實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)格式

1、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)大綱實(shí)驗(yàn)名稱：農(nóng)藥對(duì)肝腎功能及血清膽堿酯酶的影響課題來源:自選設(shè)計(jì)班級(jí):09級(jí)臨床本科六班設(shè)計(jì)人員：王XX設(shè)計(jì)日期：2011年6月14日指導(dǎo)老師：陳瑋一.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的目的意義：實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的目的意義，國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀，存在的問題，解決問題的思路1. 目的與意義.在科技進(jìn)步的今天，許多健康性問題成為主流話題.心理和精神的變態(tài)越演越烈，如喝農(nóng)藥自殺等.還有現(xiàn)代的許多農(nóng)作物中農(nóng)藥的含量越來越多，而它對(duì)人體的健康有 著很大的威脅.而我國(guó)是農(nóng)藥中毒高發(fā)的國(guó)家.究其原因主要是：生產(chǎn)工藝落后，保管不嚴(yán)、配制不當(dāng)、任意濫用、操作不善、防護(hù)不良.制作動(dòng)物模型，研究農(nóng)藥對(duì)人體重要器官的危害及其治療對(duì)人健康有重要的

2、意義2. 國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀自1863年Austin Flint首先報(bào)道晚期肝硬化患者可出現(xiàn)少尿等腎功能衰竭的表 現(xiàn)后，1924年Heyd首次將肝功能不全患者在膽道梗阻手術(shù)后發(fā)生的急性腎功能衰竭稱為肝腎綜合征"(hepatoren Msyndrone )至U 1987年意大利的Sassari召開的一次肝腎綜 合征國(guó)際會(huì)議上才訂出了診斷標(biāo)準(zhǔn)，并且對(duì)HRS的概念內(nèi)涵取得了較統(tǒng)一的認(rèn)識(shí)，1996年國(guó)際腹水研究小組推薦了關(guān)于HRS的新定義，即 慢性肝病患者出現(xiàn)進(jìn)展性肝功能衰竭和門脈高壓時(shí).以腎功能損傷.腎血流灌注減少和內(nèi)源性血管活性系統(tǒng)異常為特征的一種綜 合征”.肝腎綜合征是慢性肝病、晚期肝硬化

3、門脈高壓患者常見的并發(fā)癥，約占10 %左右.它的特點(diǎn)是腎臟缺乏形態(tài)異常.腎小管功能正常.腎功能損害是功能性、潛在可恢復(fù).其并非代表肝硬化患者的終末期.也并非提示肝功能衰竭程度的加重.故應(yīng)對(duì)HRS發(fā)病原因、發(fā)病機(jī) 制與診斷、治療進(jìn)行重新評(píng)價(jià).自1863年Austin Flint首先報(bào)道晚期肝硬化患者可出現(xiàn)少尿等腎功能衰竭的表現(xiàn) 后，1924年Heyd首次將肝功能不全患者在膽道梗阻手術(shù)后發(fā)生的急性腎功能衰竭稱為肝腎綜合征” (hepatoren Msyndrone)至9 1987年意大利的Sassari召開的一次肝腎綜合征國(guó)際會(huì)議上才訂出了診斷標(biāo)準(zhǔn)，并且對(duì)HRS的概念內(nèi)涵取得了較統(tǒng)一的認(rèn)識(shí)，199

4、6年國(guó)際腹水研究小組推薦了關(guān)于HRS的新定義，即慢性肝病患者出現(xiàn)進(jìn)展性肝功能衰竭和門脈高壓時(shí).以腎功能損傷.腎血流灌注減少和內(nèi)源性血管活性系統(tǒng)異常為特征的一種綜合 征”.肝腎綜合征是慢性肝病、晚期肝硬化門脈高壓患者常見的并發(fā)癥，約占10 %左右.它的特點(diǎn)是腎臟缺乏形態(tài)異常.腎小管功能正常.腎功能損害是功能性、潛在可恢復(fù).其并非代表 肝硬化患者的終末期.也并非提示肝功能衰竭程度的加重.故應(yīng)對(duì)HRS發(fā)病原因、發(fā)病機(jī)制與診斷、治療進(jìn)行重新評(píng)價(jià).3. 存在的問題雖然有多種藥物治療農(nóng)藥中毒，那是沒有最優(yōu)最快的藥物，在藥物其作用之前，應(yīng)該 做的緊急搶救及相關(guān)的病癥的確認(rèn)，切忌誤診.用食農(nóng)藥后并且解救后的其

