分子生物學DNA復制匯總

1、第二章第二章 基因的分子特性基因的分子特性u 核酸的化學組成核酸的化學組成u 核酸的二級結構核酸的二級結構u DNA的理化性質的理化性質u 超螺旋和真核染色超螺旋和真核染色 體的組裝體的組裝第一節(jié)第一節(jié) 遺傳物質特性遺傳物質特性嘧啶嘧啶Pyrimidines嘌呤嘌呤Purines 多聚核苷酸的化學本質多聚核苷酸的化學本質 堿基堿基Nitrogenous basesUracil (U) 核糖核糖The sugars of nucleic acids 核苷（核苷（nucleotide）嘧啶的嘧啶的1 1位位NN原子、嘌呤的原子、嘌呤的9 9位位NN原子原子核糖是戊糖核糖是戊糖 RNA核糖核苷核糖核

2、苷(R=OH) DNA脫氧核糖核苷脫氧核糖核苷(R=H)19糖苷鍵糖苷鍵Glycosidic bond 核苷酸（核苷酸（nucleotide acid）核苷的磷酸酯核苷的磷酸酯 脫氧核糖核苷酸脫氧核糖核苷酸 核糖核苷酸核糖核苷酸其中其中和和、和和之間是之間是高能磷酸鍵高能磷酸鍵dATPdNTPCMPNMP第二節(jié)第二節(jié) DNA結構結構一一、DNA分子的一級結構分子的一級結構(DNA sequence)l 多聚核苷酸鏈多聚核苷酸鏈 主鏈是核糖和磷酸主鏈是核糖和磷酸 側鏈為堿基側鏈為堿基由由3,53,5磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵連連接接l 鏈的方向鏈的方向：同一個磷酸基：同一個磷酸基 的的33酯鍵到酯鍵到

3、55酯鍵的方向酯鍵的方向 (5(53) ) 5-UCAGGCUA-3 = UCAGGCUA 默認書寫順序默認書寫順序5335l DNA DNA一級結構的特點一級結構的特點 a a、脫氧核糖是其顯著特點、脫氧核糖是其顯著特點 DNADNA極其穩(wěn)定的根本原因極其穩(wěn)定的根本原因酮式酮式烯醇式烯醇式酮式酮式烯醇式烯醇式 DNADNA在酸性條件在酸性條件 下的穩(wěn)定性？！下的穩(wěn)定性？！RNA RNA 在高在高pHpH時則穩(wěn)定性很差時則穩(wěn)定性很差 由于由于22OHOH導致的水解導致的水解OH自由的自由的 5-OH 2, 3-環(huán)式單核苷酸環(huán)式單核苷酸堿如：如：37, 0.3MKOH,1h12-18h b b、

4、磷酸呈四面體構型，脫氧核糖呈折疊的五元環(huán)，堿基是平、磷酸呈四面體構型，脫氧核糖呈折疊的五元環(huán)，堿基是平 面的面的C C、主鏈是親水的，側鏈（堿基）是疏水的、主鏈是親水的，側鏈（堿基）是疏水的 主鏈的脫氧核糖的羥基能與水形成氫鍵，而磷酸基團在主鏈的脫氧核糖的羥基能與水形成氫鍵，而磷酸基團在 生理條件下離解為負離子生理條件下離解為負離子 這些特點保證了多核苷酸鏈可形成穩(wěn)定的構象這些特點保證了多核苷酸鏈可形成穩(wěn)定的構象l 一級結構的概念一級結構的概念 指指DNADNA分子中的核苷酸排列順序，通過分子中的核苷酸排列順序，通過3,5-3,5-磷酸二酯磷酸二酯鍵相連形成的線形結構鍵相連形成的線形結構 不同

