第七章病理制片

1、病理技術(shù)在醫(yī)學(xué)科研中的應(yīng)用病理技術(shù)在醫(yī)學(xué)科研中的應(yīng)用 病理學(xué)科是一門基礎(chǔ)與臨床之間起病理學(xué)科是一門基礎(chǔ)與臨床之間起著橋梁作用的重要學(xué)科，病理研究方法著橋梁作用的重要學(xué)科，病理研究方法在技術(shù)工作上又是多方面的，有尸體解在技術(shù)工作上又是多方面的，有尸體解剖、大體標(biāo)本的制作、制片（石臘切片剖、大體標(biāo)本的制作、制片（石臘切片、冰凍切片、半薄切片、超薄切片等）、冰凍切片、半薄切片、超薄切片等）、組織化學(xué)方法，免疫酶標(biāo)技術(shù)、熒光、組織化學(xué)方法，免疫酶標(biāo)技術(shù)、熒光技術(shù)、攝影技術(shù)等。技術(shù)、攝影技術(shù)等。 作為實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員大量的工作是作為實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員大量的工作是病理制片技術(shù)，即常規(guī)病理切片、特病理制片技術(shù)，即常規(guī)

2、病理切片、特殊染色，以供教學(xué)、科研、臨床活檢殊染色，以供教學(xué)、科研、臨床活檢診斷之用。診斷之用。 第一章第一章 病理技術(shù)的應(yīng)用范圍病理技術(shù)的應(yīng)用范圍幫助臨床查明死因（原因不明的死亡）幫助臨床查明死因（原因不明的死亡）手術(shù)后病變標(biāo)本，以明確診斷（臨床活手術(shù)后病變標(biāo)本，以明確診斷（臨床活檢）檢）提供教學(xué)、科研的資料提供教學(xué)、科研的資料第一節(jié)第一節(jié) 組織制片的概述組織制片的概述 組織制片技術(shù)的應(yīng)用，從組織制片技術(shù)的應(yīng)用，從1665年由年由HOOk發(fā)現(xiàn)細(xì)胞開始，已有發(fā)現(xiàn)細(xì)胞開始，已有300多年的多年的歷史。最早應(yīng)用冰凍切片；隨后又進(jìn)一歷史。最早應(yīng)用冰凍切片；隨后又進(jìn)一步利用石蠟的硬度，以石蠟包埋組織，

3、步利用石蠟的硬度，以石蠟包埋組織，制成石臘切片；后來又利用明膠、火棉制成石臘切片；后來又利用明膠、火棉膠、碳蠟和塑料等物質(zhì)的韌性，以其包膠、碳蠟和塑料等物質(zhì)的韌性，以其包埋組織而制作切片。埋組織而制作切片。 組織制片技術(shù)隨著生物學(xué)和醫(yī)學(xué)的組織制片技術(shù)隨著生物學(xué)和醫(yī)學(xué)的發(fā)展而發(fā)展。切片染色方法可以顯示不發(fā)展而發(fā)展。切片染色方法可以顯示不同細(xì)胞和組織形態(tài)，以及細(xì)胞和組織中同細(xì)胞和組織形態(tài)，以及細(xì)胞和組織中某些化學(xué)成分含量的變化。因此，組織某些化學(xué)成分含量的變化。因此，組織制片技術(shù)是教學(xué)、醫(yī)學(xué)和科研中不可缺制片技術(shù)是教學(xué)、醫(yī)學(xué)和科研中不可缺少的一個組成部分。少的一個組成部分。第二節(jié)第二節(jié) 制片的種類

4、制片的種類 1、組織切片法、組織切片法 任何組織切片必須依靠切片機(jī)將組任何組織切片必須依靠切片機(jī)將組織切成薄片（厚度以織切成薄片（厚度以m計(jì)），再進(jìn)行染計(jì)），再進(jìn)行染色而得到結(jié)果。在切成薄片以前必須設(shè)法色而得到結(jié)果。在切成薄片以前必須設(shè)法使組織內(nèi)部滲入足夠的支持物質(zhì)，使組織使組織內(nèi)部滲入足夠的支持物質(zhì)，使組織保持一定的硬度，然后使用切片機(jī)進(jìn)行切保持一定的硬度，然后使用切片機(jī)進(jìn)行切片。滲透到組織中的支持劑（物質(zhì)）有多片。滲透到組織中的支持劑（物質(zhì)）有多種，如石臘、明膠、火棉膠和塑料等。冰種，如石臘、明膠、火棉膠和塑料等。冰凍組織切片法是直接利用快速冷凍法進(jìn)行凍組織切片法是直接利用快速冷凍法進(jìn)行切

5、片切片。2、組織非切片法 不用切片機(jī)，不經(jīng)過切片手續(xù)不用切片機(jī)，不經(jīng)過切片手續(xù)而制成組織切片的方法，包括整體而制成組織切片的方法，包括整體封藏法、浮片法、壓碎法和組織直封藏法、浮片法、壓碎法和組織直接印片法。這些方法操作簡單而快接印片法。這些方法操作簡單而快，可根據(jù)制片的需要進(jìn)行選擇使用，可根據(jù)制片的需要進(jìn)行選擇使用。第三節(jié)第三節(jié) 制片方法的程序制片方法的程序組織切片法制作過程中的各種操作組織切片法制作過程中的各種操作 1、取材與固定 取材是根據(jù)實(shí)驗(yàn)的目的和要求取材是根據(jù)實(shí)驗(yàn)的目的和要求及病變程度而合理取得組織材料。及病變程度而合理取得組織材料。固定是用化學(xué)藥品把組織原來的結(jié)固定是用化學(xué)藥品把

6、組織原來的結(jié)構(gòu)保存下來，以便觀察研究之用，構(gòu)保存下來，以便觀察研究之用，固定劑同時具有硬化細(xì)胞組織的作固定劑同時具有硬化細(xì)胞組織的作用，使制片便于進(jìn)行。用，使制片便于進(jìn)行。2、洗滌與脫水 洗滌是把滲入組織中的固洗滌是把滲入組織中的固定劑洗去，防止染色中的結(jié)晶產(chǎn)定劑洗去，防止染色中的結(jié)晶產(chǎn)生。脫水是驅(qū)除組織中的水分，生。脫水是驅(qū)除組織中的水分，以利于透明和浸蠟。以利于透明和浸蠟。3、透明與浸蠟（透蠟）脫水后的組織中水分已被透明可代脫水后的組織中水分已被透明可代替，而有利于浸蠟。替，而有利于浸蠟。浸蠟的目的是使組織有一定的硬度浸蠟的目的是使組織有一定的硬度而有利于切片和細(xì)胞組織保持一定而有利于切片

