免疫組化抗原修復(fù)簡介

1、免疫組化抗原修復(fù)簡介免疫組化抗原修復(fù)簡介l為何要進(jìn)行抗原修復(fù)l抗原修復(fù)的種類l抗原修復(fù)的原理l抗原修復(fù)的操作l抗原操作的應(yīng)用為何要進(jìn)行抗原修復(fù)為何要進(jìn)行抗原修復(fù)l常規(guī)的石蠟切片的組織要經(jīng)過福爾馬林固定和石蠟包埋，雖然上述過程能良好的保存標(biāo)本在光鏡下的形態(tài)，但是會不同程度地破壞組織的抗原，降低組織的抗原與抗體的免疫反應(yīng)率?？乖迯?fù)的種類抗原修復(fù)的種類l熱修復(fù)（HIER）l蛋白酶修復(fù)（PIER）l雙修復(fù)（特殊抗原和雙染）l不修復(fù)抗原修復(fù)的原理抗原修復(fù)的原理l抗原修復(fù)目前常用的有熱修復(fù)（HIER），蛋白酶修復(fù)（PIER）和不修復(fù)。不同的修復(fù)的原理不同。l熱修復(fù)的原理l蛋白酶修復(fù)原理熱修復(fù)熱修復(fù)(HI

2、ER)的原理的原理l“石說”：固定通過改變蛋白結(jié)構(gòu)降低免疫反應(yīng)性，AR逆轉(zhuǎn)大部分福爾馬林導(dǎo)致的蛋白修飾，冷卻后，會重建“近天然”的結(jié)構(gòu)，免疫反應(yīng)的恢復(fù)是通過蛋白表位的復(fù)性。熱修復(fù)的特點熱修復(fù)的特點l易于施行l(wèi)易于標(biāo)準(zhǔn)化蛋白酶修復(fù)蛋白酶修復(fù)(PIER)原理原理l蛋白酶的消化通過破壞福爾馬林造成的蛋白交聯(lián)，實現(xiàn)抗原的修復(fù)。l該方法的缺點是：破壞組織的完整性，會破壞抗原，而且酶的濃度，反應(yīng)時間，反應(yīng)溫度造成很大的差異，標(biāo)準(zhǔn)化難度較大。抗原修復(fù)的操作抗原修復(fù)的操作l熱修復(fù)（HIER）l蛋白酶修復(fù)（PIER）l雙重修復(fù)熱修復(fù)（熱修復(fù)（HIER）l高壓修復(fù)l煮沸法修復(fù)l微波修復(fù)l水浴加熱高壓修復(fù)高壓修復(fù)l

3、切片先脫蠟水化l將修復(fù)液注入高壓鍋，將液體煮沸l(wèi)放入切片（甩開水分）l蓋上蓋子，等噴氣，計時1.52分鐘（800W1000W）l冷卻，沖洗玻片上的修復(fù)液 1.5-2min 10min高壓鍋直接修復(fù)高壓鍋隔水間接修復(fù)煮沸法修復(fù)煮沸法修復(fù)l將修復(fù)液注入不銹鋼鍋中l(wèi)煮沸后，加入切片（甩干水分）l用保溫檔，處理20分鐘左右l冷卻，沖洗玻片上的修復(fù)液蛋白酶修復(fù)（蛋白酶修復(fù)（PIER）l切片脫蠟水化l切片上滴加酶，放入孵育盒，處理一定時間l時間到，取出切片，沖洗。雙重修復(fù)雙重修復(fù)l脫蠟水化后，對切片進(jìn)行胰酶消化l然后，對切片進(jìn)行熱修復(fù)抗原操作的應(yīng)用抗原操作的應(yīng)用l時間l溫度l冷卻l細(xì)節(jié)MOC31（上皮糖蛋白-2，EGP-2) EGFR(CLONE:EGFR.113)HBcAg(兔多抗兔多抗)C/HNO結(jié)論結(jié)論l正確的修復(fù)對抗體的表達(dá)十分重要l抗原修復(fù)是一個個