究，怎科學(xué)家正致力于研究，怎樣將農(nóng)業(yè)樣將農(nóng)業(yè)(nngy)(nngy)廢棄物、木廢棄物、木材及生長(zhǎng)材及生長(zhǎng)更為迅速的草本植物，轉(zhuǎn)化為更為迅速的草本植物，轉(zhuǎn)化為種類繁多的生物燃料（甚至是種類繁多的生物燃料（甚至是航空燃油）。航空燃油）。纖維素生物燃料：纖維素生物燃料：最有希望替代石油能源最有希望替代石油能源第2頁/共35頁第三頁，共35頁。 植物植物(zhw)(zhw)每年產(chǎn)生的纖維素超過每年產(chǎn)生的纖維素超過7070億噸，其中億噸，其中40%-60%40%-60%能能被

3、土壤中能產(chǎn)生纖維素酶的微生物所利用，不會(huì)大量積累。被土壤中能產(chǎn)生纖維素酶的微生物所利用，不會(huì)大量積累。 在草食性動(dòng)物在草食性動(dòng)物(dngw)(dngw)等的消化道內(nèi)，也共生有等的消化道內(nèi)，也共生有分解纖維素的微生物，其原理也是產(chǎn)生纖維素酶而分解分解纖維素的微生物，其原理也是產(chǎn)生纖維素酶而分解纖維素，而人沒有分解纖維素的能力。纖維素，而人沒有分解纖維素的能力。3 3、纖維素酶、纖維素酶 纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分種組分(zfn)(zfn)，即，即C1C1酶、酶、CXCX酶和葡萄糖苷酶，前兩酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二

4、糖，第三種酶將纖維二糖種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。分解成葡萄糖。纖維二糖纖維二糖C1酶、酶、Cx酶酶葡萄糖苷葡萄糖苷酶酶葡萄糖葡萄糖纖維素纖維素第3頁/共35頁第四頁，共35頁。P27P27：纖維素酶分解：纖維素酶分解(fnji)(fnji)纖維素的實(shí)纖維素的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)取二支取二支20mL的試管的試管(shgun)各加入各加入(jir)一張濾紙條一張濾紙條各加入各加入pH4.8，物質(zhì)量為，物質(zhì)量為0.1mol/L的醋酸醋酸鈉緩沖液的醋酸醋酸鈉緩沖液11ml和和10ml在乙試管中加入在乙試管中加入1mL纖維素酶纖維素酶兩支試管固定在錐形瓶中，放在兩支試管固定在錐形瓶中

5、，放在140r/min的搖床上振蕩的搖床上振蕩1h結(jié)果：乙試管的濾紙條消失結(jié)果：乙試管的濾紙條消失甲甲 乙乙討論：討論：乙試管的濾紙條為什么會(huì)消失？甲試管的作用是什么？乙試管的濾紙條為什么會(huì)消失？甲試管的作用是什么？第4頁/共35頁第五頁，共35頁。思考思考實(shí)驗(yàn)分析：實(shí)驗(yàn)分析：P27P27的小實(shí)驗(yàn)是如何的小實(shí)驗(yàn)是如何構(gòu)成對(duì)照的？構(gòu)成對(duì)照的？濾紙崩潰法濾紙崩潰法自變量是纖維素酶的有無：自變量是纖維素酶的有無：一支試管中添加適量纖維素酶溶液一支試管中添加適量纖維素酶溶液(rngy)(rngy)，另一支試管不添加纖維素酶，另一支試管不添加纖維素酶，（但需加入等量的緩沖液，不能加入蒸餾水，（但需加入等

6、量的緩沖液，不能加入蒸餾水，否則會(huì)影響溶液否則會(huì)影響溶液(rngy)(rngy)的的pHpH。）。）第5頁/共35頁第六頁，共35頁。（二）纖維素分解（二）纖維素分解(fnji)(fnji)菌的篩選菌的篩選 1 1、篩選、篩選(shixun)(shixun)方法：方法： 剛果紅染色法，這種方法能剛果紅染色法，這種方法能夠通過夠通過(tnggu)(tnggu)顏色反應(yīng)直接顏色反應(yīng)直接對(duì)微生物進(jìn)行篩選。對(duì)微生物進(jìn)行篩選。2 2、篩選原理：、篩選原理： 剛果紅剛果紅是一種染料，它可以是一種染料，它可以與像纖維素這樣的與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物 ，但并不和纖維二糖、，

