EB定量檢測（課堂PPT）

1、1EB病毒PCR定量檢測20140915李英輝2內容一、EB病毒二、EB病毒相關疾病三、EB病毒與鼻咽癌四、血漿EB病毒DNA水平與腫瘤負荷五、上市產品情況六、問題與方案七、項目計劃3一、 EB病毒 1964年Epstein、Barr在Burkitt淋巴瘤細胞系發(fā)現的第一個人類腫瘤病毒，又名人類皰疹病毒4型（HHV-4），是雙連DNA病毒。 世界上90%以上的成人都曾感染過EBV，大多終身在體內以無癥狀、潛伏感染形勢存在 二十世紀末被國際抗癌聯盟列為類致癌物4二、 EB病毒相關疾病腫瘤性疾病腫瘤性疾病 Burkitts lymphoma 伯基特淋巴瘤 （地方性，100%） Hodgkins l

2、ymphoma霍奇金淋巴瘤（40%） Nasopharyngeal carcinoma鼻咽癌（地方性，鼻咽癌（地方性，100%） Gastric carcinoma胃癌（10%）非腫瘤性疾病非腫瘤性疾病 Infectious mononucleosis傳染性單核細胞增多癥（100%）5三、EB病毒與鼻咽癌 鼻咽癌（NPC）屬于地方性腫瘤，約80%的患者分布于中國華南地區(qū)及東南亞地區(qū)，發(fā)病率約為20-30/100 000人,廣東省的發(fā)病率最高,又稱“廣東瘤” 鼻咽癌病因 1、遺傳 2、EB病毒 3、環(huán)境6N Engl J Med. 2004 Jun 10;350(24):2461-70.四、血漿

3、EB病毒DNA水平與腫瘤負荷-分期7Cancer Res. 2000 May 1;60(9):2351-5.四、血漿EB病毒DNA水平與腫瘤負荷-放療過程中監(jiān)控8四、血漿EB病毒DNA水平與腫瘤負荷-術后監(jiān)控Clin Cancer Res. 2003 Aug 15;9(9):3254-9.9復發(fā)監(jiān)控N Engl J Med. 2004 Jun 10;350(24):2461-70.四、血漿EB病毒DNA水平與腫瘤負荷-復發(fā)監(jiān)控10OS vs Plasma EBV DNAHead Neck. 2012 Aug;34(8):1064-7011五、上市產品情況公司公司類型類型靈敏度靈敏度線性范圍線性

4、范圍樣品類型樣品類型樣本用量樣本用量之江生物定性全血 艾康生物定量全血普瑞康生物 定量100IU/ml血清或血漿圣湘生物定量400拷貝/毫升 4.01024.0109全血、血漿和咽拭子血漿100ul,全血200ul,咽拭子500ul達安基因定量500拷貝/毫升 血鑫諾美迪基因定量血清或血漿12六、問題與方案 問題：問題： 靈敏度 解決方案：解決方案： 1、設計靶基因檢測片段小于100bp 2、公司已有的血漿抽提方法 3、甘油保存校準品13七、計劃項目內容項目內容項目指標項目指標預期完成時間預期完成時間查閱文獻，EBV靶序列的選擇 EBV保守區(qū)域序列人工合成9月30引物及探針設計檢測用引物、MGB探針設計合成9月30構建校準品質?？寺y序驗證成功構建克隆菌10月17質粒抽提質粒抽提、線性化10月24制備校準品制備E