生化實驗報告

1、南方田科大學(xué)生物化學(xué)實驗報告姓名:學(xué)號:專業(yè)年級:組另IJ:31200160042012級臨床醫(yī)學(xué)（婦幼保?。┑谒膶嶒炇疑锘瘜W(xué)與分子生物學(xué)實驗教學(xué)中心一、實驗室規(guī)則1 .實驗前應(yīng)認(rèn)真預(yù)習(xí)實驗指導(dǎo)，明確實驗?zāi)康暮鸵?，寫出預(yù)實驗報告。2 .進(jìn)入實驗室必須穿白大衣。嚴(yán)格遵守實驗課紀(jì)律，不得無故遲到或早退。不得高聲說話。嚴(yán)禁拿實驗器具開玩笑。實驗室內(nèi)禁止吸煙、用餐。3 .嚴(yán)格按操作規(guī)程進(jìn)行實驗。實驗過程中自己不能解決或決定的問題，切勿盲目處理，應(yīng)及時請教指導(dǎo)老師。4 .嚴(yán)格按操作規(guī)程使用儀器，凡不熟悉操作方法的儀器不得隨意動用，對貴重的精密儀器必須先熟知使用方法，才能開始使用；儀器發(fā)生故障，應(yīng)立即

2、關(guān)閉電源并報告老師，不得擅自拆修。5 .取用試劑時必須“隨開隨蓋”，“蓋隨瓶走”，即用畢立即蓋好放回原處，切忌“張冠李戴"，避免污染。6 .愛護(hù)公物，節(jié)約水、電、試劑，遵守?fù)p壞儀器報告、登記、賠償制度。7 .注意水、電、試劑的使用安全。使用易燃易爆物品時應(yīng)遠(yuǎn)離火源。用試管加熱時，管口不準(zhǔn)對人。嚴(yán)防強(qiáng)酸強(qiáng)堿及有毒物質(zhì)吸入口內(nèi)或濺到別人身上。任何時候不得將強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、高溫、有毒物質(zhì)拋灑在實驗臺上。8 .廢紙及其它固體廢物嚴(yán)禁倒入水槽，應(yīng)倒到垃圾桶內(nèi)。廢棄液體如為強(qiáng)酸強(qiáng)堿，必須事先用水稀釋，方可倒入水槽內(nèi)，并放水沖走。9 .以實事求是的科學(xué)態(tài)度如實記錄實驗結(jié)果，仔細(xì)分析，做出客觀結(jié)論。實驗

3、失敗，須認(rèn)真查找原因，而不能任意涂改實驗結(jié)果。實驗完畢，認(rèn)真書寫實驗報告，按時上交。10 .實驗完畢，個人應(yīng)將試劑、儀器器材擺放整齊，用過的玻璃器皿應(yīng)刷洗干凈歸置好，方可離開實驗室。值日生則要認(rèn)真負(fù)責(zé)整個實驗室的清潔和整理，保持實驗整潔衛(wèi)生。離開實驗室前檢查電源、水源和門窗的安全等，并嚴(yán)格執(zhí)行值日生登記制度。二、實驗報告的基本要求實驗報告通過分析總結(jié)實驗的結(jié)果和問題，加深對有關(guān)理論和技術(shù)的理解與掌握，提高分析、綜合、概括問題的能力，同時也是學(xué)習(xí)撰寫研究論文的過程。1 .實驗報告應(yīng)該在專用的生化實驗報告本上、按上述格式要求書寫。2 .實驗報告的前三部分實驗原理、實驗材料（包括實驗樣品、主要試劑、