7、和細(xì)胞組織保持一定的生活時狀態(tài)。的生活時狀態(tài)。4、包埋與切片 用石蠟和其他包埋劑將組用石蠟和其他包埋劑將組織包繞一定的形狀以便于切片織包繞一定的形狀以便于切片。將包埋好的組織塊用切片機(jī)。將包埋好的組織塊用切片機(jī)切成一定的厚度（以切成一定的厚度（以m計(jì)）。計(jì)）。5、貼片（展片、撈片）和染色將已切妥的切片在溫水中展平整后用將已切妥的切片在溫水中展平整后用載玻片貼上，稍晾趕后再烤片。載玻片貼上，稍晾趕后再烤片。染色可使細(xì)胞和組織被染上不同的顏染色可使細(xì)胞和組織被染上不同的顏色而產(chǎn)生一定的折射率，便于顯微鏡色而產(chǎn)生一定的折射率，便于顯微鏡觀察。觀察。6、封 片 切片染色后用膠類物質(zhì)將其切片染色后用膠類

8、物質(zhì)將其封固，以利于長期保存。封固，以利于長期保存。二、二、 組織切片的主要程序組織切片的主要程序 1.標(biāo)本切開或取厚塊標(biāo)本切開或取厚塊組織固組織固定定固定后處理固定后處理（石臘切片法）石臘切片法）脫水脫水透明透明浸蠟浸蠟包埋包埋切片切片粘片粘片脫蠟脫蠟各級乙醇各級乙醇水洗水洗常常規(guī)染色或特殊染色規(guī)染色或特殊染色脫水脫水透明透明樹膠封片樹膠封片2標(biāo)本切開或取厚塊標(biāo)本切開或取厚塊組織固定（冰組織固定（冰凍切片法）凍切片法）冰凍切片冰凍切片粘片粘片乙醇乙醇固定及固定及水洗水洗常規(guī)染色常規(guī)染色脫水脫水透明透明樹膠封片。樹膠封片。第二章第二章 固定、固定液和取材固定、固定液和取材第一節(jié)第一節(jié) 組織固定

9、方法組織固定方法 在制作組織切片的過程中，在制作組織切片的過程中，首先將組織充分固定后才能進(jìn)行首先將組織充分固定后才能進(jìn)行制片，尤其對石蠟切片，這是不制片，尤其對石蠟切片，這是不可少的重要步驟?？缮俚闹匾襟E。1、固定的意義、固定的意義 就是使要觀察的組織構(gòu)造就是使要觀察的組織構(gòu)造盡量接近于它生前的正常狀態(tài)。盡量接近于它生前的正常狀態(tài)。2、組織固定的目的、組織固定的目的 1）迅速防止組織，細(xì)胞的死后變化，防）迅速防止組織，細(xì)胞的死后變化，防止自溶與腐敗，以保持組織和細(xì)胞與正止自溶與腐敗，以保持組織和細(xì)胞與正常生活時的形態(tài)相似。常生活時的形態(tài)相似。 2）使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂肪、糖、酶等）使細(xì)胞內(nèi)

10、的蛋白質(zhì)、脂肪、糖、酶等各種成分轉(zhuǎn)變成不溶性物質(zhì)，以保持它各種成分轉(zhuǎn)變成不溶性物質(zhì)，以保持它原有的結(jié)構(gòu)與生活時相仿。原有的結(jié)構(gòu)與生活時相仿。 3）使組織中的各種物質(zhì)沉淀和凝固起來）使組織中的各種物質(zhì)沉淀和凝固起來，而產(chǎn)生不同的折射率，造成光學(xué)上的，而產(chǎn)生不同的折射率，造成光學(xué)上的差異，以便染色后易于鑒別和觀察。差異，以便染色后易于鑒別和觀察。 由于固定的目的是在于盡量使組由于固定的目的是在于盡量使組織和細(xì)胞保持與生活時相仿的成分和織和細(xì)胞保持與生活時相仿的成分和形態(tài)。因此，固定的組織愈新鮮愈好形態(tài)。因此，固定的組織愈新鮮愈好，固定組織時，應(yīng)使用足量的固定液，固定組織時，應(yīng)使用足量的固定液，其固

11、定液的量一般不少于組織塊總，其固定液的量一般不少于組織塊總體積的體積的4倍以上倍以上。3、固定劑的性質(zhì)、固定劑的性質(zhì) 1）迅速滲入組織而固定原生質(zhì)，使短期解）迅速滲入組織而固定原生質(zhì)，使短期解剖的組織形態(tài)不至于有較大變化。剖的組織形態(tài)不至于有較大變化。2）固定液有相當(dāng)?shù)臐B透力，對組織各部分）固定液有相當(dāng)?shù)臐B透力，對組織各部分的滲透力相等，可使組織內(nèi)外完全固定。的滲透力相等，可使組織內(nèi)外完全固定。3）使組織細(xì)胞中不至于因固定引起人為的）使組織細(xì)胞中不至于因固定引起人為的改變。改變。4）在凝固原生質(zhì)以后，增加細(xì)胞對于各種）在凝固原生質(zhì)以后，增加細(xì)胞對于各種穿透的抵抗力，不至于因以后的處理而使固穿透

12、的抵抗力，不至于因以后的處理而使固定后的原生質(zhì)變形。定后的原生質(zhì)變形。5）盡可能避免使組織膨脹或收縮。）盡可能避免使組織膨脹或收縮。6）能使細(xì)胞內(nèi)的成分（蛋白質(zhì)）凝固或沉）能使細(xì)胞內(nèi)的成分（蛋白質(zhì)）凝固或沉淀下來。淀下來。7）增加細(xì)胞內(nèi)含物的折光程度，易于鑒別）增加細(xì)胞內(nèi)含物的折光程度，易于鑒別。增加媒染作用和染色能力。增加媒染作用和染色能力。8）使組織變硬，適于制片，但又不使材料）使組織變硬，適于制片，但又不使材料太堅(jiān)硬而松脆。太堅(jiān)硬而松脆。9）使組織充分固定，便于保存。）使組織充分固定，便于保存。第二節(jié)第二節(jié) 介紹幾種常見固定液液 固定劑有簡單固定劑（液）和混合固定固定劑有簡單固定劑（液）

13、和混合固定劑兩類。作為較好的固定液，首先有強(qiáng)滲透劑兩類。作為較好的固定液，首先有強(qiáng)滲透力，能迅速地滲入組織內(nèi)部；其次不會使組力，能迅速地滲入組織內(nèi)部；其次不會使組織過渡收縮或膨脹，并能使組織內(nèi)易觀察的織過渡收縮或膨脹，并能使組織內(nèi)易觀察的成分得以凝固為不溶性物質(zhì)；最后能使組織成分得以凝固為不溶性物質(zhì)；最后能使組織達(dá)到一定硬度，獲得較佳的折光率和對某些達(dá)到一定硬度，獲得較佳的折光率和對某些染料具有較強(qiáng)的親和力。染料具有較強(qiáng)的親和力。一、簡單（單純）固定液一、簡單（單純）固定液1、甲醛（、甲醛（ormeldehyde） 甲醛（福爾馬林）為一種無色氣體，溶甲醛（福爾馬林）為一種無色氣體，溶于水成為甲

