基于生物轉(zhuǎn)化的金針菇菌糠飼料的研制

1、 基于生物轉(zhuǎn)化的金針菇菌糠飼料研制李楠（淮陰工學(xué)院，江蘇 淮安）中圖分類號(hào)： 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)： 文章編號(hào)：摘要：利用抗雜菌能力強(qiáng)的凝結(jié)芽孢桿菌預(yù)處理，利用產(chǎn)蛋白能力強(qiáng)的酵母菌菌種來對(duì)菌糠進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，增加其蛋白含量并制成菌糠飼料。先將凝結(jié)芽孢桿菌接種到菌糠中進(jìn)行預(yù)處理以去除霉菌等雜菌。應(yīng)用響應(yīng)面設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化，接入酵母菌后進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)蛋白，比較發(fā)酵前后菌糠中蛋白。調(diào)整其適口性和氣味。通過響應(yīng)面設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)可以得出在溫度為28，pH為5.0，接種量為30 %，氮源為尿素且接種量為0.4 %時(shí)。實(shí)驗(yàn)后的菌糠中蛋白質(zhì)含量是最高的可分別達(dá)到21 %左右，發(fā)酵后抗性因子草酸為3.02 %，植酸為3.11 %，較

2、適合于制成飼料。由本實(shí)驗(yàn)可知，酵母菌發(fā)酵可提高菌糠的蛋白質(zhì)含量，使氣味得到改善，而更適合動(dòng)物食用。關(guān)鍵詞 生物轉(zhuǎn)化；金針菇菌糠；響應(yīng)面；飼料；固態(tài)發(fā)酵AbstractWith the pretreatment of Bacillus Condensation with strong anti - bacteria ability, the solid-state fermentation of chaff was made by yeast strain with strong protein production capacity, and the protein content was i

3、ncreased and the substrate feed was made. First, Bacillus Condensation was inoculated into fungus chaff to pretreat to remove the fungus. The solid state fermentation conditions were optimized by response surface design. the protein was produced by solid state fermentation after access to yeast, and

4、 the protein of spent substrate was compared before and after fermentation. Adjust palatability and odor. The response surface design experiment can be concluded that when the temperature is 28 , ph is 5.0, inoculum size is 30 %, nitrogen source is urea and inoculation amount is 0. 4 %. The protein

5、content of the spent substrate is up to 21 % after the experiment, the resistance factor after fermentation is 3.02 %, and the phytic acid is 3.11 %, which is suitable for making feed. From this experiment, yeast fermentation can improve the protein content of substrate, make the smell improve, and

6、more suitable for animal foodKeywords Biotransformation ；Spent mushroom substrate；Response surface； Feed；Solid-state fermentation 菌糠中含有粗蛋白、粗纖維、粗脂肪，它們的適口性一般會(huì)比較差、這會(huì)對(duì)動(dòng)物的吸收和消化產(chǎn)生一定的作用，因而菌糠通常都不會(huì)被用來直接制作成家畜的飼料。然而我們可以通過微生物來進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，來研制出不同的微生物飼料添加劑，進(jìn)而使飼料品質(zhì)得到改善，將飼料中的蛋白質(zhì)含量提高，以利動(dòng)物的生長(zhǎng)1-3。在本實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用到的技術(shù)主要有固態(tài)發(fā)酵和響應(yīng)面的設(shè)計(jì)。選

7、用新鮮菌糠通過預(yù)處理將凝結(jié)芽孢桿菌先接種培養(yǎng)以消除部分雜菌后加入酵母菌。運(yùn)用凝結(jié)芽孢桿菌來進(jìn)行預(yù)處理不僅可以避免用高溫處理時(shí)高溫可能會(huì)對(duì)菌糠中原有營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的損傷更能夠在工廠處理時(shí)節(jié)約大量的能耗，因而可以大量節(jié)約工廠的生產(chǎn)成本4。運(yùn)用了四因素三水平來設(shè)計(jì)出響應(yīng)面的實(shí)驗(yàn)，優(yōu)化菌株的固態(tài)發(fā)酵條件，以蛋白質(zhì)含量為基準(zhǔn)。以最優(yōu)條件培養(yǎng)菌后，檢驗(yàn)各成分的含量并在一定程度上改變其適口性，最終制成有益動(dòng)物生長(zhǎng)的可口飼料。1 實(shí)驗(yàn)部分1.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器試劑1.1.1 菌株凝結(jié)芽孢桿菌（Bacillus coagulans）淮陰工學(xué)院生命科學(xué)與食品工程實(shí)驗(yàn)室保藏菌株酵母菌酵母菌（Yeast）淮陰工學(xué)院生命科學(xué)