4、主要儀器與器材）、實驗步驟（包括實驗流程與操作步驟）要求在實驗課前預(yù)習(xí)后撰寫，作為實驗預(yù)習(xí)報告的內(nèi)容。預(yù)習(xí)時也要考慮并設(shè)計好相應(yīng)實驗記錄的表格。3 .每項內(nèi)容的基本要求（1）實驗原理：簡明扼要地寫出實驗的原理，涉及化學(xué)反應(yīng)時用化學(xué)反應(yīng)方程式表示。（2）實驗材料：應(yīng)包括各種來源的生物樣品及試劑和主要儀器。說明化學(xué)試劑時要避免使用未被普遍接受的商品名和俗名。試劑要標(biāo)清所用的濃度。（3）實驗步驟：描述要簡潔，不能照抄實驗講義，可以采用工藝流程圖的方式或自行設(shè)計的表格來表示，但對實驗條件和操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)應(yīng)寫清楚，以便他人重復(fù)。（4）實驗記錄：包括主要實驗條件、實驗中觀察到的現(xiàn)象及實驗中的原始數(shù)據(jù)。（5

5、）結(jié)果（定量實驗包括計算）：應(yīng)把所得的實驗結(jié)果（如觀察現(xiàn)象）和數(shù)據(jù)進(jìn)行整理、歸納、分析、對比，盡量用圖表的形式概括實驗的結(jié)果，如實驗組與對照組實驗結(jié)果的比較表等府時對實驗結(jié)果還可附以必要的說明）o（6）討論：不應(yīng)是實驗結(jié)果的重述，而是以結(jié)果為基礎(chǔ)的邏輯推論。如對定性實驗，在分析實驗結(jié)果的基礎(chǔ)上應(yīng)有中肯的結(jié)論。還可以包括關(guān)于實驗方法、操作技術(shù)和有關(guān)實驗的一些問題，對實驗異常結(jié)果的分析和評論，對于實驗設(shè)計的認(rèn)識、體會和建議，對實驗課的改進(jìn)意見等。（7）結(jié)論：一般實驗要有結(jié)論，結(jié)論要簡單扼要，說明本次實驗所獲得的結(jié)果。三、實驗報告的評分標(biāo)準(zhǔn)（百分制）1 .實驗預(yù)習(xí)報告內(nèi)容（3。分）學(xué)生進(jìn)入實驗室前應(yīng)

6、預(yù)習(xí)實驗，并書寫預(yù)習(xí)報告。實驗預(yù)習(xí)報告應(yīng)包括以下三部分：實驗原理（10分）：要求以自己的語言歸納要點(diǎn)；實驗材料（5分）：包括樣品、試劑及儀器。只列出主要儀器、試劑（常規(guī)材料不列）；實驗方法（15分）：包括流程或路線、操作步驟，要以流程圖、表格式給出要點(diǎn)，簡明扼要。依據(jù)各部分內(nèi)容是否完整、清楚、簡明等，分以下三個等級給分。優(yōu)秀合格不合格302524、18分17'0分優(yōu)秀：項目完整，能反映實驗者的加工、整理、提煉。合格：較完整，有一定整理，但不夠精煉。不合格：不完整、缺項，大段文字，完全照抄教材，記流水賬。實驗預(yù)習(xí)報告不合格者，不允許進(jìn)行實驗。該實驗應(yīng)重新預(yù)約，待實驗室安排時間后方可進(jìn)行實

7、驗。2 .實驗記錄內(nèi)容（20分）實驗記錄是實驗教學(xué)、科學(xué)研究的重要環(huán)節(jié)之一，必須培養(yǎng)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)作風(fēng)。實驗記錄的主要內(nèi)容包括以下三方面：主要實驗條件（如材料的來源、質(zhì)量；試劑的規(guī)格、用量、濃度；實驗時間、操作要點(diǎn)中的技巧、失誤等，以便總結(jié)實驗時進(jìn)行核對和作為查找成敗原因的參考依據(jù)）；實驗中觀察到的現(xiàn)象（如加入試劑后溶液顏色的變化）；原始實驗數(shù)據(jù)：設(shè)計實驗數(shù)據(jù)表格（注意三線表格式），準(zhǔn)確記錄實驗中測得的原始數(shù)據(jù)。記錄測量值時，要根據(jù)儀器的精確度準(zhǔn)確記錄有效數(shù)字（如吸光值為0.050,不應(yīng)寫成0.05）,注意有效數(shù)字的位數(shù)。實驗記錄應(yīng)在實驗過程中書寫；應(yīng)該用鋼筆或者圓珠筆記錄，不能用鉛筆。記錄不可擦

