梅毒的實驗室檢測與技術(shù)規(guī)范PPT課件

1、梅毒的實驗室檢查與技術(shù)規(guī)范梅毒的實驗室檢查與技術(shù)規(guī)范 朱穗蘭2013年3月2日主要內(nèi)容主要內(nèi)容u梅毒概述梅毒概述u梅毒血清學(xué)檢測方法梅毒血清學(xué)檢測方法u梅毒檢測技術(shù)規(guī)范梅毒檢測技術(shù)規(guī)范梅毒概述梅毒概述（一）（一） 性接觸是主要的傳染途徑l 未經(jīng)治療的患者在感染后的1年內(nèi)最具有傳染性l 隨著病期的延長，傳染性越來越小l 到感染后2年，通過性接觸一般無傳染性 母 嬰 傳 播 在妊娠7周時，梅毒螺旋體即可通過胎盤傳染未經(jīng)治療者，雖已無性傳播（病期2年），但妊娠時仍可傳染給胎兒,病期越長，傳染性越小; 梅毒概述梅毒概述（二）（二）n 一期梅毒一期梅毒硬下疳和(或)腹股溝淋巴結(jié)腫大n 二期梅毒二期梅毒

2、可有一期梅毒史，病期在2年以內(nèi)有多形性皮疹、扁平濕疣等n 三期（晚期）梅毒三期（晚期）梅毒可有一期或二期梅毒史，病期在2年以上皮膚黏膜損害等，包括神經(jīng)梅毒、心血管梅毒n 隱性（潛伏）梅毒隱性（潛伏）梅毒 早期：病期在2年以內(nèi)；晚期：病期在2年以上。無任何梅毒性的癥狀和體征n 胎傳（先天）梅毒胎傳（先天）梅毒早期：在2歲前發(fā)生；晚期：在2歲以后發(fā)病。胎傳隱性梅毒：無臨床表現(xiàn)梅毒概述梅毒概述（三）（三）疑似病例、確證病例診斷依據(jù)：疑似病例、確證病例診斷依據(jù)： 病史 癥狀 實驗室檢查梅毒的實驗室檢查結(jié)果對診斷有決定性意義梅毒實驗室檢測技術(shù)梅毒實驗室檢測技術(shù) 病原學(xué)檢測病原學(xué)檢測 血清學(xué)檢測血清學(xué)檢測

3、梅毒血清學(xué)檢測方法梅毒血清學(xué)檢測方法梅毒血清學(xué)檢測分類梅毒血清學(xué)檢測分類(1) 非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗 （非特異性梅毒抗體）(2) 梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗 （特異性梅毒抗體）兩類方法。非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗l原理原理n人體感染了梅毒螺旋體后，組織受到破壞，釋放出來的一種類脂成分，與梅毒螺旋體結(jié)合形成完全抗原，刺激機(jī)體在3周-4周產(chǎn)生類脂質(zhì)抗體（反應(yīng)素）。主要是IgM和IgG混合抗體。l抗體的作用抗體的作用n無保護(hù)作用，治療監(jiān)測。未經(jīng)治療的病人，其血清內(nèi)的反應(yīng)素可長期存在。經(jīng)正規(guī)治療后，反應(yīng)素可以逐漸減少至轉(zhuǎn)為陰性。非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗非梅毒螺旋體抗原血

4、清學(xué)試驗l所有非梅毒螺旋體抗原血清試驗的抗原基本成分都是一樣l方法包括： （1）快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗 (RPR) （2）甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST） （3）性病研究實驗室試驗 (VDRL)等。l基本成分是心磷脂 卵磷脂和膽固醇l抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物，凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉眼所見l上述方法的敏感性和特異性都基本相似 試驗特點試驗特點n 原理和成分與試驗相同n 血清不需要滅活n 不需要顯微鏡觀測結(jié)果n 可作定量試驗n 有現(xiàn)成的試劑盒攜帶方便n 操作簡單n 價格便宜操作要點操作要點1.1.儀器：儀器：水平旋轉(zhuǎn)儀。水平旋轉(zhuǎn)儀。2.2.定性實驗定性實驗n加樣：吸取50ul血清(漿)放在卡

5、片圈中，并均勻地涂布在整個圈內(nèi)n加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號針頭加1滴抗原n反應(yīng)：將卡片置水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8分鐘，立即在亮光下觀察結(jié)果3. 3. 定量試驗定量試驗n稀釋夜準(zhǔn)備：在圈內(nèi)加入50uL生理鹽水（根據(jù)需要確定稀釋度），勿將鹽水涂開。n加樣：吸取50uL血清（漿）與各圈中鹽 水作系列稀釋，并涂布整個圈內(nèi)。n下同定性試驗。非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗結(jié)果判斷非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗結(jié)果判斷 RPR TRUST非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗臨床意義非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗臨床意義u早期梅毒硬下疳出現(xiàn)1周-2周后，血清可呈陽性。u經(jīng)治療后血清滴度可下降并轉(zhuǎn)陰性，故可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感