5、生物借此貯存遺傳信息不同生物借此貯存遺傳信息 決定決定DNADNA的二級結構和高級結構的二級結構和高級結構二二、 DNA雙螺旋模型結構雙螺旋模型結構（double helix model）1.1.雙螺旋結構提出背景依據(jù)雙螺旋結構提出背景依據(jù) a a、 1938. W. T. Astbury 1938. W. T. Astbury 首次用首次用X X射線分析射線分析DNADNA b b、 1950 Chargaff 1950 Chargaff A + G / T + C = 1 A + G / T + C = 1 A+T G + C A+T G + C c c、 1952 Alexander T

6、odd1952 Alexander Todd 發(fā)現(xiàn)了核苷酸和核苷酸之間由磷酸二酯鍵聯(lián)接發(fā)現(xiàn)了核苷酸和核苷酸之間由磷酸二酯鍵聯(lián)接 d d、 1952 M.H.F.Wilkins & Rosalind Franklin1952 M.H.F.Wilkins & Rosalind Franklin 得到了高度定向的得到了高度定向的DNADNA纖維的纖維的X-X-射線照片射線照片 發(fā)現(xiàn)原子長軸存在發(fā)現(xiàn)原子長軸存在0.340.34和和3.4nm3.4nm兩種周期性兩種周期性 此外，之前的密度測定表明螺旋由兩條多核苷酸鏈組此外，之前的密度測定表明螺旋由兩條多核苷酸鏈組成，且直徑恒定（成，且直

7、徑恒定（2nm)2nm)。DNA結構的3種模型1953. Watsosn & Crick1953. Watsosn & Crick 2. 雙螺旋的主鏈雙螺旋的主鏈每一單鏈具有每一單鏈具有5 35 3極極性性 兩條單鏈極性兩條單鏈極性相反相反 反向平行反向平行兩條單鏈間以兩條單鏈間以氫鍵連接氫鍵連接C-GT-A 堿基互補堿基互補以中心為軸，以中心為軸，向右盤向右盤 旋（旋（直直徑徑2nm2nm）堿基是堿基是扁平扁平結結構，位于內部，構，位于內部，成對且垂直于成對且垂直于螺旋軸螺旋軸雙雙 螺螺 旋旋 中中 存存 在在大，小大，小 溝溝 直徑直徑203. 雙螺旋模型參數(shù)雙螺旋模型參數(shù)

8、 螺距為螺距為34（任一條鏈（任一條鏈 繞軸一周所升降的距離）繞軸一周所升降的距離） 每圈有每圈有1010個核苷酸個核苷酸 （堿基）（堿基） 有大溝和小溝有大溝和小溝 配對堿基并不充滿雙配對堿基并不充滿雙 螺旋空間，且堿基對螺旋空間，且堿基對 占據(jù)的空間不對稱占據(jù)的空間不對稱 兩個堿基之間的垂直兩個堿基之間的垂直 距離是距離是3.43.4。螺旋轉。螺旋轉 角是角是36度度Pitch 34 Rise3.4 Width 20 Major GrooveMinor Groove10.4 bp/turn 大、小溝的差異大、小溝的差異 大溝中堿基差異容易識別大溝中堿基差異容易識別, ,往往是往往是 蛋白質

9、因子結合特異蛋白質因子結合特異DNADNA序列的位點序列的位點 小溝相對體現(xiàn)的信息較少小溝相對體現(xiàn)的信息較少 O,N:O,N:氫鍵受體氫鍵受體a aNH2NH2：氫鍵供體：氫鍵供體d d大溝大溝(a-d-a)(a-d-a)小溝（小溝（a-aa-a）大溝大溝(a-a-d, d-a-a)(a-a-d, d-a-a)小溝（小溝（a-d-aa-d-a）4.4.雙螺旋結構的基本形式雙螺旋結構的基本形式ABZHandednessBase InclinationABZ大溝寬大溝寬小溝窄小溝窄小溝窄小溝窄大溝窄深大溝窄深小溝寬淺小溝寬淺大溝不存在大溝不存在小溝窄而深小溝窄而深 表表 2.1 A、B 及及 Z