8、抹和涂改，寫錯時可以準(zhǔn)確劃去重記。記錄數(shù)據(jù)時請教師審核并簽名。實驗記錄分以下三個等級給分。優(yōu)秀合格不合格20171613分12"0分優(yōu)秀：如實詳細(xì)地記錄了實驗條件、實驗中觀察到的現(xiàn)象、結(jié)果及實驗中的原始數(shù)據(jù)（如三次測定的吸光度值）等；實驗記錄用鋼筆或者圓珠筆記錄，沒有抹擦和涂改跡象。書寫準(zhǔn)確，表格規(guī)范（三線表）。有教師的簽字審核。合格：記錄了主要實驗條件，但不詳細(xì)、凌亂；實驗中觀察到的現(xiàn)象不細(xì)致；原始數(shù)據(jù)無涂改跡象，但不規(guī)范。有教師的簽字審核。不合格：記錄不完整，有遺漏；原始數(shù)據(jù)有抹擦和涂改跡象、捏造數(shù)據(jù)（以0分計）；圖、表格形式錯誤；用鉛筆記錄原始數(shù)據(jù)；無教師的簽字審核。若記錄的結(jié)

9、果有懷疑、遺漏、丟失，必須重做實驗，培養(yǎng)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)作風(fēng)。3 .結(jié)果與討論（45分）（1）數(shù)據(jù)處理（5分）對實驗中所測得的一系列數(shù)值，要選擇合適的處理方法進(jìn)行整理和分析。數(shù)據(jù)處理時，要根據(jù)計算公式正確書寫中間計算過程或推導(dǎo)過程及結(jié)果，得出最終實驗結(jié)果。要注意有效數(shù)字的位數(shù)、單位（國際單位制）。經(jīng)過統(tǒng)計處理的數(shù)據(jù)要以X±SD表示。可分成以下三個等級給分。優(yōu)秀合格不合格5分4分3%分優(yōu)秀：處理方法合理，中間過程清楚，數(shù)據(jù)格式單位規(guī)范。合格：處理方法較合理，有中間計算過程；數(shù)據(jù)格式單位較規(guī)范。不合格：處理方法不當(dāng)；無中間過程；有效數(shù)字的位數(shù)、單位不規(guī)范。（2）結(jié)果（20分）實驗結(jié)果部分應(yīng)把所

10、觀察到的現(xiàn)象和處理的最終數(shù)據(jù)進(jìn)行歸納、分析、比對，以列表法或作圖法來表示。同時對結(jié)果還可附以必要的說明。要注意圖表的規(guī)范：表格要有編號、標(biāo)題；表格中數(shù)據(jù)要有單位（通常列在每一列頂端的第一行或每一行左端的第一列）。圖也要有編號、標(biāo)題，標(biāo)注在圖的下方；直角坐標(biāo)圖的縱軸和橫軸要標(biāo)出方向、名稱、單位和長度單位；電泳圖譜和層析圖譜等要標(biāo)明正、負(fù)極方向及分離出的區(qū)帶、色帶或色斑的組分或成分。電泳結(jié)果還要標(biāo)記泳道，并在圖題下給出泳道的注釋；要標(biāo)出分子量標(biāo)準(zhǔn)的各條帶的大小。并且注意需要結(jié)合圖表對結(jié)果進(jìn)行較詳細(xì)的解釋說明?？煞殖梢韵氯齻€等級給分。優(yōu)秀合格不合格20171613分12'0分優(yōu)秀：實驗結(jié)果有

