血清清蛋白、γ-球蛋白的分離、提純與鑒定-2012醫(yī)學(xué)-第六實(shí)驗(yàn)室

1、生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)報告姓 名： 學(xué) 號： 專業(yè)年級： 組 別： 第六實(shí)驗(yàn)室生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心一、 實(shí)驗(yàn)室規(guī)則1實(shí)驗(yàn)前應(yīng)認(rèn)真預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)，明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵螅瑢懗鲱A(yù)實(shí)驗(yàn)報告。2進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須穿白大衣。嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)課紀(jì)律，不得無故遲到或早退。不得高聲說話。嚴(yán)禁拿實(shí)驗(yàn)器具開玩笑。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)禁止吸煙、用餐。3嚴(yán)格按操作規(guī)程進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)過程中自己不能解決或決定的問題，切勿盲目處理，應(yīng)及時請教指導(dǎo)老師。4嚴(yán)格按操作規(guī)程使用儀器，凡不熟悉操作方法的儀器不得隨意動用，對貴重的精密儀器必須先熟知使用方法，才能開始使用；儀器發(fā)生故障，應(yīng)立即關(guān)閉電源并報告老師，不得擅自拆修。5取用試劑時必須“隨開隨蓋”，“

2、蓋隨瓶走”，即用畢立即蓋好放回原處，切忌“張冠李戴”，避免污染。6愛護(hù)公物，節(jié)約水、電、試劑，遵守?fù)p壞儀器報告、登記、賠償制度。7注意水、電、試劑的使用安全。使用易燃易爆物品時應(yīng)遠(yuǎn)離火源。用試管加熱時，管口不準(zhǔn)對人。嚴(yán)防強(qiáng)酸強(qiáng)堿及有毒物質(zhì)吸入口內(nèi)或?yàn)R到別人身上。任何時候不得將強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、高溫、有毒物質(zhì)拋灑在實(shí)驗(yàn)臺上。8廢紙及其它固體廢物嚴(yán)禁倒入水槽，應(yīng)倒到垃圾桶內(nèi)。廢棄液體如為強(qiáng)酸強(qiáng)堿，必須事先用水稀釋，方可倒入水槽內(nèi)，并放水沖走。9以實(shí)事求是的科學(xué)態(tài)度如實(shí)記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果，仔細(xì)分析，做出客觀結(jié)論。實(shí)驗(yàn)失敗，須認(rèn)真查找原因，而不能任意涂改實(shí)驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)完畢，認(rèn)真書寫實(shí)驗(yàn)報告，按時上交。10實(shí)驗(yàn)完畢

3、，個人應(yīng)將試劑、儀器器材擺放整齊，用過的玻璃器皿應(yīng)刷洗干凈歸置好，方可離開實(shí)驗(yàn)室。值日生則要認(rèn)真負(fù)責(zé)整個實(shí)驗(yàn)室的清潔和整理，保持實(shí)驗(yàn)整潔衛(wèi)生。離開實(shí)驗(yàn)室前檢查電源、水源和門窗的安全等，并嚴(yán)格執(zhí)行值日生登記制度。二、實(shí)驗(yàn)報告的基本要求實(shí)驗(yàn)報告通過分析總結(jié)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果和問題，加深對有關(guān)理論和技術(shù)的理解與掌握，提高分析、綜合、概括問題的能力，同時也是學(xué)習(xí)撰寫研究論文的過程。1實(shí)驗(yàn)報告應(yīng)該在專用的生化實(shí)驗(yàn)報告本上、按上述格式要求書寫。2實(shí)驗(yàn)報告的前三部分實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)材料（包括實(shí)驗(yàn)樣品、主要試劑、主要儀器與器材）、實(shí)驗(yàn)步驟（包括實(shí)驗(yàn)流程與操作步驟）要求在實(shí)驗(yàn)課前預(yù)習(xí)后撰寫，作為實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)報告的內(nèi)容。預(yù)習(xí)時