8、與食品工程實(shí)驗(yàn)室保藏菌株1.1.2 培養(yǎng)基LB培養(yǎng)基：蛋白胨10 g，酵母粉5 g，氯化鈉10 g，水1 L，pH 7.0PDA培養(yǎng)基：200 g土豆、葡萄糖20 g、瓊脂粉20 g、pH 7.01.1.3 主要設(shè)備儀器與耗材名稱型號(hào)廠家電熱恒溫培養(yǎng)箱DNP-9052上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱DGG-9420A上海森信實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司生物凈化工作臺(tái)BCM-1000蘇州凈化設(shè)備有限公司紫外分光光度計(jì)Spectru mlab 22PC上海棱光技術(shù)有限公司分析天平FA2004上海恒平科學(xué)儀器有限公司電子天平Y(jié)P601N上海精密科學(xué)儀器有限公司電熱恒溫水浴鍋DK-98-1型天津市泰斯特

9、儀器有限公司不銹鋼立式滅菌消毒器YM上海三申醫(yī)療器械有限公司冰箱BCD-228D11SY海信科龍電器股份有限公司搖床KCY 111上海福馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司微型旋渦混合儀W h-3上海滬西分析儀器廠有限公司光學(xué)顯微鏡Nikon YS100上海長(zhǎng)方光學(xué)儀器有限公司pH計(jì)pHSJ-4A上海精密儀器有限公司玻璃儀器1000 mL、500 mL、250 mL錐形瓶，1000 mL、50 mL燒杯，5 mL、2 mL、1 mL、0.5 mL移液管，9cm平板，25 mL具塞比色管，小試管，50 mL量筒，1000L、200L、20L移液槍1.2 實(shí)驗(yàn)方法1.2.1 活化培養(yǎng)方法：在斜面上挑取凝結(jié)芽孢桿菌之

10、后接種到LB培養(yǎng)基中，250 r/min搖床培養(yǎng)， 培養(yǎng)48 h。 在斜面上挑取酵母菌再接到PDA培養(yǎng)基中，250 r/min進(jìn)行搖床培養(yǎng)，搖 床24 h。1.2.2 菌株活性的檢驗(yàn)方法：分別取5g未經(jīng)處理和經(jīng)凝結(jié)芽孢桿菌處理過的菌糠，加入45 mL的水，分 別取0.2 mL涂布于PDA平板上培養(yǎng)48小時(shí)，記錄并比較霉菌數(shù)。 1.2.3 發(fā)酵設(shè)計(jì)方案圖1發(fā)酵設(shè)計(jì)流程圖Fig. 1 Flow chart of fermentation design1.2.4 菌糠中營(yíng)養(yǎng)成分含量的測(cè)定蛋白質(zhì)含量的測(cè)定方法：取1 g固體培養(yǎng)料置100 mL容量瓶中加20 mL水于60水浴鍋中加15min 定容過濾，

11、吸取2 mL，加2 mL考馬斯亮藍(lán)溶液混勻后測(cè)定5-9。595nm波長(zhǎng) 下比色記錄各管測(cè)定的吸光度值，并通過標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)得菌糠中蛋白質(zhì)含量。 1.2.5 酵母菌固態(tài)發(fā)酵的優(yōu)化（1） 菌糠的預(yù)處理：根據(jù)吳德景13的研究顯示在250 mL的三角錐瓶中可放置45g 的菌糠為佳，將凝結(jié)芽孢桿菌接種到新鮮菌糠,進(jìn)行靜置培 養(yǎng)。（2） 接種所需菌株：取菌糠和水以1：1混勻，接種凝結(jié)芽桿菌后加入酵母菌，并 在恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)。（3） 優(yōu)化固態(tài)發(fā)酵條件：對(duì)氮源，pH，溫度，酵母菌的接種量進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)作 為響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)中的水平，再采用響應(yīng)面設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，確定 酵母菌固態(tài)發(fā)酵 產(chǎn)蛋白的最適溫度（）、初始pH

