細(xì)胞工程學(xué)復(fù)習(xí)題

1、細(xì)胞工程學(xué)習(xí)題1誘導(dǎo)試管苗生根時(shí)，培養(yǎng)基的調(diào)整應(yīng)A加大鹽的濃度 B加活性炭 C加大分裂素的濃度 D加大生長(zhǎng)素的濃度2下列實(shí)驗(yàn)中可能獲得三倍體植株的是A小麥的莖尖培養(yǎng) B番茄花藥培養(yǎng)C玉米胚乳培養(yǎng) D玉米花粉培養(yǎng)3動(dòng)物體內(nèi)各種類型的細(xì)胞中，具有最高全能性的細(xì)胞是A體細(xì)胞 B生殖細(xì)胞 C受精卵 D干細(xì)胞4下列哪個(gè)是植物離體培養(yǎng)常用的主要糖類 A 葡萄糖 B果糖 C麥芽糖 D蔗糖5農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化方法主要適用于 A草本植物 B木本植物 C單子葉植物 D雙子葉植物6原生質(zhì)體純化步驟大致有如下幾步：將收集到的濾液離心，轉(zhuǎn)速以將原生質(zhì)體沉淀而碎片等仍懸浮在上清液中為準(zhǔn)，一般以500rmin離心15min。

2、用吸管謹(jǐn)慎地吸去上清液。將離心下來(lái)的原生質(zhì)體重新懸浮在洗液中(除不含酶外，其他成分和酶液相同)，再次離心，去上清液，如此重復(fù)三次。將原生質(zhì)體混合液經(jīng)篩孔大小為40100um的濾網(wǎng)過(guò)濾，以除去未消化的細(xì)胞團(tuán)塊和篩管、導(dǎo)管等雜質(zhì)，收集濾液。用培養(yǎng)基清洗一次，最后用培養(yǎng)基將原生質(zhì)調(diào)到一定密度進(jìn)行培養(yǎng)。一般原生質(zhì)體的培養(yǎng)密度為104106ml。正確的操作步驟是：（ ） A B C D 7常用的細(xì)胞融合劑是 A刀豆球蛋白 B聚乙二醇（PEG） C細(xì)胞松弛素B D脂質(zhì)體8利用細(xì)胞雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體過(guò)程中，HAT培養(yǎng)基用來(lái)進(jìn)行 A細(xì)胞融合 B雜交瘤選擇 C檢測(cè)抗體 D動(dòng)物免疫9下列過(guò)程中，沒(méi)有發(fā)生膜融

3、合的是A植物體細(xì)胞雜交 B受精過(guò)程 C氧進(jìn)入細(xì)胞中的線粒體 D單克隆抗體的產(chǎn)生10科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體。與骨髓瘤細(xì)胞融合的是A經(jīng)過(guò)免疫的B細(xì)胞 B沒(méi)經(jīng)過(guò)免疫的T細(xì)胞 C經(jīng)過(guò)免疫的T淋巴細(xì)胞 D沒(méi)經(jīng)過(guò)免疫的B淋巴細(xì)胞二 填空題1、在植物組織培養(yǎng)基中，添加_細(xì)胞分裂素_ 能促進(jìn)合成細(xì)胞分裂素，有利于細(xì)胞的分裂與分化，促進(jìn)芽的形成2、在植物組織培養(yǎng)基中，添加_肌醇_ 能促進(jìn)糖類物質(zhì)的轉(zhuǎn)化，也能促進(jìn)愈傷組織的生長(zhǎng)以及胚狀體的形成3、生長(zhǎng)素是由_色氨酸_通過(guò)一系列中間產(chǎn)物形成，在植物組織培養(yǎng)中生長(zhǎng)素主要是用來(lái)刺激細(xì)胞的分裂和誘導(dǎo)根的分化，吲哚乙