4、也要考慮并設(shè)計好相應(yīng)實(shí)驗(yàn)記錄的表格。3每項(xiàng)內(nèi)容的基本要求（1）實(shí)驗(yàn)原理：簡明扼要地寫出實(shí)驗(yàn)的原理，涉及化學(xué)反應(yīng)時用化學(xué)反應(yīng)方程式表示。（2）實(shí)驗(yàn)材料：應(yīng)包括各種來源的生物樣品及試劑和主要儀器。說明化學(xué)試劑時要避免使用未被普遍接受的商品名和俗名。試劑要標(biāo)清所用的濃度。（3）實(shí)驗(yàn)步驟：描述要簡潔，不能照抄實(shí)驗(yàn)講義，可以采用工藝流程圖的方式或自行設(shè)計的表格來表示，但對實(shí)驗(yàn)條件和操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)應(yīng)寫清楚，以便他人重復(fù)。（4）實(shí)驗(yàn)記錄：包括主要實(shí)驗(yàn)條件、實(shí)驗(yàn)中觀察到的現(xiàn)象及實(shí)驗(yàn)中的原始數(shù)據(jù)。（5）結(jié)果（定量實(shí)驗(yàn)包括計算）：應(yīng)把所得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果（如觀察現(xiàn)象）和數(shù)據(jù)進(jìn)行整理、歸納、分析、對比，盡量用圖表的形式概

5、括實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，如實(shí)驗(yàn)組與對照組實(shí)驗(yàn)結(jié)果的比較表等(有時對實(shí)驗(yàn)結(jié)果還可附以必要的說明)。（6）討論：不應(yīng)是實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重述，而是以結(jié)果為基礎(chǔ)的邏輯推論。如對定性實(shí)驗(yàn)，在分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上應(yīng)有中肯的結(jié)論。還可以包括關(guān)于實(shí)驗(yàn)方法、操作技術(shù)和有關(guān)實(shí)驗(yàn)的一些問題，對實(shí)驗(yàn)異常結(jié)果的分析和評論，對于實(shí)驗(yàn)設(shè)計的認(rèn)識、體會和建議，對實(shí)驗(yàn)課的改進(jìn)意見等。（7）結(jié)論：一般實(shí)驗(yàn)要有結(jié)論，結(jié)論要簡單扼要，說明本次實(shí)驗(yàn)所獲得的結(jié)果。三、實(shí)驗(yàn)報告的評分標(biāo)準(zhǔn)（百分制）1實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)報告內(nèi)容（30分） 學(xué)生進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室前應(yīng)預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)，并書寫預(yù)習(xí)報告。實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)報告應(yīng)包括以下三部分： 實(shí)驗(yàn)原理（10分）：要求以自己的語言歸納要點(diǎn)；實(shí)驗(yàn)材料

6、（5分）：包括樣品、試劑及儀器。只列出主要儀器、試劑（常規(guī)材料不列）；實(shí)驗(yàn)方法（15分）：包括流程或路線、操作步驟，要以流程圖、表格式給出要點(diǎn)，簡明扼要。依據(jù)各部分內(nèi)容是否完整、清楚、簡明等，分以下三個等級給分。優(yōu)秀合格不合格30252418分170分優(yōu)秀：項(xiàng)目完整，能反映實(shí)驗(yàn)者的加工、整理、提煉。 合格：較完整，有一定整理，但不夠精煉。不合格：不完整、缺項(xiàng)，大段文字，完全照抄教材，記流水賬。實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)報告不合格者，不允許進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。該實(shí)驗(yàn)應(yīng)重新預(yù)約，待實(shí)驗(yàn)室安排時間后方可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。2實(shí)驗(yàn)記錄內(nèi)容（20分）實(shí)驗(yàn)記錄是實(shí)驗(yàn)教學(xué)、科學(xué)研究的重要環(huán)節(jié)之一，必須培養(yǎng)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)作風(fēng)。實(shí)驗(yàn)記錄的主要內(nèi)容包括以

7、下三方面：主要實(shí)驗(yàn)條件（如材料的來源、質(zhì)量；試劑的規(guī)格、用量、濃度；實(shí)驗(yàn)時間、操作要點(diǎn)中的技巧、失誤等，以便總結(jié)實(shí)驗(yàn)時進(jìn)行核對和作為查找成敗原因的參考依據(jù)）；實(shí)驗(yàn)中觀察到的現(xiàn)象（如加入試劑后溶液顏色的變化）；原始實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：設(shè)計實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表格（注意三線表格式），準(zhǔn)確記錄實(shí)驗(yàn)中測得的原始數(shù)據(jù)。記錄測量值時，要根據(jù)儀器的精確度準(zhǔn)確記錄有效數(shù)字（如吸光值為0.050，不應(yīng)寫成0.05），注意有效數(shù)字的位數(shù)。實(shí)驗(yàn)記錄應(yīng)在實(shí)驗(yàn)過程中書寫；應(yīng)該用鋼筆或者圓珠筆記錄，不能用鉛筆。記錄不可擦抹和涂改，寫錯時可以準(zhǔn)確劃去重記。記錄數(shù)據(jù)時請教師審核并簽名。實(shí)驗(yàn)記錄分以下三個等級給分。優(yōu)秀合格不合格20171613分1

