ABO血型鑒定與血涂片觀察 2014-3

1、鄒方東 教授助教：陽(yáng)敏 課程QQ群： 299535378課件共享：QQ群、課程中心網(wǎng)站實(shí)驗(yàn)報(bào)告提交時(shí)間：5月8日10時(shí)16時(shí) 地點(diǎn)：第一實(shí)驗(yàn)大樓C102期末考試時(shí)間：課堂通知、網(wǎng)站、QQ群 （一般是最后一次課之后的一兩周）注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 掌握光學(xué)顯微鏡的使用方法；2. 了解人體血液以及輸血相關(guān)常識(shí)；3. 掌握ABO組成以及分型原則；4. 初步掌握血涂片制片的方法和練習(xí)光學(xué)顯微鏡的常規(guī)使用。第一節(jié) 顯微鏡的使用光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造顯微鏡的正確使用方法顯微鏡的保養(yǎng)油鏡的使用與清潔（了解）目鏡目鏡物鏡物鏡載物臺(tái)載物臺(tái)焦距粗焦距粗 微調(diào)螺旋微調(diào)螺旋集光鏡集光鏡聚光鏡聚光鏡視度調(diào)節(jié)圈視度調(diào)節(jié)圈瞳距調(diào)節(jié)

2、拉板瞳距調(diào)節(jié)拉板物鏡轉(zhuǎn)換器物鏡轉(zhuǎn)換器光源亮度調(diào)節(jié)手輪光源亮度調(diào)節(jié)手輪載物臺(tái)左右推進(jìn)螺旋載物臺(tái)左右推進(jìn)螺旋顯 微 鏡 的 結(jié) 構(gòu)操作步驟（一）1、將凳子調(diào)節(jié)到合適的高度，保持桌面整潔；2、手握鏡柱將顯微鏡輕輕挪出，目鏡筒與桌邊對(duì)齊，將鏡罩拿下放于抽屜中，插上電源；3、調(diào)節(jié)物鏡轉(zhuǎn)換器膠輪到4x物鏡（最短物鏡），緩慢旋轉(zhuǎn)粗準(zhǔn)焦螺旋，將載物臺(tái)調(diào)到最低；4、打開(kāi)集光燈電源，將燈光調(diào)節(jié)到適當(dāng)亮度，將集光鏡調(diào)節(jié)到最高；5、將目鏡調(diào)節(jié)到合適的瞳距，調(diào)節(jié)聚光鏡輪找到白亮的視野；操作步驟（二）6、將青蛙血涂片正確放置于載物臺(tái)，將涂有血細(xì)胞的一面朝上，用玻片夾固定；7、緩慢調(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺旋，將載物臺(tái)調(diào)到最高；8、雙眼

3、從目鏡觀察視野，將兩個(gè)視野合并為一個(gè)。緩緩調(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺旋使載物臺(tái)下降，找到物像，配合細(xì)準(zhǔn)焦螺旋將物像調(diào)節(jié)清晰；9、使用物鏡轉(zhuǎn)換器膠輪，將10X或40X目鏡調(diào)節(jié)到位，配合粗細(xì)準(zhǔn)焦螺旋和聚光鏡、集光鏡亮度將視野調(diào)節(jié)清晰；注意玻片的正確放置！操作步驟（三）10、將物鏡調(diào)到4x，載物臺(tái)調(diào)低，取出玻片放于適當(dāng)位置，用擦鏡紙輕輕擦拭用過(guò)的目鏡與物鏡；11、關(guān)閉聚光燈，拔出插頭，將載物臺(tái)調(diào)高后將線纜輕輕纏繞在顯微鏡柱上；12、將目鏡調(diào)節(jié)拉板調(diào)回，套上鏡罩，將顯微鏡輕輕放回。第二節(jié) ABO血型鑒定與血涂片制作ABO血型鑒定原理與鑒定方法血涂片制作與觀察紅細(xì)胞、白細(xì)胞的識(shí)別（照相）一次性醫(yī)用采血針酒精消毒棉球抗

4、A血清(藍(lán)色)，抗B血清(黃色)瑞氏染液載玻片，消毒牙簽顯微鏡(帶油鏡，香柏油，擦鏡紙，洗鏡液)紅細(xì)胞紅細(xì)胞 抗原抗原（表型）（表型）血型鑒定原理1、抗A血清含有使A型血凝集的抗體（A凝集素）， 抗B血清含有使B型血凝集的抗體（B凝集素）；2、A型血：抗A血清凝集、抗B血清不凝集 B型血：抗A血清不凝集、抗B血清凝集 O型血：抗A血清、抗B血清均不凝集 AB型血：抗A血清、抗B血清均凝集 凝集凝集血漿 水、糖類(lèi)、脂類(lèi)、蛋白質(zhì)和鉀鹽、鈉鹽、鈣鹽的混合物。 紅細(xì)胞白細(xì)胞血小板血漿 55%紅細(xì)胞 45%白細(xì)胞 0.1%血小板 0.17%血細(xì)胞的組成小淋巴細(xì)胞嗜曙紅細(xì)胞單核細(xì)胞血小板嗜中性粒細(xì)胞嗜堿性