4、酸（IAA）、2、4-二氯苯養(yǎng)乙酸（2、4-D）、吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸(NAA)、吲哚丁酸（IBA）等為類生長(zhǎng)素。4、細(xì)胞分裂素大多是_嘌呤_的衍生物，在植物組織培養(yǎng)中細(xì)胞分裂素主要是用來(lái)_5、生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素配比低有利于_芽_的形成6人工種子的結(jié)構(gòu): _體細(xì)胞胚、人工種皮、人工胚乳_(kāi)，在人工種子制作中，細(xì)胞培養(yǎng)初期加入細(xì)胞分裂抑制劑5-氨基尿嘧啶是為了滿足_胚狀體同步發(fā)育_的要求 7植物次級(jí)代謝產(chǎn)物在培養(yǎng)系統(tǒng)中的積累會(huì)目標(biāo)產(chǎn)物的合成具有反饋抑制，可以采用流加培養(yǎng)_和兩相培養(yǎng)_工藝技術(shù)克服8 1923年法國(guó)科學(xué)家卡雷兒設(shè)計(jì)培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞的_卡式瓶_，培養(yǎng)雞心組織獲得成功三、 名詞解釋 1

5、細(xì)胞工程 細(xì)胞工程是指主要以細(xì)胞為對(duì)象，應(yīng)用生命科學(xué)理論，借助工程學(xué)原理與技術(shù)，有目的地利用或改造生物遺傳性狀，以獲得特定的細(xì)胞、組織產(chǎn)品或新型物種的一門(mén)綜合性科學(xué)技術(shù)2細(xì)胞工程包含哪幾方面的內(nèi)容 植物快速繁殖  新物種培育  細(xì)胞工程生物制品  細(xì)胞療法與組織修復(fù)3什么是植物組織培養(yǎng) ，什么是植物細(xì)胞培養(yǎng) ，為什么植物組織培養(yǎng)能夠?qū)崿F(xiàn)植物的大規(guī)模繁殖植物組織培養(yǎng)是將植物器官、組織、細(xì)胞或原生質(zhì)體等外植體材料無(wú)菌條件下培養(yǎng)在人工培養(yǎng)基上，在適當(dāng)條件下誘發(fā)長(zhǎng)成完整植株的一種技術(shù)。 植物細(xì)胞培養(yǎng)是在離體條件下，將分離的植物細(xì)胞通

6、過(guò)繼代培養(yǎng)增殖，獲得大量細(xì)胞群體的一種技術(shù)。（植物組織培養(yǎng)目的，就是獲得新的個(gè)體；植物細(xì)胞培養(yǎng)目的，就是獲得大量的細(xì)胞。） 不受季節(jié)、地域、氣候和有害生物影響，培養(yǎng)條件可控 遺傳性狀相對(duì)穩(wěn)定，具有較穩(wěn)定的次級(jí)代謝產(chǎn)物的合成能力 分化程度高，可產(chǎn)生高度分化的細(xì)胞合成的次級(jí)代謝產(chǎn)物，例如根、葉中合成的代謝產(chǎn)物 激素自養(yǎng)型，成本低；生長(zhǎng)速度快。 注：外植體切割可以形成很多植株4外植體外植體主要指用于離體培養(yǎng)的植物或組織切段。一般來(lái)說(shuō)，來(lái)源于生長(zhǎng)活躍或生長(zhǎng)潛力大的植物組織或器官的外植體更有利于誘導(dǎo)分化形成再生植株5、器官發(fā)生途徑與體細(xì)胞胚途徑器官發(fā)生途

7、徑：外植體誘導(dǎo)愈傷組織的形成，在激素的調(diào)控作用下，愈傷組織分化形成形態(tài)與功能不同的細(xì)胞，繼而形成不同的器官，發(fā)育成完整的植株。(成熟細(xì)胞愈傷組織出根出芽完整植株。植物的器官發(fā)生指在離體培養(yǎng)的組織或細(xì)胞團(tuán)（愈傷組織）分化形成不定根、不定芽等器官的過(guò)程。)  體細(xì)胞胚發(fā)生途徑：外植體誘導(dǎo)愈傷組織的形成，愈傷組織分散成單個(gè)細(xì)胞，單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)形成體細(xì)胞胚，體細(xì)胞胚促進(jìn)胚胎發(fā)育形成再生植株。(成熟細(xì)胞分生細(xì)胞胚狀體完整植株。指體細(xì)胞在離體培養(yǎng)過(guò)程中經(jīng)過(guò)了胚胎發(fā)育過(guò)程。) 6玻璃化現(xiàn)象植物組織培養(yǎng)中，常會(huì)出現(xiàn)一些半透明狀的畸形試管植物，這類植物體被稱為“玻璃苗”，這種現(xiàn)象稱為