14、醛水溶液，甲醛是一種還原劑，于水成為甲醛水溶液，甲醛是一種還原劑，極易揮發(fā)旦有強(qiáng)烈刺激性氣味。在平時常用極易揮發(fā)旦有強(qiáng)烈刺激性氣味。在平時常用的甲醛濃度為的甲醛濃度為10%，這是指以，這是指以10ml甲醛加入甲醛加入90ml的水配成的，此液實(shí)際上只有的水配成的，此液實(shí)際上只有4%的甲的甲醛。醛。 甲醛水溶液滲透力強(qiáng)，固定均勻，對組織甲醛水溶液滲透力強(qiáng)，固定均勻，對組織收縮較少。但經(jīng)乙醇收縮較少。但經(jīng)乙醇脫水時脫水時收縮很大，它能使收縮很大，它能使組織硬化并增加組織的彈性。固定厚度適當(dāng)?shù)慕M織硬化并增加組織的彈性。固定厚度適當(dāng)?shù)慕M織，較為適宜。因早醛為非沉淀性固定劑，組織，較為適宜。因早醛為非沉淀

15、性固定劑，它不能使白蛋的及抗蛋白沉淀；但可與蛋白質(zhì)它不能使白蛋的及抗蛋白沉淀；但可與蛋白質(zhì)化合，對脂肪，神經(jīng)，及髓鞘的固定很好，也化合，對脂肪，神經(jīng)，及髓鞘的固定很好，也可固定高爾基體、線粒體，又是復(fù)糖的保存劑可固定高爾基體、線粒體，又是復(fù)糖的保存劑，使肝糖元變?yōu)槲⒓?xì)的顆粒團(tuán)。，使肝糖元變?yōu)槲⒓?xì)的顆粒團(tuán)。 使用甲醛固定的陳舊組織，以多血的贓器使用甲醛固定的陳舊組織，以多血的贓器如脾、肝等，較易發(fā)生黑色或棕黑色的沉淀，如脾、肝等，較易發(fā)生黑色或棕黑色的沉淀，稱甲醛色素。稱甲醛色素。2、乙醇（乙醇（thyl alcohol） 乙醇為無色液體，可以水在任何比例下混乙醇為無色液體，可以水在任何比例下混

16、合。它是一種還原劑，很易被氧化為乙醛，合。它是一種還原劑，很易被氧化為乙醛，在變?yōu)榇姿幔圆荒芘c鉻酸、重鉻酸鉀、在變?yōu)榇姿幔圆荒芘c鉻酸、重鉻酸鉀、鋨酸等氧化劑混合。鋨酸等氧化劑混合。 用于固定時以用于固定時以80%95%的濃度為好，它的濃度為好，它具有固定硬化脫水等多種作用。高濃度乙醇具有固定硬化脫水等多種作用。高濃度乙醇固定的組織硬化顯著，組織在高濃度乙醇中固定的組織硬化顯著，組織在高濃度乙醇中留置過久，易變脆，也使組織收縮明顯，均留置過久，易變脆，也使組織收縮明顯，均可縮小原組織體積的可縮小原組織體積的20%。因。因70%乙醇可較乙醇可較久的保存組織久的保存組織。 另外，乙醇其滲透力

17、較弱，能沉淀另外，乙醇其滲透力較弱，能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白。因此，乙醇白蛋白、球蛋白和核蛋白。因此，乙醇除固定作用外，還具有硬化和脫水作用除固定作用外，還具有硬化和脫水作用，所以它在制片過程中用途很大。，所以它在制片過程中用途很大。3、醋酸（、醋酸（cetic acid） 醋酸又名乙酸，是帶有刺激味的無醋酸又名乙酸，是帶有刺激味的無色液體，因在室溫色液體，因在室溫15時常結(jié)成冰狀時常結(jié)成冰狀冰醋酸。冰醋酸。特性：特性：（1）在）在15時成冰狀結(jié)晶，有刺激性味，可溶水時成冰狀結(jié)晶，有刺激性味，可溶水、乙醇一般配成、乙醇一般配成5 5作為混合固定液。作為混合固定液。（2）醋酸）醋酸只能沉淀核

18、蛋白，對染色質(zhì)，固定較好，對白蛋只能沉淀核蛋白，對染色質(zhì)，固定較好，對白蛋白、球蛋白，固定不佳。對脂肪、糖元不能固定白、球蛋白，固定不佳。對脂肪、糖元不能固定。（3）醋酸能使組織膨脹，因此，可抵償因乙醇、）醋酸能使組織膨脹，因此，可抵償因乙醇、升汞、甲醛等固定液引起的組織收縮和硬化，故升汞、甲醛等固定液引起的組織收縮和硬化，故常配成混合固定液。常配成混合固定液。（4）醋酸穿透速度最快，米粒大的組織在單純醋）醋酸穿透速度最快，米粒大的組織在單純醋酸固定液中酸固定液中12h即可。即可。5醋酸的醋酸的p值在值在28，此時可停止細(xì)菌和酶的活動，可防止組織自溶變此時可停止細(xì)菌和酶的活動，可防止組織自溶變

19、性。性。4、氯化汞（、氯化汞（ercury bichloride） 氯化汞俗稱升汞。為白色粉末或針氯化汞俗稱升汞。為白色粉末或針狀結(jié)晶，有劇毒，必須嚴(yán)格保管及注意狀結(jié)晶，有劇毒，必須嚴(yán)格保管及注意使用。通常用其飽和水溶液，在室溫的使用。通常用其飽和水溶液，在室溫的水中飽和度為水中飽和度為5%7%。特性：特性：（1）能沉淀蛋白質(zhì)，它不能固定脂肪、類脂）能沉淀蛋白質(zhì)，它不能固定脂肪、類脂和糖類。和糖類。（2）穿透力較弱，單獨(dú)使用可使組織收縮。）穿透力較弱，單獨(dú)使用可使組織收縮。因此，多與醋酸和鉻鹽（重鉻酸鉀）配成混因此，多與醋酸和鉻鹽（重鉻酸鉀）配成混合固定液，組織宜薄而小合固定液，組織宜薄而小2