5、他問題.4. 解決問題的思路復(fù)制動(dòng)物模型，給藥致使家兔出現(xiàn)肝腎功能的障礙，然后給以相應(yīng)的解救藥品，觀察家兔各項(xiàng)體征.并且對(duì)膽堿酯酶的影響測(cè)定.最后得到結(jié)論，做出農(nóng)藥對(duì)肝腎功能及全 血膽堿酯酶的影響結(jié)論.5. 參考文獻(xiàn)2345678910(阮詩瑋，鄭弘義 楊愛國(guó)，王智，孫光，鄭京,吳竟,洪江淮；慢性腎炎及中醫(yī)證型與血中內(nèi)皮素、 醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)；1999年04期石志蕓，施賽珠，陳劍秋，李曉明,何婉婷，鄧守貞：血瘀證患者血漿內(nèi)皮素測(cè)定的臨床意義J；遼寧胡克武，丁俊:肝腎陰虛型高脂血癥治療的臨床分析J；遼寧中醫(yī)雜志；1996年12期劉曉秋，梁幼雅，賈曉林，唐惠瓊，蔡文成:脾虛證患者唾液淀粉酶活性變化與一氧

6、化氮相關(guān)性的 臨床；2002年04期王元?jiǎng)?，袁靜，張敏華，韓明向，李澤根：肺氣虛證的實(shí)驗(yàn)研究川血液流變學(xué)及血漿TXJ；甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)；1994年01期石林階，陳國(guó)林，陳昌華羅團(tuán)連,舒毅剛，李學(xué)文，陳澤奇，林源:肝血虛證、肝血虛兼脾氣虛證患者 平的相關(guān)研究J；中國(guó)醫(yī)藥學(xué)報(bào)；1997年05期蔡圣榮，方志斌，黃開泉，王元?jiǎng)?肺氣虛證大鼠血液流變性指標(biāo)與內(nèi)皮素、血栓素水平的相關(guān)報(bào)；2003年05期劉強(qiáng):心氣虛證患者血中 ET、CGRP、NO和NOS含量變化J；山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)；2004年0 :急性心肌梗塞患者血小板膜表吾柏銘，潘宜智，洪小蘇，劉勵(lì)軍，張莉麗，高嵐，陳建昌膜蛋白血漿凝血噁烷 B_2、6

7、 酮一前列腺素F_ （ 1a）的動(dòng)態(tài)變化及其臨床意義 J；中國(guó)李君,徐錫鴻，戴關(guān)海，盧鶯燕，李鳧堅(jiān):肺氣虛證大鼠模型內(nèi)皮素含量變化的實(shí)驗(yàn)研究 劉紅旭，黃麗娟，金玫，夏軍，王玉明，王斌，金敬善，鄧新榮及治療影響研究J；北京中醫(yī)；1995年06期11J；遼寧中:血瘀胸痹患者血漿內(nèi)皮源性收縮/舒張12賴世隆，王奇，丘梅清，梁偉雄，譚芬來,謝紅,秦莉莉:血瘀證、氣虛血瘀證患者血漿TXA_2、PGI_2水平與微及其相關(guān)性分析 J；中華中醫(yī)藥雜志；1990年06期13湯健;心鈉素（Cardionatrin）心臟產(chǎn)生的一種激素 J:北京大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版）;1984年03期1415張全貴：內(nèi)皮素測(cè)定在心血管疾

8、病中的意義J；重慶醫(yī)學(xué)；1993年01期原世麟，張福琴,李志超，陳金城:家兔實(shí)驗(yàn)性呼吸窘迫綜合征時(shí)肺微栓、白細(xì)胞和心阻抗參數(shù)報(bào);1987年05期J；第四軍醫(yī)大TXB 2、6-Keto PJ；貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)J王元?jiǎng)?，袁靜，張敏華，韓明向，李澤根：肺氣虛證的實(shí)驗(yàn)研究川血液流變學(xué)及血漿16平J；甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)；1994年01期17吳祥聲，安乙敏：縮血管肽一一內(nèi)皮素J；國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志；1993年05期吳玉生，姜立萍，王占奎：內(nèi)皮素、降鈣素基因相關(guān)肽與急性腦梗塞辨證分型的關(guān)系:實(shí)驗(yàn)性SD大鼠肺氣虛證”血液流變學(xué)改變18期楊牧祥，李澎濤，方朝義，韓樹芬，王占波，王生茂，曹剛19能狀態(tài)研究J1；河北中

9、醫(yī)；1996年05期二.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)萬案（實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)目標(biāo)，擬解決的主要問題，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)計(jì)，實(shí)驗(yàn)專業(yè)設(shè)計(jì)，實(shí) 驗(yàn)統(tǒng)計(jì)設(shè)計(jì)，實(shí)驗(yàn)方法設(shè)計(jì)，可行性分析 ，預(yù)期結(jié)果，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)工作時(shí)間安排）（一）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)目標(biāo)探討誤食農(nóng)藥后，對(duì)集體肝腎功能的影響， 它的主要表現(xiàn)特征， 給出相應(yīng)的解救藥 品后家兔各項(xiàng)體征的變化，設(shè)計(jì)不同藥量的模型作對(duì)比學(xué)習(xí)血清肝腎功能及全血膽堿酯酶活性的測(cè)定（二）擬解決的關(guān)鍵問題觀察有機(jī)磷酯農(nóng)藥中毒后的癥狀和特征.觀察阿托品和碘解磷定對(duì)急性有機(jī)農(nóng)藥中毒的解救效果，并且比較兩中藥物的解救原理和作用特點(diǎn)（三）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1. 實(shí)驗(yàn)專業(yè)設(shè)計(jì)選用家兔作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，給予一定量的農(nóng)藥后再給予阿托品和碘解磷定，觀