10、型螺旋的主要特征概括型螺旋的主要特征概括 A 型型 B 型型 Z 型型 螺旋方向螺旋方向 右手右手 右手右手 左手左手 直徑直徑 約約 2.6nm 約約 2.0nm 約約 1.8nm 每匝螺旋堿基數(shù)每匝螺旋堿基數(shù)（n） 11 10 12（6 個二聚體個二聚體） 每對堿基旋轉角度每對堿基旋轉角度（360/n） 33? ? 36? ? 60? ? 每對堿基螺旋上升每對堿基螺旋上升（h） 0.26nm 0.34nm 0.37nm 螺距螺距 2.8nm 3.4nm 4.5nm 堿基對與中心軸傾角堿基對與中心軸傾角 20? ? 6? ? 7? ? 大溝大溝 乍，乍，深深 寬，寬，深深 平坦平坦 小溝小溝

11、 寬寬，淺淺 乍乍，深深 乍，乍，深深 糖苷鍵糖苷鍵 anti anti anti（嘧啶嘧啶） syn（嘌呤嘌呤） 序列序列 Any Any 嘌呤、嘧啶交替嘌呤、嘧啶交替排列排列 存在的條件存在的條件 DNA-Na crytic D.S RNA DNA/RNA Normal 4M Na+ 三、超螺旋（三、超螺旋（superhelix OR supercoil） 最早在最早在SV40SV40和多瘤病毒和多瘤病毒 中發(fā)現(xiàn)中發(fā)現(xiàn) 超螺旋是所有線性或環(huán)超螺旋是所有線性或環(huán) 形形DNADNA的共有的重要特征的共有的重要特征The supercoils of the SV40 minichromosome

12、 can be relaxed to generate a circular structure, whose loss of histones then generates supercoils in the free DNA.l 超螺旋結構的方向性超螺旋結構的方向性B-DNA緊纏緊纏overwinding overwinding (右旋右旋) 正超螺旋正超螺旋（positive supercoiled ）導致左手超螺旋導致左手超螺旋B-DNA松纏松纏unwindingunwinding (左旋左旋) 負超螺旋負超螺旋（Negative Supercoiled ）導致右手超螺旋導致右手超螺旋

13、 所有生物的所有生物的DNA幾乎幾乎 有有5%為為 Negative Superhelix ?!l 超螺旋狀態(tài)的描述超螺旋狀態(tài)的描述數(shù)學公式描述數(shù)學公式描述Vinograd 方程式方程式L = T + W ( = + )L 連接數(shù)（連接數(shù)（Linking number ） cccDNA分子兩鏈的交叉數(shù)分子兩鏈的交叉數(shù)T 盤繞數(shù)（盤繞數(shù)（Twisting number ） 雙鏈雙鏈DNA的纏繞數(shù)，初級螺旋圈數(shù)的纏繞數(shù)，初級螺旋圈數(shù)W 超螺旋數(shù)超螺旋數(shù)（Writhing number） 直觀上為雙螺旋在空間的轉動數(shù)直觀上為雙螺旋在空間的轉動數(shù)W= 負值（負值（negative superhelix

14、）W = 正值正值 ( positive superhelix） In vitroEB insertedNeg. Pos.Superhelix change base base3.4埃埃EB 7.0埃埃 base basebasebase體外可產(chǎn)生正超螺旋體外可產(chǎn)生正超螺旋360o-26o/helix / One of EB insertedcccDNA不同構型的不同構型的DNA沉降系數(shù)和遷移率不同沉降系數(shù)和遷移率不同Linear DNA. LOpen Circle DNA OC relexed formSupercoiled circle(高級結構高級結構)Covalent Closed C

15、ircle CCC負負 Superhelix OC, L, DNA 正正 Superhelix EB對超螺旋結構的影響對超螺旋結構的影響L (linking Num.)不變不變T (Twisting Num.)減少減少(-26o/helix / 0ne of EB inserted) L= T+WW = L - T = 正值正值 DNA向緊縮方向發(fā)展向緊縮方向發(fā)展0 0.05 0.1 第三節(jié)第三節(jié) DNA的物理、化學性質的物理、化學性質一、一、DNADNA分子變性分子變性 (DNA denaturation)D.S. DNAS.S. DNA 加熱加熱, , 極端極端pH,pH,有機溶劑（有機溶