8、玻璃化現(xiàn)象，又稱過(guò)度水化現(xiàn)象。 7、采用體外受精技術(shù)獲得試管動(dòng)物時(shí)，為什么要對(duì)精子進(jìn)行體外獲能技術(shù)處理精子獲能是指精子獲得穿透卵子透明帶能力的過(guò)程。雄性精液中含有“去能因子”（多是：糖蛋白），附在精子表面，是頂體酶的抑制劑，抑制了精子的受精能力。去能因子的清除，使精子頂體酶活性恢復(fù)，具有受精能力。主要依靠宮頸、子宮及輸卵管液中的淀粉酶、胰蛋白酶、葡糖苷酶及唾液酸酶，水解糖蛋白等“去能因子”。 增強(qiáng)精子活力，使精子具有在體外與卵子結(jié)合的能力（精子獲能）并能發(fā)生頂體反應(yīng)。精子獲能在生育上具有重要意義，通過(guò)獲能不僅增強(qiáng)了精子活力，而且關(guān)鍵是去除了精子表面的覆蓋物，暴露出精子膜和卵

9、子的結(jié)合位點(diǎn)，使精子具有發(fā)生頂體反應(yīng)的能力。當(dāng)精子遇上卵子時(shí)，精子頭部的“頂體”脫落，頂體酶釋放，使卵子的放射冠和透明帶溶解，精子進(jìn)入卵細(xì)胞達(dá)到受精的目的。8、超排卵技術(shù)超數(shù)排卵：雌性動(dòng)物用促卵泡素和促黃體素處理后，從輸卵管中沖取成熟卵子，可直接與獲能精子受精。（人工地使動(dòng)物的激素水平達(dá)到閥值，誘發(fā)卵的成熟與排放） 為了獲得足夠的卵母細(xì)胞需要采用超數(shù)排卵技術(shù)。誘導(dǎo)家畜超數(shù)排卵需注射外源激素，其目的就是人工地使動(dòng)物的激素水平達(dá)到閾值，從而誘發(fā)卵的成熟與排放。9、在動(dòng)物細(xì)胞核移植實(shí)驗(yàn)中為什么要對(duì)供核細(xì)胞進(jìn)行饑餓培養(yǎng)供核細(xì)胞可以是動(dòng)物原代細(xì)胞或傳代細(xì)胞。分離制備單個(gè)動(dòng)物細(xì)胞，體外培養(yǎng)得到正

10、常二倍體體細(xì)胞系，然后進(jìn)行15 天的缺血饑餓培養(yǎng)，誘使細(xì)胞處于“靜止”狀態(tài)（一般進(jìn)入G0 期）。GO期細(xì)胞從生長(zhǎng)方面看處于靜止?fàn)顟B(tài)，在適宜刺激下，能被觸發(fā)，從靜止?fàn)顟B(tài)進(jìn)入增殖狀態(tài)。為核移植效率提供保證。 因?yàn)轶w外培養(yǎng)得到正常二倍體體細(xì)胞系，通常采用處于G0期細(xì)胞作為核移植的供體細(xì)胞。在510d內(nèi)將培養(yǎng)液中的血清濃度從10逐漸減少到0.5（即血清饑餓法），造成營(yíng)養(yǎng)缺乏，才能誘導(dǎo)細(xì)胞脫離正常周期而進(jìn)入G0期，所以需對(duì)供核細(xì)胞進(jìn)行饑餓培養(yǎng)。G0期細(xì)胞處于靜止?fàn)顟B(tài)，在適宜的刺激下，細(xì)胞能被觸發(fā)，從靜止?fàn)顟B(tài)進(jìn)入到增殖狀態(tài)。10、聚乙二醇誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理，為什么要對(duì)融合細(xì)胞

