仿制藥生物等效性實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)-崔一民

1、仿制藥生物等效性試驗(yàn)設(shè)計(jì)仿制藥生物等效性試驗(yàn)設(shè)計(jì)崔一民崔一民北京大學(xué)第一醫(yī)院北京大學(xué)第一醫(yī)院E-mail: 生物等效性（生物等效性（BE）的概念）的概念 生物等效性試驗(yàn)是指用生物利用度研究的方法，以藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)為指標(biāo)，比較同一種藥物的相同或者不同劑型的制劑，在相同的試驗(yàn)條件下，其活性成分吸收程度和速度有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的人體試驗(yàn)。 生物等效性試驗(yàn)在藥物研究開(kāi)發(fā)的不同階段，其作用可能稍有差別，但究其根本，生物等效性試驗(yàn)的目的都是通過(guò)測(cè)定血藥濃度的方法，來(lái)比較不同的制劑對(duì)藥物吸收的影響，也即藥物不同制劑之間的差異，以此來(lái)推測(cè)其臨床治療效果差異的可接受性，即不同制劑之間的可替換性。 BE研究適用范圍研

2、究適用范圍改變國(guó)內(nèi)已上市銷(xiāo)售藥品的劑型，但不改變給藥途徑的口服制劑或其他有關(guān)制劑（化學(xué)藥）。已有國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)的制劑（化學(xué)藥）。改變口服藥物制劑處方或工藝的補(bǔ)充申請(qǐng)其他BEBE研究方法研究方法 通常意義的BE研究是指通過(guò)測(cè)量不同時(shí)間點(diǎn)的生物樣本（如血漿或尿液）中藥物濃度，獲得藥物濃度-時(shí)間曲線來(lái)反映藥物從制劑中釋放吸收到體循環(huán)中的動(dòng)態(tài)過(guò)程。并經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)挠?jì)算得到曲線下面積（AUC）、達(dá)峰濃度（Cmax）、達(dá)峰時(shí)間（Tmax）等參數(shù)后，通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)比較判斷兩制劑是否生物等效。 生物樣本中藥物濃度測(cè)定生物樣本中藥物濃度測(cè)定 建立生物樣本中藥物濃度定量分析方法是進(jìn)行生物等效性研究的關(guān)鍵之一。 開(kāi)始入選受試

3、者前，應(yīng)建立可靠的和可重現(xiàn)的藥物濃度定量分析方法。 方法學(xué)建立和考察的內(nèi)容方法學(xué)建立和考察的內(nèi)容 特異性； 標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量范圍； 定量下限； 精密度與準(zhǔn)確度； 樣品穩(wěn)定性； 提取回收率。隨機(jī)、交叉、單劑量、兩周期試驗(yàn)設(shè)計(jì)隨機(jī)、交叉、單劑量和多劑量、兩周期試驗(yàn)設(shè)計(jì) 交叉設(shè)計(jì)是目前應(yīng)用最多最廣的方法。 把受試對(duì)象隨機(jī)分為兩組，按一定順序處理，一組受試者先服用受試制劑，后服用參比制劑；另一組受試者先服用參比制劑，后服用受試制劑。兩順序間應(yīng)有足夠長(zhǎng)的間隔時(shí)間，為清洗期。為什么采用一般采用交叉設(shè)計(jì)？對(duì)每位受試者都連續(xù)接受兩次或多次的處理，相當(dāng)于自身對(duì)照，可以將制劑因素對(duì)藥物吸收的影響與其他因素區(qū)分開(kāi)來(lái)，

4、減少了不同試驗(yàn)周期和個(gè)體間差異對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。 在進(jìn)行兩種以上劑型比較時(shí)，也可以進(jìn)行多周期試驗(yàn)設(shè)計(jì)。 在試驗(yàn)藥物的半衰期過(guò)長(zhǎng)時(shí)，可進(jìn)行平行試驗(yàn)設(shè)計(jì)。單劑量給藥交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)單劑量給藥交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì) 給藥給藥20天-7天1天3天 研究日研究日 篩查篩查 -1天入院入院 出院出院入院入院 14天給藥給藥出院出院15天 17天隨訪隨訪第一周期第二周期A組服試驗(yàn)藥物B組服對(duì)照藥物A組服對(duì)照藥物B組服試驗(yàn)藥物清洗期單劑量給藥平行試驗(yàn)設(shè)計(jì)單劑量給藥平行試驗(yàn)設(shè)計(jì) 給藥給藥8天-7天1天研究日研究日 篩查篩查 -1天入院入院 出院出院隨訪隨訪PKA組服試驗(yàn)藥物B組服對(duì)照藥物 觀察制劑的控釋或緩釋特性是否一致。