8、20分優(yōu)秀：如實(shí)詳細(xì)地記錄了實(shí)驗(yàn)條件、實(shí)驗(yàn)中觀察到的現(xiàn)象、結(jié)果及實(shí)驗(yàn)中的原始數(shù)據(jù)（如三次測定的吸光度值）等；實(shí)驗(yàn)記錄用鋼筆或者圓珠筆記錄，沒有抹擦和涂改跡象。書寫準(zhǔn)確，表格規(guī)范（三線表）。有教師的簽字審核。合格：記錄了主要實(shí)驗(yàn)條件，但不詳細(xì)、凌亂；實(shí)驗(yàn)中觀察到的現(xiàn)象不細(xì)致；原始數(shù)據(jù)無涂改跡象，但不規(guī)范。有教師的簽字審核。不合格：記錄不完整，有遺漏；原始數(shù)據(jù)有抹擦和涂改跡象、捏造數(shù)據(jù)（以0分計）；圖、表格形式錯誤；用鉛筆記錄原始數(shù)據(jù)；無教師的簽字審核。若記錄的結(jié)果有懷疑、遺漏、丟失，必須重做實(shí)驗(yàn)，培養(yǎng)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)作風(fēng)。3結(jié)果與討論（45分）（1）數(shù)據(jù)處理（5分）對實(shí)驗(yàn)中所測得的一系列數(shù)值，要選擇合

9、適的處理方法進(jìn)行整理和分析。數(shù)據(jù)處理時，要根據(jù)計算公式正確書寫中間計算過程或推導(dǎo)過程及結(jié)果，得出最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果。要注意有效數(shù)字的位數(shù)、單位（國際單位制）。經(jīng)過統(tǒng)計處理的數(shù)據(jù)要以X±SD表示?？煞殖梢韵氯齻€等級給分。優(yōu)秀合格不合格5分4分30分優(yōu)秀：處理方法合理，中間過程清楚，數(shù)據(jù)格式單位規(guī)范。合格：處理方法較合理，有中間計算過程；數(shù)據(jù)格式單位較規(guī)范。不合格：處理方法不當(dāng)；無中間過程；有效數(shù)字的位數(shù)、單位不規(guī)范。（2）結(jié)果（20分）實(shí)驗(yàn)結(jié)果部分應(yīng)把所觀察到的現(xiàn)象和處理的最終數(shù)據(jù)進(jìn)行歸納、分析、比對，以列表法或作圖法來表示。同時對結(jié)果還可附以必要的說明。要注意圖表的規(guī)范：表格要有編號、標(biāo)題

10、；表格中數(shù)據(jù)要有單位（通常列在每一列頂端的第一行或每一行左端的第一列）。圖也要有編號、標(biāo)題，標(biāo)注在圖的下方；直角坐標(biāo)圖的縱軸和橫軸要標(biāo)出方向、名稱、單位和長度單位；電泳圖譜和層析圖譜等要標(biāo)明正、負(fù)極方向及分離出的區(qū)帶、色帶或色斑的組分或成分。電泳結(jié)果還要標(biāo)記泳道，并在圖題下給出泳道的注釋；要標(biāo)出分子量標(biāo)準(zhǔn)的各條帶的大小。并且注意需要結(jié)合圖表對結(jié)果進(jìn)行較詳細(xì)的解釋說明?？煞殖梢韵氯齻€等級給分。優(yōu)秀合格不合格20171613分120分優(yōu)秀：實(shí)驗(yàn)結(jié)果有歸納、 解釋說明，結(jié)果準(zhǔn)確，格式規(guī)范。合格：堆砌實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象、數(shù)據(jù)，解釋說明少。不合格：最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果錯誤且無解釋說明，圖表、數(shù)字不規(guī)范。（3）討論（20分