11、歸納、解釋說明，結(jié)果準(zhǔn)確，格式規(guī)范。合格：堆砌實驗現(xiàn)象、數(shù)據(jù)，解釋說明少。不合格：最終實驗結(jié)果錯誤且無解釋說明，圖表、數(shù)字不規(guī)范。（3）討論（20分）討論應(yīng)圍繞實驗結(jié)果進(jìn)行，不是實驗結(jié)果的重述，而是以實驗結(jié)果為基礎(chǔ)的邏輯推論，基本內(nèi)容包括：用已有的專業(yè)知識理論對實驗結(jié)果進(jìn)行討論，從理論上對實驗結(jié)果的各種資料、數(shù)據(jù)、現(xiàn)象等進(jìn)行綜合分析、解釋，說明實驗結(jié)果，重點(diǎn)闡述實驗中出現(xiàn)的一般規(guī)律與特殊性規(guī)律之間的關(guān)系；實驗結(jié)果提示了哪些新問題，指出結(jié)果與結(jié)論的理論意義及其大??；對實踐的指導(dǎo)與應(yīng)用價值；實驗中遇到的問題、差錯和教訓(xùn)，與預(yù)想不一致的原因，有何待解決的方法，提出在今后的實驗中需要注意和改進(jìn)的地方；

12、實驗?zāi)康氖欠襁_(dá)到。同時能結(jié)合查閱的其他文獻(xiàn)等資料進(jìn)行討論，有獨(dú)到的見解。在實驗結(jié)果和理論分析的基礎(chǔ)上，經(jīng)過推理，歸納規(guī)律得出結(jié)論。結(jié)論要嚴(yán)謹(jǐn)、精煉，表達(dá)要準(zhǔn)確，與實驗?zāi)康暮魬?yīng)。也分三個等級給分。優(yōu)秀合格不合格20171613分12飛分優(yōu)秀：分析實驗結(jié)果的問題與經(jīng)驗；分析實驗設(shè)計的優(yōu)劣；能提出實驗技術(shù)、方法的改進(jìn)意見;能結(jié)合自己查閱的其他資料來討論，有自己獨(dú)到的見解；有結(jié)論。合格：僅針對實驗結(jié)果進(jìn)行討論，有一定自己的見解。不合格：將討論寫成注意事項分析或回答思考題等，與實驗結(jié)果無關(guān)。4 .格式與版面（5分）按照實驗報告的書寫格式、版面是否整潔、工整，分三個等級給分。優(yōu)秀合格不合格5分4分3%分優(yōu)

13、秀：實驗報告字體工整，版面整潔。合格：實驗報告字體較工整，版面較整潔。不合格：實驗報告字體潦草，版面凌亂。5 .力口分（510分）：以全英文書寫實驗報告視情況加5"10 分。IntroductiontoBiochemistryExperimentBbchemfetryexperinentisapieclhralcurriDuhmofomnirspecfeltieshbbmedrheandanexperinentalcumcuhmforgoingwUhbbchemisttyteaching.ItstaskistohetstudentstoundeiBtandandmaster1heba

14、shtechnicalprhcplesandmethodsinbbchemistry,topossesstheabilitiesofanalyzingproblemsandwoikhgoutsohtionshdependent.ByJeamhg出代cumculim,thestudentsshouldundetBtandthebasrexperinentalprincplesofspectophotometty,chromatography,electophoresisandcentrifiige,etal,master1hebasictechnicalskillscommonlyusedwil

15、h1heseprhcplesandpossesstheabilitiestoappKtheskfllssystematicallyandtooptiiiizetheexperinentconditbns.Thegoalofbbchemistryexperinentistomake1hestudentsstrengthentheirgiaspof1hebbchemistryIheoriesandtointegratewhattheyhavelearnedwithscientificwseaichandclhralapplration.Thereare9experinentsIhatreprese

16、ntmostinportantawasofbbchemistryhchdhgcharacterizatbnofprotehsandnuclei:acidbyelectophoresisandspectroscopicorchromatogtaphranalysis.Theseexperinentsareessentialforatypialone-semestercoutBeandaretoberevisedandupdatedwhennecessary.Newexperinentswillbeaddedtothislisth1hefiituiBtocovermoretopicsofbbche

