hcy臨床方案烏魯木齊

1、同型半胱氨酸測定試劑盒（酶法）臨床試驗方案臨床試驗負(fù)責(zé)人（簽名）： 臨床試驗機構(gòu)（蓋章）： 統(tǒng)計學(xué)負(fù)責(zé)人（簽名）：統(tǒng)計學(xué)負(fù)責(zé)人單位（簽章）： 產(chǎn)品注冊申請人（蓋章）： 北京 有限公司一、 臨床試驗背景同型半胱氨酸測定試劑盒（酶法）用于定量測定人體血清或血漿中同型半胱氨酸的含量。同型半胱氨酸（homocysteine，HCY）又稱高半胱氨酸，是蛋氨酸去甲基后形成的一種含硫氨基酸，屬于蛋氨酸循環(huán)的中間產(chǎn)物。有關(guān)其代謝紊亂的報道最早來源于先天性胱硫醚合成酶缺乏導(dǎo)致出現(xiàn)同型半胱氨酸尿患者的觀察。此后，又相繼發(fā)現(xiàn)其他幾種參與HCY代謝的酶或輔酶改變所引起的代謝紊亂。近幾年來，隨著測定技術(shù)方法的改進(jìn)，已經(jīng)

2、能夠?qū)φＨ搜獫{中以各種形式存在的HCY進(jìn)行測定，并且發(fā)現(xiàn)在心、腦及外周血管疾病、慢性腎功能不全、牛皮癬、維生素B12缺乏等疾病的患者中存在HCY的代謝紊亂。對同型半胱氨酸的研究始于20世紀(jì)70年代，1969年首次提出高同型半胱氨酸血癥可致動脈粥樣硬化并可形成血栓后，人們逐漸發(fā)現(xiàn)人體血清中同型半胱氨酸的含量與冠心病、腦血管疾病、外周血管疾病和靜脈血栓的發(fā)生和發(fā)展有著密切的關(guān)系，而且隨著同型半胱氨酸含量的增加發(fā)生血管疾病的危險也呈遞增趨勢。高同型半胱氨酸通過氧自由基介導(dǎo)引起血管內(nèi)皮損傷，不同濃度的血清Hcy還可通過抑制內(nèi)皮細(xì)胞DNA的合成，影響內(nèi)皮功能及細(xì)胞形態(tài)改變，并促使血管平滑肌細(xì)胞增殖，導(dǎo)

3、致動脈粥樣硬化。血清Hcy可使血小板受損，使血小板的黏附性和聚集性增加。血清HCy尚能改變花生四烯酸代謝，使血栓素A2合成增加，血栓素A2具有收縮血管和促血小板聚集的作用。血清Hcy還通過抑制凝血酶調(diào)節(jié)蛋白在內(nèi)皮細(xì)胞表面的表達(dá)及活性，進(jìn)一步抑制蛋白C的激活，影響凝血酶的滅活。血清Hcy還能增加組織因子的活性，激活凝血酶，導(dǎo)致血管系統(tǒng)的血栓少形成。目前越來越多的資料顯示 Hcy與腦血管病有著緊密的聯(lián)系。甚至有人認(rèn)為Hcy水平升高是腦血管病的一項獨立危險因素和重要危險因子。研究分析表明，隨著血漿Hcy水平的增高，患缺血性腦血管病的相對危險度逐漸增加，與非Hcy患者相比，Hcy患者患缺血性腦血管病相

4、對危險度增加。此外，研究還發(fā)現(xiàn)，不論是缺血性腦血管病患者，還是腦梗死和TIA患者，其血漿Hcy水平均高于對照組，提示Hcy水平升高可能與缺血性腦血管病的發(fā)病密切相關(guān)。腦梗死與TIA患者血漿Hcy水平相比無顯著性差異，表明Hcy水平與缺血性腦血管病的類型可能無關(guān)。北京 公司的同型半胱氨酸測定試劑盒（酶法）研發(fā)工作已完成，為了驗證該試劑盒在臨床應(yīng)用上的適用性和準(zhǔn)確性，現(xiàn)開展臨床驗證工作。二、產(chǎn)品原理、特點及試驗范圍1、機理同型半胱氨酸被轉(zhuǎn)化為游離型后，通過與共價底物反應(yīng)，同時產(chǎn)生腺苷。腺苷立即水解成氨和次黃嘌呤，氨在谷氨酸脫氫酶的作用下，使-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸還原性（NADH）轉(zhuǎn)化為NAD+，樣