11、）討論應(yīng)圍繞實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行，不是實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重述，而是以實(shí)驗(yàn)結(jié)果為基礎(chǔ)的邏輯推論，基本內(nèi)容包括：用已有的專業(yè)知識理論對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行討論，從理論上對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的各種資料、數(shù)據(jù)、現(xiàn)象等進(jìn)行綜合分析、解釋，說明實(shí)驗(yàn)結(jié)果，重點(diǎn)闡述實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的一般規(guī)律與特殊性規(guī)律之間的關(guān)系；實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示了哪些新問題，指出結(jié)果與結(jié)論的理論意義及其大??；對實(shí)踐的指導(dǎo)與應(yīng)用價值；實(shí)驗(yàn)中遇到的問題、差錯和教訓(xùn)，與預(yù)想不一致的原因，有何待解決的方法，提出在今后的實(shí)驗(yàn)中需要注意和改進(jìn)的地方；實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖欠襁_(dá)到。同時能結(jié)合查閱的其他文獻(xiàn)等資料進(jìn)行討論，有獨(dú)到的見解。在實(shí)驗(yàn)結(jié)果和理論分析的基礎(chǔ)上，經(jīng)過推理，歸納規(guī)律得出結(jié)論。結(jié)論要嚴(yán)謹(jǐn)、精煉，

12、表達(dá)要準(zhǔn)確，與實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮魬?yīng)。也分三個等級給分。優(yōu)秀合格不合格20171613分120分優(yōu)秀：分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果的問題與經(jīng)驗(yàn)；分析實(shí)驗(yàn)設(shè)計的優(yōu)劣；能提出實(shí)驗(yàn)技術(shù)、方法的改進(jìn)意見；能結(jié)合自己查閱的其他資料來討論，有自己獨(dú)到的見解；有結(jié)論。合格：僅針對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行討論，有一定自己的見解。不合格：將討論寫成注意事項(xiàng)分析或回答思考題等，與實(shí)驗(yàn)結(jié)果無關(guān)。4格式與版面（5分）按照實(shí)驗(yàn)報告的書寫格式、版面是否整潔、工整，分三個等級給分。優(yōu)秀合格不合格5分4分30分優(yōu)秀：實(shí)驗(yàn)報告字體工整，版面整潔。合格：實(shí)驗(yàn)報告字體較工整，版面較整潔。不合格：實(shí)驗(yàn)報告字體潦草，版面凌亂。5. 加分（510分）：以全英文書寫實(shí)驗(yàn)報告視

13、情況加510分。Introduction to Biochemistry ExperimentBiochemistry experiment is a preclinical curriculum of omni-specialties in biomedicine and an experimental curriculum for going with biochemistry teaching. Its task is to help students to understand and master the basic technical principles and methods

14、in biochemistry, to possess the abilities of analyzing problems and working out solutions independently. By learning this curriculum, the students should understand the basic experimental principles of spectrophotometry，chromatography, electrophoresis and centrifuge, et al.，master the basic technica

15、l skills commonly used with these principles and possess the abilities to apply the skills systematically and to optimize the experiment conditions. The goal of biochemistry experiment is to make the students strengthen their grasp of the biochemistry theories and to integrate what they have learned

16、 with scientific research and clinical application.There are 9 experiments that represent most important areas of biochemistry including characterization of proteins and nucleic acid by electrophoresis and spectroscopic or chromatographic analysis. These experiments are essential for a typical one-s

17、emester course and are to be revised and updated when necessary. New experiments will be added to this list in the future to cover more topics of biochemistry and to reflect the many advances in biochemistry. Biochemistry Laboratory Rules1Pre-Laboratory Preparation All students must prepare BEFORE A

18、RRIVING IN THE LABORATORY. The experiments are designed so that they can be carried out with proper advance planning within the four-hour laboratory periods. It is expected that students should have a fundamental understanding of the theory and practices pertaining to the experiment before entering

19、the laboratory to conduct these experiments. Biochemical experiments often employ toxic chemicals. For the health and safety of all students, the experimental protocols must be studied and the days activities should be planned in advance. If it becomes obvious that a student is ill-prepared, he or s

20、he will not be permitted to continue the experiment. 2Safety Precautions in the Biochemistry LaboratoryAll INJURIES, no matter how minor, should be reported to the instructor IMMEDIATELY. If you have any questions regarding the safe handling of any biochemical, consult your instructor. 3Strictly fol