16、劑（ 尿尿素、素、 酰胺酰胺 ) )，低鹽濃度等，低鹽濃度等1 1、條件：、條件：2 2、變性過程的表現(xiàn)、變性過程的表現(xiàn) 是一個爆發(fā)式的協(xié)同過程，變性作用發(fā)生在一個很是一個爆發(fā)式的協(xié)同過程，變性作用發(fā)生在一個很 窄的溫度范圍窄的溫度范圍 導致一些理化性質發(fā)生劇烈變化導致一些理化性質發(fā)生劇烈變化 熔液黏度降低熔液黏度降低 沉降速度加大沉降速度加大 浮力密度上升浮力密度上升 此外吸收值升高（此外吸收值升高（A260nmA260nm），即），即增色效應增色效應 指在指在DNADNA變性的過程中，在變性的過程中，在260nm260nm的吸收值先是的吸收值先是 緩慢上升，達到某一溫度時及驟然上升緩慢上升

17、，達到某一溫度時及驟然上升1.1851.01.37ODConcentration 50g/ml Opetical Density D.S DNA A260 = 1S.S DNA A260 = 1.37dNTPs A260 = 1.60 = OD增加值的中點溫度增加值的中點溫度(一般為一般為85-95) Tm (melting temperature) = midpoint of the temperature range over which DNA is denatured Marmur-Doty formula Evaluation GC% of DNA Tm = 69.3 + 0.41

18、GC% 1x SSCGC% = 30-70% ( 0.15 M Nacl + 0.015 M Sodium Limonate )Tm1 Tm21.01.1851.37ODwhat is meaning ?注意事項: DNA的的GC含量同樣含量同樣影響其密度影響其密度 OD260的應用：DNA或RNA的定量 OD260=1.0相當于 50g/ml雙鏈DNA 40 g/ml單鏈DNA 33 g/ml寡核苷酸判斷核苷酸樣品的純度 DNA純品：OD260/OD280=1.8 RNA純品：OD260/OD280=2.03 3、影響、影響 TmTm值的因素值的因素 （1） 在在 A, T, C, G 隨機

19、分布的情況下隨機分布的情況下 ，決定于，決定于GC含量含量 （2）GC%含量相同的情況下含量相同的情況下GC%愈高愈高 Tm值愈大；值愈大；GC%愈低愈低Tm 值愈小值愈小 AT形成變性核心，變性加快，形成變性核心，變性加快，Tm 值小值小 堿基排列對堿基排列對Tm值具有明顯影響值具有明顯影響 5 GC 3 CG n 5 CG 3 GC n5 TA 3 AT n5 AT 3 TA n36.7 57.02 Tm136.12 72.55 嘌呤嘧啶的排列順序對雙螺旋結構（穩(wěn)定性）的影響嘌呤嘧啶的排列順序對雙螺旋結構（穩(wěn)定性）的影響Pyrimidine-Purine Steps Have Little

20、 Base Stacking5335CGAT 5 CA 3 3 GT 5 Purine-Pyrimidine Steps Have Extensive Base Stacking533CATG5 5 AC 3 3 TG 5 生物體內僅生物體內僅UAA為最有效的終止密碼子為最有效的終止密碼子 因為：因為： UAA UAA AUU AUU 的的TmTm值是最低的一個，即使生值是最低的一個，即使生 理溫度下也不穩(wěn)定理溫度下也不穩(wěn)定（3） 大片段大片段D.S DNA分子之間比較分子之間比較片段長短對片段長短對Tm值的影響較小值的影響較小, 與組成和排列相關與組成和排列相關（4） 小于小于100bp 的