5、SFDA指導(dǎo)原則：1824例 根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)的把握度進(jìn)行計(jì)算 對(duì)某些變異性大的藥物可能需要適當(dāng)增加 例數(shù) 原則上以原藥為基礎(chǔ)進(jìn)行等效性研究。在原藥代謝很快、藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)變異大導(dǎo)致血液濃度測(cè)定困難或受試者數(shù)目過(guò)大時(shí)可以主要活性代謝產(chǎn)物為基礎(chǔ)進(jìn)行等效性研究。 原則上選擇國(guó)內(nèi)已經(jīng)批準(zhǔn)上市相同劑型藥 物中的原創(chuàng)藥。在無(wú)法獲得原創(chuàng)藥時(shí)，可考慮選用上市主 導(dǎo)產(chǎn)品作為參比制劑。給藥劑量一般應(yīng)與臨床單次用藥劑量一致，不得超過(guò)臨床推薦的單次最大劑量或已經(jīng)證明的安全劑量。受試制劑和參比制劑一般應(yīng)服用相等劑量。需要使用不相等劑量時(shí)，應(yīng)說(shuō)明理由并提供所用劑量范圍內(nèi)的線性藥代動(dòng)力學(xué)特征依據(jù)，結(jié)果可以劑量校正方式計(jì)算生物利

6、用度。 設(shè)定清洗期是為了消除兩制劑的互相干擾，避免上個(gè)周期內(nèi)的處理影響到隨后一周期的處理中。清洗期一般不應(yīng)短于7個(gè)消除半衰期。取樣點(diǎn)的設(shè)計(jì)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的可靠性及藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)計(jì)算的合理性，均有十分重要的意義。一般應(yīng)兼顧到吸收相、平衡相（峰濃度）和消除相。服藥前應(yīng)先取空白血樣。一般在吸收相部分取23 個(gè)點(diǎn)，峰濃度附近至少需要3個(gè)點(diǎn)，消除相取35 個(gè)點(diǎn)。 采樣持續(xù)應(yīng)到受試藥原形或其活性代謝物35個(gè)半衰期時(shí)，或至血藥濃度為Cmax 的110120，AUC0-t/AUC0-通常應(yīng)當(dāng)大于80%。受試者入選標(biāo)準(zhǔn)： 男性健康受試者，1840 周歲。 體重指數(shù)（體重(kg)/身高(m)2）在正常范圍（1924）

7、內(nèi)。 試驗(yàn)前簽署知情同意書(shū)。受試者排除標(biāo)準(zhǔn)（舉例）受試者排除標(biāo)準(zhǔn)（舉例）： 通過(guò)直接提問(wèn)和體檢，有任何顯著的臨床疾病者。 臨床上有顯著的變態(tài)反應(yīng)史、特別是藥物過(guò)敏史者。 經(jīng)研究前全面體檢和實(shí)驗(yàn)室檢查發(fā)現(xiàn)有任何顯著的臨床疾病者。 正在服用或在服第一劑研究藥物前3周中曾服用任何處方藥或非處方藥（每天3g以內(nèi)撲熱息痛除外）者。 在此研究給第一劑的日期前4個(gè)月內(nèi)接受過(guò)任何試驗(yàn)性藥物者。 喝酒每周超過(guò)28單位酒精（1單位285ml啤酒或25ml烈酒或1玻璃杯葡萄酒）者。 每天吸煙超過(guò)10支或相等量的煙草者。 有證據(jù)表明其為藥物濫用者。 在研究前一個(gè)月獻(xiàn)過(guò)血，或打算在研究期間或研究結(jié)束后一個(gè)月內(nèi)獻(xiàn)血或血液