17、mistryandtoreftectthemanyadvanceshbbchemistry.BiochemistryLaboratoryRules1. Pre-LaboratoryPreparationA11studentsmustprepareBEFOREARRIVINGINTHELABORATORY.Theexperinentsaedesignedsothattheycanbecarriedout-wihproperadvanceplannhg-wilhhthefourhourbboratoryperiods.Itisexpectedthatstudentsshouldhaveaflind

18、amentalundeiBtandhgof1heIheoiyandpracticespertahhgto1heexperinentbeforeentetiigtheJaboiatotytoconductiheseexperinents.Biochemicalexperimentsoftenemploytoxicchemicals.Forthehealthandsafetyofallstudents,theexperinentalprotocolsmustbestudfedand1hedayshouldbe'sacuitiesplannedinadvance.Ifitbecomesobv

19、ious1hatastudentisillprepared,heorshewillnotbepernittedtocontinuetheexperinent2. SafetyPrecautionsintheBiochemistryLaboratoryA11INJURIES,nomatterhowmhoi;shouldbereportedtothehstmctor血MED1ATELY.Ifyouhaveanyquestionstgaitihgthesafehandlingofanybbchemralconsultyourinstmctor3. Strictlyfollowtheexperimen

20、talprocedures.Turntohstmctorsinmedhtelyforhetoncethehboratoryinsttumentsdon'wotktDON'TttytofixthebreakdownbyyourselfPropercompensationforbssbecauseofyourownfeuItwUlbedemanded.4. DisposalofSolutionsMmostcases1hesolitbnsuseddurhg1hehboiatorycanbedisposedofasdirectedbyJaboratoiypersonnelat1heen

21、dof1heperiod.Anyvolatileotganrsolventsshouldbeplacedh1hehoodasdimcted.LaboratoiypeiBonnelwHlthendisposeof1hesesolvents.5. Solidtesheshclidhgwastepapersareprohibitedtodiscaidinto1heshk.6. Alllhegbsswawshouldbecleanedinmediate卜afteruse.Andalithereagentbotdesandinsttumentsshouldbeplacednea由afteruse.7.

22、AnexperinentreportshouHbesubmittedto1heProfessorand/6rTAshtine.LaboratoryReport1. AthoughstudentswHlwoikinpa4bforallexperinents,eachstudentmustturninanindividuallaboratoryreport,writtenbyhimselforherself.Thesereportsshouldbeclearwrittenhink,typed,orprintedandbeclearandlegible.Ifmistakesaremade,nea由c

23、ross1hemoutandenter1hecorrectionsneatby.ReportsshouldbewritteninthethirdpeiBon(e.g.,donotuseI”orSTAPLE“we").aTidePagetothetopof1hereportandSTAPLE1heaccompanyhggraphs,tables,andbbotatoiynotebooksheetsto1heback.Ifthereportisnotclearlypresented,theinstructormayreturnthereportwithoutgradingit.2. Ea

24、chJaboiatoiyreportshouHconsistof:a. TitlePageAtitlepageforeachexperinentisrequiredandshouldstate1hetitfeof1heexperinentthenameofthestudentthedatesof1hehboratoiyperiodscovered,thenamesof1heJaboratorypartners,and1hedatethatthebboratotyreportisdue.b. ObjectivesStatementof1hepohtof1heexperinent-hnomoe1h

25、antvosentences.c. ProceduresD0N0TrecapitulatetheJaboratoiyprotocolWritehyou0WNwords.Aclearfbwchartof1heproceduresisrecommended.d. ResultsThissectionshouldsummarizeyourobservationspresentedh1hefcimofgraphs,calculations,tables,etc.e. DiscussionEvaluateyourdata.Explainwhatyouobservedandalsowhyyou1hhkth

26、edatawereasobserved.Donotrestateprocedures!Listpossiblesitesoferror.WheneverpossibledemonsttateyourundeiBtandhgof1hetheorybehind1heexperinentSupportyourresults(e.g.:“UsingtheIhearportbnof1heAbsoibancevs.Concentrationgraphtocalculate1hesbpe,itwasdetenuhedthat.")(Linonyonepageperexperinentforexpe