20、3毫米，固定毫米，固定618h。（3）升汞混合液固定的組織對于細(xì)胞的結(jié)構(gòu)）升汞混合液固定的組織對于細(xì)胞的結(jié)構(gòu)，特別是核的細(xì)微結(jié)構(gòu)，顯示由為清晰。，特別是核的細(xì)微結(jié)構(gòu)，顯示由為清晰。（4）經(jīng)升汞固定的組織易產(chǎn)生汞鹽的沉著（）經(jīng)升汞固定的組織易產(chǎn)生汞鹽的沉著（為棕黑色結(jié)晶）易損害切片刀，因此染色前為棕黑色結(jié)晶）易損害切片刀，因此染色前必須脫汞。必須脫汞。5、苦味酸（、苦味酸（icric acid） 苦味酸是一種黃色結(jié)晶，是一種苦味酸是一種黃色結(jié)晶，是一種相當(dāng)強(qiáng)的酸。它在水中的溶解度隨室相當(dāng)強(qiáng)的酸。它在水中的溶解度隨室溫而變化，約在溫而變化，約在0.91.2%，在空氣，在空氣中能自燃，在密閉器中能劇

21、裂爆炸。中能自燃，在密閉器中能劇裂爆炸。為使用安全起見，常制成飽和水溶液為使用安全起見，常制成飽和水溶液貯藏保存。貯藏保存。特性特性:1）能沉淀蛋白質(zhì)，但對脂肪和類脂無固定作）能沉淀蛋白質(zhì)，但對脂肪和類脂無固定作用。用。2）穿透力很慢，細(xì)胞收縮顯著，但不會使組）穿透力很慢，細(xì)胞收縮顯著，但不會使組織硬化?？椨不?）有軟化皮膚的作用，配制的）有軟化皮膚的作用，配制的Bouin氏液對氏液對頭皮及全身皮膚制片效果甚好。頭皮及全身皮膚制片效果甚好。4）苦味酸固定的組織、固定時間太久會影響）苦味酸固定的組織、固定時間太久會影響HE染色（苦味酸對堿性染料不易著色）。染色（苦味酸對堿性染料不易著色）。5）

22、苦味酸酒精飽和液為糖元較好的沉淀劑。）苦味酸酒精飽和液為糖元較好的沉淀劑。6、丙酮、丙酮 丙酮又名醋酮或本酮，極易揮發(fā)丙酮又名醋酮或本酮，極易揮發(fā)、易燃的無色液體，能與水、醇、氯仿、易燃的無色液體，能與水、醇、氯仿、醚及多種溶液混合。、醚及多種溶液混合。特性：特性：1）它可以作固定劑，又可作脫水劑，穿透）它可以作固定劑，又可作脫水劑，穿透速度快，可使蛋白質(zhì)沉淀凝固，速度快，可使蛋白質(zhì)沉淀凝固，2毫米以下毫米以下的組織固定半小時至的組織固定半小時至1小時即可。小時即可。2）可引起組織較強(qiáng)的收縮使之變硬，對核）可引起組織較強(qiáng)的收縮使之變硬，對核固定不佳。固定不佳。3）對某些酶的固定很好，如堿性磷酸

23、酶、）對某些酶的固定很好，如堿性磷酸酶、酸性磷酸酶等。酸性磷酸酶等。4）丙酮一般多與氯化汞、甲醛混合液使用）丙酮一般多與氯化汞、甲醛混合液使用，先用低濃度丙酮再經(jīng)高濃度丙酮固定以減，先用低濃度丙酮再經(jīng)高濃度丙酮固定以減少組織收縮和過度硬化。少組織收縮和過度硬化。7、重鉻酸鉀、重鉻酸鉀1）為橙紅色結(jié)晶，有毒，是強(qiáng)氧化劑）為橙紅色結(jié)晶，有毒，是強(qiáng)氧化劑，不能與酒精等還原劑混合，常配成，不能與酒精等還原劑混合，常配成0.5%水溶液固定組織。水溶液固定組織。2）重鉻酸鉀單獨(dú)固定組織不能沉淀蛋）重鉻酸鉀單獨(dú)固定組織不能沉淀蛋白質(zhì)，但加入冰醋酸轉(zhuǎn)變?yōu)殂t酸，（白質(zhì)，但加入冰醋酸轉(zhuǎn)變?yōu)殂t酸，（即酸化重鉻酸鉀）

24、，可使蛋白質(zhì)凝固即酸化重鉻酸鉀），可使蛋白質(zhì)凝固沉淀。沉淀。3）重絡(luò)酸鉀與甲醛混合（臨用時配過久失效）為未酸化的重）重絡(luò)酸鉀與甲醛混合（臨用時配過久失效）為未酸化的重鉻酸鉀固定劑，是固定線粒體、高爾基復(fù)合體和嗜鉻細(xì)胞等鉻酸鉀固定劑，是固定線粒體、高爾基復(fù)合體和嗜鉻細(xì)胞等優(yōu)良固定劑，若配成優(yōu)良固定劑，若配成Eenker氏液，能很好的固定細(xì)胞質(zhì)、胞氏液，能很好的固定細(xì)胞質(zhì)、胞核及染色體。核及染色體。4）重鉻酸鉀穿透速度快，固定組織收縮很小，但經(jīng)酒精脫水）重鉻酸鉀穿透速度快，固定組織收縮很小，但經(jīng)酒精脫水時都有明顯收縮。經(jīng)重絡(luò)酸鉀固定的組織必須流水充分洗滌時都有明顯收縮。經(jīng)重絡(luò)酸鉀固定的組織必須流水

25、充分洗滌（612h），否則影響染色。），否則影響染色。5）經(jīng)重鉻酸鉀固定的組織，對酸性染料，如伊紅染色良好，）經(jīng)重鉻酸鉀固定的組織，對酸性染料，如伊紅染色良好，但對堿性料染，如蘇木素較差，若加入升汞及醋酸等，則對但對堿性料染，如蘇木素較差，若加入升汞及醋酸等，則對細(xì)胞核染色極佳。細(xì)胞核染色極佳。 以上敘述了幾種單純固定液的性質(zhì)以上敘述了幾種單純固定液的性質(zhì)和用途，它們各有其優(yōu)缺點(diǎn)，但單獨(dú)使和用途，它們各有其優(yōu)缺點(diǎn)，但單獨(dú)使用的不多，而混合固定液的應(yīng)用更為廣用的不多，而混合固定液的應(yīng)用更為廣泛。單獨(dú)固定液如重鉻酸鉀等單獨(dú)應(yīng)用泛。單獨(dú)固定液如重鉻酸鉀等單獨(dú)應(yīng)用效果不好，若與其他固定劑混合就可以效果