8、成分者。 研究者認(rèn)為受試者有任何原因可能不會(huì)完成本研究者。 消除性別間的差異。 避免受女性經(jīng)期及妊娠的影響。藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的計(jì)算 在生物等效性研究中，其主要藥代參數(shù)Cmax 和Tmax 均以實(shí)測(cè)值表示，AUC0t 以梯形法計(jì)算。 一般用非房室數(shù)學(xué)模型分析方法來(lái)估算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，為什么？用房室模型方法估算藥代參數(shù)時(shí)，采用不同的方法或軟件其值可能有較大差異。BEBE研究中常用的軟件研究中常用的軟件 WinNonLin DAS 研究者可根據(jù)具體情況選擇使用，但所用軟件必須經(jīng)確證并應(yīng)在研究報(bào)告中注明所用軟件。等效判斷標(biāo)準(zhǔn)等效判斷標(biāo)準(zhǔn) 采用主要藥代參數(shù)經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后以多因素方差分析（

9、ANOVA）進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，然后用雙向單側(cè)t 檢驗(yàn)和計(jì)算90置信區(qū)間的統(tǒng)計(jì)分析方法來(lái)評(píng)價(jià)和判斷藥物間的生物等效性。 等效判斷標(biāo)準(zhǔn)等效判斷標(biāo)準(zhǔn)關(guān)于方差分析 方差檢驗(yàn)是顯著性檢驗(yàn)，設(shè)定的無(wú)效假設(shè)是兩藥無(wú)差異，檢驗(yàn)方式為是與否。 在P0.05時(shí)認(rèn)為兩藥差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義，但并不能認(rèn)為兩者相等或相近。 等效判斷標(biāo)準(zhǔn)等效判斷標(biāo)準(zhǔn)關(guān)于等效檢驗(yàn) 雙向單側(cè)t 檢驗(yàn)及（12）%置信區(qū)間法是目前生物等效檢驗(yàn)的唯一標(biāo)準(zhǔn)。 SFDA規(guī)定：一般經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后的受試制劑的AUC0t 在參比制劑的80125范圍，受試制劑的Cmax 在參比制劑的70143范圍，判斷兩藥生物等效。 如有必要時(shí)，應(yīng)對(duì)Tmax 經(jīng)非參數(shù)法檢驗(yàn)，如無(wú)差異

10、，可以認(rèn)定受試制劑與參比制劑生物等效。 各國(guó)等效判斷標(biāo)準(zhǔn)比較各國(guó)等效判斷標(biāo)準(zhǔn)比較國(guó)家國(guó)家/ /地區(qū)地區(qū)AUCAUC標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)90%90%可信限可信限CmaxCmax標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)90%90%可信限可信限中國(guó)80125%70143%加拿大 80125%None （點(diǎn)估計(jì)）EMEA 80125%75133%日本80125%某些藥物更寬WHO80125%Cmax的可接受范圍可能比AUC寬美國(guó)80125%80125%南非80125%75133%等效判斷標(biāo)準(zhǔn)等效判斷標(biāo)準(zhǔn) 出現(xiàn)Tmax不等效，Cmax等效，AUC等效或 Cmax不等效，AUC等效時(shí)，怎么看？目前比較肯定AUC 對(duì)藥物吸收程度的衡量作用，而Cmax

11、、Tmax 依賴(lài)取樣時(shí)間的安排，用它們衡量吸收速率有時(shí)是不夠準(zhǔn)確的，不適合用于具有多峰現(xiàn)象的制劑及個(gè)體變異大的試驗(yàn)。故在評(píng)價(jià)時(shí)，若出現(xiàn)某些不等效特殊情況，需具體問(wèn)題加以具體分析。BEBE研究的臨床試驗(yàn)報(bào)告研究的臨床試驗(yàn)報(bào)告 生物等效性研究臨床報(bào)告內(nèi)容至少應(yīng)包括以下內(nèi)容（1）實(shí)驗(yàn)?zāi)康?；?）生物樣本分析方法考察的數(shù)據(jù)，提供必要的圖譜；（3）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和操作方法，包括全部受試者的資料、樣本例 數(shù)、參比制劑、給藥劑量、服藥方法和采樣時(shí)間安排；（4）受試者各時(shí)間點(diǎn)的藥物濃度、藥代參數(shù)和藥時(shí)曲線；（5）采用的統(tǒng)計(jì)分析方法以及詳細(xì)統(tǒng)計(jì)過(guò)程和結(jié)果；（6）服藥后的臨床不良反應(yīng)觀察結(jié)果，受試者中途退出和脫落記錄及