12、 值、接種量（%）和氮源。 1.2.6 酵母菌固態(tài)發(fā)酵的單因素優(yōu)化實(shí)驗(yàn) 本實(shí)驗(yàn)選取的氮源為尿素、大豆蛋白胨和硫酸銨。再進(jìn)行pH，溫度和接種量實(shí)驗(yàn)，選擇較優(yōu)的三個(gè)做響應(yīng)面的條件。 向菌糠中加入凝結(jié)芽孢桿菌，培養(yǎng)48小時(shí)后完成對(duì)菌糠的預(yù)處理。 氮源：根據(jù)表1向預(yù)處理后的菌糠中加入適當(dāng)?shù)牡?，加?0 %的酵母菌，調(diào)pH至5.0，放入28培養(yǎng)24小時(shí)。表1 氮源的種類及添加量Table 1 Type and amount of nitrogen source尿素（%）大豆蛋白胨（%）硫酸銨（%）添加量0.2 0.75 1.0 0.3 1 1.5 0.4 1.25 2.0 0.5 1.5 2.5 溫度

13、：向預(yù)處理后的菌糠中加入30 %的酵母菌和適當(dāng)?shù)?，pH至5.0，分別24，26，28，30下培養(yǎng)，培養(yǎng)24 h。 pH：向預(yù)處理后的菌糠中加入30 %的酵母菌和適當(dāng)?shù)?，?8下，pH分別為4.0，4.5，5.0，5.5培養(yǎng)，培養(yǎng)24 h。 接種量：向預(yù)處理后的菌糠中加入適當(dāng)?shù)矗?8下，pH為5.0，分別接種20 %，25 %，30 %，35 %來進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)24 h。 利用考馬斯亮藍(lán)法檢測(cè)蛋白質(zhì)的多少，比較得最優(yōu)氮源，最佳接入量，pH，溫度。2.2.7 應(yīng)用響應(yīng)面法測(cè)定固態(tài)發(fā)酵的最優(yōu)條件表2 響應(yīng)面分析因素和水平Table 2 Response surface analysis fa

14、ctors and levels因素水平-101生長(zhǎng)溫度（）262830初使pH值4.55.05.5接種量（%）25 30 35 尿素（%）3 4 5 根據(jù)響應(yīng)面法得到的結(jié)果確定固態(tài)發(fā)酵的最優(yōu)條件對(duì)酵母菌進(jìn)行固態(tài)培養(yǎng)。以蛋白質(zhì)含量作為響應(yīng)值，再經(jīng)回歸擬合10,11。后各試驗(yàn)因子對(duì)響應(yīng)值的影響可以用下列函數(shù)表現(xiàn)：Y=a0+a1X1+a2X2+a3X3+a4X4+a12X1X2+a13X1X3+a14X1X4+a23X2X3+a24X2X4+a34X3X4 +a11X12+a22X22+a33X32+a44X42然后根據(jù)響應(yīng)面分析結(jié)果繪出趨勢(shì)圖，確定最優(yōu)條件。1.2.8 抗性因子的消除菌株的發(fā)酵在

15、一定程度上對(duì)抗性因子的消除有很大的作用，本實(shí)驗(yàn)利用酵母菌在菌糠中的發(fā)酵作用減少草酸和植酸的抗性因子的作用。(1) 草酸原理:加入氨水后可以產(chǎn)生出草酸銨,而草酸銨又不溶與此，因而會(huì)產(chǎn)生出沉淀，之后加水溶解,再加入已經(jīng)經(jīng)過中和的甲醛,最后便可以利用氫氧化鈉來滴定15。 方法：5g鮮樣，用25 mL稀鹽酸(6N)用研體勻質(zhì)，轉(zhuǎn)移到50 mL燒杯中，加兩滴正辛醇，煮沸15 min。待溫度至室溫，移入到500 mL的容量瓶，并稀釋到刻度處，放置過夜12。將內(nèi)容物混和，濾紙過濾。吸移25 mL的濾液，移入到50 mL的錐形瓶中，加5 mL硝酸鹽一磷酸試劑?；旌图尤?，靜置5小時(shí)沉淀。將內(nèi)容物用定量濾紙過濾，