6、染的指征。 為什么要做定量檢測？非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗臨床意義非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗臨床意義u 一期梅毒1年后轉(zhuǎn)為陰性u 二期梅毒2年后轉(zhuǎn)為陰性。u 晚期梅毒 治療后血清滴度下降緩慢，2年后約50%病人血清反應(yīng)仍為陽性。TRUST結(jié)果解釋示意圖 假陽性問題假陽性問題 假陽性：非梅毒患者的血清反應(yīng)呈陽性技術(shù)性假陽性技術(shù)性假陽性 由于標(biāo)本的保存不當(dāng)（如細(xì)胞污染或溶血）、試劑質(zhì)量差或過期、或?qū)嶒炇也僮麇e誤所造成。生物學(xué)假陽性生物學(xué)假陽性 是由于患者有其他疾病或生理狀態(tài)發(fā)生變化，使梅毒血清試驗出現(xiàn)陽性某些疾?。航Y(jié)核、瘧疾、肝病、紅斑狼瘡、流感、肺炎、類風(fēng)某些疾?。航Y(jié)核、瘧疾、肝病、紅斑狼瘡、流

7、感、肺炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性心臟病、風(fēng)疹、系統(tǒng)性硬化癥等，疾病發(fā)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性心臟病、風(fēng)疹、系統(tǒng)性硬化癥等，疾病發(fā)展過程中釋放心磷脂到血液中呈假陽性。老年人。展過程中釋放心磷脂到血液中呈假陽性。老年人。生理機(jī)能發(fā)生變化：少數(shù)孕婦也可發(fā)生生物學(xué)假陽性。生理機(jī)能發(fā)生變化：少數(shù)孕婦也可發(fā)生生物學(xué)假陽性。梅毒假陽性反應(yīng)的處理梅毒假陽性反應(yīng)的處理u技術(shù)性假陽性反應(yīng)一般是由于操作錯誤引起的假陽性反應(yīng)，經(jīng)過重復(fù)試驗即可除外。u 對生物學(xué)假陽性反應(yīng)，應(yīng)做TPHA（TPPA）等試驗進(jìn)行排除。前帶現(xiàn)象l指非梅毒螺旋體抗原血清試驗中，有時血清中存在高濃度的抗體時出現(xiàn)的弱陽性、不典型或陰性反應(yīng)的結(jié)果，而臨床上

8、又象二期梅毒，此時將血清稀釋后再進(jìn)行試驗，出現(xiàn)了陽性的結(jié)果，該現(xiàn)象稱為前帶現(xiàn)象。l處理：處理：將血清稀釋后再進(jìn)行試驗。耐血清性（血清固定）l指經(jīng)抗梅毒治療后，非梅毒螺旋體抗原血清試驗在一定時期內(nèi)不陰轉(zhuǎn)。早期的耐血清性常與治療量不足或不規(guī)則治療、復(fù)發(fā)、再感染或有神經(jīng)系統(tǒng)梅毒等因素有關(guān)。梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗 梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗方法梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗方法u 梅毒螺旋體顆粒凝集試驗 (TPPA)u 梅毒螺旋體血球凝集試驗 (TPHA)u 梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）u 梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測 (RT)u 熒光螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS）u 化

9、學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）u 梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（WB） TPPAuTPPA試驗用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒，此致敏顆粒與人血清中的抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生可見的凝集反應(yīng)，具有較高的敏感性和特異性。uTPPA是目前WHO認(rèn)可的梅毒抗原血清學(xué)試驗的“金標(biāo)準(zhǔn)”，常用于新方法、新試劑評價的參照標(biāo)準(zhǔn)。TPPA(TPHA)TPPA(TPHA)試驗原理示意圖試驗原理示意圖 梅毒螺旋體抗原血清試驗的臨床意義梅毒螺旋體抗原血清試驗的臨床意義u一般情況下，一旦梅毒患者梅毒螺旋體抗原血清試驗呈陽性，即使經(jīng)過正規(guī)有效治療治，仍將終身陽性。所以TPPA等試驗不能作為療效觀察的指標(biāo)。u作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗初

10、篩陽性標(biāo)本的確證試驗。uTPPA等陽性不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，應(yīng)結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清試驗結(jié)果進(jìn)行診斷。TPPA結(jié)果解釋示意圖 梅毒血清學(xué)試驗結(jié)果解釋梅毒血清學(xué)試驗結(jié)果解釋 梅毒檢測技術(shù)規(guī)范簡介全國梅毒檢測技術(shù)規(guī)范l第一章 梅毒檢測樣品的采集和處理l第二章 梅毒血清學(xué)檢測l第三章 梅毒病原體顯微鏡檢測l第四章 梅毒病原體核酸檢測l第五章 實驗室生物安全l第六章 梅毒檢測實驗室質(zhì)量管理第一章 樣品的采集和處理 血清、血漿、全血及腦脊液血清、血漿、全血及腦脊液: : 梅毒血清學(xué)檢測或核酸檢測梅毒血清學(xué)檢測或核酸檢測 皮損部位組織液、淋巴穿刺液皮損部位組織液、淋巴穿刺液: : 梅毒病原體檢測或