12、原因；（7）生物利用度或生物等效性結(jié)果分析以及討論；（8）參考文獻(xiàn)?；瘜W(xué)藥物制劑人體生物利用度和生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則(二五年三月)主要參考文獻(xiàn)主要參考文獻(xiàn)舉例：舉例：A片劑片劑的生物等效性研究的生物等效性研究XXX制藥有限公司生產(chǎn)與制藥有限公司生產(chǎn)與YYY制藥有限公司制藥有限公司生產(chǎn)生產(chǎn)A片劑的開(kāi)放、隨機(jī)、交叉研究片劑的開(kāi)放、隨機(jī)、交叉研究 研究目的研究目的 在中國(guó)男性健康受試者中評(píng)價(jià)XXX制藥有限公司生產(chǎn)與YYY制藥有限公司生產(chǎn)A片劑的生物等效性。 試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)設(shè)計(jì)l本研究為開(kāi)放、單劑量、雙周期隨機(jī)交叉設(shè)計(jì)；l計(jì)劃入組24例，均為男性；l受試者于試驗(yàn)當(dāng)日清晨按試驗(yàn)設(shè)計(jì)口服試驗(yàn)制劑或參比

13、制劑。于1周后交叉服用另一制劑。試驗(yàn)結(jié)束后進(jìn)行隨訪；l每周期分別于給藥前及給藥后第0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12、16、24小時(shí)采集靜脈血測(cè)定血漿中A的濃度，計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，判定兩種制劑是否生物等效。入選標(biāo)準(zhǔn)入選標(biāo)準(zhǔn)l年齡在1840周歲之間健康男性, 且同一批入組受試者年齡相差不超過(guò)10歲；l體重指數(shù)(BMI)在1924之間, 體重不應(yīng)低于50Kg； l自愿參加本試驗(yàn)并簽署書(shū)面知情同意書(shū)。 排除標(biāo)準(zhǔn)排除標(biāo)準(zhǔn)l受試者在首次服用研究藥物前30天內(nèi)患有嚴(yán)重疾病（研究者認(rèn)為沒(méi)有臨床顯著意義除外）；或有胃腸肝腎疾病患者；或有其他影響吸收、分布、代謝和排泄等因素者； l有藥物過(guò)敏史

14、者； l受試者在篩選試驗(yàn)前2年內(nèi)有藥物濫用史或酗酒史（定義飲用酒精的量：每日飲用酒精的量約為40g）； l飲用過(guò)量茶、咖啡和/或含有咖啡因的飲料者（8杯/天）； l乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒抗體(Anti-HCV)、艾滋病病毒抗體(Anti-HIV)中有一項(xiàng)呈陽(yáng)性者； l實(shí)驗(yàn)室檢查異常且研究者認(rèn)為有臨床意義的受試者； l收縮壓90mmHg的受試者；臥位5分鐘和站立后立即測(cè)定的血壓值：收縮壓之差20mmHg，舒張壓之差10 mmHg的受試者； 排除標(biāo)準(zhǔn)（續(xù)）排除標(biāo)準(zhǔn)（續(xù)）l受試者在首次服用研究藥物前2周曾經(jīng)吸過(guò)煙或服用過(guò)含有煙堿的產(chǎn)品（包括但不限定是香煙、煙斗、雪茄煙、咀嚼