16、至濾液清澈。吸取20 mL的濾液移取到50 mL的離心管中，逐滴加入氫氧化銨至出現(xiàn)輕微而持久的沉淀。保證pH在4.0-4.5之間，加入5 mL緩沖溶液，用玻棒攪拌，將離心管4靜置過夜。離心5min后，用吸移管移去清液，再將沉淀物懸浮于20 mL過濾過的洗液中，再離心，盡可能移去上層清液16。用5 mL 10 %的硫酸溶液溶解沉淀物，定量地移溶液至50 mL的錐形燒瓶中，于沸水浴上加熱5 min,在溫度還高時(shí)，利用0.02 N高錳酸鉀滴定溶液，直到溶液變?yōu)榉奂t色(而且要保持30 s內(nèi)不褪色)。樣品中草酸（mg/g）=（V×（90/2000）×1000×c×

17、500×30）/（m×20×25）式中，V表示的是0.02 N的高錳酸鉀溶液的體積( mL)，c則表示的是0.02 N的高錳酸鉀溶液的精確的濃度，而m則是樣品的質(zhì)量，（90/2000）×1000則為草酸毫克數(shù)14,15。(2) 植酸 原理： 植酸能夠與Fe3+在低酸性下產(chǎn)生出穩(wěn)固的配合物，如用標(biāo)定的三氯化鐵來滴定植酸，并以磺基水楊酸作為指示劑，當(dāng)3價(jià)鐵稍微有一些過量的時(shí)侯，從而會(huì)與磺基水楊酸產(chǎn)生出紫紅色的化合物，這樣就可以表現(xiàn)出此為滴定的終點(diǎn)。 方法：采取最優(yōu)條件0.8 mol/L的鹽酸溶液、700 W、25 Khz超聲波處 理15 min后，60水浴恒

18、溫浸提1.5 h。準(zhǔn)確稱取樣品2.0 g于100 mL錐形瓶，加入0.8 mol/L鹽酸溶液20 mL后，依上述浸提條件浸提，然后將浸提液離心(3000 r/min，15 min)，并取上清液2 mL，用蒸餾水定容至10 mL。再加入10 %氨基水楊酸溶液2滴，并用標(biāo)定后的三氯化鐵溶液滴定至紫色不褪色為止。植酸含量（%）=（c×V×0.2357）×10）/m）×100 式中，C為三氯化鐵溶液濃度(mol/L)， V為滴定消耗的三氯化鐵溶液濃度的體積( mL)，m為樣品重(g)。1.3 制備菌糠飼料 將發(fā)酵好的菌糠干燥制備成為飼料。根據(jù)國(guó)家的飼料標(biāo)準(zhǔn)中的飼

19、料要求水分不超過13 %，但是不低于5 %，粗蛋白含量不低于15 %，糖含量不低于12%用3 mm孔徑的篩子篩選后篩上物不多于15 %，5 mm孔徑的篩子篩選后篩上物不多于5 %。鈣元素為0.5 %-1 %，磷元素為0.2 %-1 %。1.4 菌糠飼料適口性改善研究 菌糠粉碎粒度的差異，對(duì)動(dòng)物的采食的快慢起到一定作用?？刂凭返呐囵B(yǎng)溫度為30，pH為5.0，尿素0.4 %，酵母菌接種量為30 %。將菌糠進(jìn)行粉碎，將其通過14目篩 30目篩，40目篩，60目篩。在華威養(yǎng)殖廠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，將每一種同時(shí)喂養(yǎng)廠內(nèi)的同一批50只鴨子（飼料量是過量的），比較一天下來每種飼料的減少量。1.5 菌糠飼料氣味性改善

20、研究 氣味是影響金針菇菌糠飼料最重要的特征之一，氣味是評(píng)價(jià)飼料的重要因素,金針菇特征氣味主要是由于復(fù)水，還有一部分臭氣化合物。而復(fù)水大多數(shù)為一些含氮的有機(jī)化合物，可以經(jīng)過菌的作用轉(zhuǎn)換為一些蛋白質(zhì)。一般處理這些氣味的方法就是要添加氨基酸或使本身合成蛋白質(zhì)17,18。2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析2.1 凝結(jié)芽孢桿菌活性檢測(cè)結(jié)果 圖2,3 未預(yù)處理時(shí)菌糠中菌落生長(zhǎng)狀況 圖4預(yù)處理后菌落生長(zhǎng)狀況 Figure2,3 Growth of colony in mushroom residue Figure 4 Colony growth after without pretreatment pretreatment由