7、但并不和纖維二糖、葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)纖維素被纖維素酶分葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅解后，剛果紅纖維素的復(fù)合物就無法形成，培纖維素的復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解為中心的透明圈養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解為中心的透明圈 。這樣我們可以通過這樣我們可以通過是否產(chǎn)生透明圈是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素來篩選纖維素分解菌。分解菌。第6頁/共35頁第七頁，共35頁。例例1 1 ：下列關(guān)于纖維素酶的說法，錯(cuò)誤：下列關(guān)于纖維素酶的說法，錯(cuò)誤(cuw)(cuw)的的是（是（ ）A. A. 纖維素酶是一種復(fù)合酶，至少包括三種纖維素酶是一種復(fù)合酶，至少包括三種B. B. 纖維素酶

8、可把纖維素分解成葡萄糖纖維素酶可把纖維素分解成葡萄糖C. C. 纖維素酶可用于去掉植物的細(xì)胞壁纖維素酶可用于去掉植物的細(xì)胞壁D. D. 葡萄糖苷酶可把纖維素分解成葡萄糖葡萄糖苷酶可把纖維素分解成葡萄糖D第7頁/共35頁第八頁，共35頁。二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（一）分離分解（一）分離分解(fnji)(fnji)纖維素的微生物纖維素的微生物實(shí)驗(yàn)流程實(shí)驗(yàn)流程土壤土壤(t(trnrng)g)取取樣樣選擇選擇(xu(xunz)nz)培養(yǎng)培養(yǎng)梯度梯度稀釋稀釋將樣品涂將樣品涂布到鑒別布到鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基挑選挑選菌落菌落什么樣什么樣的環(huán)境的環(huán)境取樣取樣? ? 培養(yǎng)的目的培養(yǎng)的目的? ? 選選擇培養(yǎng)基的特點(diǎn)擇

9、培養(yǎng)基的特點(diǎn)? ?挑選什么挑選什么樣的菌落樣的菌落? ?鑒別培養(yǎng)基的特鑒別培養(yǎng)基的特點(diǎn)點(diǎn)? ?如何鑒別如何鑒別? ?根據(jù)：根據(jù)：微生物微生物對(duì)生存環(huán)境的要對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)環(huán)境求，到相應(yīng)環(huán)境中去找；中去找；目的：目的：增加纖維素增加纖維素分解菌的濃度，分解菌的濃度，以確保能夠從樣品以確保能夠從樣品中分離到所需要的中分離到所需要的微生物；微生物；剛果紅染色法剛果紅染色法第8頁/共35頁第九頁，共35頁。本實(shí)驗(yàn)流程與尿素分解菌的分離實(shí)驗(yàn)流程有哪些異同？ 尿素分解菌的分離實(shí)驗(yàn)流程是將土樣制成的尿素分解菌的分離實(shí)驗(yàn)流程是將土樣制成的菌懸液直接涂布在選擇培養(yǎng)基上菌懸液直接涂布在選擇培養(yǎng)基上; ;本

10、課題通過選擇本課題通過選擇培養(yǎng)使細(xì)菌增殖后培養(yǎng)使細(xì)菌增殖后, ,再涂布在鑒別培養(yǎng)基上。其它再涂布在鑒別培養(yǎng)基上。其它操作基本操作基本(jbn)(jbn)基本基本(jbn)(jbn)共同。共同。 第9頁/共35頁第十頁，共35頁。分布分布(fnb)(fnb)環(huán)環(huán)境境1 1、土壤、土壤(trng)(trng)取樣：取樣： 生物與環(huán)境的互相依存關(guān)系，在富含纖維素生物與環(huán)境的互相依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中纖維素分解菌的含量相對(duì)提高，因此從的環(huán)境中纖維素分解菌的含量相對(duì)提高，因此從這種土壤中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)這種土壤中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境。境。原因原因（二）操作步驟（二）