21、的 D.S DNA分子比較分子比較片段愈短，片段愈短， 變性愈快，變性愈快，Tm值愈小值愈?。?） 變性液中含有尿素，甲酰胺等變性液中含有尿素，甲酰胺等尿素，甲酰胺與堿基間形成氫鍵尿素，甲酰胺與堿基間形成氫鍵 改變堿基對間的氫鍵改變堿基對間的氫鍵 Tm 值可降至值可降至40左右左右 （6）鹽濃度的影響）鹽濃度的影響 單鏈單鏈DNA主鏈的磷酸基團主鏈的磷酸基團負電荷的靜電斥力負電荷的靜電斥力兩條單鏈兩條單鏈DNA的分離的分離 Na+在磷酸基團周圍形成的電子云在磷酸基團周圍形成的電子云對靜電斥力產(chǎn)生屏蔽作用對靜電斥力產(chǎn)生屏蔽作用減弱靜電斥力減弱靜電斥力Tm 當當Na+濃度低濃度低屏蔽作用小屏蔽作用

22、小斥力加強斥力加強Tm 靜電斥力靜電斥力 熵值（熵值（S）TmOD A260 0.01M0.1M1.0MNa+當當Na+濃度高濃度高 屏蔽作用大屏蔽作用大斥力減弱斥力減弱熵值熵值(S)上升上升堿基溶解性降低堿基溶解性降低疏水作用力增加疏水作用力增加 pH 12 酮基酮基 烯醇基烯醇基pH 2-3NH2 NH2+ (質子化質子化) 改變氫鍵的形成與結合力改變氫鍵的形成與結合力（7） 極端極端pH條件的影響條件的影響一切減弱氫鍵，一切減弱氫鍵， 堿基堆積力的因素堿基堆積力的因素 均將使均將使Tm 值降低值降低4 4、 常用的變性方法常用的變性方法 熱變性熱變性 堿變性堿變性應用廣泛，特別是用于變性

23、動力學研究應用廣泛，特別是用于變性動力學研究 缺點：高溫引起磷酸二酯鍵的斷裂，得到長短不一的單鏈缺點：高溫引起磷酸二酯鍵的斷裂，得到長短不一的單鏈pH11.3時，全部氫鍵被淘汰時，全部氫鍵被淘汰無熱變性的缺點，為制備單鏈無熱變性的缺點，為制備單鏈DNADNA的首選方法的首選方法 保存單鏈保存單鏈DNADNA的條件的條件 保持保持pHpH大于大于11.311.3 鹽濃度低于鹽濃度低于0.01mol/L0.01mol/LD.S DNAS.S DNADenaturation Renaturation 復性過程依賴于單鏈分子間的隨機碰撞復性過程依賴于單鏈分子間的隨機碰撞 ( Depends on th

24、e collision of complementary S.S. DNA ) 二、二、 DNA分子的復性分子的復性 （anneal or renaturation）影響影響DNA復性過程的因素復性過程的因素 ： 陽離子濃度陽離子濃度 0.18 0.2M Na+ 可消除可消除polydNt 間的靜電斥力間的靜電斥力 復性反應的溫度復性反應的溫度 低于低于Tm值值 25左右左右 (60-65) S.S, DNA 的初始濃度的初始濃度 C0 DNA 分子中分子中, dNt 的排列狀況的排列狀況 (隨機排列隨機排列, 重復排列重復排列) S.S. DNA分子的長度（片段的大小）分子的長度（片段的大小

25、）S.S. DNA愈長愈長S.S. DNA愈短愈短 分子擴散愈慢分子擴散愈慢 復性愈慢復性愈慢 分子擴散愈快分子擴散愈快 復性愈快復性愈快3-ATCTATGCTGTCAT-55-TAGATACGACAGTA-35-TAGATACGACAGTA-33-ATCTATGCTGTCAT-53-ATATATATATAT-55-TATATATATATA-33-ATATATATATAT-55-TATATATATATA-35-TATATATATATA-33-ATATATATATAT-53-ATATATATATAT-55-TATATATATATA-3三、三、Molecular Hybridization (核酸

