分子生物學(xué)DNA結(jié)構(gòu)

1、會計學(xué)1分子生物學(xué)分子生物學(xué)DNA結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)第1頁/共202頁第2頁/共202頁第3頁/共202頁u堿基形成氫鍵的特性堿基形成氫鍵的特性第4頁/共202頁第5頁/共202頁第6頁/共202頁第7頁/共202頁繞DNA雙螺旋表面上出現(xiàn)的螺旋槽（溝），寬的溝稱為大溝，窄溝稱為小溝。大溝，小溝都是由于堿基對堆積和糖-磷酸骨架扭轉(zhuǎn)造成的。第8頁/共202頁1 主鏈:2 堿基對3 螺距4 大溝和小溝第9頁/共202頁第10頁/共202頁C-GT-A第11頁/共202頁8.5 11.7 7.5 5.7 Major GrooveMinor Groove第12頁/共202頁第13頁/共202頁第14頁/共202

2、頁第15頁/共202頁DNA的穩(wěn)定性第16頁/共202頁雙鏈越不穩(wěn)定第17頁/共202頁第18頁/共202頁第19頁/共202頁不存在大溝，小溝窄而深，并具有更多的負電荷密度。 Z-DNA的存在與基因的表達調(diào)控有關(guān)。第20頁/共202頁第21頁/共202頁n每每bpbp上升距離（上升距離（A A） 3.38 3.38 2.56 3.712.56 3.71n螺旋直徑（螺旋直徑（A A）19 23 19 23 1818第22頁/共202頁B-DNA是最常見的DNA構(gòu)象；A-DNA和Z-DNA可能具有不同的生物活性?，F(xiàn)已證明，左手Z-DNA（1979，Rich）只是右手螺旋結(jié)構(gòu)模型的一個補充和發(fā)展。

3、第23頁/共202頁第24頁/共202頁第25頁/共202頁生反應(yīng)并閱讀DNA鏈內(nèi)部儲藏的信息具有重要作用。第26頁/共202頁第27頁/共202頁一協(xié)同性過程。第28頁/共202頁Tm = 4（G+C）+2（A+T）第29頁/共202頁第30頁/共202頁Effect of Salt on Tm第31頁/共202頁第32頁/共202頁第33頁/共202頁第34頁/共202頁化學(xué)復(fù)雜長度：用化學(xué)方法測量的DNA的長度。重復(fù)頻率f=化學(xué)復(fù)雜長度/動力學(xué)復(fù)雜長度第35頁/共202頁component.3.2 Eukaryotic genomes have several sequence comp

4、onents第36頁/共202頁基因表達中起重要作用第37頁/共202頁 高度重復(fù)序列：拷貝數(shù)達到幾百個到幾百萬個。 Alu家族，B1家族衛(wèi)星DNA：A T含量很高的簡單高度重復(fù)序列。第38頁/共202頁第七節(jié)第七節(jié) DNA超螺旋和拓撲超螺旋和拓撲異構(gòu)酶異構(gòu)酶DNA的高級結(jié)構(gòu)1） 定義：指DNA雙螺旋進一步扭曲盤繞所形成的特定空間結(jié)構(gòu)。是一種比雙螺旋更高層次的空間構(gòu)象。2）主要形式：超螺旋結(jié)構(gòu)（正超螺旋和負超螺旋）第39頁/共202頁第40頁/共202頁第41頁/共202頁第42頁/共202頁第43頁/共202頁拓撲異構(gòu)酶or溴化乙錠拓撲異構(gòu)酶or溴化乙錠DNA扭曲與雙螺旋相同（擰緊）DNA扭

5、曲與雙螺旋相反（松開）負超螺旋松弛DNA正超螺旋第44頁/共202頁第45頁/共202頁第46頁/共202頁And there may also be significant lengths of DNA between genes. 第47頁/共202頁真核細胞DNA序列可被分為3類：1、不重復(fù)序列。 在單倍體基因組里，這些序列一般只有一個或幾個拷貝，它占DNA總量的10%80%。不重復(fù)序列長約7502 000bp，相當于一個結(jié)構(gòu)基因的長度。 蛋清蛋白、蠶的絲心蛋白、血紅蛋白和珠蛋白等都是單拷貝基因。第48頁/共202頁2 2、中度重復(fù)序列 這類序列的重復(fù)次數(shù)在10101 110104 4之