11、核酸檢測。梅毒病原體檢測或核酸檢測。梅毒血清學(xué)試驗適用范圍 第二章 梅毒血清學(xué)檢測 檢測目的檢測目的: :臨床診斷、血液篩查、流行病學(xué)監(jiān)測臨床診斷、血液篩查、流行病學(xué)監(jiān)測 以臨床診斷為目的的檢測是為了確定梅毒感染的狀況。以臨床診斷為目的的檢測是為了確定梅毒感染的狀況。 以血液篩查為目的的檢測是為了防止梅毒的經(jīng)血傳播。以血液篩查為目的的檢測是為了防止梅毒的經(jīng)血傳播。 以流行病學(xué)監(jiān)測為目的的檢測是為了調(diào)查梅毒血清學(xué)以流行病學(xué)監(jiān)測為目的的檢測是為了調(diào)查梅毒血清學(xué)感染率和發(fā)病率。感染率和發(fā)病率。 梅毒實驗室檢測策略選擇u根據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略。u可采用任何一類梅毒血清學(xué)檢測方法作為篩查試驗。以

12、臨床診斷為目的檢測策略一以臨床診斷為目的檢測策略一 以臨床診斷為目的檢測策略二以臨床診斷為目的檢測策略二 策略一和策略二比較策略一和策略二比較 第三章 梅毒體病原學(xué)檢測檢測方法檢測方法 暗視野顯微鏡檢查暗視野顯微鏡檢查 鍍銀染色檢查鍍銀染色檢查第四章 梅毒核酸檢測n可對血漿、血清、皮損部位組織液、淋巴穿刺液及腦脊液可對血漿、血清、皮損部位組織液、淋巴穿刺液及腦脊液等標(biāo)本的梅毒螺旋體核酸檢測等標(biāo)本的梅毒螺旋體核酸檢測n在早期梅毒、神經(jīng)梅毒和先天梅毒等診斷，以及螺旋體現(xiàn)在早期梅毒、神經(jīng)梅毒和先天梅毒等診斷，以及螺旋體現(xiàn)癥感染和既往感染鑒別診斷中具有一定的價值癥感染和既往感染鑒別診斷中具有一定的價值

13、n可應(yīng)用于梅毒螺旋體的耐藥性監(jiān)測、菌株流行病學(xué)分型?？蓱?yīng)用于梅毒螺旋體的耐藥性監(jiān)測、菌株流行病學(xué)分型。第五章 實驗室生物安全n梅毒的生物危害梅毒的生物危害n 梅毒螺旋體屬第三類病原微生物，一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴(yán)重危害，傳播風(fēng)險有限，實驗室感染后很少引起嚴(yán)重疾病，是有有效治療和預(yù)防方法的致病微生物 n梅毒相關(guān)檢測的生物安全級別梅毒相關(guān)檢測的生物安全級別n 為了保證安全，對臨床和現(xiàn)場未知樣本的梅毒血清學(xué)檢測應(yīng)在符合級生物安全實驗室（BSL-2）要求的實驗室中進(jìn)行。如有艾滋病檢測實驗室，可以在艾滋病抗體檢測實驗室中進(jìn)行。第六章 實驗室質(zhì)量管理質(zhì)量保證質(zhì)量保證質(zhì)量評估質(zhì)量評估試劑評價試劑

14、評價質(zhì)量保證檢測方法和試劑的選擇檢測方法和試劑的選擇 用于臨床診斷的檢測方法應(yīng)使用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督用于臨床診斷的檢測方法應(yīng)使用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)的試劑，應(yīng)選擇敏感性高、特異性好的試管理局注冊批準(zhǔn)的試劑，應(yīng)選擇敏感性高、特異性好的試劑。性病參比實驗室和省級性病中心實驗室應(yīng)定期組織開劑。性病參比實驗室和省級性病中心實驗室應(yīng)定期組織開展梅毒診斷試劑的臨床質(zhì)量評價和新方法與技術(shù)的評估展梅毒診斷試劑的臨床質(zhì)量評價和新方法與技術(shù)的評估。 質(zhì)量評價u所有梅毒檢測實驗室應(yīng)參加外部質(zhì)量評價所有梅毒檢測實驗室應(yīng)參加外部質(zhì)量評價u省級中心實驗室應(yīng)參加國家級職能工作考核和省級中心實驗室應(yīng)參加國家級職能工作考核和PTPTu其他實驗室應(yīng)參加省級職能工作考核和其他實驗室應(yīng)參加省級職能工作考核和PTPT。質(zhì)量評價u考評組織單