11、操作步驟第10頁/共35頁第十一頁，共35頁。實(shí)例實(shí)例(shl)(shl)討論討論(toln) (toln) 將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對(duì)集中將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對(duì)集中(jzhng)(jzhng)，實(shí)際上是人工設(shè)置纖維素分解菌生存的，實(shí)際上是人工設(shè)置纖維素分解菌生存的適宜環(huán)境。一般應(yīng)將濾紙埋于深約適宜環(huán)境。一般應(yīng)將濾紙埋于深約10cm10cm左右的土壤左右的土壤中。中。樹林中多年落葉形成的腐殖土，多年積累的枯枝敗樹林中多年落葉形成的腐殖土，多年積累的枯枝敗葉等。葉等。如果找不到合適的環(huán)境，可以將濾紙埋在土壤中，如果找不到合適的環(huán)境，可以將濾紙埋在土壤中，將濾紙埋在土壤中有

12、什么作用？你認(rèn)為濾紙應(yīng)該埋在土將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認(rèn)為濾紙應(yīng)該埋在土壤中多深？壤中多深？第11頁/共35頁第十二頁，共35頁。2 2、選擇、選擇(xunz)(xunz)培培養(yǎng)養(yǎng) 增加纖維素分解菌的濃度，以確保能夠從樣品增加纖維素分解菌的濃度，以確保能夠從樣品(yngpn)(yngpn)中分離所需要的微生物。中分離所需要的微生物。 目的目的(md)(md)：制備選擇培養(yǎng)基制備選擇培養(yǎng)基操作：操作：將土樣加入裝有將土樣加入裝有30ml30ml選擇培養(yǎng)基的錐形瓶選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中，將錐形瓶固定在搖床上，在一定溫度下震中，將錐形瓶固定在搖床上，在一定溫度下震蕩培養(yǎng)蕩培養(yǎng)1 12 2天，直至

13、培養(yǎng)液變渾濁。也可重復(fù)天，直至培養(yǎng)液變渾濁。也可重復(fù)選擇培養(yǎng)。選擇培養(yǎng)。第12頁/共35頁第十三頁，共35頁。閱讀閱讀(yud)(yud)資料二資料二“選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基”，回答以下幾問，回答以下幾問題：題：第13頁/共35頁第十四頁，共35頁。培養(yǎng)基組成培養(yǎng)基組成纖維素粉纖維素粉 5gNaNO3 1gKCl 0.5g Na2HPO47H2O 1.2gKH2PO4 0.9g MgSO4 7H2O 0.5g酵母膏酵母膏 0.5g水解酵素水解酵素 0.5g溶解后，蒸餾水定容至溶解后，蒸餾水定容至1000mL碳源（能源碳源（能源(nngyun)）氮源、無機(jī)鹽氮源、無機(jī)鹽無機(jī)鹽無機(jī)鹽碳源、氮源、生長(zhǎng)

14、因子碳源、氮源、生長(zhǎng)因子氮素、生長(zhǎng)因子氮素、生長(zhǎng)因子水水提供提供(tgng)主要的營養(yǎng)物主要的營養(yǎng)物質(zhì)質(zhì)第14頁/共35頁第十五頁，共35頁。提示：自變量為培養(yǎng)基的種類，即普通培養(yǎng)基和選提示：自變量為培養(yǎng)基的種類，即普通培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基。可用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基與之對(duì)照擇培養(yǎng)基?？捎门Ｈ飧嗟鞍纂伺囵B(yǎng)基與之對(duì)照, ,或者或者(huzh)(huzh)將纖維素改為葡萄糖。將纖維素改為葡萄糖。A A、旁欄中的配方是液體、旁欄中的配方是液體(yt)(yt)培養(yǎng)基還是固體培養(yǎng)培養(yǎng)基還是固體培養(yǎng)基？基？為什么？為什么？是液體培養(yǎng)基，原因是配方中無凝固劑（瓊脂）。目的是液體培養(yǎng)基，原因是配方中無凝固劑（瓊脂）

15、。目的(md)(md)是使纖維素分解菌增殖是使纖維素分解菌增殖, ,含量增多。含量增多。B B、這個(gè)培養(yǎng)基對(duì)微生物是否具有選擇作用？如果、這個(gè)培養(yǎng)基對(duì)微生物是否具有選擇作用？如果具有，是如何進(jìn)行選擇的？具有，是如何進(jìn)行選擇的？有選擇作用，本配方中纖維素作為主要碳源，有選擇作用，本配方中纖維素作為主要碳源，只有能分解纖維素的微生物可以大量繁殖。只有能分解纖維素的微生物可以大量繁殖。C C、你能否設(shè)計(jì)一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，說明選擇培養(yǎng)基的、你能否設(shè)計(jì)一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，說明選擇培養(yǎng)基的作用？作用？第15頁/共35頁第十六頁，共35頁。分析分析“纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基配方纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基配方”可知，該配