11、篩選(PEG的促融合機(jī)制尚不完全清楚，它可能引起細(xì)胞膜中磷脂的酰鍵及極性基團(tuán)發(fā)生結(jié)構(gòu)重排。) 聚乙二醇誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理： PEG分子具有輕微的負(fù)極性，可以與具有正極性基團(tuán)的水分子、蛋白質(zhì)、碳水化合物形成氫鍵，在相鄰的原生質(zhì)體間起到分子橋的作用，使原生質(zhì)體接觸。當(dāng)PEG分子被洗脫時(shí)，膜電荷發(fā)生紊亂而重新分配。此時(shí)，一種原生質(zhì)體上帶正電的基團(tuán)可能與另外一個(gè)原生質(zhì)體中帶負(fù)電的基團(tuán)相連，導(dǎo)致原生質(zhì)體融合。 除了PEG的這種分子橋作用外，它可以改變膜的物理和化學(xué)性質(zhì)，增加類脂膜的流動(dòng)性，使原生質(zhì)體的核、細(xì)胞器發(fā)生融合成為可能，從而促進(jìn)細(xì)胞融合。 對(duì)融合細(xì)胞篩選的

12、原因：細(xì)胞融合是一個(gè)隨機(jī)的物理過(guò)程，經(jīng)融合后細(xì)胞將以多種形式出現(xiàn)，需要通過(guò)培養(yǎng)和篩選，除去不需要的細(xì)胞，分離出需要的雜種細(xì)胞，從而解決融合細(xì)胞的選擇問(wèn)題。 11為什么動(dòng)物的多倍體比植物的多倍體少植物：（1）大多數(shù)植物是雌雄同體或雌雄同花的，它們的精原細(xì)胞和卵原細(xì)胞可能同時(shí)發(fā)生不正常的減數(shù)分裂，使配子中染色體數(shù)目不減半，這種配子通過(guò)自體受精而自然形成了多倍體。 （2）植物的繁殖比較容易，如果多倍體植物不能形成種子，它還能依靠營(yíng)養(yǎng)器官的無(wú)性繁殖來(lái)產(chǎn)生后代，因此在生物進(jìn)化過(guò)程中，植物多倍體有可能被保存下來(lái)。動(dòng)物：（1）高等動(dòng)物的遠(yuǎn)源雜交能力很弱，這樣難以形成雜種個(gè)體。 

13、（2）多倍體動(dòng)物高度不育，染色體異常通常會(huì)造成胚胎死亡，因此很難得到多倍體的子代個(gè)體。 7為什么在植物細(xì)胞培養(yǎng)中，要采取看護(hù)培養(yǎng)技術(shù)處理單個(gè)細(xì)胞因?yàn)槌醪降玫降闹参飭渭?xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)增殖比較困難，需要設(shè)計(jì)特殊的培養(yǎng)方式提高培養(yǎng)效率?？醋o(hù)培養(yǎng)是用一塊活躍生長(zhǎng)的愈傷組織來(lái)看護(hù)單個(gè)細(xì)胞，使其持續(xù)分裂和增殖。這塊愈傷組織被稱為看護(hù)組織。目的使單細(xì)胞恢復(fù)活力。具體方法：將單個(gè)細(xì)胞接種于濾紙上，再置于愈傷組織之上培養(yǎng)。優(yōu)點(diǎn)是：簡(jiǎn)便、成功率高。（缺點(diǎn)是不能在顯微鏡下直接觀察。） 8、植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)有哪些優(yōu)點(diǎn)，通過(guò)植物細(xì)胞培養(yǎng)獲取植物次級(jí)代謝產(chǎn)物，可以采用哪些方法提高次級(jí)代謝產(chǎn)物產(chǎn)量可以增加