6、間，占總DNADNA的10%10%40%40%。 如小鼠中占20%20%，果蠅中占15%15%，各種rRNArRNA、tRNAtRNA以及某些結(jié)構(gòu)基因如組蛋白基因等都屬于這一類。第49頁/共202頁 非洲爪蟾這些基因（28S、5.8S、18S）及間隔區(qū)組成的單位在DNA鏈上串聯(lián)重復(fù)約5000次。第50頁/共202頁 在動物卵細胞形成過程中，rDNArDNA（就是可以轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生rRNA的基因 ）可進行幾千次不同比例的復(fù)制，產(chǎn)生2 210106 6個拷貝，使rDNArDNA占卵細胞DNADNA的75%75%，從而使該細胞能積累10101212個核糖體，以合成大量蛋白質(zhì)供細胞分裂之需。第51頁/共20

7、2頁3、高度重復(fù)序列衛(wèi)星DNA 只存在于真核生物中，占基因組的10%60%，由6100個堿基組成，在DNA鏈上串聯(lián)重復(fù)高達數(shù)百萬次。 衛(wèi)星DNA不轉(zhuǎn)錄，其功能不詳。它們是異染色質(zhì)（異染色質(zhì)在間期的復(fù)制晚于常染色質(zhì)）的成份，可能與染色體的穩(wěn)定性有關(guān)。第52頁/共202頁第53頁/共202頁The bacterial genome is a nucleoid with many supercoiled loops細菌的基因組是細菌的基因組是一個有許多超螺一個有許多超螺旋環(huán)的核酸旋環(huán)的核酸第54頁/共202頁第55頁/共202頁The bacterial genome is a nucleoid w

8、ith many supercoiled loops第56頁/共202頁第57頁/共202頁n重疊基因和基因內(nèi)基因第58頁/共202頁 原核生物基因組原核生物的基因組很小，大多只有一條染色體，且DNA含量少，如大腸桿菌DNA的相對分子質(zhì)量僅為4.6106bp，其完全伸展總長約為1.3mm，含4000多個基因。第59頁/共202頁 原核生物基因主要是單拷貝基因，只有很少數(shù)基因如rRNA基因以多拷貝形式存在； 整個染色體DNA幾乎全部由功能基因與調(diào)控序列所組成； 幾乎每個基因序列都與它所編碼的蛋白質(zhì)序列呈線性對應(yīng)狀態(tài)。第60頁/共202頁原核細胞DNA特點：1、結(jié)構(gòu)簡煉。 原核DNA分子的絕大部分

9、是用來編碼蛋白質(zhì)的，只有很小一部分控制基因表達的序列不轉(zhuǎn)錄。如在X174中不轉(zhuǎn)錄部分只占4%左右（217/5386),T4 DNA中占5.1%（282/5577)。第61頁/共202頁2、存在轉(zhuǎn)錄單元 原核生物DNA序列中功能相關(guān)的RNA和蛋白質(zhì)基因，往往叢集在基因組的一個或幾個特定部位，形成轉(zhuǎn)錄單元并轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生含多個mRNA的分子，稱為多順反子mRNA。第62頁/共202頁3、有重疊基因。 一些細菌和動物病毒存在重疊基因，同一段DNA能攜帶兩種不同蛋白質(zhì)的信息。 1973年，Weiner和Weber在研究一種大腸桿菌RNA病毒時發(fā)現(xiàn)，有兩個基因從同一起點開始翻譯，一個在400bp處結(jié)束，而在3

10、%的情況下，翻譯可一直進行下去直到800bp處碰到雙重終止信號時才停止。第63頁/共202頁1977年，Sanger正式發(fā)現(xiàn)了重疊基因： X174感染寄主后共合成9個蛋白質(zhì)，相對分子質(zhì)量約2.5105，相當于6 078個核苷酸，而病毒DNA本身只有5 375個核苷酸。 Sanger在弄清X174 DNA的全部核苷酸序列及各個基因的起迄位置和密碼數(shù)目以后發(fā)現(xiàn)，9個基因中有些是重疊的。第64頁/共202頁組蛋白： H1 H2A H2B H3 H4非組蛋白核小體DNA蛋白質(zhì)染色體真核生物染色體真核生物染色體的組成的組成端粒，著絲點和端粒，著絲點和DNADNA復(fù)制原點是復(fù)制原點是構(gòu)成染色體不可缺少的三