27、rinents1-6andfourpagesforexperinent7-9).3. Ifanylaboratoryreportisnotcompietedandturnedhbytheendof1hequartet;1hestudentmaybereceiveanIncompleteforthecourseatthediscetionof1heinstmctoiB;ahemativea“zero”fcr1hemisshghboratoiywportwUlberecordedandthefhalgradedeteimhedaccotdhgy.實驗名稱(TitleofExperimetn)血清A

28、b、y-G測定實驗日期(DateofExperiment)2013-12-09實驗地點(diǎn)（tabNo.）第四實驗室合作者(Partner)沈倩文吳莉楊柳指導(dǎo)老師(Instructor)馮春瓊總分(TotalScore)90教師簽名(Signature)馮春瓊批改日期（Date）2014-1-10【實驗報告第一部分（預(yù)習(xí)報告內(nèi)容）：實驗原理、實驗材料（包括實驗樣品、主要試劑、主要儀器與器材）、實驗步驟（包括實驗流程、操作步驟和注意事項）；評分（滿分30分）：XX】一、實驗原理不同蛋白質(zhì)的分子量、溶解度及在一定條件下的帶電的情況都有所不同。利用蛋白質(zhì)的這一特性，可以分離純化各種蛋白質(zhì)。L鹽析法。由于

29、血清中各種蛋白質(zhì)分子的顆粒大小、所帶電荷的多少和親水程度不同，故鹽析所需的鹽濃度也不一樣。因此調(diào)節(jié)鹽的濃度可使不同的蛋白質(zhì)沉淀從而達(dá)到分離的目的。如：血清清蛋白不溶于飽和硫酸鏤溶液，而球蛋白不溶于半飽和硫酸鏤溶液，從而將清、球蛋白分離開。2 .脫鹽。用鹽析法分離而得到的蛋白質(zhì)中含有大量的中性鹽，會妨礙蛋白質(zhì)的進(jìn)一步純化。本實驗中我們采用葡聚糖凝膠（G-25）層析法。主要利用的是蛋白質(zhì)與無機(jī)鹽類之間的分子量的差異。當(dāng)溶液通過凝膠柱時，溶液中分子直徑大的蛋白質(zhì)不能進(jìn)入凝膠顆粒的網(wǎng)孔從而首先被洗脫出來；而無機(jī)鹽分子直徑小，能進(jìn)入凝膠顆粒網(wǎng)孔中被阻滯而后洗脫出來。3 .純化（離子交換層析）離子交換層析

30、是指流動相中的離子和固定相上的離子進(jìn)行可逆的交換，利用化合物的電荷性質(zhì)及電荷量不同進(jìn)行分離。本實驗采用的DEAE（二乙基氨基乙基）纖維素是一種陰離子交換劑。溶液中帶負(fù)電荷的離子可與其進(jìn)行交換結(jié)合，帶正電的離子則不能，從而達(dá)到分離純化的目的。4 .蛋白性質(zhì)鑒定（沉淀法）。本實驗采用的是磺基水楊酸檢測蛋白質(zhì)。因為蛋白質(zhì)為兩性物質(zhì)，在酸性環(huán)境中帶正電荷，而磺基水楊酸根帶負(fù)電，正好與蛋白質(zhì)結(jié)合沉淀，顯示液體中有蛋白存在。5 .純度鑒定（電泳）。本實驗采用的是醋酸纖維素薄膜電泳。血漿中各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同，一般都低于PH7.4。它們在pH8.6的緩沖液中均解離帶負(fù)電荷，在電場中向正極移動。由于血漿中各

31、種蛋白質(zhì)分子大小、形狀及所帶的電荷量不同，因而在醋酸纖維素薄膜上電泳的速度也不同。因此可以將它們分離為清蛋白（Abumh）al-球蛋白、a2-球蛋白、8-球蛋白、Y-球蛋白5條區(qū)帶。二、實驗材料L樣品。健康人血清6 .試劑。0.3moilpH6.5醋酸鏤（NH4AC）緩沖液、0.06mo乩pH6.5NH4AC緩沖液、0.02moilpH6.5NH4AC緩沖液、l.5mollNaCK».3mo丸NH4AC溶液、飽和硫酸鏤溶液、l%BaC12溶液、20%磺基水楊酸7 .儀器及器材電泳儀、電泳槽、離心機(jī)、微量加樣槍、離心管、托盤天平、載玻片、蓋玻片、醋酸纖維素薄膜、濾紙、試管、點(diǎn)樣板、滴管

