虎杖中蒽醌類成分的提取分離鑒定及含量測(cè)定

1、湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥化學(xué)教研究室湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥化學(xué)教研究室 虎杖中蒽醌類成分虎杖中蒽醌類成分 提取、分離、提取、分離、 鑒定及含量測(cè)鑒定及含量測(cè)定定l l、掌握梯度掌握梯度pHpH萃取法分離酸性成分的方法。萃取法分離酸性成分的方法。2 2、學(xué)習(xí)脂溶性成分和水溶性成分分離的方法。、學(xué)習(xí)脂溶性成分和水溶性成分分離的方法。3 3、了解蒽醌類化合物的一般性質(zhì)和鑒別反應(yīng)。、了解蒽醌類化合物的一般性質(zhì)和鑒別反應(yīng)。 本實(shí)驗(yàn)是根據(jù)虎杖中的羥基蒽醌類化合物及二苯乙本實(shí)驗(yàn)是根據(jù)虎杖中的羥基蒽醌類化合物及二苯乙烯類成分均可溶于乙醇，故采用乙醇將它們提取出來(lái)。烯類成分均可溶于乙醇，故采用乙醇將它們提取出

2、來(lái)。羥基蒽醌類苷元成分能溶于乙醚等弱親脂性溶劑，采羥基蒽醌類苷元成分能溶于乙醚等弱親脂性溶劑，采用乙醚使苷元和苷類成分分離，又利用羥基蒽醌類化用乙醚使苷元和苷類成分分離，又利用羥基蒽醌類化合物酸性強(qiáng)弱不同，用梯度合物酸性強(qiáng)弱不同，用梯度pHpH萃取法進(jìn)行分離。萃取法進(jìn)行分離。( (一一) )虎杖中蒽醌苷元的提取與分離虎杖中蒽醌苷元的提取與分離 1 1、虎杖中蒽醌類成分的提?。?、虎杖中蒽醌類成分的提取： 2 2、蒽醌苷與苷元的分離：、蒽醌苷與苷元的分離： 3 3、不同酸性蒽醌苷元的分離（梯度、不同酸性蒽醌苷元的分離（梯度pHpH萃取法）萃取法） 流程圖流程圖 1 1、顏色反應(yīng)、顏色反應(yīng) ( (l

3、)l)、取以上取以上a,b,ca,b,c少量，分別置于三支試管中，少量，分別置于三支試管中，加少量乙醇溶解后，加加少量乙醇溶解后，加2 2NaOHNaOH溶液數(shù)滴，觀察溶液數(shù)滴，觀察顏色變化。顏色變化。 （2 2）、取以上）、取以上a,b,ca,b,c少量，分別置于三支試管中，少量，分別置于三支試管中，加少量乙醇溶解后，再滴加加少量乙醇溶解后，再滴加1%1%醋酸鎂的乙醇溶液醋酸鎂的乙醇溶液數(shù)滴，觀察顏色變化。數(shù)滴，觀察顏色變化。 （3 3）、取以上）、取以上a,b,ca,b,c少量，分別置于三支試管中，少量，分別置于三支試管中，加少量乙醇溶解后，再滴加加少量乙醇溶解后，再滴加1%1%三氯化鐵的

4、乙醇溶三氯化鐵的乙醇溶液數(shù)滴，觀察顏色變化。液數(shù)滴，觀察顏色變化。 2 2、薄層色譜、薄層色譜( (TLC)TLC)： 吸附劑：硅膠吸附劑：硅膠G GCMCNaCMCNa板，用前活化板，用前活化 展開劑：石油醚展開劑：石油醚乙酸乙酯乙酸乙酯 (2 (2：1)1) 樣樣 品：品：a,b,ca,b,c乙醇液，大黃素標(biāo)準(zhǔn)品乙醇液，大黃素標(biāo)準(zhǔn)品 顯顯 色：先置可見光下觀察色斑，色：先置可見光下觀察色斑， 后紫外燈下觀察熒光斑點(diǎn)后紫外燈下觀察熒光斑點(diǎn) 再用再用2%2%NaOHNaOH噴灑顯色噴灑顯色 結(jié)果及計(jì)算比移值結(jié)果及計(jì)算比移值虎杖中游離蒽醌的測(cè)定虎杖中游離蒽醌的測(cè)定1. 1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備標(biāo)準(zhǔn)曲

5、線的制備 稱取稱取1,8-1,8-二羥基蒽醌二羥基蒽醌2525mgmg置于置于200200mlml容量瓶中，乙容量瓶中，乙醚溶解并定容，取此溶液醚溶解并定容，取此溶液0.055.000.055.00mlml，分別置于分別置于2525mlml容量瓶中，水浴上揮去乙醚，加容量瓶中，水浴上揮去乙醚，加5%5%氫氧化鋁氫氧化鋁-2%-2%氫氧化銨混合堿液至刻度，在氫氧化銨混合堿液至刻度，在490490nmnm測(cè)定光密度，繪測(cè)定光密度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2. 2. 樣品測(cè)定樣品測(cè)定 取生藥粉末（過(guò)取生藥粉末（過(guò)4040目）目）0.20.2g g置于索氏提取器中，氯置于索氏提取器中，氯仿回流提取至

6、無(wú)色，將氯仿液置于分液漏斗中，仿回流提取至無(wú)色，將氯仿液置于分液漏斗中， 以以5%5%氫氧化鋁氫氧化鋁-2%-2%氫氧化銨混合堿分次提取至無(wú)色，合并堿氫氧化銨混合堿分次提取至無(wú)色，合并堿液，用少量氯仿洗滌，堿液調(diào)整至一定體積，堿液若不液，用少量氯仿洗滌，堿液調(diào)整至一定體積，堿液若不澄清，垂熔漏斗過(guò)濾，濾液在沸水浴中加熱澄清，垂熔漏斗過(guò)濾，濾液在沸水浴中加熱4 4分鐘，用分鐘，用冷水冷卻至室溫，冷水冷卻至室溫，3030分鐘后在分鐘后在490490nmnm比色，由標(biāo)準(zhǔn)曲比色，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算含量。線計(jì)算含量。1.1.常壓蒸餾回收溶劑之前，應(yīng)該加入沸石，以免暴常壓蒸餾回收溶劑之前，應(yīng)該加入沸石，以免暴沸。沸。2.2.什么是梯度什么是梯度pHpH萃取法，適用于哪些物質(zhì)的分離？萃取法，適用于哪些物質(zhì)的分離？試解釋本次試驗(yàn)中試解釋本次試驗(yàn)中pHpH萃取法應(yīng)該注意哪些事項(xiàng)？萃取法應(yīng)該注意哪些事項(xiàng)？3.3.兩相萃取時(shí)，不可猛力振搖，只能輕輕旋轉(zhuǎn)搖動(dòng)，兩相萃取時(shí)，不可猛力振搖，只能輕輕旋轉(zhuǎn)搖動(dòng)，以免造成嚴(yán)重乳化現(xiàn)象而影響分層