11、個要素構(gòu)成染色體不可缺少的三個要素第65頁/共202頁n組蛋白的可修飾性第66頁/共202頁不同種生物組蛋白的氨基酸組成十分相似。牛、豬、大鼠的H4氨基酸序列完全相同，與豌豆序列相比也只有兩個氨基酸的差異。第67頁/共202頁2、無組織特異性 僅發(fā)現(xiàn)鳥類、魚類及兩棲類紅細胞染色體不含H1而帶有H5，精細胞染色體的組蛋白是魚精蛋白這兩個例外。第68頁/共202頁3、肽鏈上氨基酸分布的不對稱性 堿性氨基酸集中分布在N端的半條鏈上，而大部分疏水基團都分布在C端。 堿性的半條鏈易與DNA的負電荷區(qū)結(jié)合，而另外半條鏈與其他組蛋白、非組蛋白結(jié)合。第69頁/共202頁4、組蛋白的修飾作用 如甲基化、乙基化、

12、磷酸化及ADP核糖基化等。修飾作用只發(fā)生在細胞周期的特定時間和組蛋白的特定位點上。 H3、H4的修飾作用較普遍。第70頁/共202頁5、 H5組蛋白的特殊性： 富含賴氨酸（24%）； 還富含16%丙氨酸、13%絲氨酸、11%精氨酸。第71頁/共202頁第72頁/共202頁 在細胞周期特定時間可發(fā)生甲基化、乙酰化、磷酸化和ADP核糖基化等。H3、H4修飾作用較普遍，H2B有乙?；饔?、H1有磷酸化作用。 所有這些修飾作用都有一個共同的特點，即降低組蛋白所攜帶的正電荷。這些組蛋白修飾的意義：一是改變?nèi)旧w的結(jié)構(gòu)，直接影響轉(zhuǎn)錄活性；二是核小體表面發(fā)生改變，使其他調(diào)控蛋白易于和染色質(zhì)相互接觸，從而間接

13、影響轉(zhuǎn)錄活性。 第73頁/共202頁或轉(zhuǎn)錄有關(guān)的酶或調(diào)節(jié)物質(zhì)或轉(zhuǎn)錄有關(guān)的酶或調(diào)節(jié)物質(zhì)（3 3）A24A24非組蛋白：與非組蛋白：與H2AH2A差不多大差不多大小，呈酸性，含谷小，呈酸性，含谷AAAA與天冬與天冬AAAA多，多，于核小體內(nèi)，功能不詳于核小體內(nèi)，功能不詳?shù)?4頁/共202頁1、定義：用于包裝染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)單位，是由DNA鏈纏繞一個組蛋白核心構(gòu)成的。 核心顆粒、連接區(qū)DNA第75頁/共202頁Limited Micrococcal Nulcease Digestion of Chromatin Generates a 200 bp Ladder第76頁/共202頁H1H1H1H1H1H

14、1Micrococcal Nuclease Digestion TimeMononucleosomeChromatosome染色質(zhì)小體Core ParticleLinker DNA (variable)Operational Definititions of Nucleosome ParticlesChromatin第77頁/共202頁6.8:140:11000:18000:1DNA double helixNucleosome (10 nm fiber)30 nm FiberLoops ILoops IIchromosome3、染色體的包裝第78頁/共202頁第79頁/共202頁第80頁/共

15、202頁X174 D-E-J-F-G-H mRNA 蛋白J、F、G H D EE.coli 色氨酸操縱子 9個順反子 9個酶1 1、原核生物基因組結(jié)構(gòu)特、原核生物基因組結(jié)構(gòu)特點點第81頁/共202頁第82頁/共202頁第83頁/共202頁第84頁/共202頁試題）第85頁/共202頁l生命的遺傳是染色體DNA自我復(fù)制的結(jié)果，主要是通過半保留復(fù)制來實現(xiàn)的，是一個以親代DNA分子為模板合成子代DNA鏈的過程。l親代DNA以自身分子為模板來合成新的分子，并分配到兩個子細胞中去，完成其遺傳信息載體的使命。lDNA分子由兩條多核苷酸鏈組成，兩條鏈上的堿基G與C配對，A與T配對；兩條鏈是互補的，一條鏈上的