16、方中的酵母膏也能夠提供少量可知，該配方中的酵母膏也能夠提供少量(sholing)的碳的碳源，因此其他微生物也能在該培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁源，因此其他微生物也能在該培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖。只不過，由于酵母膏的含量極少，因此，殖。只不過，由于酵母膏的含量極少，因此，只有以纖維素為碳源的微生物才能大量繁殖。只有以纖維素為碳源的微生物才能大量繁殖。說明說明(shumng)：第16頁/共35頁第十七頁，共35頁。在選擇培養(yǎng)在選擇培養(yǎng)(piyng)(piyng)的條件下，可以使那些的條件下，可以使那些能夠適應(yīng)能夠適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不這種營養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微

17、生物的繁殖被抑制，因此適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到可以起到“濃縮濃縮”的作用。的作用。第17頁/共35頁第十八頁，共35頁。比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目分解尿素的細(xì)菌分解尿素的細(xì)菌纖維素分解菌纖維素分解菌選選擇擇培培養(yǎng)養(yǎng)基基原理原理培養(yǎng)基培養(yǎng)基類型類型目的目的將細(xì)菌涂布在只將細(xì)菌涂布在只有尿素有尿素(nio s)做氮做氮源的源的選擇培養(yǎng)基上選擇培養(yǎng)基上將細(xì)菌涂布在只有將細(xì)菌涂布在只有(zhyu)纖維素粉做碳源的纖維素粉做碳源的選擇培養(yǎng)基上選擇培養(yǎng)基上固體固體(gt)培養(yǎng)基培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基篩選菌株篩選菌株增大菌株濃度增大菌株濃度比較：比較：第18頁/共35頁第十九頁，共35頁

18、。本實(shí)驗(yàn)的流程與課題本實(shí)驗(yàn)的流程與課題(kt)2(kt)2中的實(shí)驗(yàn)流程有哪些異同？中的實(shí)驗(yàn)流程有哪些異同？ 本實(shí)驗(yàn)流程與課題本實(shí)驗(yàn)流程與課題2 2的流程的區(qū)別如下。課題的流程的區(qū)別如下。課題2 2是將土樣制成的菌懸液直接涂布在以尿素為唯一氮是將土樣制成的菌懸液直接涂布在以尿素為唯一氮源的選擇性培養(yǎng)基上，直接分離源的選擇性培養(yǎng)基上，直接分離(fnl)(fnl)得到菌落得到菌落。本課題通過選擇培養(yǎng)，使纖維素分解菌得到增殖。本課題通過選擇培養(yǎng)，使纖維素分解菌得到增殖后，再將菌液涂布在選擇培養(yǎng)基上。其他步驟基本后，再將菌液涂布在選擇培養(yǎng)基上。其他步驟基本一致。一致。 思考：思考：第19頁/共35頁第二

19、十頁，共35頁。按照課題按照課題1 1的稀釋操作方法，將選擇的稀釋操作方法，將選擇(xunz)(xunz)培養(yǎng)后培養(yǎng)后的培養(yǎng)基進(jìn)行等比稀釋的培養(yǎng)基進(jìn)行等比稀釋101101107107倍。倍。3 3、梯度、梯度(t d)(t d)稀釋稀釋101102103104105106第20頁/共35頁第二十一頁，共35頁。4 4、將樣品、將樣品(yngpn)(yngpn)涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上基上（1 1）制備）制備(zhbi)(zhbi)鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基: :培養(yǎng)基組成培養(yǎng)基組成提供的主要營養(yǎng)物質(zhì)提供的主要營養(yǎng)物質(zhì)CMC-Na 510gCMC-Na 510g碳源