21、圖2，3，4可看出，凝結(jié)芽孢桿菌有較強(qiáng)的抑菌效果2.2 測(cè)量菌糠飼料中蛋白質(zhì)含量2.2.1 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線圖5 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線Figure 5 Protein standard curve由圖 5可得趨勢(shì)線為y=0.0639x+0.0019，R2=0.9939、2.3 單因素實(shí)驗(yàn)2.3.1 氮源的單因素試驗(yàn)按各自選擇的四個(gè)梯度進(jìn)行發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，記錄發(fā)酵后的蛋白質(zhì)含量，結(jié)果如下圖所示：圖 6 不同的大豆蛋白胨的添加量對(duì)蛋白產(chǎn)生量的影響Figure 6 Effect of different amounts of soy peptone on Protein count通過圖6可以看出，大豆蛋白胨的最

22、適添加量為1.25 %，此時(shí)蛋白質(zhì)含量為15.73 %。圖 7 不同尿素添加量對(duì)蛋白質(zhì)產(chǎn)生量的影響Figure 7 Effect of different urea additions on Protein count由圖 7可得出，尿素的最適添加量為0.4 %，此時(shí)蛋白質(zhì)含量為17.16 %。以此作為正交實(shí)驗(yàn)的添加量。圖8 不同的硫酸銨添加量對(duì)蛋白質(zhì)的影響Figure 8 Effect of different ammonium sulpHate addition on Protein count從圖8中看出，硫酸銨的最適添加量為1.5 %，此時(shí)蛋白質(zhì)含量為15.14 %。2.3.2 溫度的

23、單因素實(shí)驗(yàn)圖9 不同的溫度對(duì)蛋白質(zhì)的影響Figure 9 Effect of different temperature on Protein count從圖 9中看出，最適溫度為28，此時(shí)蛋白質(zhì)含量為17.69 %。2.3.3 pH的單因素實(shí)驗(yàn)圖 10 不同的pH對(duì)蛋白質(zhì)產(chǎn)生量的影響Figure 10 Effect of different pH on Protein count從圖 10中看出，最適的pH為5.0，此時(shí)蛋白質(zhì)含量為17.77 %。2.3.4 接種量的單因素實(shí)驗(yàn)圖 11 不同的接種量對(duì)蛋白質(zhì)產(chǎn)生量的影響Figure 11 Effect of different inoculu

24、m size on Protein count從圖11中看出，最適的接種量為30 %，此時(shí)蛋白質(zhì)含量為18.53 %。2.4 響應(yīng)面法數(shù)據(jù)處理2.4.1 含量處理結(jié)果表 3 含量處理結(jié)果Table 3 Content treatment resultsA595標(biāo)曲計(jì)算蛋白含量10.4130.03040.136820.3780.02820.126730.5120.03670.165240.2060.01720.077250.4180.03070.138260.5360.03830.172170.6850.04780.215080.6910.04820.216790.4140.03050.1370

25、100.4010.02960.1333110.8670.05940.2193120.4150.03050.1373130.3910.02900.1304140.1620.01440.0646150.4110.03030.1362160.2860.02230.1002170.2170.01790.0804180.2930.02270.1023190.4130.03040.1368200.1390.01290.0580210.1450.01330.0597220.3910.02900.1304230.1560.01400.0629240.4340.03170.1428250.2930.02270.

26、1023260.5170.03700.1667270.6480.04540.204328（樣品1）0.0680.00830.037629（樣品2）0.0660.00820.037030（樣品3）0.0730.00870.0390 由表3可以看到經(jīng)過發(fā)酵后的蛋白質(zhì)含量有明顯的提升，而未處理的樣品中蛋白質(zhì)含量都較少。2.4.2 蛋白質(zhì)的響應(yīng)面數(shù)據(jù)A：pH，B：T，C：N，D：Q圖12 A-B pH與溫度響應(yīng)面圖Fig.12 A-B Response surface map of pH and temperature圖13 A-C pH與氮源響應(yīng)面圖Fig.13 A-C Response surfa

27、ce map of pH and nitrogen surface圖14 A-D pH與接種量響應(yīng)面圖Fig.14 A-D Response surface map of inoculation quantity and inoculum size 圖15 B-C接種量與氮源響應(yīng)面圖Fig .15 B-C Response surface map of inoculum size and nitrogen source圖16 B-D接種量與溫度響應(yīng)面圖Fig. 16 B-D Response surface map of inoculation size and temperature圖17