16、核苷酸排列順序決定了另一條鏈上的核苷酸排列順序。lDNA的復(fù)制包括復(fù)制的起始、延伸和終止三個階段。第86頁/共202頁 DNA replication is semi-conservative, one strand serves as the template for the second strand. Furthermore, DNA replication only occurs at a specific step in the cell cycle. The following table describes the cell cycle for a hypothetical ce

17、ll with a 24 hr cycle. Stage Activity Duration G1 Growth and increase in cell size 10 hr S DNA synthesis 8 hr G2 Post-DNA synthesis 5 hr M Mitosis 1 hr 1.DNA template 2.Free 3 -OH group DNA replication has two requirements that must be met:第87頁/共202頁第88頁/共202頁第89頁/共202頁第90頁/共202頁“Heavy” DNA“Hybrid”

18、DNA “l(fā)ight” DNA “Hybrid” DNA（1958 Meselson 和Stahl ）：第91頁/共202頁第92頁/共202頁RNA作為合成DNA的引物（Primer)。實質(zhì)是以DNA為模板的RNA聚合酶。第93頁/共202頁第94頁/共202頁性質(zhì) 聚合酶聚合酶聚合酶3 5 外切活性+ + + +5 3 外切活性+-5 3 聚合活性+ 中+ 很低+ 很高新生鏈合成-+主要是對主要是對DNADNA損傷的修復(fù)；損傷的修復(fù)；以及在以及在DNADNA復(fù)復(fù)制時切除制時切除RNARNA引物并填補引物并填補其留下的空其留下的空隙。隙。修復(fù)紫修復(fù)紫外光引外光引起的起的DNADNA損損傷傷D

19、NA DNA 復(fù)制復(fù)制的主要聚的主要聚合酶，還合酶，還具有具有3 3-5-5外切酶的外切酶的校對功能，校對功能，提高提高DNADNA復(fù)復(fù)制的保真制的保真性性第95頁/共202頁引引物物合合成成修修復(fù)復(fù)作作用用線粒體線粒體DNADNA的復(fù)制的復(fù)制核核DNADNA的復(fù)的復(fù)制制復(fù)制復(fù)制修復(fù)修復(fù)第96頁/共202頁有35和53外切活性）。第97頁/共202頁3535OHOH P P第98頁/共202頁第99頁/共202頁reprep蛋白沿蛋白沿3 3 5 5移動，而解移動，而解螺旋酶螺旋酶I I、IIII、IIIIII沿沿5 5 3 3移移動。動。第100頁/共202頁第101頁/共202頁第102頁

20、/共202頁第103頁/共202頁lDNA的復(fù)制有特定的起始位點，叫做復(fù)制原點。 ori(或o）、富含A、T的區(qū)段。l復(fù)制起點是固定的，表現(xiàn)為固定的序列，并識別參與復(fù)制起始的特殊蛋白質(zhì)。 基本概念：第104頁/共202頁 從復(fù)制原點到終點，組成一個復(fù)制單位，叫復(fù)制子 復(fù)制時，解鏈酶等先將DNA的一段雙鏈解開，形成復(fù)制點，這個復(fù)制點的形狀象一個叉子，故稱為復(fù)制叉復(fù)制叉復(fù)制叉復(fù)制叉復(fù)制叉第105頁/共202頁單單起點、起點、雙雙向等速向等速多多起點、起點、雙雙向等速向等速第106頁/共202頁Electron Microscopy of replicating DNA revealsreplica

21、ting bubbles. How does one provebidirectional fork movement?DNA的復(fù)制第107頁/共202頁Pulse with radiolabeled nucleotide; chase with coldnucleotide. Then do autoradiography第108頁/共202頁第109頁/共202頁大約20個DnaA蛋白在ATP的作用下與oriC處的4個9bp保守序列相結(jié)合第110頁/共202頁在HU蛋白和ATP的共同作用下,DNA復(fù)制起始復(fù)合物使3個13bp直接重復(fù)序列變性,形成開鏈第111頁/共202頁解鏈酶六體分別與單