26、, 蛋白質分子雜交)1 1、定義、定義 ( (核酸分子核酸分子雜交，雜交， “DNADNA印跡雜交印跡雜交”) ) 不同來源的單鏈不同來源的單鏈DNADNA與單鏈與單鏈DNADNA、RNARNA與與 單鏈單鏈DNADNA分子分子間間 在長于在長于20 bp20 bp的同源區(qū)域內的同源區(qū)域內 以氫鍵連接方式互補配對以氫鍵連接方式互補配對 形成穩(wěn)定的雙鏈結構的過程形成穩(wěn)定的雙鏈結構的過程用途用途 檢測檢測DNADNA的缺失、插入，的缺失、插入，考察不同生物種類在進化中的考察不同生物種類在進化中的關系關系2 2、分子雜交的檢測、分子雜交的檢測D.S. DNAX-filmColumn absorb D

27、.S DNAp32 or biotinlabeledS.S. DNA ( as probe) S.S. DNAS.S. RNA顯微鏡觀察或放射自顯影顯微鏡觀察或放射自顯影3 3、雜交形式、雜交形式 固相雜交（濾膜）固相雜交（濾膜） 液相雜交液相雜交固相分子雜交固相分子雜交 類型類型 （1975 E. M. Southern1975 E. M. Southern） 放射自顯影DNA印跡轉移探針雜交Southern BlottingSouthern Blotting的過程的過程1.1.堿變性的瓊脂糖凝膠電泳分離的堿變性的瓊脂糖凝膠電泳分離的DNADNA2.2.通過電泳液的移動轉移膠中的通過電泳液的

28、移動轉移膠中的DNADNA3.3.固定膠中的固定膠中的DNADNA4.4.預雜交和雜交（放射性和熒光檢測）預雜交和雜交（放射性和熒光檢測）5.5.結果檢測結果檢測傳統(tǒng)和現(xiàn)代雜交實驗示意圖傳統(tǒng)和現(xiàn)代雜交實驗示意圖原位雜交原位雜交/平板雜交平板雜交Southern/Northern 點雜交點雜交Southern/Northern 雜交雜交Western 雜交雜交微孔板雜交微孔板雜交DIGDIG分子示意圖分子示意圖學生雜交實驗結果學生雜交實驗結果JM83 DNA (EcoRV)JM83 DNA (BglI)JM83 DNA (NcoI) pMD-phoA lasmid DNA (BamHI/PstI

29、)M. MarkerDIG分子雜交轉膜分子雜交轉膜 1975 E. M. Southern1975 E. M. Southern 1977.1977. J.C. AlwineJ.C. Alwine 1978.1978. Hany TowbinHany TowbinNorthern blotWestern blotS.S. RNA S.S. DNAProtein (antigen ) antibodySouthern blotS.S. DNA S.S. DNA 原位分子雜交原位分子雜交 (In situ hybridization ) Western印跡（免疫印跡）印跡（免疫印跡）檢測重組體克隆

30、的檢測重組體克隆的菌落雜交菌落雜交技術技術原位雜交原位雜交In situ hybridizationLocalization of DNALocalization of RNASouthern blotNorthern blotWestern blotFISH四、基因組的大小和四、基因組的大小和C值悖理值悖理 基因組（基因組（genome）：是指細胞或生物體的全套遺傳物：是指細胞或生物體的全套遺傳物 質，即質，即。 比如比如人人基因組的全長為大約基因組的全長為大約3 310109 9對對堿基，編碼堿基，編碼 3-43-4萬個萬個 蛋白蛋白分子分子細菌或噬菌體、病毒細菌或噬菌體、病毒單個染色體中

31、所含單個染色體中所含的全部基因（的全部基因（DNADNA） C值（值（C-value）：在真核生物中，每種生物的單倍：在真核生物中，每種生物的單倍 體基因組的體基因組的DNA總量總是恒定的，稱為總量總是恒定的，稱為C-值值 【C-value is the quantity of DNA in the genome (per haploid set of chromosomes).】 C C是每種生物的一個特征，不同生物之間差別很大是每種生物的一個特征，不同生物之間差別很大低等真核生物中與形態(tài)學復雜程度相關，但高等真核生物低等真核生物中與形態(tài)學復雜程度相關，但高等真核生物中變化很大中變化很大DN

