第二講分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室儀器操作簡(jiǎn)介

1、第二講第二講 實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備簡(jiǎn)介及操作備簡(jiǎn)介及操作1. 微量移液器微量移液器 微量移液器有數(shù)字可調(diào)式和固定式兩種型號(hào)，是計(jì)量微量移液器有數(shù)字可調(diào)式和固定式兩種型號(hào)，是計(jì)量和轉(zhuǎn)移液體的專用儀器，其裝有直接讀數(shù)容量計(jì)。和轉(zhuǎn)移液體的專用儀器，其裝有直接讀數(shù)容量計(jì)。 微量移液器有多種規(guī)格，在移液器量程范圍內(nèi)能連續(xù)微量移液器有多種規(guī)格，在移液器量程范圍內(nèi)能連續(xù)調(diào)節(jié)讀數(shù)。調(diào)節(jié)讀數(shù)。量液的操作步驟：量液的操作步驟：第一停點(diǎn)第二停點(diǎn)A A 保持微量移液器垂直，將按鈕壓至第一停點(diǎn)；保持微量移液器垂直，將按鈕壓至第一停點(diǎn)；B B 微量移液器頭尖端浸入溶液，緩慢釋放按鈕；微量移液器頭尖端浸入溶液

2、，緩慢釋放按鈕；C C 保持微量移液器垂直，將微量移液器頭與容器壁接觸，慢保持微量移液器垂直，將微量移液器頭與容器壁接觸，慢 慢壓下按鈕至第一停點(diǎn)；慢壓下按鈕至第一停點(diǎn)；D D 壓至第二停點(diǎn)把溶液完全釋放出；壓至第二停點(diǎn)把溶液完全釋放出；E E 釋放按鈕回原狀。釋放按鈕回原狀。 2. 臺(tái)式高速離心機(jī)臺(tái)式高速離心機(jī)離心機(jī)的分類離心機(jī)的分類 低速：每分鐘幾千轉(zhuǎn)低速：每分鐘幾千轉(zhuǎn) 高速：每分鐘高速：每分鐘1 3萬(wàn)轉(zhuǎn)萬(wàn)轉(zhuǎn) 超速：每分鐘超速：每分鐘3萬(wàn)轉(zhuǎn)以上萬(wàn)轉(zhuǎn)以上 低速：細(xì)胞等大分子低速：細(xì)胞等大分子 高速：高速：DNADNA，蛋白等，蛋白等 超速超速: : 病毒，蛋白，細(xì)胞器等病毒，蛋白，細(xì)胞器等基

3、因片段的分離、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物樣品基因片段的分離、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物樣品的分離制備實(shí)驗(yàn)中都離不開低溫離心技術(shù)的分離制備實(shí)驗(yàn)中都離不開低溫離心技術(shù) 離心機(jī)的功能：分離離心機(jī)的功能：分離 純化純化臺(tái)式高速離心機(jī)使用步驟臺(tái)式高速離心機(jī)使用步驟3. PCR儀儀 PCR儀主要應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究等許多領(lǐng)域，儀主要應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究等許多領(lǐng)域，如基因分析、序列分析、進(jìn)化分析、臨床診斷、法醫(yī)如基因分析、序列分析、進(jìn)化分析、臨床診斷、法醫(yī)學(xué)等。學(xué)等。 PCR儀，也稱儀，也稱DNA熱循環(huán)儀、基因擴(kuò)增儀，能使熱循環(huán)儀、基因擴(kuò)增儀，能使一對(duì)寡核苷酸引物結(jié)合到正負(fù)一對(duì)寡核苷酸引物結(jié)

4、合到正負(fù)DNA鏈上的靶序列兩鏈上的靶序列兩側(cè)，從而酶促合成拷貝數(shù)為百萬(wàn)倍的靶序列側(cè)，從而酶促合成拷貝數(shù)為百萬(wàn)倍的靶序列DNA片片段，它的每一循環(huán)包括段，它的每一循環(huán)包括DNA變性、復(fù)性、延伸三個(gè)變性、復(fù)性、延伸三個(gè)反應(yīng)。反應(yīng)。操作程序操作程序: :1 1）開機(jī)：打開電源，顯示主界面；）開機(jī)：打開電源，顯示主界面；2 2）創(chuàng)建程序：使用）創(chuàng)建程序：使用”createcreate”輸入新程序（包括輸入新程序（包括PCRPCR循循 環(huán)數(shù)，預(yù)變性、變性、復(fù)性、延伸的時(shí)間和溫環(huán)數(shù)，預(yù)變性、變性、復(fù)性、延伸的時(shí)間和溫 度），保存程序（包括用戶名和方法名）度），保存程序（包括用戶名和方法名）; ;3 3）放