5、本中的同型半胱氨酸的濃度與NADH的變化成正比。2、特點液體雙試劑，開瓶即用，具有操作簡單、快速、微量、特異性好和精密度高等優(yōu)點，可應(yīng)用于全自動或半自動生化分析儀。3、試驗范圍樣本為新鮮血清或血漿（肝素抗凝）。請采血后立即離心分離血漿，或冷藏保存1h內(nèi)分離，離心后的樣本在室溫下可穩(wěn)定4天，02可穩(wěn)定數(shù)周，20下可穩(wěn)定數(shù)月或數(shù)年。三、產(chǎn)品的適應(yīng)癥：高HCY水平可導(dǎo)致動脈血管壁內(nèi)皮片狀脫落，同時刺激平滑肌細(xì)胞增生，引起血管損傷，出現(xiàn)類似動脈粥樣硬化性病理改變。同時高HCY還會增大冠心病、中風(fēng)、高血壓、老年癡呆等疾病的危險性。四、臨床試驗的項目內(nèi)容和目的項目內(nèi)容：選擇已批準(zhǔn)上市的同型半胱氨酸測定試劑

6、盒與本試劑盒進(jìn)行對比試驗。項目目的：（1）與對照試劑同時測定正常人和病理值標(biāo)本的同型半胱氨酸，對臨床試驗結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，證明本試劑與對比試劑具有等效性。（2）通過臨床試驗對臨床前制定的各項指標(biāo)進(jìn)行修正，發(fā)現(xiàn)或預(yù)測在實際應(yīng)用中遇到的問題，在說明書中提醒用戶注意。五、總體試驗設(shè)計（包括成功和失敗的可能性分析）（一）試驗機構(gòu)： （二）試驗方法：選擇已批準(zhǔn)上市的同型半胱氨酸測定產(chǎn)品與本品對臨床樣本進(jìn)行對比試驗。如果對同一份血清樣本，雙方試劑檢測結(jié)果一致時，認(rèn)同檢測結(jié)果。如果對同一份樣本檢測結(jié)果不一致，需根據(jù)選用第三種試劑或方法進(jìn)一步檢測，結(jié)果遵從多數(shù)原則。1、臨床試驗所用的試驗材料1) 臨床試驗研

7、究產(chǎn)品名稱：同型半胱氨酸測定試劑盒（酶法）來源：北京 有限公司規(guī)格：R1-66ml，R2-18ml效期：12個月 保存條件：2-82) 對比用已批準(zhǔn)上市的同類產(chǎn)品名稱：同型半胱氨酸測定試劑盒（循環(huán)酶法）來源：北京九強生物技術(shù)有限公司規(guī)格：R1：2×20ml，R2：1×7ml，R3：1×6ml效期：12個月 保存條件：2-8批準(zhǔn)文號：國食藥監(jiān)械(準(zhǔn))字2006第3400161號3）如果在臨床試驗過程中出現(xiàn)對比試驗測定結(jié)果不符的樣本，應(yīng)采用金標(biāo)準(zhǔn)或其他方法再次進(jìn)行確認(rèn)試驗，以便對臨床結(jié)果進(jìn)行分析。4）儀器設(shè)備：雅培Aeroset2000型全自動生化分析儀。2、試驗成功

8、與失敗的可行性分析在整個試驗過程中，對操作人員的臨床經(jīng)驗和操作技能有專業(yè)要求，必須精確掌握臨床檢驗規(guī)程和制度，嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行操作，本產(chǎn)品臨床試驗即可成功。本試驗進(jìn)行過程中如果保存條件不當(dāng)或者出現(xiàn)其他非預(yù)期的產(chǎn)品性能變化，再或者操作不當(dāng)?shù)榷伎赡軐?dǎo)致檢測結(jié)果的嚴(yán)重偏離，出現(xiàn)這種情況不要急于認(rèn)定試劑本身出現(xiàn)質(zhì)量問題，應(yīng)當(dāng)認(rèn)真分析整個試驗過程，確保過程及操作無誤后進(jìn)行重復(fù)試驗，以得到正確的結(jié)果。上述風(fēng)險可通過使用前嚴(yán)格的產(chǎn)品檢查和有經(jīng)驗的醫(yī)生操作降至最低。3、臨床試驗質(zhì)量控制1） 嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行操作，確保試驗結(jié)果準(zhǔn)確。2） 在每次試驗中都檢測質(zhì)控血清，測定值應(yīng)在規(guī)定范圍之內(nèi)。3） 臨床