21、low the experimental procedures. Turn to instructors immediately for help once the laboratory instruments dont work. DONT try to fix the breakdown by yourself. Proper compensation for loss because of your own fault will be demanded.4Disposal of SolutionsIn most cases the solutions used during the la

22、boratory can be disposed of as directed by laboratory personnel at the end of the period. Any volatile organic solvents should be placed in the hood as directed. Laboratory personnel will then dispose of these solvents.5Solid trashes including waste papers are prohibited to discard into the sink. 6A

23、ll the glassware should be cleaned immediately after use. And all the reagent bottles and instruments should be placed neatly after use. 7An experiment report should be submitted to the Professor and/or TAs in time. Laboratory Report1Although students will work in pairs for all experiments, each stu

24、dent must turn in an individual laboratory report, written by himself or herself. These reports should be clearly written in ink, typed, or printed and be clear and legible. If mistakes are made, neatly cross them out and enter the corrections nearby. Reports should be written in the third person (e

25、.g., do not use “I” or “we”). STAPLE a Title Page to the top of the report and STAPLE the accompanying graphs, tables, and laboratory notebook sheets to the back. If the report is not clearly presented, the instructor may return the report without grading it. 2Each laboratory report should consist o

26、f: a. Title Page A title page for each experiment is required and should state the title of the experiment, the name of the student, the dates of the laboratory periods covered, the names of the laboratory partners, and the date that the laboratory report is due. b. ObjectivesStatement of the point

27、of the experiment - in no more than two sentences. c. Procedures DO NOT recapitulate the laboratory protocol. Write in you OWN words. A clear flowchart of the procedures is recommended. d. Results This section should summarize your observations presented in the form of graphs, calculations, tables,

28、etc. e. Discussion Evaluate your data. Explain what you observed and also why you think the data were as observed. Do not restate procedures! List possible sites of error. Whenever possible demonstrate your understanding of the theory behind the experiment. Support your results (e.g.: “Using the lin

29、ear portion of the Absorbance vs. Concentration graph to calculate the slope, it was determined that.”) (Limited to only one page per experiment for experiments 1 - 6 and four pages for experiment 7-9). 3If any laboratory report is not completed and turned in by the end of the quarter, the student m

30、aybe receive an Incomplete for the course at the discretion of the instructors; alternatively a “zero” for the missing laboratory report will be recorded and the final grade determined accordingly.實(shí)驗(yàn)名稱(Title of Experimetn)血清清蛋白、-球蛋白的分離、提純與鑒定實(shí)驗(yàn)日期(Date of Experiment)2013-12-13實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)(Lab No.)第六實(shí)驗(yàn)室合作者(Par

31、tner)指導(dǎo)老師(Instructor)總分(Total Score)教師簽名(Signature)批改日期(Date)【實(shí)驗(yàn)報告第一部分（預(yù)習(xí)報告內(nèi)容）：實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)材料（包括實(shí)驗(yàn)樣品、主要試劑、主要儀器與器材）、實(shí)驗(yàn)步驟（包括實(shí)驗(yàn)流程、操作步驟和注意事項(xiàng)）；評分（滿分30分）：XX】1、實(shí)驗(yàn)原理：蛋白質(zhì)的分離和純化是研究蛋白質(zhì)化學(xué)及其生物學(xué)功能的重要手段。 不同蛋白質(zhì)的分子量、溶解度及等電點(diǎn)等都有所不同。利用這些性質(zhì)的差別，可分離純化各種蛋白質(zhì)。2、實(shí)驗(yàn)材料：藥品：人血清、葡聚糖凝膠G-25(Sephadex G-25)層析柱、二乙基氨基乙基(DEAE)纖維素離子交換層析柱、飽和硫酸銨

32、溶液、各不同濃度的醋酸銨溶液、20%磺基水楊酸、1%BaCl2溶液。 儀器：電泳儀、電泳槽實(shí)驗(yàn)步驟：實(shí)驗(yàn)流程：粗提脫鹽純化鑒定 操作步驟： 步驟 操作 鹽析粗提取血清0.8ml，邊搖邊緩慢滴加飽和硫酸銨溶液0.8ml，混勻室溫放置10min，4000r/min離心10min。 凝膠柱層析除鹽1、沉淀（含球蛋白）加水 0.6ml溶解。2、過葡聚糖凝膠G-25層析柱（1.0×7cm）3、用1ml 0.02mol/L NH4AC緩沖液清洗層析柱內(nèi)壁,繼續(xù)用0.02mol/L pH6.5 NH4AC緩沖液(2ml)洗脫，流出液量約1ml時開始檢測蛋白質(zhì)。（磺基水楊酸檢測蛋白質(zhì)）4、收集含有蛋