28、C-D 氮源與接種量響應(yīng)面圖Fig.17 C-D Response surface map of inoculation size and nitrogen source表4 響應(yīng)面ANOVA分析結(jié)果Table 4 Response surface ANOVA analysis results方差來源自由度df平方和SS均方MSF值Pr>FModel691.311449.385.020.023X111.701.700.170.0528X2158.4858.485.950.0066X310.200.200.0200.4911X410.550.550.0560.8214X1X2113.541

29、3.541.380.8582X1X3113.4113.411.340.3986X1X4135.4035.403.600.4584X2X310.350.350.0350.3960X2X4126.6826.682.710.3281X3X4115.6415.641.590.4170X121180.71180.7118.380.0125X221376.75376.7538.300.0004X321101.07101.0710.280.0001X421114.42114.4211.630.0023純誤差121.215.30失擬項(xiàng)116.491011.652.200.2330由表4可知，模型R2=0.83

30、39方程中X12X22,X42對(duì)Y值影響較大。因子B溫度（）即X2對(duì)響應(yīng)面值影響最大。由上示多圖和表即計(jì)算結(jié)果可得到以下方程Y=22.62-0.58X1+2.21X2-0.13X3-0.21X4-1.84X1X2+1.81X1X3+2.98X1X4+0.29X2X3+2.58X2X4+1.98X3X4-5.28X12-7.62X22-3.95X32-4.20X422.4.3 數(shù)據(jù)擬合結(jié)果以所測(cè)得的結(jié)果，在各項(xiàng)最優(yōu)條件下對(duì)菌糠再次進(jìn)行處理。表5 數(shù)據(jù)擬合Table 5 data fitting序號(hào)發(fā)酵前蛋白含量 %發(fā)酵后蛋白含量 %13.7621.5323.7021.7733.9021.29由表

31、5可知，在最優(yōu)條件下發(fā)酵后的蛋白含量大致為21%作用，發(fā)酵后比發(fā)酵前的蛋白含量和糖含量都增長(zhǎng)了很多。2.5 抗性因子的消除表 6 抗性因子在發(fā)酵前后的含量變化Table 6 Changes of resistance factors before and after fermentation草酸含量 %植酸含量 %發(fā)酵前6.866.97發(fā)酵后3.023.11在發(fā)酵中，酵母菌可利用草酸和植酸作為能源，使其含量得以減少，以利于動(dòng)物生長(zhǎng)。由表6可知，發(fā)酵后草酸和植酸都有所減少。2.6 菌糠飼料的制備 最優(yōu)條件發(fā)酵后對(duì)菌糠飼料進(jìn)行干燥，測(cè)定其內(nèi)部的各成分。表7 飼料制備后各關(guān)鍵因素的含量Table 7

32、 contents of key factors after feed preparation蛋白質(zhì)含量%糖含量%草酸%植酸%鈣%磷%水分菌糠3.704.426.866.970.550.3210%制備后的飼料21203.023.110.600.3810% 由表7可以看出，飼料的蛋白質(zhì)質(zhì)含量為21%左右，還原糖含量在20%左右，都大量提高，草酸和植酸都在3%左右，都有所降低，鈣，磷元素基本持平。由此可以看出此飼料有一定的發(fā)展前景。2.7 菌糠飼料的適口性和氣味性研究2.7.1 適口性表8 對(duì)不同顆粒直徑飼料的減少量Table 8 The amount of feed decreased for

33、different particle diameters14目30目40目50目第一天20 kg11 kg5 kg4 kg第二天19 kg13 kg5 kg3 kg第三天23 kg10 kg4 kg3 kg第四天21 kg12 kg5 kg2 kg第五天18 kg11 kg6 kg5 kg 由表8可知，14目的直徑最大，在實(shí)驗(yàn)中飼喂效果是最好的。在本實(shí)驗(yàn)中，飼料的適口性呈現(xiàn)為顆粒度越大，適口性越高。2.7.2 氣味 經(jīng)過實(shí)驗(yàn)后，菌糠的氣味可明顯減小，異味基本消除。在本實(shí)驗(yàn)中,酵母菌主要用來產(chǎn)生蛋白質(zhì),可以減少氣味。酵母菌在固態(tài)發(fā)酵過程中的部分發(fā)酵途徑如下： 圖 25 代謝途徑Figure 25