9、試驗應(yīng)指定專人負(fù)責(zé)，操作者應(yīng)具備相應(yīng)的試驗技能。4、試驗報告要求臨床試驗研究結(jié)束之后，實施臨床試驗單位應(yīng)按照要求出具臨床試驗報告，并加蓋實施臨床試驗單位公章。臨床研究報告至少應(yīng)包括產(chǎn)品名稱，生產(chǎn)單位，產(chǎn)品批號，試驗單位，試驗日期，試驗方法、結(jié)果及結(jié)論。六、臨床評價標(biāo)準(zhǔn)1 產(chǎn)品性能產(chǎn)品性能測定結(jié)果應(yīng)達(dá)到下述要求：（1）空白吸光度以蒸餾水為檢測樣本時，吸光度應(yīng)不小于0.800A。（2）試劑空白吸光度變化率以蒸餾水為檢測樣本時，每分鐘吸光度變化值(A/min)的絕對值應(yīng)不大于0.100A。（3）靈敏度 Hcy含量為10umol/L時，測定吸光度變化率(減掉試劑空白吸光度變化率) A 0.002Abs

10、/min。（4）準(zhǔn)確性以Roche或Randox等公司質(zhì)控物為標(biāo)本，測定值在給定的范圍內(nèi)。（5）線性范圍在0-50umol/L范圍內(nèi)，用高值標(biāo)本進(jìn)行系列稀釋，配制5個不同濃度的標(biāo)本（濃度在0-50umol/L范圍內(nèi)），計算相關(guān)系數(shù)（r）0.990。（6）精密性（批內(nèi)精密性）同一批號的試劑分別測定高、低值兩個標(biāo)本，每個標(biāo)本重復(fù)測定10次，分別計算變異系數(shù)CV，應(yīng)均不大于8.0%。2 參考值驗證（1）正常標(biāo)本和病理標(biāo)本的測定結(jié)果均應(yīng)與相應(yīng)項目的參考值相符，如有不相符的標(biāo)本出現(xiàn)，且超過一定的醫(yī)學(xué)決定水平，應(yīng)采用其他方法或第三方試劑再次進(jìn)行確認(rèn)試驗，結(jié)果遵從多數(shù)原則。（2）統(tǒng)計本試劑與對照組試劑對樣本

11、的測定值，計算相關(guān)性；對兩組結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，應(yīng)無統(tǒng)計學(xué)差異。 七、臨床試驗持續(xù)時間及其確定理由該產(chǎn)品為檢測用體外診斷試劑，不存在試驗病例的觀察周期；操作簡便，快速，在被檢樣本準(zhǔn)備充足的情況下，幾個小時內(nèi)即可完成；或者根據(jù)該產(chǎn)品及標(biāo)本的要求可以隨時檢測，因此臨床試驗持續(xù)時間取決于臨床醫(yī)院病理收集情況。根據(jù)醫(yī)院內(nèi)住院病人和門診流量情況，認(rèn)為30天內(nèi)可以完成樣本的檢測。八、臨床試驗例數(shù)及其確定理由 依據(jù)體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則確定每家臨床醫(yī)院樣本數(shù)為100例，且具有統(tǒng)計學(xué)意義。正常組：70例以上正常人樣本，性別不限，年齡不限。疾病組：經(jīng)臨床診斷為患有動脈粥樣硬化、冠心病等疾病的患者30例