14、細(xì)胞與培養(yǎng)液的接觸，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)的吸收。 保證良好的混合狀態(tài)，從而獲得良好的氣體傳遞效果。 可以達(dá)到較高的細(xì)胞濃度，容易放大培養(yǎng)。 提高次級(jí)代謝產(chǎn)物產(chǎn)量的方法： 為了提高次級(jí)代謝產(chǎn)物產(chǎn)量，首先要選育優(yōu)良的細(xì)胞株，培養(yǎng)時(shí)保證培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件符合細(xì)胞生長(zhǎng)和代謝的需要。通過(guò)添加次級(jí)代謝產(chǎn)物的前體物質(zhì)、誘導(dǎo)子等物質(zhì)進(jìn)行調(diào)控。還可以通過(guò)添加表面活性劑增加細(xì)胞膜的通透性。 9動(dòng)物細(xì)胞貼附生長(zhǎng)的過(guò)程？什么是微載體培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞，有什么優(yōu)點(diǎn)，在此過(guò)程中如何接種動(dòng)物細(xì)胞貼附生長(zhǎng)的過(guò)程： 游離期：接種的細(xì)胞在培養(yǎng)液中呈懸浮態(tài)。由于細(xì)胞質(zhì)的回縮，各種形狀的細(xì)胞開(kāi)

15、始變圓。 吸附期：多數(shù)細(xì)胞可在24h內(nèi)貼壁，血清中有促進(jìn)細(xì)胞貼壁的糖蛋白，這些帶正電荷糖蛋白的促貼壁因子先吸附于載體表面，懸浮細(xì)胞再在吸附有促貼壁因子的載體上附著。 繁殖期：懸浮細(xì)胞貼壁后經(jīng)過(guò)一段停滯后開(kāi)始分裂。隨著細(xì)胞數(shù)量的增多，細(xì)胞間開(kāi)始接觸并連接成片。出現(xiàn)接觸性抑制。 退化期：細(xì)胞長(zhǎng)滿培養(yǎng)瓶壁，隨著營(yíng)養(yǎng)物的消耗和代謝物的積累，密度抑制現(xiàn)象出現(xiàn)，細(xì)胞開(kāi)始退化。如不及時(shí)傳代培養(yǎng)，細(xì)胞會(huì)從瓶壁上脫落死亡。 微載體培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞 微載體培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)：貼壁，懸浮 模擬了體內(nèi)三維生長(zhǎng)環(huán)境，減輕了接觸抑制，可以多層生長(zhǎng)。 很好地

16、解決了生物反應(yīng)器的空間分布問(wèn)題，單位體積培養(yǎng)液的細(xì)胞產(chǎn)率高；培養(yǎng)系統(tǒng)占地面積和空間?。粍趧?dòng)強(qiáng)度??；放大容易，使大規(guī)模培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞成為可能。 把懸浮培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)融合在一起，兼有兩者的優(yōu)點(diǎn)；可以稍加改造利用傳統(tǒng)生物反應(yīng)器。 接種與收獲方便；可循環(huán)、連續(xù)收獲與培養(yǎng)，培養(yǎng)基利用率較高。 接種方法： 球傳球接種技術(shù)：將貼滿細(xì)胞的微載體與新鮮微載體混合，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞因隨機(jī)碰撞而實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)移貼附在新載體表面的技術(shù)。（保證培養(yǎng)基和微載體處于穩(wěn)定的pH與溫度水平， 接種對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞。不同的微載體所用濃度是不同的，常使用23g/L的微載體含量。攪動(dòng)速度以5070r/m

17、in為好。） 10單克隆抗體技術(shù)中為什么要采用HAT培養(yǎng)基，如何獲取人源化的單克隆抗體 ：因?yàn)镠AT培養(yǎng)基中的氨基蝶呤可阻斷細(xì)胞正常途徑合成DNA，融合使用的瘤細(xì)胞一般是HGPRT和TK缺陷型，也不能采用補(bǔ)救途徑合成DNA。兩條途徑被阻斷后，瘤細(xì)胞（未融合的與自身融合的）因不能正常合成DNA而死亡。融合細(xì)胞具有親代雙方的遺傳性能，具有來(lái)自于淋巴細(xì)胞的HGPRT與TK，可采用補(bǔ)救途徑合成DNA，因此可在HAT培養(yǎng)中存活于繁殖，繼而可篩選出雜交瘤細(xì)胞，獲得單克隆抗體。 制備人源單克隆抗體的方法如下： A人-鼠雜交瘤單克隆抗體：用小鼠骨髓瘤細(xì)胞和來(lái)源于人外周血