5、入樣品，蓋上蓋子）放入樣品，蓋上蓋子; ;4 4）在所建用戶名下按）在所建用戶名下按“run”run”鍵，找到設(shè)定的程序，鍵，找到設(shè)定的程序， 按按“startstart”鍵鍵啟動(dòng)程序啟動(dòng)程序; ;5 5）運(yùn)行結(jié)束后按）運(yùn)行結(jié)束后按“stopstop”鍵停止運(yùn)行，取出樣品，關(guān)鍵停止運(yùn)行，取出樣品，關(guān)閉電源。閉電源。4. 電泳圖像分析系統(tǒng)電泳圖像分析系統(tǒng)系統(tǒng)簡(jiǎn)介：系統(tǒng)簡(jiǎn)介： 系統(tǒng)可以通過紫外系統(tǒng)可以通過紫外/ /可見光分析裝置及透光掃描儀直可見光分析裝置及透光掃描儀直接獲得核酸、蛋白質(zhì)凝膠電泳圖像。系統(tǒng)配置有接獲得核酸、蛋白質(zhì)凝膠電泳圖像。系統(tǒng)配置有SmartViewSmartView生物電泳圖

6、像分析軟件，可以進(jìn)行密度掃描、生物電泳圖像分析軟件，可以進(jìn)行密度掃描、密度定量、分子量計(jì)算等電泳分析。此外，該系統(tǒng)含有密度定量、分子量計(jì)算等電泳分析。此外，該系統(tǒng)含有多種圖像濾波器，可降低圖像的噪音，從而獲得較清晰多種圖像濾波器，可降低圖像的噪音，從而獲得較清晰的圖像。的圖像。操作步驟：操作步驟：1）將電泳樣品放入分析裝置中將電泳樣品放入分析裝置中2）打開電腦，運(yùn)行打開電腦，運(yùn)行Smart View 軟件，單擊軟件，單擊“Import”鍵進(jìn)入鍵進(jìn)入 圖像獲取項(xiàng)目欄，圖像獲取項(xiàng)目欄，選擇選擇“獲取視頻圖像獲取視頻圖像”鍵，進(jìn)鍵，進(jìn)行圖像采集行圖像采集3）選選 擇紫外或可見光源，在圖像采集窗口中調(diào)

7、節(jié)好圖像大擇紫外或可見光源，在圖像采集窗口中調(diào)節(jié)好圖像大 小、亮度及焦距小、亮度及焦距4）單擊單擊“采集圖像采集圖像”鍵，根據(jù)圖像質(zhì)量選擇好優(yōu)化攝影時(shí)間鍵，根據(jù)圖像質(zhì)量選擇好優(yōu)化攝影時(shí)間 （一般情況下在（一般情況下在12秒左右秒左右），即開始采集。，即開始采集。1 1、圖像采集、圖像采集2、圖像保存、圖像保存 單擊單擊“System 鍵鍵”選擇選擇“另保存圖像為另保存圖像為”鍵，出現(xiàn)一個(gè)鍵，出現(xiàn)一個(gè)“圖像文圖像文件登記件登記”窗口，窗口，輸入標(biāo)題，實(shí)驗(yàn)人，實(shí)驗(yàn)日期，實(shí)驗(yàn)摘要等輸入標(biāo)題，實(shí)驗(yàn)人，實(shí)驗(yàn)日期，實(shí)驗(yàn)摘要等信息，信息，按按“保存保存”鍵完成圖像文件登記鍵完成圖像文件登記，同時(shí)出現(xiàn)，同時(shí)出