20、碳源酵母膏酵母膏 1g1g碳源、氮源、生長(zhǎng)因子碳源、氮源、生長(zhǎng)因子KHKH2 2POPO4 4 0.25g0.25g無機(jī)鹽無機(jī)鹽土豆汁土豆汁 100mL100mL碳源、生長(zhǎng)因子碳源、生長(zhǎng)因子瓊脂瓊脂 15g15g凝固劑凝固劑上述物質(zhì)溶解后，加蒸餾水上述物質(zhì)溶解后，加蒸餾水定容至定容至1000mL1000mL氫元素、氧元素氫元素、氧元素( (水溶性羧甲基纖維素鈉水溶性羧甲基纖維素鈉) )第21頁/共35頁第二十二頁，共35頁。（2 2）涂布平板）涂布平板(pngbn)(pngbn)： 將稀釋度為將稀釋度為104104106106的菌懸液各取的菌懸液各取0.1mL0.1mL滴加在鑒滴加在鑒別纖維素

21、分解別纖維素分解(fnji)(fnji)菌的培養(yǎng)基上菌的培養(yǎng)基上, ,用涂布器將菌液用涂布器將菌液涂布均勻涂布均勻, ,在在3030倒置培養(yǎng)。每個(gè)稀釋度下需涂布倒置培養(yǎng)。每個(gè)稀釋度下需涂布3 3個(gè)平個(gè)平板板, ,還要注意設(shè)置對(duì)照。還要注意設(shè)置對(duì)照。第22頁/共35頁第二十三頁，共35頁。5 5、剛果紅染色法、剛果紅染色法 挑選產(chǎn)生挑選產(chǎn)生(chnshng)(chnshng)透明圈的菌落，一般即為分透明圈的菌落，一般即為分解纖維素的菌落。解纖維素的菌落。常用常用(chn yn)(chn yn)的剛果紅染色法有的剛果紅染色法有兩種：兩種：方法方法(fngf)一：一：先先_，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)

22、，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)。方法方法(fngf)二：二：在在_時(shí)就加入剛果紅。時(shí)就加入剛果紅。培養(yǎng)微生物培養(yǎng)微生物倒平板倒平板第23頁/共35頁第二十四頁，共35頁。顏色顏色(yns)反反應(yīng)基本上是纖應(yīng)基本上是纖維素分解菌的維素分解菌的作用作用操作操作(cozu)繁瑣繁瑣剛果紅會(huì)使菌落之間剛果紅會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜發(fā)生混雜操作簡(jiǎn)便不存操作簡(jiǎn)便不存在菌落混雜在菌落混雜(hnz)問題問題1.產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)生淀粉酶的微生物也產(chǎn)生模糊透明圈也產(chǎn)生模糊透明圈2.有些微生物能降解色有些微生物能降解色素，形成明顯的透明圈。素，形成明顯的透明圈。第24頁/共35頁第二十五頁，共35頁。漂洗作用，洗去與纖

23、維素結(jié)合不牢的剛果漂洗作用，洗去與纖維素結(jié)合不牢的剛果紅，以免出現(xiàn)的透明圈不夠清晰。用這方法可紅，以免出現(xiàn)的透明圈不夠清晰。用這方法可以判斷酶活力的大小以判斷酶活力的大小(dxio)(dxio)，實(shí)際上剛果紅是結(jié)合到，實(shí)際上剛果紅是結(jié)合到培養(yǎng)基的多糖底物，但分解纖維素的細(xì)菌可以培養(yǎng)基的多糖底物，但分解纖維素的細(xì)菌可以產(chǎn)生纖維素酶，能分解這個(gè)多糖底物成為單產(chǎn)生纖維素酶，能分解這個(gè)多糖底物成為單糖，這樣剛果紅就不能結(jié)合上去了，氯化鈉溶糖，這樣剛果紅就不能結(jié)合上去了，氯化鈉溶液就可以使結(jié)合不牢的剛果紅洗去，這樣就留液就可以使結(jié)合不牢的剛果紅洗去，這樣就留下大大小下大大小(dxio)(dxio)小的透