15、用煙草、煙堿片、煙堿口香糖），或在首次服用研究藥物前1周內(nèi)曾經(jīng)飲酒者； l在過(guò)去4周內(nèi)采集全血200 ml或過(guò)去12周內(nèi)采集全血400 ml或過(guò)去2周內(nèi)采集成分血（采集血清成分或血小板成分）者； l3個(gè)月內(nèi)用過(guò)已知對(duì)臟器有損害的藥物者；或在給予試驗(yàn)藥物前2周內(nèi)有用藥史者；或目前正在使用藥物者； l在試驗(yàn)開(kāi)始前2個(gè)月內(nèi)參加過(guò)其他試驗(yàn)者； l不能和研究者很好溝通者（語(yǔ)言障礙、智力發(fā)育不良或腦功能受損者）； l在緊急情況下不能取得聯(lián)系者； l由研究者判斷為不適合參加本試驗(yàn)的受試者。用法用量用法用量 采用隨機(jī)的服藥順序，受試者在第一研究周期早晨空腹單次口服試驗(yàn)制劑或參比制劑，在第二研究周期交叉服用參比

16、制劑或試驗(yàn)制劑，劑量均為5mg，兩次服藥間隔至少1周。 生物等效性評(píng)價(jià)指標(biāo)生物等效性評(píng)價(jià)指標(biāo) 主要判定指標(biāo)：Cmax 和 AUC0-24h； 參考指標(biāo)：AUC0- 和 Tmax安全性評(píng)價(jià)指標(biāo)安全性評(píng)價(jià)指標(biāo)l 不良事件（癥狀）；l 不良事件（檢查）；l 生命體征（血壓、心率）；l 嚴(yán)重不良事件。評(píng)價(jià)方法評(píng)價(jià)方法 藥代動(dòng)力學(xué)：使用WinNonLin Version 5.0程序的非房室模型法計(jì)算試驗(yàn)制劑和參比制劑的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)Cmax，Tmax，AUC0-24h，AUC0-，t1/2 。 生物等效性分析：藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)Cmax，AUC0-24h，AUC0-的生物等效性分析采用WinNonLin程序

17、中的Bioequivalence Wizard模塊；Tmax采用SPSS軟件 Wilcoxon檢驗(yàn)法進(jìn)行分析。 安全性分析： 將試驗(yàn)過(guò)程中觀察到的不良事件及實(shí)驗(yàn)室檢查異常的研究前后的數(shù)據(jù)進(jìn)行列表描述。對(duì)生命體征（血壓、心率）、實(shí)驗(yàn)室檢查值進(jìn)行描述性統(tǒng)計(jì)和列表分析，按給藥組檢查時(shí)期計(jì)算出平均值、標(biāo)準(zhǔn)差、最小值、最大值。 試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)結(jié)果受試者人口學(xué)資料受試者人口學(xué)資料 受試者年齡（y）身高（m）體重(kg）體重指數(shù)(kg/m2)meansd35.02.91.680.0663.56.022.41.3范圍范圍28381.601.81517619.924.0主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)藥代動(dòng)力

18、學(xué)參數(shù)試驗(yàn)制劑 參比制劑Cmax (ng/mL)Tmax* (h)AUC0-24h (ng*h/mL)AUC0- (ng*h/mL) t1/2 (h) F（%）* Tmax以中位數(shù)（最小值，最大值）表示單次口服試驗(yàn)制劑和參比制劑后平均血漿濃度單次口服試驗(yàn)制劑和參比制劑后平均血漿濃度(meansd)-時(shí)間曲線圖時(shí)間曲線圖 主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)方差分析主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)方差分析 參數(shù)參數(shù)變異來(lái)源變異來(lái)源AUC024hAUC0Cmax F值值P值值F值值P值值 F值值 P值值 制劑間制劑間 1.120.2994 0.940.3407 0.60.4432周期間周期間 0.430.517 0.280.6015 0.360.5537個(gè)體間個(gè)體間12683.620.00012577.560.0003836.570.000生物等效性評(píng)價(jià)生物等效性評(píng)價(jià) 參數(shù)參數(shù) 兩制劑比值兩制劑比值 90%置信區(qū)間置信區(qū)間等效性標(biāo)準(zhǔn)等效性標(biāo)準(zhǔn)結(jié)論結(jié)論 AUC024h104.28%97.48 % 111.5