8、現(xiàn)“另保存圖另保存圖像為像為”窗口，輸入圖像名，保存圖像至桌面。窗口，輸入圖像名，保存圖像至桌面。 3、關(guān)閉操作系統(tǒng)、關(guān)閉操作系統(tǒng)（1）關(guān)閉紫外）關(guān)閉紫外/可見光。可見光。（2）退出軟件界面。）退出軟件界面。（3）關(guān)閉紫外與可見分析裝置的電源。）關(guān)閉紫外與可見分析裝置的電源。注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)：1、 不要戴不要戴“臟臟”手套觸摸電腦鼠標(biāo)、鍵盤及其它位置；手套觸摸電腦鼠標(biāo)、鍵盤及其它位置； 2、 不要戴不要戴“臟臟”手套觸摸倉(cāng)門和燈箱電源開關(guān)；手套觸摸倉(cāng)門和燈箱電源開關(guān)； 3、 不要戴不要戴“臟臟”手套觸摸外接電源開關(guān)；手套觸摸外接電源開關(guān)； 4、在圖像獲取過程中，若通過軟件打開紫外、在圖像獲取

9、過程中，若通過軟件打開紫外/可見光，則可見光，則 必須再通過軟件關(guān)閉，必須再通過軟件關(guān)閉，若通過紫外與可見分析裝置上若通過紫外與可見分析裝置上 打開紫外打開紫外/可見光，則從分析裝置上關(guān)閉，可見光，則從分析裝置上關(guān)閉，嚴(yán)禁互用，嚴(yán)禁互用， 導(dǎo)致紫外燈長(zhǎng)亮。導(dǎo)致紫外燈長(zhǎng)亮。5. 電泳儀電泳儀DYY-12型電腦三恒多用電泳儀（北京六一儀器廠）型電腦三恒多用電泳儀（北京六一儀器廠）操作程序：操作程序：1）電泳槽的兩個(gè)電極與電泳儀的直流輸出端連接（極）電泳槽的兩個(gè)電極與電泳儀的直流輸出端連接（極 性不要接反）；性不要接反）；2）打開電源，設(shè)置參數(shù)（選擇穩(wěn)壓穩(wěn)流方式及電壓電）打開電源，設(shè)置參數(shù)（選擇穩(wěn)壓

10、穩(wěn)流方式及電壓電 流范圍）；流范圍）；3）按）按“啟動(dòng)啟動(dòng)”啟動(dòng)程序（輸出為高電壓，注意安全）；啟動(dòng)程序（輸出為高電壓，注意安全）；4）電泳結(jié)束，按）電泳結(jié)束，按“停止停止”鍵終止程序。鍵終止程序。使用及性能使用及性能：搖床（振蕩器）廣泛用于對(duì)搖床（振蕩器）廣泛用于對(duì)溫度和振蕩頻率有較高要求溫度和振蕩頻率有較高要求的細(xì)菌培養(yǎng)、發(fā)酵、雜交、的細(xì)菌培養(yǎng)、發(fā)酵、雜交、生物化學(xué)反應(yīng)以及酶和組織生物化學(xué)反應(yīng)以及酶和組織研究等。實(shí)驗(yàn)室常用的液體研究等。實(shí)驗(yàn)室常用的液體搖勻，微生物、細(xì)菌和細(xì)胞搖勻，微生物、細(xì)菌和細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)。6. 恒溫氣浴搖床恒溫氣浴搖床SHK-99-SHK-99-型臺(tái)式空氣恒溫?fù)u床型臺(tái)

11、式空氣恒溫?fù)u床操作程序：操作程序：7. 超凈工作臺(tái)超凈工作臺(tái)使用及性能：使用及性能：超凈工作臺(tái)為分子生物超凈工作臺(tái)為分子生物學(xué)無(wú)菌操作提供可能，學(xué)無(wú)菌操作提供可能，分為垂直送風(fēng)和水平送分為垂直送風(fēng)和水平送風(fēng)兩種。風(fēng)兩種。 超凈臺(tái)由三相電機(jī)作鼓風(fēng)動(dòng)力，空氣通過由超凈臺(tái)由三相電機(jī)作鼓風(fēng)動(dòng)力，空氣通過由特制的微孔泡沫塑料片層疊合組成的特制的微孔泡沫塑料片層疊合組成的“超級(jí)濾清超級(jí)濾清器器”后吹送出來，形成連續(xù)不斷的無(wú)塵無(wú)菌的超后吹送出來，形成連續(xù)不斷的無(wú)塵無(wú)菌的超凈空氣層流，即所謂凈空氣層流，即所謂“高效的特殊空氣高效的特殊空氣”，能夠，能夠防止附近空氣可能襲擾而引起的污染，同時(shí)也不防止附近空氣可能