26、不好，若與其他固定劑混合就可以成為優(yōu)良的固定液成為優(yōu)良的固定液。二、介紹幾種常用的混合固定液二、介紹幾種常用的混合固定液1、乙醇、乙醇甲醛液（甲醛液（AF液）液）配制：配制：95%或無水乙醇或無水乙醇90ml加入加入40%并裝甲并裝甲醛醛10ml為常用固定液，取材后立即入此固定為常用固定液，取材后立即入此固定液。液。 此液兼有脫水作用，用于固定肥大細(xì)胞此液兼有脫水作用，用于固定肥大細(xì)胞和糖元較好，米粒大小固定和糖元較好，米粒大小固定46h，大塊組，大塊組織織1224h，固定后不經(jīng)水洗，直接放入，固定后不經(jīng)水洗，直接放入95%酒精開始脫水。酒精開始脫水。2、AAF液液配制 : 純酒精85ml+醋

27、酸5ml+甲醛10ml3、enker氏液氏液配制配制:重鉻酸鉀重鉻酸鉀2.5g+升汞升汞5g+蒸餾水蒸餾水100ml加溫溶解，冷卻過濾，貯于棕色瓶內(nèi)，成加溫溶解，冷卻過濾，貯于棕色瓶內(nèi)，成為貯存液。為貯存液。 用時取此液臨用時取此液臨95ml再加入冰醋酸再加入冰醋酸5ml即即成。成。 enker氏液為組織學(xué)、細(xì)胞學(xué)、病理氏液為組織學(xué)、細(xì)胞學(xué)、病理學(xué)常用的固定液，多用于固定一般組織，學(xué)常用的固定液，多用于固定一般組織，能使細(xì)胞核和細(xì)胞漿染色較為清晰，固定能使細(xì)胞核和細(xì)胞漿染色較為清晰，固定時間時間1224h，然后沖洗，然后沖洗24h，切片脫臘后，切片脫臘后需脫汞（浸入需脫汞（浸入5%碘酒精碘酒精

28、10），脫碘（），脫碘（5%硫代硫酸鈉）硫代硫酸鈉）流水洗。流水洗。4、Bouin氏液氏液配制配制 苦味酸飽和液苦味酸飽和液75ml+甲醛甲醛25ml+冰醋酸冰醋酸5ml 此液滲透快，組織收縮小，固定均勻，此液滲透快，組織收縮小，固定均勻，此液為常用固定液。它對肝、皮膚、胰臟此液為常用固定液。它對肝、皮膚、胰臟特染效果好，但此液固定過久對堿性染料特染效果好，但此液固定過久對堿性染料的著色有影響。的著色有影響。5、Garnay氏液氏液配制配制 純酒精純酒精60ml+氯仿氯仿30ml+醋酸醋酸10ml為細(xì)胞極好的固定液，對淋巴組織及為細(xì)胞極好的固定液，對淋巴組織及腺體固定很好，米粒大的組織固定腺體

29、固定很好，米粒大的組織固定12h，也適宜，也適宜RNA、DNA及糧元的及糧元的固定。固定。6、甲醛、甲醛生理鹽水生理鹽水配制配制 甲醛甲醛10ml+生理鹽水生理鹽水90ml PH值為值為7此固定液是應(yīng)用最廣的一種，它可以保此固定液是應(yīng)用最廣的一種，它可以保護(hù)脂類和細(xì)胞核。在作酸性染色時，入護(hù)脂類和細(xì)胞核。在作酸性染色時，入-，或三重染色之前，還可以再使，或三重染色之前，還可以再使用第用第2次固定。次固定。第六章第六章 洗滌、脫水、洗滌、脫水、透明、浸蠟和包埋、切片透明、浸蠟和包埋、切片第一節(jié)第一節(jié) 組織洗滌組織洗滌一一、洗滌的目的洗滌的目的 組織在固定后一定要把滲透到里面的固定液洗組織在固定后

30、一定要把滲透到里面的固定液洗去，然后再進(jìn)行下一步過程。為防止組織中留有去，然后再進(jìn)行下一步過程。為防止組織中留有較多的固定液而影響脫水劑，甚至可在組織中發(fā)較多的固定液而影響脫水劑，甚至可在組織中發(fā)生沉淀物或結(jié)晶而影響觀察，特別是對陳舊性標(biāo)生沉淀物或結(jié)晶而影響觀察，特別是對陳舊性標(biāo)本更應(yīng)注意流水沖洗，盡可能減少組織中的酸性本更應(yīng)注意流水沖洗，盡可能減少組織中的酸性程度和甲醛色素。對混合性固定液，更應(yīng)及時洗程度和甲醛色素。對混合性固定液，更應(yīng)及時洗滌，有利于脫水直至切片和染色。滌，有利于脫水直至切片和染色。二、洗滌的方法二、洗滌的方法1固定劑以水配制者固定劑以水配制者 用流水沖洗，可使組織用流水沖

31、洗，可使組織中的固定液隨時溢出和隨時洗去。常用的固定劑中的固定液隨時溢出和隨時洗去。常用的固定劑是甲醛液（是甲醛液（10 甲醛水液），尸檢組織、大動甲醛水液），尸檢組織、大動物組織沖洗時間為物組織沖洗時間為24左右，小動物組織沖洗時左右，小動物組織沖洗時間為間為2-10左右。左右。2 固定劑含乙醇者固定劑含乙醇者 乙醇或乙醇混合液固定液乙醇或乙醇混合液固定液者，一般不要求沖洗，如需沖洗必需采用與固定者，一般不要求沖洗，如需沖洗必需采用與固定劑中的乙醇濃度相近的乙醇沖洗，不可用水沖洗劑中的乙醇濃度相近的乙醇沖洗，不可用水沖洗，也不應(yīng)用濃度相差很大的乙醇沖洗。，也不應(yīng)用濃度相差很大的乙醇沖洗。三、

32、特殊固定液洗滌法三、特殊固定液洗滌法1重鉻酸鉀重鉻酸鉀 用重鉻酸鉀固定的組織可用用重鉻酸鉀固定的組織可用流水沖洗流水沖洗12-24，或用亞硫酸，或用，或用亞硫酸，或用1 含水氯溶液進(jìn)行洗滌。含水氯溶液進(jìn)行洗滌。2苦味酸苦味酸 含苦味酸固定的組織，可用含苦味酸固定的組織，可用50 或或70 乙醇浸洗。乙醇浸洗。3氯化汞氯化汞 用氯化汞固定的組織內(nèi)常有一用氯化汞固定的組織內(nèi)常有一種沉淀物生成，呈棱形或不規(guī)則或略圓的種沉淀物生成，呈棱形或不規(guī)則或略圓的塊狀物，棱形物被認(rèn)為氯化亞汞，不規(guī)則塊狀物，棱形物被認(rèn)為氯化亞汞，不規(guī)則物可能是金屬汞，此種結(jié)晶必需洗去，否物可能是金屬汞，此種結(jié)晶必需洗去，否則會使