32、三、實驗步驟L流程：粗提一脫鹽一純化一鑒定2.操作步驟（1）取0.8ml血清于試管中，邊搖邊緩慢滴加飽和硫酸鏤溶液0.8ml,混勻室溫放置10mh,4000r4h離心10min（2）取沉淀（含球蛋白）力口0.6ml蒸儲水溶解，過葡聚糖凝膠GV5層析柱。（3）用lm10.02moilNH4AC緩沖液清洗層析柱內(nèi)壁，繼續(xù)用0.02m0此pH6.5NH4AC緩沖液（2mD洗脫，流出液量約2m1（4）磺基水楊酸檢測是否有蛋白質(zhì)被洗脫，當(dāng)有沉淀且后一滴洗脫液產(chǎn)生的沉淀明顯多于前一滴時，收集含有較純凈球蛋白的峰液12d.（5）此時磺基水楊酸和BaC12檢測可能同時陽性，繼續(xù)用0.02mO11NH4AC緩沖

33、液洗滌約2nliBaC12檢測SO42T為性，用23m10.02moilNH4AC緩沖液再生平衡（6）上清液（含清蛋白、少量a球蛋白和8球蛋白）約0.8m1,加入到步驟（5）再生的葡聚凝膠層析柱中，重復(fù)步驟（3）-（5）（7）除鹽后收集的球蛋白，過DEAE纖-維素層析柱。（8）用lm10.02m0乩NH4AC緩沖液清洗層析柱內(nèi)壁，繼續(xù)用0.02m0此pH6.5NH4AC緩沖液（3mD洗脫，流出液量約2nli時，用磺基水楊酸檢測是否有蛋白質(zhì)生成（9）當(dāng)點(diǎn)滴板上有沉淀生成時，收集含有球蛋白的洗脫液每管10d,連續(xù)收集3管（10）DEAE纖-維素柱不用再生，可直接用于純化清蛋白（11）除鹽后收集的清

34、蛋白過DEAE纖-維素層析柱，用lmlO.O6mo£NH4AC緩沖液清洗層析柱內(nèi)壁，用約5mL0.06mo£NH4AC緩沖液流洗，除去a球蛋白和8球蛋白（12）用磺基水楊酸檢測蛋白質(zhì)呈陰性時，用0.3moilNH4AC緩沖液（約3mD洗脫，流出液量約2.5m1（13）磺基水楊酸檢測蛋白質(zhì)呈陽性時，收集含有清蛋白的洗脫液每管10d,連續(xù)收集2管(14)DEAE纖-維素柱先用6m115moilNaC1-0.3moilNH4AC溶液流洗，再用10ml0.02moilNH4AC緩沖液流洗再生平衡（15）將收集到的3管丫-球蛋白用磺基水楊酸做純度鑒定，取濃度最高的一管做純度鑒定，而收集到的兩管清蛋白都要做純度鑒定醋酸纖維素薄膜電泳：取醋酸纖維素薄膜迎光找出粗糙面，在粗面距邊緣約1.5cm點(diǎn)樣，然后將薄膜粗面向下，點(diǎn)樣端置陰極端，兩端緊貼在濾紙鹽橋上，膜應(yīng)輕輕拉平，接通電源開始電泳。電泳完畢后，關(guān)閉電源，將膜取出，直接浸于染色液中5m力。取出膜，盡量瀝凈染色液，移入漂洗液中浸洗脫色（一般更換2次），至背景顏色脫凈為止。取出膜，用濾紙吸干即可3.注意事項（1）當(dāng)層析柱上的緩沖液面或樣品液面剛好下降到凝膠床表面時，注意不要使液面低于