12、襲擾而引起的污染，同時(shí)也不會(huì)妨礙采用酒精燈或本生燈對(duì)器械等的灼燒消毒。會(huì)妨礙采用酒精燈或本生燈對(duì)器械等的灼燒消毒。工作人員就在這樣的無(wú)菌條件下操作，可以保持工作人員就在這樣的無(wú)菌條件下操作，可以保持無(wú)菌材料在轉(zhuǎn)移接種過程中不受污染。無(wú)菌材料在轉(zhuǎn)移接種過程中不受污染。 臺(tái)面清潔消毒臺(tái)面清潔消毒進(jìn)行無(wú)菌操作進(jìn)行無(wú)菌操作清理工作臺(tái)面清理工作臺(tái)面紫外消毒紫外消毒3030分鐘分鐘關(guān)閉紫外燈、電源關(guān)閉紫外燈、電源操作程序：操作程序：1 1）工作臺(tái)面上，不要存）工作臺(tái)面上，不要存 放不必要的物品，以放不必要的物品，以 保持工作區(qū)內(nèi)的潔凈保持工作區(qū)內(nèi)的潔凈 氣流不受干擾。氣流不受干擾。操作時(shí)一定注意關(guān)掉操作時(shí)

13、一定注意關(guān)掉 紫外燈，防止對(duì)實(shí)驗(yàn)紫外燈，防止對(duì)實(shí)驗(yàn) 人員造成傷害。人員造成傷害。注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)：8. 滅菌鍋滅菌鍋使用及性能：使用及性能： 細(xì)菌和細(xì)胞培養(yǎng)以及核酸等有關(guān)實(shí)驗(yàn)所用細(xì)菌和細(xì)胞培養(yǎng)以及核酸等有關(guān)實(shí)驗(yàn)所用的試劑、器皿及實(shí)驗(yàn)用具，應(yīng)嚴(yán)格滅菌；的試劑、器皿及實(shí)驗(yàn)用具，應(yīng)嚴(yán)格滅菌； 對(duì)于經(jīng)過導(dǎo)入對(duì)于經(jīng)過導(dǎo)入DNADNA重組分子的菌株，操作后重組分子的菌株，操作后必須進(jìn)行嚴(yán)格的高壓消毒滅活處理必須進(jìn)行嚴(yán)格的高壓消毒滅活處理 。1 1）開蓋：轉(zhuǎn)動(dòng)手輪，使鍋蓋離開密封圈，添加蒸餾水剛沒）開蓋：轉(zhuǎn)動(dòng)手輪，使鍋蓋離開密封圈，添加蒸餾水剛沒至板上；至板上；2 2）通電：打開控制面板上電源開關(guān)，若水位

14、低則紅燈亮；）通電：打開控制面板上電源開關(guān)，若水位低則紅燈亮； 3 3）堆放物品：需包扎的滅菌物品，體積不宜過大，各包裝）堆放物品：需包扎的滅菌物品，體積不宜過大，各包裝之間留有間隙，利于蒸汽穿透，提高滅菌效果；之間留有間隙，利于蒸汽穿透，提高滅菌效果； 3 3）密封高壓鍋：推橫梁入立柱內(nèi)，旋轉(zhuǎn)手輪，壓緊鍋蓋；）密封高壓鍋：推橫梁入立柱內(nèi)，旋轉(zhuǎn)手輪，壓緊鍋蓋；4 4）滅菌：）滅菌：121121， 20min20min；如為液體，液體必須裝在可耐；如為液體，液體必須裝在可耐高溫的玻璃器皿中，不宜超過高溫的玻璃器皿中，不宜超過2/32/3；5 5）滅菌結(jié)束，所有東西放入干燥箱干燥，排盡水氣。）滅菌結(jié)束，所有東西放入干燥箱干燥，排盡水氣。操作程序：操作程序：1 1）如是手動(dòng)的滅菌鍋，滅菌過程中，應(yīng)注意排）如是手動(dòng)的滅菌鍋，滅菌過程中，應(yīng)注意排 凈鍋內(nèi)冷空氣，否則會(huì)影響滅菌效果。凈鍋內(nèi)