臨床微生物學檢驗：實驗八 腸道桿菌的檢驗（三）

實驗八腸道桿菌的檢驗（三）目的要求：1熟悉腸道桿菌的分離鑒定程序及臨床意義；2掌握腸道桿菌的生化反應特點和數值鑒定方法；3掌握鑒定腸道桿菌的生化反應試驗和血清學試驗的操作方法和結果分析實驗內容（第三次實驗）：1觀察試驗結果，查編碼手冊鑒定；2沙門菌及志賀菌的血清學鑒定（2人一組，小組作）；3下結論，出實驗報告。1KIA、MIU試驗結果記錄細菌名稱KIA試驗（乳糖、葡萄糖、氣體、H2S）MIU試驗（動力、吲哚、脲酶）大腸埃希菌AA+-++-變形桿菌（普通；奇異）KA++++++-+乙型副傷寒沙門菌KA+++--痢疾桿菌

KA---+/--KIA結果觀察（酚紅指示劑）：未種菌的培養(yǎng)基為紅色

上層斜面為紅色，堿性，記錄為K；黃色，酸性為A。下層為紅色，堿性，記錄為K；黃色，酸性為A。看到有氣體，記錄產氣+，不產氣-，觀察到黑色，為H2S試驗+MIU結果觀察：（未種菌培養(yǎng)基為淡黃色）

動力陽性：可見接種線變寬、變模糊、培養(yǎng)基變渾濁；尿素酶試驗陽性：培養(yǎng)基全部變成桃紅色；靛基質陽性：加入靛基質試劑的界面形成玫瑰紅色。

2微量生化管結果及數字編碼鑒定（參P32）

微量生化管鑒定細菌的步驟：接種細菌，孵育一定時間判斷陽性/陰性結果計算數值，組成編碼查詢編碼手冊，查找對應的細菌+變黃，氣—黃色不變+黃變紫+黃變紫+變黑色+變紅+藍變黃+藍變黃+無色變綠+黃變紅+綠變藍產品名稱結果判斷培養(yǎng)時間(小時)備注陽性陰性葡萄糖（產氣）黃色產氣藍色或綠色不產氣24-48穿刺接種賴氨酸脫羧酶肉湯紫色黃色18-24每株被檢菌應同時接種氨基酸對照管一支，并加滅菌液體石蠟覆蓋培養(yǎng)基液面。試驗管紫色，對照管變黃色，為陽性；試驗管與對照管均變黃色，為陰性。鳥氨酸脫羧酶肉湯紫色黃色18-24硫化氫生化管變黑沿穿刺線呈傘狀生長不變黑穿刺線周圍清晰，無變化18-24穿刺接種蛋白胨水紅色環(huán)不變色(黃棕色環(huán))18-24滴加Kovacs試劑2-4滴乳糖發(fā)酵管黃色綠色或藍色或紫色或紫灰色18-24衛(wèi)茅醇黃色不變色18-24穿刺接種苯丙氨酸脫氨酶綠色或深綠色不變色18-24滴加10%三氯化鐵溶液2-3滴，自斜面培養(yǎng)物上流下。尿素酶玫瑰紅黃色12-24斜面：穿刺接種；液體同其他生化管。西蒙氏枸櫞酸鹽藍色淺綠色24-48有時需延長培養(yǎng)時間至4天氨基酸脫羧酶對照黃色黃色18-24加滅菌液體石蠟覆蓋培養(yǎng)基液面例如：未知菌發(fā)酵葡萄糖產酸產氣（AG）；賴氨酸+，鳥氨酸-，硫化氫-；蛋白胨吲哚+，乳糖+，衛(wèi)茅醇？（+或-）；苯丙氨酸-，尿素-，枸櫞酸鹽-。

得出總值AG460orAG470

查詢編碼手冊為大腸埃希菌3沙門菌及志賀菌的血清學鑒定（玻片法，p33）原理：Ag+Ab——Ag-Ab凝集物方法：1于干凈載玻片的測試區(qū)域及對照區(qū)域分別滴加1滴抗血清和1滴生理鹽水；2用接種環(huán)蘸取新鮮培養(yǎng)物單菌落1環(huán)于抗血清和生理鹽水中；3來回傾斜晃動混合30s-1min；4觀察凝結現象：O抗原為顆粒狀凝集，H抗原為絮狀或絨毛狀凝集。志賀菌屬的血清學分型鑒定志賀菌屬分四個血清群（種）：即A群痢疾志賀菌，B群福氏志賀菌，C群鮑特志賀菌，D群宋內志賀菌，是人類細菌性痢疾的病原體。材料：志賀菌四種多價抗血清；福氏志賀菌抗血清；玻片，待測菌。操作方法：先用志賀菌四種多價抗血清出現凝結物陽性結果鑒定為志賀菌屬細菌A群痢疾志賀菌診斷血清B群福氏志賀菌診斷血清C群鮑特志賀菌診斷血清D群宋內志賀菌診斷血清出現凝結物陽性結果鑒定為福氏志賀沙門菌的血清學分型鑒定沙門菌有2500多種血清型，含有菌體O抗原，鞭毛H抗原，有的還有Vi抗原。根據相同的O抗原分組，其中最常見的臨床分離株為A—F組，常檢查A—F組的O抗原確定沙門菌屬；檢查相應組別的O抗原成分可確定哪一組的沙門菌；但鞭毛H抗原比較特異，每種沙門菌各不相同，故常檢查特異性的H抗原鑒定是哪一種血清型沙門菌。組菌名O抗原H抗原（第1相第2相）A甲型副傷寒1,2,12Ha-B

乙型副傷寒1,4,5,12Hb1,2

鼠傷寒1,4,5,12Hi1,2--------C豬霍亂6,7Hc1,5

希氏（丙型）6,7，ViHc1,5D傷寒9,12（Vi）Hd-E鴨3,10-1,6F阿伯丁11Hi1,2材料：沙門菌屬診斷血清全試劑盒（教師示教，含A-F多價血清兩瓶/o2/o4/o7/09/Vi/Ha/Hb/Hc/Hd/Hi)---可鑒定到沙門菌的血清型;

學生桌沙門菌A-F多價血清，沙門菌O4抗血清，只能鑒定細菌所在的組.方法：先用沙門菌A-F組的多價抗血清與細菌作用如出現顆粒狀凝結物鑒定為沙門菌屬細菌再用沙門菌O4抗血清與細菌作用如出現顆粒狀凝集物鑒定為沙門菌