34、 Metabolic pathway 還原糖經(jīng)過EMP途徑可以生成丙酮酸，而丙酮酸經(jīng)過TCA循環(huán)則能夠產(chǎn)生酮戊二酸和草酰乙酸，而這三種酮酸又可以通過加氨基和經(jīng)氨基得轉(zhuǎn)化作用，最后產(chǎn)生谷氨酸，谷氨酸，天冬氨酸，氨基酸再轉(zhuǎn)換為蛋白質(zhì)。 一些脂類中的甘油能夠轉(zhuǎn)化為丙酮酸，再經(jīng)歷如上的步驟。而脂肪酸可以經(jīng)過氧化能夠產(chǎn)生乙酰CoA，乙酰CoA與草酰乙酸羧合通過TCA循環(huán)，然后與天冬氨酸和谷氨酸產(chǎn)生關(guān)聯(lián)轉(zhuǎn)換為蛋白質(zhì)。 糖經(jīng)過EMP途徑能生成丙酮酸，丙酮酸在丙酮酸脫氫酶復(fù)合體的作用下產(chǎn)生乙酰CoA，然后乙酰CoA可以通過羧產(chǎn)生脂肪酸，之后脂肪酸能通過氧化又產(chǎn)生乙酰CoA進(jìn)入TCA。 將粗纖維分解為乙酸、丙酸

35、等脂肪酸來進(jìn)行吸收，再經(jīng)歷上一過程的步驟。結(jié) 論1 預(yù)處理實(shí)驗(yàn)證明凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)菌糠有明顯的抑菌作用。2 在優(yōu)化固態(tài)發(fā)酵的單因素實(shí)驗(yàn)中，添加尿素時(shí)蛋白含量更高一些。且接種量為0.4%。另外最適的溫度為28，pH為5.0，酵母菌的接種量為30 %。3 通過固態(tài)發(fā)酵的響應(yīng)面設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)可以得出在溫度為28，pH為5.0，接種量為30 %，氮源為尿素，且量為0.4 %時(shí)，實(shí)驗(yàn)后的菌糠中蛋白質(zhì)含量是最高的，可達(dá)到21%左右。而根據(jù)響應(yīng)面結(jié)果的分析，溫度是對(duì)蛋白質(zhì)含量影響最大的因素。4 酵母菌的發(fā)酵對(duì)抗性因子尤其是草酸和植酸的減少有一定的作用，二者均可以減少3%左右，發(fā)酵后分別減少到3.02%和3.11%。

36、5 在本實(shí)驗(yàn)中，菌糠飼料的適口性呈現(xiàn)出顆粒直徑越大，適口性越好的情況。而且在酵母菌固態(tài)發(fā)酵的實(shí)驗(yàn)后，菌糠的氣味可明顯減小，菌糠的異味基本消除。參 考 文 獻(xiàn) 1 虞志強(qiáng)，余水靜，李昆太.生物轉(zhuǎn)化食用菌菌糠木質(zhì)纖維素產(chǎn)燃料乙醇的研究進(jìn)展J.食品與發(fā)酵工業(yè)，2015，41（5）：235-239. 2 盧定強(qiáng)，韋萍，周華.生物催化與生物轉(zhuǎn)化的研究進(jìn)展J.化工進(jìn)展，2008，23（6）：585-589. 3 蘭良程.中國(guó)食用菌產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀與發(fā)展J.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2009，25（5）：205-208. 4 李景榮，張海峰，徐義璊.金針菇菌糠發(fā)酵床對(duì)生態(tài)養(yǎng)豬效果的影響J.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（22）：7439-7440. 5 陳建州，何建玲，易 敏. 香菇菌糠作栽培基質(zhì)對(duì)番茄幼苗生長(zhǎng)的影響J.北方園藝，2011，11（7）：15-19. 6 米青山，王尚堃，宋建華.食用菌廢料的綜合利用研究J.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，200721（2）：284-287. 7 謝修鴻，梁運(yùn)江，李 玉. 黑木耳菌糠改良蘇打鹽堿土效果研究J. 水土保持報(bào)，2009，22(5)：130-133. 8 Xu C C,Cai Y M.Feeding value of total mixed ratio