22、鏈DNA相結(jié)合(需DnaC幫助),進一步解開DNA雙鏈第112頁/共202頁第113頁/共202頁2 2、RNARNA引物的合成引物的合成DnaB蛋白活化引物合成酶，引發(fā)RNA引物的合成。引物長度約為幾個至10個核苷酸，第114頁/共202頁后鏈。第115頁/共202頁第116頁/共202頁第117頁/共202頁 （復(fù)制終止）在DNA聚合酶催化下切除RNA引物；留下的空隙由DNA聚合酶催化合成一段DNA填補上；在DNA連接酶作用下，連接相鄰的DNA鏈第118頁/共202頁 a、終止序列終止序列 E.coli E.coli 有兩個終止區(qū)域，分有兩個終止區(qū)域，分別結(jié)合專一性的終止蛋白別結(jié)合專一性的

23、終止蛋白 序列一：序列一：terE terD terE terD terAterA 序列二：序列二：terF terB terCterF terB terC 每個區(qū)域只對一個方向的復(fù)每個區(qū)域只對一個方向的復(fù)制叉起作用制叉起作用 第119頁/共202頁第120頁/共202頁 b b、專一性終止蛋白、專一性終止蛋白 E.coli E.coli 中由中由 tus gene tus gene 編碼編碼 通過抑制通過抑制DNADNA螺旋酶而發(fā)揮螺旋酶而發(fā)揮終止作用終止作用ter第121頁/共202頁第122頁/共202頁第123頁/共202頁第124頁/共202頁 第125頁/共202頁（如端粒的復(fù)制）

24、（如端粒的復(fù)制）第126頁/共202頁?二聚二聚體體3-OHATCGTAGCATCGTAGC3-OHT T7 7噬噬菌菌體體的的末末端端復(fù)復(fù)制制專一性專一性核酸內(nèi)核酸內(nèi)切酶切酶第127頁/共202頁第128頁/共202頁 第129頁/共202頁腺病毒腺病毒 DNA 復(fù)制起始復(fù)制起始G第130頁/共202頁第131頁/共202頁IRIR長的長的發(fā)夾發(fā)夾結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)復(fù)制起始復(fù)不需復(fù)制起始復(fù)不需引物引物,避免避免5-end shortent 第132頁/共202頁滾環(huán)復(fù)制第133頁/共202頁單向復(fù)制的特殊方式如：動物線粒體DNA第134頁/共202頁n真核生物有多種DNA聚合酶。組蛋白八聚體是以全保守

25、的方式傳給子代分子的第135頁/共202頁種蛋白質(zhì)組成的復(fù)合物。第136頁/共202頁 真核生物染色體真核生物染色體 DNA末端補齊模末端補齊模式式 (1) 端粒端粒DNA (Telomer)(Telomer) TTGGGG(T2G4)序列高度重復(fù)的序列高度重復(fù)的末端末端 5 TTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGG 3 (富含富含 G 鏈鏈) 3 AACCCC AACCCC AACCCC 5 (富含富含 C 鏈鏈) 第137頁/共202頁（2） 端粒酶（端粒酶（ Telomerase）1985. Carol Greider & Blackburn, 1986. Gottchl

26、ing Gottchling 四膜蟲四膜蟲 端粒酶端粒酶 （ telomerase ）將）將T2G4 末末端重復(fù)延伸端重復(fù)延伸 游撲蟲游撲蟲 TelomeraseTelomerase = RNA CAAAACCCC 鏈鏈 + 末端結(jié)合蛋白末端結(jié)合蛋白 （TBP） 端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶a、核蛋白（、核蛋白（ ribonucleoprotein RNP）b、含約長、含約長150NT的的RNA，其中含，其中含 15 拷貝的拷貝的CxAy重復(fù)序列，重復(fù)序列， 是合成端粒是合成端粒T2G4的模板的模板c、延長的、延長的3-T2G4端（端（一段一段cDNA）作為）作為5-端端DNA合成的模板合成的