33、白質(zhì)的峰液12d5、繼續(xù)用2ml 0.02mol/L NH4AC緩沖液洗滌。（BaCl2檢測 至SO42-陰性）7、用23ml 0.02mol/L NH4AC緩沖液再生平衡。7、上清液（含清蛋白、少量球蛋白和球蛋白）約0.8ml。8、過葡聚糖凝膠G-25層析柱（1.0×7cm）9、用1ml 0.02mol/L NH4AC緩沖液清洗層析柱內(nèi)壁,繼續(xù)用0.02mol/L pH6.5 NH4AC緩沖液(2ml)洗脫，流出液量約1ml時開始檢測蛋白質(zhì)。（磺基水楊酸檢測蛋白質(zhì)）10、收集含有蛋白質(zhì)的峰液12d11、繼續(xù)用0.02mol/L NH4AC緩沖液洗滌約2ml。（BaCl2檢測 至SO

34、42-陰性）12、用23ml 0.02mol/L NH4AC緩沖液再生平衡。 離子交換柱層析純化1、 除鹽后收集的球蛋白過DEAE-纖維素層析柱（1.0×6cm）2、 用1ml 0.02mol/L NH4AC緩沖液清洗層析柱內(nèi)壁,繼續(xù)用0.02mol/L pH6.5 NH4AC緩沖液(3ml)洗脫，流出液量約1ml開始檢測蛋白質(zhì)。（磺基水楊酸檢測蛋白質(zhì)）3、 收集含有蛋白質(zhì)的洗脫液每管10d，連續(xù)收集3管。4、DEAE-纖維素柱不用再生，可直接用于純化清蛋白5、 除鹽后收集的清蛋白過DEAE-纖維素層析柱（1.0×6cm）。6、 用1ml 0.06mol/L NH4AC緩沖

35、液清洗層析柱內(nèi)壁,用約mL 0.06mol/L NH4AC緩沖液流洗，除去球蛋白和球蛋白。7、 用0.3mol/L NH4AC緩沖液(約3ml)洗脫，流出液量約2ml開始檢測蛋白質(zhì)（磺基水楊酸檢測蛋白質(zhì)）。8、 收集含有清蛋白的洗脫液每管10d，連續(xù)收集2管9、 DEAE-纖維素柱先用6ml l.5mol/L NaCl - 0.3mol/L NH4AC溶液流洗，再用10ml 0.02mol/L NH4AC緩沖液流洗再生平衡。 離子交換柱再生和蛋白純度鑒定取含球蛋白濃度最高的1管作純度鑒定（醋酸纖維素薄膜電泳法）2管含清蛋白的溶液均作純度鑒定(醋酸纖維素薄膜電泳法） 醋酸纖維素薄膜 電泳1、 點(diǎn)

36、樣(粗面)點(diǎn)樣線盡量點(diǎn)得細(xì)窄而均勻。2、 電泳：薄膜粗面向下點(diǎn)樣端置陰極端兩端緊貼在濾紙鹽橋上，膜應(yīng)輕輕拉平。3、 染色和漂洗：電泳完畢后，關(guān)閉電源，將膜取出，直接浸于染色液中5min。取出膜，盡量瀝凈染色液，移入漂洗液中浸洗脫色（一般更換2次），至背景顏色脫凈為止。取出膜，用濾紙吸干即可。 4、注意事項(xiàng)：電泳是切勿使點(diǎn)樣處與電泳槽接觸。 所用血清應(yīng)新鮮，無沉淀物及細(xì)菌滋生。使用時勿將各時段所應(yīng)用的溶液濃度弄錯。 上樣時，滴管應(yīng)沿柱上端內(nèi)壁加入樣品，動作應(yīng)輕、慢，勿將柱床沖起。流洗平衡時亦應(yīng)如此。 洗脫時應(yīng)注意及時收集樣品，切勿使蛋白質(zhì)峰溶液流失，并注意層析柱不要流干，進(jìn)入空氣。 切勿將檢測蛋