18、淋巴細(xì)胞、淋巴結(jié)細(xì)胞、脾細(xì)胞進(jìn)行融合。 B人-人雜交瘤單克隆抗體：可通過(guò)建立人骨髓瘤或其他人細(xì)胞系與人淋巴細(xì)胞融合來(lái)制備人單克隆抗體 C嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷小鼠制備人單克隆抗體：SCID小鼠是由CB-17純系小鼠16號(hào)染色體突變，使動(dòng)物T、B淋巴細(xì)胞功能障礙導(dǎo)致聯(lián)合免疫缺陷。免疫缺陷使動(dòng)物可接受人體組織或器官移植，形成人-鼠嵌合體小鼠。將人免疫干細(xì)胞移植到SCID小鼠體內(nèi)，SCID小鼠實(shí)際上獲得了人的免疫系統(tǒng)。這種小鼠可用任何抗原免疫，從激活的淋巴細(xì)胞中富集抗原特異性人源性B淋巴細(xì)胞，通過(guò)細(xì)胞融合制備抗體。 D基因工程單克隆抗體：基因工程抗體是通過(guò)PCR技術(shù)獲得抗體基

19、因或抗體基因片段，與適當(dāng)載體重組后引入不同表達(dá)系統(tǒng)所產(chǎn)生的抗體?；蚬こ碳夹g(shù)可以獲得完全人源化抗體。四簡(jiǎn)答題1簡(jiǎn)述毛狀根培養(yǎng)獲取次級(jí)代謝產(chǎn)物？毛狀根是由發(fā)根農(nóng)桿菌含有的Ri質(zhì)粒引起的。將發(fā)根農(nóng)桿菌含有的Ri質(zhì)粒中的T-DNA 片段整合到植物細(xì)胞的DNA上誘導(dǎo)出毛狀根，從而建立起毛狀根培養(yǎng)系統(tǒng)，從毛狀根中 提取次生代謝產(chǎn)物。 Ri質(zhì)粒上vir區(qū)具有很高的保守性。在通常狀態(tài)下vir區(qū)的基因處于抑制狀態(tài)，當(dāng)發(fā) 根農(nóng)桿菌感染寄主植物時(shí)，受損傷的植物細(xì)胞合成的低分子苯酚化合物乙酰丁香酮使vir 區(qū)處于抑制狀態(tài)的基因被激活，產(chǎn)生一系列限制性核酸內(nèi)切酶，在酶

20、的切割作用下產(chǎn)生 T-DNA鏈，T-DNA進(jìn)入植物細(xì)胞核內(nèi)，整合進(jìn)植物細(xì)胞的基因組。T-DNA上有生長(zhǎng)素合成 基因tms1和tms2，指導(dǎo)IAA(吲哚乙酸）的合成，在不需要添加外源生長(zhǎng)激素的條件下， T-DNA在植物細(xì)胞中得到轉(zhuǎn)錄與翻譯，刺激植物細(xì)胞形成毛狀根，然后從毛狀根中提取次 生代謝產(chǎn)物。 2在轉(zhuǎn)基因生物反應(yīng)器構(gòu)建中，請(qǐng)分析一種目標(biāo)蛋白高效表達(dá)的策略外源基因在宿主內(nèi)的大量擴(kuò)增是目的蛋白高效表達(dá)的保證。氨甲蝶呤（MTX）是動(dòng)物細(xì)胞關(guān)鍵代謝酶二氫葉酸還原酶（）的抑制劑，經(jīng)過(guò)氨甲蝶呤處理后大多數(shù)細(xì)胞死亡，存活下來(lái)的細(xì)胞中dhrf基因得以擴(kuò)增，提高二氫葉酸還原酶的表達(dá)水平，抵消氨甲蝶呤的抑制作用，與該基因相鄰的染色體片段同樣擴(kuò)增。 外源基因與dhrf基因拼接構(gòu)建重組分子，轉(zhuǎn)化內(nèi)源缺陷型的細(xì)胞系。 dhrf缺陷型細(xì)胞一部分會(huì)接納dhrf，另一部分不會(huì)接納dhfr，接納dhrf的細(xì)胞外源基因表達(dá)水平低。 在不含核苷的培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選，只有含dhrf基因的細(xì)胞才能增殖，進(jìn)而