32、A content of the haploid genome is related to the morphological complexity of lower eukaryotes, but varies extensively among the higher eukaryotes.之一之一： 物種之間形態(tài)學物種之間形態(tài)學的復雜性與的復雜性與C C值不成值不成正正相關相關 b b、親緣關系相近的親緣關系相近的生物大生物大C C值相差較大值相差較大之二之二：一種生物內大：一種生物內大C C值值與與 編碼蛋白質的基因相編碼蛋白質的基因相差極大差極大 (Euk.(Euk.人體人體 c =

33、C/10)c = C/10) (Prok. x174 c (Prok. x174 c C)C) C值矛盾（值矛盾（C-value paradox，C-悖理）悖理）：形態(tài)學的復雜程度與形態(tài)學的復雜程度與C-值不一致的現(xiàn)象值不一致的現(xiàn)象a a、生物進化程度與、生物進化程度與C C值的矛盾值的矛盾( (兩棲類與兩棲類與哺乳類哺乳類) ) C值悖理與表現(xiàn)值悖理與表現(xiàn) 第四節(jié)第四節(jié) 真核生物真核生物DNA序列類型序列類型一、高度重復序列一、高度重復序列（Highly repetitive sequenceHighly repetitive sequence）ProkaryoteProkaryoteEuk

34、aryoteEukaryote(GC%)42413455MOUSEMOUSE CALFCALFCsCl 離心離心 衛(wèi)星衛(wèi)星DNADNA（Satellite DNASatellite DNA） 由由2-20bp2-20bp組成組成重復單位串排列重復單位串排列分布于著絲點分布于著絲點, , 端粒區(qū)端粒區(qū), , 結構基因結構基因 兩側兩側 heterochromatinheterochromatin果蠅（果蠅（Drosophila）衛(wèi)星衛(wèi)星DNASea crab2bpATATAT.Drosophila5bpATAATATAAT.Mouse9bpGAAAAATGAGAAAAATGA小衛(wèi)星重復單位小于小

35、衛(wèi)星重復單位小于25bp25bp，數(shù)目可變的串聯(lián)重復或數(shù)目可變的串聯(lián)重復或( Variable number tandem repeats . VNTR ) 小衛(wèi)星小衛(wèi)星Minisatellite DNA限制性內切核酸酶概念限制性內切核酸酶概念限制性內切酶可以將限制性內切酶可以將DNADNA剪切成特定的片段剪切成特定的片段使用不同的限制性內切使用不同的限制性內切酶，通過疊加法可用于酶，通過疊加法可用于DNADNA作圖作圖SouthernSouthern印記印記限制性片斷長度多限制性片斷長度多態(tài)性技術態(tài)性技術 (RFLP)(RFLP)第一代第一代DNADNA指紋技術指紋技術DNA指紋技術指紋技術

36、Hae切某一個體切某一個體DNA電泳電泳 (Electrophorese)與標記的小衛(wèi)星與標記的小衛(wèi)星DNADNA探針雜交探針雜交X X線膠片檢測線膠片檢測限制性片斷長度多態(tài)性技術限制性片斷長度多態(tài)性技術(RFLP)(RFLP) 第一代第一代DNADNA指紋技術指紋技術利用利用DNA分型（分型（DNA typing）輔助鑒定嫌疑犯）輔助鑒定嫌疑犯現(xiàn)場血跡現(xiàn)場血跡1234567 微衛(wèi)星微衛(wèi)星DNADNA（Microsatellite DNAMicrosatellite DNA）105-106 copies / genome微衛(wèi)星重復單位為微衛(wèi)星重復單位為26bp26bp，重復區(qū)域小于，重復區(qū)域小于150bp150bp 無選擇壓力無選擇壓力 （multiple allele multiple allele 可保留在群體中）可保留在群體中） （ 有效的分子標記，有效的分子標記， ）廣泛用于基因定位的連鎖分析、個體識別和親