37、白質(zhì)的磺基水楊酸與檢查SO42-的BaCl2混淆，因二者與相應(yīng)物質(zhì)生成的沉淀均為白色。 葡聚糖凝膠價錢昂貴，要回收再生,避免損耗，嚴(yán)禁倒掉! 當(dāng)層析柱的緩沖液面或樣品液面剛好下降到纖維素床表面時，不要使液面低于纖維素膜表面，以免空氣進(jìn)入凝膠床。 【實(shí)驗(yàn)報告第二部分（實(shí)驗(yàn)記錄）：主要實(shí)驗(yàn)條件（如材料的來源、質(zhì)量；試劑的規(guī)格、用量、濃度；實(shí)驗(yàn)時間、操作要點(diǎn)中的技巧、失誤等，以便總結(jié)實(shí)驗(yàn)時進(jìn)行核對和作為查找成敗原因的參考依據(jù)）；實(shí)驗(yàn)中觀察到的現(xiàn)象（如加入試劑后溶液顏色的變化）；原始實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。評分（滿分20分）：XX】1、 主要實(shí)驗(yàn)條件：粗鹽提取時：由于血清中各種蛋白質(zhì)分子的顆粒大小、所帶電荷的多少和

38、親水程度不同，故鹽析所需的鹽濃度也不一樣。調(diào)節(jié)鹽的濃度可使不同的蛋白質(zhì)沉淀從而達(dá)到分離的目的。血清清蛋白和球蛋白在半飽和硫酸銨溶液中清蛋白不沉淀，存在于上清液中；球蛋白沉淀，蒸餾水溶解。 脫鹽（凝膠層析）：凝膠層析法主要是根據(jù)混合物中各種物質(zhì)分子大小的不同而將其分離的技術(shù)。 純化（離子交換層析）：離子交換層析是指流動相中的離子和固定相上的離子進(jìn)行可逆的交換，利用化合物的電荷性質(zhì)及電荷量不同進(jìn)行分離。 醋酸纖維素薄膜電泳：血漿中各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同，一般都低于pH7.4。它們在pH8.6的緩沖液中均解離帶負(fù)電荷，在電場中向正極移動。由于血漿中各種蛋白質(zhì)分子大小、形狀及所帶的電荷量不同，因而在醋

39、酸纖維素薄膜上電泳的速度也不同。因此可以將它們分離為清蛋白（Albumin)、1-球蛋白、2-球蛋白、-球蛋白、-球蛋白5條區(qū)帶。 操作與失誤：在進(jìn)行球蛋白純化時，觀察不仔細(xì)，出現(xiàn)沉淀后沒有及時收集蛋白液。導(dǎo)致沒有收集到球蛋白。 在醋酸纖維素薄膜上點(diǎn)樣時，發(fā)現(xiàn)無光面粗面之分，后來發(fā)現(xiàn)是鑷子夾取了兩張薄膜。 第一次點(diǎn)樣時多次點(diǎn)樣，有時未點(diǎn)到點(diǎn)樣線上的。2、 實(shí)驗(yàn)中觀察到的現(xiàn)象：粗提實(shí)驗(yàn)時，加入飽和硫酸銨溶液后，溶液變渾濁，有乳白色沉淀生成。得到的含清蛋白的溶液與含球蛋白的溶液均呈淡黃色。 脫鹽（凝膠層析）時溶液中的色素隨著蛋白質(zhì)一起通過層析柱。 純化（離子交換層析）時膽色素卻吸附在了陰離子交換吸附柱上。 電泳后漂洗染色后出現(xiàn)顯色條帶。3、原始實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：見實(shí)驗(yàn)第三部分【實(shí)驗(yàn)報告第三部分（結(jié)果與討論）：結(jié)果（定量實(shí)驗(yàn)包括計算）：應(yīng)把所得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果（如觀察現(xiàn)象）和數(shù)據(jù)進(jìn)行整理、歸納、分析、對比，盡量用圖表的形式概括實(shí)驗(yàn)的結(jié)果；討論：不應(yīng)是實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重述，而是以結(jié)果為基礎(chǔ)的邏輯推論。結(jié)論：簡單扼要，說明本次實(shí)驗(yàn)所獲得的結(jié)果。（包括思考題）。評分（滿分45分）：XX】 1、 結(jié)