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1、親和層析原理親和層析原理 1 2 3 M 1 2 3 M 樣品加樣品加30 uL30 uLMarkerMarker加加10 uL10 uL實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理1. 凝膠孔徑的不延續(xù)性凝膠孔徑的不延續(xù)性2種孔徑種孔徑2. 緩沖液離子成分及緩沖液離子成分及pH值的不延續(xù)性值的不延續(xù)性2種種緩沖體系，緩沖體系，3種種pH：濃縮膠，：濃縮膠，pH6.8，蛋白，蛋白質(zhì)分子的遷移率比質(zhì)分子的遷移率比Cl- 低，比低，比Gly高。高。濃縮效應(yīng)濃縮效應(yīng)3. 電位梯度不延續(xù)性：快離子電位梯度不延續(xù)性：快離子 Cl- 后面后面構(gòu)成高電位梯度區(qū)，慢離子構(gòu)成高電位梯度區(qū)，慢離子Gly前面構(gòu)成前面構(gòu)成低電位梯度區(qū)，高電位梯

2、度和低電位梯度之低電位梯度區(qū)，高電位梯度和低電位梯度之間的地方，構(gòu)成一個(gè)穩(wěn)定而不斷向陽極挪動(dòng)間的地方，構(gòu)成一個(gè)穩(wěn)定而不斷向陽極挪動(dòng)的界面，蛋白質(zhì)分子在界面處濃縮成一個(gè)狹的界面，蛋白質(zhì)分子在界面處濃縮成一個(gè)狹小的中間層。小的中間層。濃縮效應(yīng)濃縮效應(yīng)試劑名稱試劑名稱加液量加液量ddH2O2.5 mL30% Acr-Bis（29:1）3.0 mL1.5 mol/L Tris-HCl（pH8.8）2.0 mL10% SDS75 uLTEMED（加速劑）（加速劑）10 uL10% AP（催化劑，最后加）（催化劑，最后加）75 uL總體積總體積7.5 mL試劑名稱試劑名稱加液量加液量ddH2O3.4 mL30% Acr-Bis（29:1）0.86mL1.5 mol/L Tris-HCl（pH6.8）0.62mL10%SDS50 uLTEMED20 uL10%AP（最后加）（最后加）50 uL總體積總

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