5、細(xì)胞巨淋巴細(xì)胞紅細(xì)胞實(shí) 驗(yàn) 步 驟 注意：有嚴(yán)重暈血史的同學(xué)請(qǐng)不要參加實(shí)驗(yàn)，可到休息室休息，待放學(xué)后離開(kāi)！準(zhǔn)備（1）取三張載玻片，用吸水紙將兩面擦干，放于白紙上；（2）取一張玻片，如圖在兩端分別滴上抗A、抗B血清，在白紙上標(biāo)明；（3）取未用過(guò)的采血針，檢查包裝是否破損、是否干燥，檢查牙簽；A B第1張：血型鑒定第2張：血涂片第3張：血涂片推片采血（4）用酒精棉球?qū)⒆笫譄o(wú)名指消毒，以穿刺法，用一次性醫(yī)用采血針無(wú)名指指腹迅速扎一下，取血；注意：采血針、牙簽、棉花等請(qǐng)勿混用，以免造成交叉感染，用完即棄入垃圾桶中！酒精棉球消毒扎取無(wú)名指采血（5）用右手自無(wú)名指指腹下端擠壓，流出適量血液；（6）用第一根

6、牙簽蘸取少許血液混于抗A血清，攪拌混勻，將牙簽放入垃圾桶；再用另一根牙簽蘸取血液混于抗B血清（切記換牙簽?。?；（7）將此玻片靜置與空閑處，觀察血液是否凝集；血型鑒定請(qǐng)問(wèn)：上圖是什么血型？血型鑒定（8）取末捎血一滴置于玻片的一端，左手持，載片上保留下一薄層血膜載玻片，右手以邊緣平滑的推片的一端從血滴前方后移接觸血滴，待血滴即沿推片散開(kāi)。然后使推片與載片夾角保持30-45度平穩(wěn)地向前移動(dòng)；血涂片制作血涂片制作推推 片片 動(dòng)動(dòng) 作作(9) 血涂片制成后可手持玻片在空氣中揮動(dòng)，使血膜迅速干燥，以免血細(xì)胞皺縮；(10) 將干燥后的血膜平放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，加瑞氏染液2-3滴,使覆蓋整個(gè)血膜，固定5-10min

7、，注意不要讓染液干掉，如若有干燥請(qǐng)覆以少量清水；血涂片制作 (11)用流水小心沖去染液，待自然干燥后或用吸水紙吸干，即可置血涂片于顯微鏡下進(jìn)行鏡檢、照相；(12)鏡檢完畢請(qǐng)將載玻片放入垃圾桶，將顯微鏡收好、桌面擦拭干凈。血涂片制作請(qǐng)從低倍鏡到高倍鏡進(jìn)行鏡檢，并用手機(jī)或相機(jī)拍照，將照片貼在實(shí)驗(yàn)報(bào)告上。血細(xì)胞的組成小淋巴細(xì)胞嗜曙紅細(xì)胞單核細(xì)胞血小板嗜中性粒細(xì)胞嗜堿性細(xì)胞巨淋巴細(xì)胞紅細(xì)胞1. 一張良好的血片,要求厚薄適宜,頭體尾分明,分布均勻,邊緣整齊, 兩側(cè)留有空隙；2.血片制好后最好立即固定染色,以免細(xì)胞變化影響觀察；3.血膜未干透,細(xì)胞尚未牢固附在玻片上,在染色過(guò)程中容易脫落,因此血膜必需充分干燥；注 意 事 項(xiàng)4. 染液不可過(guò)少，以防蒸發(fā)干燥，染料沉著于血片上難沖洗干凈；5. 沖洗時(shí)應(yīng)用流水將染液沖去，不能先倒掉染液，以免染料沉著于血片上；6. 染色時(shí)應(yīng)注意保護(hù)血膜尾部細(xì)胞，不能劃掉，因?yàn)轶w積較大細(xì)胞常在此處出現(xiàn)。注 意 事 項(xiàng)1. 通過(guò)凝集反應(yīng)判斷自身血型；2. 從顯微鏡下找到白細(xì)胞，并由老師檢查；3. 完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告。 實(shí)驗(yàn)報(bào)告包括：實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、?shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)步驟、實(shí)驗(yàn)結(jié)果、討論、思考題、引用文獻(xiàn)等 實(shí)驗(yàn)報(bào)告于最后一次實(shí)驗(yàn)完成后，裝訂成冊(cè)交道老師辦公室。q 血細(xì)胞由紅細(xì)胞