33、組織發(fā)脆，或染色不良。則會使組織發(fā)脆，或染色不良。第二節(jié)第二節(jié) 組織脫水組織脫水一、脫水的目的和原則一、脫水的目的和原則 組織經(jīng)固定和水洗后，會有大量水組織經(jīng)固定和水洗后，會有大量水分，而水與苯根本不相融合，所以組織分，而水與苯根本不相融合，所以組織在透明前必須經(jīng)過脫水這一環(huán)節(jié)。就是在透明前必須經(jīng)過脫水這一環(huán)節(jié)。就是說用某些溶劑逐步將組織塊吸收的水分說用某些溶劑逐步將組織塊吸收的水分置換出來，以利于透明劑和石蠟或火綿置換出來，以利于透明劑和石蠟或火綿膠的滲入，這一過程叫脫水。膠的滲入，這一過程叫脫水。1尸檢及活檢尸檢及活檢 有條件時，將組織分別進(jìn)有條件時，將組織分別進(jìn)行脫水，如腦、胰腺、肌肉、

34、胸腺或淋巴行脫水，如腦、胰腺、肌肉、胸腺或淋巴結(jié)、肝、脾等組織。因?yàn)槊撍畷r間差異性結(jié)、肝、脾等組織。因?yàn)槊撍畷r間差異性較大，最好是單獨(dú)處理。較大，最好是單獨(dú)處理。2動物組織動物組織 應(yīng)區(qū)分動物大、小，如狗組應(yīng)區(qū)分動物大、小，如狗組織接近新生兒組織，大白鼠和小白鼠也有織接近新生兒組織，大白鼠和小白鼠也有差異，前者需時稍長，后者則較短。差異，前者需時稍長，后者則較短。3脫水時間與脫水劑的關(guān)系脫水時間與脫水劑的關(guān)系 脫水劑脫水劑的新舊（純度）影響脫水時間，必須的新舊（純度）影響脫水時間，必須靈活掌握。靈活掌握。4穿刺組織穿刺組織 如腎穿刺、徑胃鏡取得如腎穿刺、徑胃鏡取得組織等，因組織塊很小，常規(guī)用擦

35、鏡組織等，因組織塊很小，常規(guī)用擦鏡紙包裹，防止丟失。紙包裹，防止丟失。二、脫水劑的種類和效果、脫水劑的種類和效果1非石蠟溶劑的脫水劑非石蠟溶劑的脫水劑 如乙醇和丙如乙醇和丙酮等，其組織在脫水后必須再經(jīng)酮等，其組織在脫水后必須再經(jīng)二甲二甲苯苯透明才能浸蠟。透明才能浸蠟。2脫水兼石蠟溶劑的脫水劑脫水兼石蠟溶劑的脫水劑 如正丁如正丁醇等組織在脫水后即可直接浸蠟，不醇等組織在脫水后即可直接浸蠟，不比經(jīng)過中間溶劑如比經(jīng)過中間溶劑如二甲苯之類的試劑二甲苯之類的試劑。 脫水種類可根據(jù)須要選擇，目前在病脫水種類可根據(jù)須要選擇，目前在病理診斷和實(shí)驗(yàn)性動物研究中，較多地采用理診斷和實(shí)驗(yàn)性動物研究中，較多地采用乙醇

36、脫水、乙醇脫水、二甲苯透明和二甲苯透明和石蠟浸透組織。石蠟浸透組織。 脫水方法甚多，最重要的是不應(yīng)驟然脫水方法甚多，最重要的是不應(yīng)驟然進(jìn)行，不能操之過急，否則可引起組織強(qiáng)進(jìn)行，不能操之過急，否則可引起組織強(qiáng)烈收縮，或使組織發(fā)生變形，而得不到滿烈收縮，或使組織發(fā)生變形，而得不到滿意切片。意切片。三、常用脫水劑的使用方法三、常用脫水劑的使用方法1、乙醇（、乙醇（lcohol 酒精）酒精） 沸點(diǎn)沸點(diǎn)78.4，為最常用的脫水劑。脫水，為最常用的脫水劑。脫水能力強(qiáng)，并能使組織硬化，能較好地與二能力強(qiáng)，并能使組織硬化，能較好地與二甲苯透明劑相溶合。甲苯透明劑相溶合。 其缺點(diǎn)是易使組織收縮、變脆。導(dǎo)致這其缺

37、點(diǎn)是易使組織收縮、變脆。導(dǎo)致這些缺點(diǎn)是因?yàn)榻M織在高濃度乙醇（無水乙些缺點(diǎn)是因?yàn)榻M織在高濃度乙醇（無水乙醇）中停留時間較長，或者加溫脫水的溫醇）中停留時間較長，或者加溫脫水的溫度過高。在日常中一般脫水從度過高。在日常中一般脫水從70%乙醇（乙醇（人體組織從人體組織從75%）開始，由低向高的梯度）開始，由低向高的梯度脫水。脫水。 一般的脫水順序是：一般的脫水順序是：70%、 80%、 90%、 95%、95%、無水乙醇、無水乙醇、無水乙醇、無水乙醇。只有脫水充分才能。只有脫水充分才能在在透明劑中透明。透明劑中透明。2、丙酮（、丙酮（cetone） 沸點(diǎn)為沸點(diǎn)為56。脫水作用比乙醇強(qiáng)，。脫水作用比乙

38、醇強(qiáng)，但是對組織的收縮較大，而價格較高但是對組織的收縮較大，而價格較高，故一般少用于組織的脫水，主要用，故一般少用于組織的脫水，主要用于快速脫水或固定兼脫水。脫水時間于快速脫水或固定兼脫水。脫水時間13h。3、正丁醇（、正丁醇（-utyl-alcohol） 為無色液體，沸點(diǎn)為無色液體，沸點(diǎn)100118，微，微溶于水，在溶于水，在100ml100ml水中能溶水中能溶8.3g8.3g，故脫，故脫水能力較弱，但能與水、乙醇及石臘水能力較弱，但能與水、乙醇及石臘混合，故這種脫水的組織塊，可直接混合，故這種脫水的組織塊，可直接浸蠟包埋。浸蠟包埋。 這種脫水劑兼透明劑的最大優(yōu)點(diǎn)這種脫水劑兼透明劑的最大優(yōu)點(diǎn)

39、是很少引起組織塊的收縮及變脆。是很少引起組織塊的收縮及變脆。第三節(jié)第三節(jié) 組織透明組織透明一、透明的目的一、透明的目的 在制片過程中有兩次透明，第在制片過程中有兩次透明，第一次是脫水以后組織塊的透明，第一次是脫水以后組織塊的透明，第二次透明是染色以后切片的透明。二次透明是染色以后切片的透明。 組織塊透明的目的是便于透蠟組織塊透明的目的是便于透蠟包埋，切片透明的目的就是有利光包埋，切片透明的目的就是有利光線的透過，便于顯微鏡下的觀察。線的透過，便于顯微鏡下的觀察。 組織塊在浸蠟前，必須通組織塊在浸蠟前，必須通過透明以便使石蠟浸入組織內(nèi)，過透明以便使石蠟浸入組織內(nèi)，起充分支持硬化組織塊的作用，起充