24、明圈，大的透明圈當(dāng)然分解纖小的透明圈，大的透明圈當(dāng)然分解纖維素的能就強(qiáng)！維素的能就強(qiáng)！ 第25頁/共35頁第二十六頁，共35頁。比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目分解尿素的細(xì)菌分解尿素的細(xì)菌纖維素分解菌纖維素分解菌鑒鑒定定培培養(yǎng)養(yǎng)基基原理原理現(xiàn)象現(xiàn)象方法方法在細(xì)菌分解在細(xì)菌分解(fnji)尿素的化尿素的化學(xué)學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的脲反應(yīng)中，細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解酶將尿素分解(fnji)成了氨成了氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，強(qiáng)，pH升高。在培養(yǎng)基升高。在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，如中加入酚紅指示劑，如果果pH升高指示劑會(huì)變紅升高指示劑會(huì)變紅剛果紅可以與纖維素形剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖

25、維成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶催化分解素被纖維素酶催化分解后紅色復(fù)合物無法形成后紅色復(fù)合物無法形成(xngchng)，培養(yǎng)基上就會(huì)出現(xiàn)以纖培養(yǎng)基上就會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透維素分解菌為中心的透明圈明圈觀察菌落周圍是否有著觀察菌落周圍是否有著色的環(huán)帶出現(xiàn)色的環(huán)帶出現(xiàn)(chxin)來來鑒定尿鑒定尿素分解菌素分解菌觀察菌落周圍是否出現(xiàn)觀察菌落周圍是否出現(xiàn)透明圈來篩選纖維素分透明圈來篩選纖維素分解菌解菌脲酶檢測(cè)法脲酶檢測(cè)法剛果紅染色法剛果紅染色法第26頁/共35頁第二十七頁，共35頁。6 6、純化、純化(chn hu)(chn hu)培養(yǎng)培養(yǎng) 挑取產(chǎn)生明顯的透明圈的菌落，一般即為分挑取產(chǎn)生明

26、顯的透明圈的菌落，一般即為分解解(fnji)(fnji)纖維素的菌落。纖維素的菌落。 接種到纖維素分解接種到纖維素分解(fnji)(fnji)菌的選擇培養(yǎng)菌的選擇培養(yǎng)基上，在基上，在300C300C 370C 370C培養(yǎng)，可獲得純培養(yǎng)。培養(yǎng)，可獲得純培養(yǎng)。第27頁/共35頁第二十八頁，共35頁。三、結(jié)果三、結(jié)果(ji gu)(ji gu)分析與評(píng)價(jià)分析與評(píng)價(jià)對(duì)照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長(zhǎng)則說明培養(yǎng)基對(duì)照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長(zhǎng)則說明培養(yǎng)基制作合格。制作合格。如果觀察如果觀察(gunch)(gunch)到產(chǎn)生透明圈的菌落，則說明可能到產(chǎn)生透明圈的菌落，則說明可能獲得了分解纖維素的

27、微生物。獲得了分解纖維素的微生物。1 1、培養(yǎng)基的制作、培養(yǎng)基的制作(zhzu)(zhzu)是否合格以及選擇培養(yǎng)基是否合格以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落是否篩選出菌落2 2、分離的結(jié)果是否一致、分離的結(jié)果是否一致由于在土壤中細(xì)菌的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于真菌和放線菌的數(shù)量由于在土壤中細(xì)菌的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于真菌和放線菌的數(shù)量，因此最容易分離得到的是細(xì)菌。但由于所取土樣的環(huán)境不，因此最容易分離得到的是細(xì)菌。但由于所取土樣的環(huán)境不同，不同同學(xué)也可能得到真菌和放線菌等不同的分離結(jié)果。同，不同同學(xué)也可能得到真菌和放線菌等不同的分離結(jié)果。第28頁/共35頁第二十九頁，共35頁。為了確定分離得到的是纖維素分解菌，還需要為了確定分離得到的是纖維素分解菌，還需要進(jìn)行進(jìn)行_實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)(shyn)(shyn)，纖維素酶，纖維素酶的發(fā)酵方法有的發(fā)酵方法有_ _ 發(fā)酵和發(fā)酵和_ _ 發(fā)酵。纖發(fā)酵。纖維素酶測(cè)定方法是對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素所維素酶測(cè)定方法是對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素所產(chǎn)生的產(chǎn)生的_ _ 含量進(jìn)行定量測(cè)定。含量進(jìn)行定量測(cè)定。四、課題四、課題(kt)(kt)延延伸伸發(fā)酵發(fā)酵(f jio)產(chǎn)纖維素酶產(chǎn)纖維素酶 液體液體 固體固體 葡萄糖葡萄糖 第29頁/共35頁第三十頁，共