27、模板第138頁/共202頁（3） 補齊過程補齊過程 通過通過TG鏈的回鏈的回折形成折形成 發(fā)夾結(jié)構(gòu)（發(fā)夾結(jié)構(gòu)（GG氫鍵）氫鍵） 尺蠖模尺蠖模型型 實現(xiàn)端粒實現(xiàn)端粒酶位置的酶位置的 調(diào)整調(diào)整第139頁/共202頁 G G hoogsteen 氫鍵氫鍵 三螺旋三螺旋DNA G鏈鏈 T2G4-TTGGGG TTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGG C鏈鏈-A2C4- G鏈鏈 T2G4-TTGGGG t t g g g g t t gC鏈鏈-A2C4- AACCCCAA g g g g t tgggPrimaseAACCCCAACCCCAACCCCAACCCCAACCCDNA polorG鏈鏈

28、 T2G4-TTGGGG TTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGG C鏈鏈-A2C4- 第140頁/共202頁 第141頁/共202頁（華中科技大學(xué)2004年生物化學(xué)與分子生物學(xué)碩士研究生入學(xué)試題）第142頁/共202頁傷的系統(tǒng)。第143頁/共202頁第144頁/共202頁錯配修復(fù)恢復(fù)錯配堿基切除修復(fù) 切除突變的堿基核苷酸切除修復(fù)修復(fù)被破壞的DNADNA直接修復(fù) 修復(fù)嘧啶二聚體或甲基化DNA易錯修復(fù)應(yīng)急措施第145頁/共202頁第146頁/共202頁發(fā)現(xiàn)錯配堿基在水解ATP的作用下，MutS， MutL與堿基錯配點的DNA雙鏈結(jié)合MutS-MutL在DNA雙鏈上移動，發(fā)現(xiàn)甲基化DNA后

29、由MutH切開非甲基化的子鏈第147頁/共202頁錯配堿基位于切口3下游端，錯配堿基位于切口5上游端，第148頁/共202頁第149頁/共202頁第150頁/共202頁第151頁/共202頁糖苷水解酶識別改變了的堿基，把堿基糖苷水解酶識別改變了的堿基，把堿基從從N-N- -糖苷鍵處切下來，在糖苷鍵處切下來，在DNADNA鏈上鏈上形成去嘌呤或去嘧啶位點，統(tǒng)稱為形成去嘌呤或去嘧啶位點，統(tǒng)稱為APAP位位點點。第152頁/共202頁由AP核酸內(nèi)切酶將受損核苷酸的糖苷-磷酸鍵切開第153頁/共202頁。DNA連接酶連接利用DNA聚合酶I切除損傷部位，補上核苷酸第154頁/共202頁4）DNA連接酶將切

30、口補平第155頁/共202頁識別損傷部位損傷的兩邊切除幾個核苷酸DNA 聚合酶以母鏈為模板復(fù)制合成新子鏈DNA連接酶將切口補平第156頁/共202頁在DNA光解酶的作用下將環(huán)丁烷胸腺嘧啶二體和6-4光化物還原成為單體甲基轉(zhuǎn)移酶甲基轉(zhuǎn)移酶使O6-甲基鳥嘌呤脫甲基生成鳥嘌呤，防止G-T配對第157頁/共202頁第158頁/共202頁第159頁/共202頁第160頁/共202頁 LexA蛋白的作用是一種阻遏蛋白,結(jié)合于SOS系統(tǒng)中各基因的操縱子上,使得這些基因不能產(chǎn)生轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物第161頁/共202頁遏作用第162頁/共202頁第163頁/共202頁都含有20bp的LexA結(jié)合位點,稱為SOS框(SOS box)第164頁/共202頁第165頁/共202頁第166頁/共202頁世代每細胞10-6-10-10之間。第167頁/共202頁轉(zhuǎn)座酶的基因。第168頁/共202頁第169頁/共202頁第170頁/共202頁轉(zhuǎn)座酶的含量是轉(zhuǎn)座作用的限制因子。第171頁/共202頁Ds是Ac轉(zhuǎn)座子的缺失突變體，Ac編碼轉(zhuǎn)座酶，能自主轉(zhuǎn)座，Ds不能自主轉(zhuǎn)座，但有Ac存在時，能活化Ds使其轉(zhuǎn)座。第172頁/共202頁第173頁/共202頁第174頁/共202頁第175頁/共202頁第176頁/共202頁果