40、分支持硬化組織塊的作用，以便完整切片。以便完整切片。 通常根據(jù)透明時間與肉眼觀通常根據(jù)透明時間與肉眼觀察相結(jié)合判斷透明程度。察相結(jié)合判斷透明程度。二、常用透明劑的種類和二、常用透明劑的種類和使用使用方法方法 最常用透明劑的種類較多，但最常用透明劑的種類較多，但使用最多的是二甲苯。使用最多的是二甲苯。1、二甲苯、二甲苯 易揮發(fā)，無色透明液體，長期接易揮發(fā)，無色透明液體，長期接觸對呼吸粘膜有刺激作用。透明能力觸對呼吸粘膜有刺激作用。透明能力強(qiáng)，易使組織收縮、變脆，故組織塊強(qiáng)，易使組織收縮、變脆，故組織塊在二甲苯中不宜久留，特別對小動物在二甲苯中不宜久留，特別對小動物組織材料必須嚴(yán)格控制好。組織材料

41、必須嚴(yán)格控制好。2、甲苯、甲苯 性質(zhì)雖同二甲苯，但透明較慢，時性質(zhì)雖同二甲苯，但透明較慢，時間比二甲苯長一倍多，也易變脆。有時間比二甲苯長一倍多，也易變脆。有時用以代替二甲苯。用以代替二甲苯。3、苯、苯 苯的用途與二甲苯相似，對組織苯的用途與二甲苯相似，對組織有較小收縮，是較好的透明劑。但也有較小收縮，是較好的透明劑。但也易揮發(fā)，易燃。吸入苯能引起中毒，易揮發(fā)，易燃。吸入苯能引起中毒，可以較小使用。可以較小使用。4、氯仿、氯仿 即三氯甲烷。其透明能力比二甲即三氯甲烷。其透明能力比二甲苯及苯差，透明時間長達(dá)苯及苯差，透明時間長達(dá)24h。不易使。不易使組織變脆，能溶于醇、醚、苯等，微組織變脆，能溶

42、于醇、醚、苯等，微溶于水、極易揮發(fā)。多用于大塊組織溶于水、極易揮發(fā)。多用于大塊組織的透明。的透明。5、香柏油、香柏油 對組織收縮及硬化程度比任何透對組織收縮及硬化程度比任何透明劑小，但透明時間長，小塊組織至明劑小，但透明時間長，小塊組織至少少12h以上，缺點(diǎn)它不能溶解石臘，透以上，缺點(diǎn)它不能溶解石臘，透明以后還需二甲苯補(bǔ)充透明。明以后還需二甲苯補(bǔ)充透明。6、松節(jié)油、汽油、松節(jié)油、汽油 可作脫水，又可透明，但需用優(yōu)可作脫水，又可透明，但需用優(yōu)質(zhì)（無雜質(zhì)）的工業(yè)汽油也不行，在質(zhì)（無雜質(zhì)）的工業(yè)汽油也不行，在條件困難時可試用。條件困難時可試用。第四節(jié)、組織浸蠟（透蠟）第四節(jié)、組織浸蠟（透蠟）浸蠟的目

43、的和方法浸蠟的目的和方法 組織經(jīng)過脫水、透明后要用石蠟、組織經(jīng)過脫水、透明后要用石蠟、火棉膠、碳蠟等支持劑透入內(nèi)部火棉膠、碳蠟等支持劑透入內(nèi)部,使其使其變硬并將組織包埋進(jìn)去以利于切片和變硬并將組織包埋進(jìn)去以利于切片和觀察，這個過程稱為觀察，這個過程稱為“透入（浸蠟）透入（浸蠟）”或或“包埋包埋”。 以石蠟切片的透入即（浸蠟）以石蠟切片的透入即（浸蠟）為例，其目的就是除去組織中為例，其目的就是除去組織中“透透明劑（如二甲苯等）而代之以石臘明劑（如二甲苯等）而代之以石臘，并滲入組織內(nèi)部，把軟組織變?yōu)?，并滲入組織內(nèi)部，把軟組織變?yōu)檫m當(dāng)硬度的蠟塊，以便切成薄片。適當(dāng)硬度的蠟塊，以便切成薄片。 浸蠟的方

44、法是將組織經(jīng)過二甲苯透浸蠟的方法是將組織經(jīng)過二甲苯透明以后，并立即投入到液體石蠟中去。明以后，并立即投入到液體石蠟中去。在浸蠟時組織必須經(jīng)過數(shù)次純石蠟（石在浸蠟時組織必須經(jīng)過數(shù)次純石蠟（石蠟蠟、），這樣可以使石蠟中剩），這樣可以使石蠟中剩余的透明劑完全除盡，以免影響切片質(zhì)余的透明劑完全除盡，以免影響切片質(zhì)量。量。浸蠟劑的浸蠟劑的種類種類1、石蠟石蠟 石蠟有高熔點(diǎn)和低熔點(diǎn)之分，一石蠟有高熔點(diǎn)和低熔點(diǎn)之分，一般普遍應(yīng)用熔點(diǎn)為般普遍應(yīng)用熔點(diǎn)為5656以上的以上的石蠟。低熔石蠟。低熔點(diǎn)在點(diǎn)在5454以下，用于酶的顯示和保存抗原以下，用于酶的顯示和保存抗原活性。活性。石蠟分軟蠟（石蠟分軟蠟（525454

45、），硬蠟（），硬蠟（56585658），蜂蠟），蜂蠟6060。一般氣溫用硬蠟，氣溫低時用軟蠟。一般氣溫用硬蠟，氣溫低時用軟蠟。2 2、火棉膠火棉膠 目前使用火棉膠目前使用火棉膠透入組織較透入組織較少，少，用于用于染色前的覆蓋液較多。染色前的覆蓋液較多。3 3、碳碳蠟蠟4、明膠明膠第五節(jié)第五節(jié) 組織包埋組織包埋 石蠟是動物植物、人體組織制片技石蠟是動物植物、人體組織制片技術(shù)中極重要且應(yīng)用最廣的包埋劑。包埋術(shù)中極重要且應(yīng)用最廣的包埋劑。包埋蠟須在溫箱內(nèi)經(jīng)多次熔化沉淀后的干凈蠟須在溫箱內(nèi)經(jīng)多次熔化沉淀后的干凈蠟，包埋較為理想，其包埋蠟蠟，包埋較為理想，其包埋蠟熔點(diǎn)為熔點(diǎn)為56585658。石蠟包埋的