12、。九、選擇對象范圍、選擇對象數(shù)量及選擇理由為了體現(xiàn)結(jié)果的廣泛性和代表性，考察性別、年齡等因素是否會對結(jié)果產(chǎn)生影響，我們選擇不同性別和年齡段的受試者樣本進(jìn)行臨床試驗研究。對照組的正常人并非指任何組織和器官的形態(tài)和功能都無異常的人，而是指各種生理指標(biāo)正常波動，并排除患有動脈粥樣硬化、冠心病等可能使HCY升高的患者。疾病組為經(jīng)臨床診斷確認(rèn)為患有動脈粥樣硬化、冠心病等可能使HCY升高的患者。十、不良反應(yīng)預(yù)測及應(yīng)當(dāng)采取的措施本品作為體外診斷試劑，不直接接觸人體，僅對血清或血漿標(biāo)本進(jìn)行檢測，但其檢測結(jié)果間接影響臨床醫(yī)生的診治。因此我們對合格產(chǎn)品在按要求使用中出現(xiàn)的預(yù)期之外的境況作為不良反應(yīng)進(jìn)行預(yù)測：（1）

13、 如果保存條件不當(dāng)或者出現(xiàn)其他非預(yù)期的產(chǎn)品性能變化，甚至使用過期產(chǎn)品可能導(dǎo)致檢測結(jié)果的嚴(yán)重偏離；（2） 試驗操作人員操作不當(dāng)?shù)纫部赡軐?dǎo)致檢測結(jié)果的嚴(yán)重偏離；采取的相應(yīng)措施：在整個實驗過程中，對操作人員的臨床經(jīng)驗和操作技能有專業(yè)要求，必須經(jīng)過培訓(xùn)、精確掌握臨床檢驗規(guī)程和制度，嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明進(jìn)行操作；另外我們還對上述可能發(fā)生的不良反應(yīng)在說明書中明確提示，將上述風(fēng)險降到最低。十一、統(tǒng)計指標(biāo)：1 產(chǎn)品性能（1）空白吸光度統(tǒng)計以蒸餾水為檢測標(biāo)本時的吸光度值。（2）試劑空白吸光度變化率以蒸餾水為檢測樣本時，每分鐘吸光度變化值(A/min)的絕對值。（3）靈敏度 測定已知濃度的標(biāo)本，記錄反應(yīng)前后吸光度差值

14、，計算平均值，換算為10umol/L時吸光度差值。(4) 準(zhǔn)確性以Roche或Randox等公司質(zhì)控物為標(biāo)本，記錄測定值。（5）線性范圍在0-50umol/L內(nèi)，用高值標(biāo)本進(jìn)行系列稀釋，配制5個不同濃度的標(biāo)本進(jìn)行測定,記錄測定結(jié)果，計算相關(guān)系數(shù)r。根據(jù)下列公式計算相關(guān)系數(shù)：r=式中： 測定管溶液濃度的測定值； 與測定管溶液濃度相對應(yīng)的稀釋比例；i 1,2,3,n；n 測定標(biāo)本數(shù)。（6）精密性（批內(nèi)精密性）同一批號的試劑分別測定高、低值兩個標(biāo)本，每個標(biāo)本重復(fù)測定10次，記錄測定值，分別計算兩個水平的變異系數(shù)CV。變異系數(shù)CV計算公式：CV（%）= ×100% 式中： Xi 試劑測定標(biāo)本

15、結(jié)果的值； n次試劑測定結(jié)果的平均值； i 1，2，3，n；n 重復(fù)測定次數(shù)。2 參考值驗證使用北京九強生物技術(shù)有限公司的試劑盒和北京 生物工程技術(shù)有限公司的試劑盒同時測定樣本，記錄測定結(jié)果，計算兩組數(shù)據(jù)的相關(guān)性，并對兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行T檢驗，檢驗兩組數(shù)據(jù)間是否有統(tǒng)計學(xué)差異。樣本相關(guān)性檢驗:T檢驗：十二、各方承擔(dān)的職責(zé)：1、臨床申請單位職責(zé)：（1）與試驗單位共同設(shè)計、制定臨床試驗方案并簽署。（2）向試驗單位免費提供受試產(chǎn)品。（3）負(fù)擔(dān)與試驗相關(guān)的各種費用。2、臨床試驗單位職責(zé)：（1）與申請單位共同設(shè)計、制定臨床試驗方案，并簽署。（2）試驗單位中止臨床試驗前，應(yīng)當(dāng)通知申請單位并說明理由。（3）出具臨床試驗報告，并對報