10、察對(duì)實(shí)驗(yàn)性農(nóng)藥治療作用，觀察家兔的呼吸頻率、心率、瞳孔大小、唾液分泌、大小便、肌緊張、肝功 能、腎功能等實(shí)驗(yàn)指標(biāo)2. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)計(jì)（遺傳背景，微生物質(zhì)量控制，育種繁殖，飼養(yǎng)管理，動(dòng)物模型，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)技術(shù)）2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇我們選用家兔作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，有以下幾點(diǎn)理由：1）、家兔易得到，容易飼養(yǎng)，在科研工作中被廣泛利用2）、家兔肝腎相對(duì)較大，易于得到樣品，能在稱重過程中減少實(shí)驗(yàn)誤差3. 實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)設(shè)計(jì)中應(yīng)始終貫徹隨機(jī)、對(duì)照、重復(fù)三大原則（1） 隨機(jī)：選正常成年健康重相近的家兔2只，雌雄兼用.（2）對(duì)照：本組實(shí)驗(yàn)做了空白對(duì)照和實(shí)驗(yàn)對(duì)照，在前面的專業(yè)設(shè)計(jì)里已經(jīng)提及（3） 統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)收集：本實(shí)驗(yàn)

11、搜集計(jì)量資料，初步確定對(duì)各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的比較分為實(shí)驗(yàn) 值和基礎(chǔ)值比較.（4） 統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)分析： 酶活力值=（A1+A2-A1-A樣）/（A3-A1）酶活力百分比=（酶活力值（給藥后或解救后）/酶活力值（給藥前）4. 實(shí)驗(yàn)方法設(shè)計(jì) 4.1實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線全血膽堿酯酶活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)操作步驟試劑（ml）4.2實(shí)驗(yàn)技術(shù)方法1、取家免兩只，稱重并編號(hào)觀察家免的活動(dòng)情況，測(cè)量并記錄正常指標(biāo)，包括呼吸 頻率、心率、大小便、唾液分泌、瞳孔大小、肌肉緊張及有無肌震顫情況2、 從1號(hào)家免耳中動(dòng)脈取血約 0.5ml，分別加入2號(hào)試管和4號(hào)試管各0.15ml,充分 震搖，混合均勻，其中2號(hào)試管為對(duì)照管，4號(hào)試管用以測(cè)定正常家免

12、全血膽堿酯酶活性.（取血法：先輕彈免耳，使血管充分?jǐn)U張，耳中動(dòng)脈用手術(shù)刀片割破約2mm傷口，讓血液自流，以刻度吸管吸血，其中一份血采用肝素法抗凝，另一份不抗凝.）3、 1號(hào)家免從耳緣靜脈注射0.1%阿托品1mg/kg,密切觀察上述指標(biāo)有何改變.當(dāng)毒覃堿樣癥狀消失時(shí)（約 10min）,記錄作用時(shí)間，按上法取血0.15ml加入6號(hào)試管，用以測(cè)定家免阿托品解救后的膽堿酯酶活性.4、2號(hào)家免按1號(hào)家免同樣方法取空白血測(cè)定中毒前膽堿酯酶洗發(fā)敵百蟲中毒后，以2.5%PAM50mg/kg代替阿托品進(jìn)行解救，兩樣按上法采取中毒后和解救后血樣，測(cè)定各血樣膽堿酯酶活性.5、 將實(shí)驗(yàn)中甩采集的非抗凝血的血樣離心取血清用于肝腎功能的檢測(cè)（采用半自動(dòng)生 化儀）.6、 將抗凝血的血樣按上表實(shí)驗(yàn)操作步驟測(cè)定全血膽堿酯酶活性，比較1號(hào)和2號(hào)家免 解救后的癥狀、體重變化以及及膽堿酯酶活性變化有何不同（四）可行性分析1、家兔易得到，容易侍養(yǎng)，在科研工作中被廣泛利用2、其中使用的藥品比較常用，市場(chǎng)上可以買到，價(jià)格不貴3、手術(shù)器材和設(shè)備均為實(shí)驗(yàn)室常用，手術(shù)方法我們也相對(duì)熟練（五）預(yù)期效果農(nóng)藥中毒后：瞳孔擴(kuò)大、大小便失禁、肌震顫、膽堿酯酶活力下降、肝腎功能障礙等 注射阿托品或者碘解磷