46、注意點(diǎn)：石蠟包埋的注意點(diǎn)：（1 1）動作要迅速：特別是冬天，在有多塊組織要包埋時，蠟）動作要迅速：特別是冬天，在有多塊組織要包埋時，蠟很快會凝固，就包埋不成。很快會凝固，就包埋不成。（2 2）切面向下埋：組織包埋要平整或按要求包埋。）切面向下埋：組織包埋要平整或按要求包埋。（3 3）包埋的鑷子必須加溫，鑷子溫度又不能太高，否則會燒）包埋的鑷子必須加溫，鑷子溫度又不能太高，否則會燒壞組織。壞組織。（4 4）包埋后待蠟塊冷卻后再放入冷水中，不能太快，否則變）包埋后待蠟塊冷卻后再放入冷水中，不能太快，否則變形有氣泡。形有氣泡。（5 5）包埋時組織不能重疊擠壓，否則切片不全會影響診斷。）包埋時組織不能

47、重疊擠壓，否則切片不全會影響診斷。（6 6）包埋用的蠟一般為工業(yè)蠟，氣候炎熱可用熔點(diǎn)高石蠟（）包埋用的蠟一般為工業(yè)蠟，氣候炎熱可用熔點(diǎn)高石蠟（6060）第六節(jié)第六節(jié) 組織脫水透明和浸蠟時間組織脫水透明和浸蠟時間各種組織的脫水透明和浸蠟時間各種組織的脫水透明和浸蠟時間 程序程序 項(xiàng)項(xiàng) 目目 時間分配時間分配1234567891011121375%乙醇乙醇85%乙醇乙醇95 %乙醇乙醇95 %乙醇乙醇無水乙醇無水乙醇無水乙醇無水乙醇無水乙醇無水乙醇二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯石蠟石蠟56585658石蠟石蠟5658 5658 石蠟石蠟56585658時間長短均可時間長短均可51051051

48、025252530 min30 min-1-130 min-1-11-21-21-21-22-42-4 程序程序 項(xiàng)項(xiàng) 目目 時間分配時間分配1234567891011121375%乙醇乙醇85%乙醇乙醇95 %乙醇乙醇95 %乙醇乙醇無水乙醇無水乙醇無水乙醇無水乙醇無水乙醇無水乙醇二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯石蠟石蠟56585658石蠟石蠟5658 5658 石蠟石蠟56585658時間長短均可時間長短均可25252520 min30 min30 min15 min10 min10 min1 11-21-21-21-2 程序程序 項(xiàng)項(xiàng) 目目 時間分配時間分配1234567891011

49、121370%乙醇乙醇80%乙醇乙醇90 %乙醇乙醇95 %乙醇乙醇95 %乙醇乙醇無水乙醇無水乙醇無水乙醇無水乙醇二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯石蠟石蠟56585658石蠟石蠟5658 5658 石蠟石蠟565856583h1212121212121 1121-21-21-21-21224第七節(jié)第七節(jié) 組織切片組織切片 一、石蠟切片法一、石蠟切片法1、切片前的準(zhǔn)備工作、切片前的準(zhǔn)備工作石蠟切片是以石蠟作為組織的支持媒介石蠟切片是以石蠟作為組織的支持媒介作用。應(yīng)先將作用。應(yīng)先將包埋的每塊組織周圍過多包埋的每塊組織周圍過多的的石蠟切去，石蠟切去，組織四周留組織四周留2 2mm的石蠟的石蠟邊

50、。邊。在常規(guī)實(shí)驗(yàn)室中須備以下用品在常規(guī)實(shí)驗(yàn)室中須備以下用品 經(jīng)過清潔液浸泡過的載玻片。經(jīng)過清潔液浸泡過的載玻片。 展片盆、染色架、蛋白甘油。展片盆、染色架、蛋白甘油。 大、中號毛筆、眼科鑷（彎）大、中號毛筆、眼科鑷（彎）2、切片制作過程、切片制作過程 將預(yù)先冷卻的組織裝在切片機(jī)固定器上。將預(yù)先冷卻的組織裝在切片機(jī)固定器上。 切片組織經(jīng)過粗切，待組織充分切完整，右切片組織經(jīng)過粗切，待組織充分切完整，右手旋動切片機(jī)把，切片帶出來之后，用毛筆輕輕手旋動切片機(jī)把，切片帶出來之后，用毛筆輕輕托起，再用眼科鑷輕攝蠟片，以正面放入展片盆托起，再用眼科鑷輕攝蠟片，以正面放入展片盆中，待攤平整后撈片。中，待攤平

51、整后撈片。 撈片在載玻片上的二分之一以處。撈片在載玻片上的二分之一以處。 切片附貼后，放在空氣中稍涼干，即可進(jìn)行切片附貼后，放在空氣中稍涼干，即可進(jìn)行烤片?？酒?。3、切片的、切片的注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 凡是陳舊、腐敗或干枯的組織不易制好切片凡是陳舊、腐敗或干枯的組織不易制好切片。 固定失時或固定不當(dāng)?shù)慕M織，染色時常出現(xiàn)固定失時或固定不當(dāng)?shù)慕M織，染色時常出現(xiàn)核質(zhì)著色較淺、輪廓不清，出現(xiàn)不等的片狀發(fā)白核質(zhì)著色較淺、輪廓不清，出現(xiàn)不等的片狀發(fā)白區(qū)。區(qū)。 組織脫水，透明和浸蠟過渡，會造成過硬、變脆，特別是動物組織應(yīng)嚴(yán)格控制。 切片出現(xiàn)橫皺紋常多見于切片出現(xiàn)橫皺紋常多見于組織組織固定不牢，或固定不牢，或切片刀固定不緊。切片刀固定不緊。 切片刀不鋒利，切片時會自行卷起或皺起，切片刀不鋒利，切片時會自行卷起或皺起，更不能順利地將切片聯(lián)結(jié)成蠟帶。切片刀如有缺更不能順利地將切片聯(lián)結(jié)成蠟帶。切片刀如有缺口存在，更易口存在，更易造成造成切片斷裂、破碎、不完整等現(xiàn)切片斷裂、破碎、不完整等現(xiàn)象。象。 組織切片機(jī)各個零件和螺絲應(yīng)旋緊，否則將組織切片機(jī)各個零件和螺絲應(yīng)旋緊，否則將會產(chǎn)生震動，以致切片厚薄不均。會產(chǎn)生震動，以致切片厚薄不均。u(7)(7)對小標(biāo)本的蠟塊進(jìn)行粗切時，設(shè)置的厚度不能過大對小標(biāo)本的蠟塊進(jìn)行粗切時，設(shè)置的厚度不能