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1、會(huì)計(jì)學(xué)1第一頁(yè),共34頁(yè)。2無(wú)菌技術(shù)(jsh) 3實(shí)驗(yàn)(shyn)操作 二、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離(fnl)與計(jì)數(shù) 第1頁(yè)/共34頁(yè)第二頁(yè),共34頁(yè)。三、分解(fnji)纖維素的微生物的分離第2頁(yè)/共34頁(yè)第三頁(yè),共34頁(yè)。微生物的應(yīng)用(yngyng) 1微生物的代謝類型(1)根據(jù)能否將CO2合成有機(jī)物可分為自養(yǎng)型生物與異養(yǎng)型生物。自養(yǎng)型生物:能利用CO2等簡(jiǎn)單的無(wú)機(jī)物合成貯存能量的有機(jī)物的生物。異養(yǎng)型生物:不能利用CO2等簡(jiǎn)單無(wú)機(jī)物合成有機(jī)物,只有以其他生物制造的有機(jī)物為食的生物。(2)根據(jù)同化過(guò)程中能量來(lái)源不同,可分為光能自養(yǎng)型、化能自養(yǎng)型、化能異養(yǎng)型。它們(t men)的比較見(jiàn)下表:

2、第3頁(yè)/共34頁(yè)第四頁(yè),共34頁(yè)。2.微生物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及功能(gngnng)第4頁(yè)/共34頁(yè)第五頁(yè),共34頁(yè)。知識(shí)拓展(1)微生物最常用的碳源是糖類,尤其是葡萄糖;最常利用的氮源是銨鹽、硝酸鹽。(2)對(duì)異養(yǎng)微生物來(lái)說(shuō),含C、H、O、N的有機(jī)物既是碳源,又是氮源、能源。(3)有些培養(yǎng)基不需要添加特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),生物自己能合成,如大腸桿菌能合成某些維生素,作為(zuwi)特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。(4)病毒是一類完全寄生的生物,它不能在一般的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖,必須在活體培養(yǎng)基中才能表現(xiàn)出生命活性。第5頁(yè)/共34頁(yè)第六頁(yè),共34頁(yè)。3培養(yǎng)基的種類(zhngli)及用途第6頁(yè)/共34頁(yè)第七頁(yè),共34頁(yè)。知識(shí)拓展培養(yǎng)

3、基的配制原則(1)目的(md)要明確:配制時(shí)應(yīng)根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的(md)等確定配制的培養(yǎng)基種類。(2)營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào):注意各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。(3)pH要適宜:各種微生物適宜生長(zhǎng)的pH范圍不同,如細(xì)菌為6.57.5,放線菌為7.58.5,真菌為5.06.0,培養(yǎng)不同微生物所需pH不同。第7頁(yè)/共34頁(yè)第八頁(yè),共34頁(yè)。4無(wú)菌技術(shù)(1)消毒和滅菌(mi jn)的區(qū)別知識(shí)拓展酒精消毒時(shí),70%的酒精殺菌效果最好,原因是:濃度過(guò)高,使菌體表面(biomin)蛋白質(zhì)凝固成一層保護(hù)膜,乙醇分子不能滲入其中;濃度過(guò)低,殺菌力減弱。第8頁(yè)/共34頁(yè)第九頁(yè),共34頁(yè)。1培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實(shí)驗(yàn)操

4、作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌、消毒方法依次是()化學(xué)消毒灼燒滅菌干熱滅菌紫外線滅菌高壓蒸汽滅菌巴氏消毒法ABC D解析:培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌;培養(yǎng)皿能耐高溫,需用干熱滅菌;接種環(huán)可用灼燒滅菌達(dá)到迅速?gòu)氐椎臏缇Ч粚?shí)驗(yàn)操作者的雙手可用化學(xué)藥劑進(jìn)行消毒,如用酒精擦拭雙手;空氣可用紫外線消毒;牛奶為不破壞(phui)其營(yíng)養(yǎng)成分可采用巴氏消毒法。答案:A第9頁(yè)/共34頁(yè)第十頁(yè),共34頁(yè)。2某小組同學(xué)為了調(diào)查湖水中細(xì)菌的污染情況而進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落觀察與計(jì)數(shù)。請(qǐng)回答與此實(shí)驗(yàn)相關(guān)的問(wèn)題:(1)培養(yǎng)基中含有的蛋白胨、淀粉分別為細(xì)菌培養(yǎng)提供了_和_。除此之外,培養(yǎng)基

5、還必須含有的基本成分是_和_。(2)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌,應(yīng)該采用的方法是 _。(3)為了盡快觀察到細(xì)菌培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,應(yīng)將接種了湖水樣品的平板置于_中培養(yǎng),培養(yǎng)的溫度設(shè)定在37 。要使該實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果可靠,還應(yīng)該同時(shí)在另一平板上接種_作為對(duì)照進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。(4)培養(yǎng)20小時(shí)后,觀察到平板上有形態(tài)和顏色不同的菌落,這說(shuō)明湖水樣品中有_種細(xì)菌。一般說(shuō)來(lái),菌落總數(shù)(zngsh)越多,湖水遭受細(xì)菌污染的程度越_。第10頁(yè)/共34頁(yè)第十一頁(yè),共34頁(yè)。解析:本題主要考查了微生物的培養(yǎng)與分離知識(shí)。培養(yǎng)基中含有蛋白胨主要提供氮源,淀粉主要提供碳源;還需要水及無(wú)機(jī)鹽等;培養(yǎng)基進(jìn)行(jnxng)高壓蒸汽滅菌后,還要檢驗(yàn)

6、滅菌效果;用選擇培養(yǎng)基可以將耐鹽細(xì)菌分離出來(lái)。答案:(1)氮源(碳源不作要求)碳源無(wú)機(jī)鹽水(2)高壓蒸汽滅菌(3)恒溫培養(yǎng)箱無(wú)菌水(4)多大(5)鹽(或NaCl)選擇培養(yǎng)基(5)如果提高培養(yǎng)基中NaCl的濃度,可以用于篩選耐_細(xì)菌(xjn),這種培養(yǎng)基被稱為_(kāi)。第11頁(yè)/共34頁(yè)第十二頁(yè),共34頁(yè)。細(xì)菌(xjn)的分離與計(jì)數(shù)1土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)(1)分離的原理土壤中的細(xì)菌之所以能夠分解尿素,是因?yàn)樗鼈凅w內(nèi)能合成脲酶。這種物質(zhì)在把尿素分解成無(wú)機(jī)物的過(guò)程中起催化作用。實(shí)驗(yàn)室中微生物篩選的原理:人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等),同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。(

7、2)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法 顯微鏡直接計(jì)數(shù)法a原理:利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品(yngpn)中微生物的數(shù)量。b方法:用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。c缺點(diǎn):不能區(qū)分死菌與活菌。第12頁(yè)/共34頁(yè)第十三頁(yè),共34頁(yè)。間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)a原理:當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí),培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落,來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌,通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù),就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。b操作i設(shè)置重復(fù)組,增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。ii.為了保證結(jié)果準(zhǔn)確,一般選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。c計(jì)算公式:每克樣品中的菌株數(shù)M,其中(qzhng)C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落

8、數(shù),V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL),M代表稀釋倍數(shù)。(3)細(xì)菌分離與計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)流程土壤取樣樣品稀釋取樣涂布微生物培養(yǎng)觀察并記錄結(jié)果細(xì)菌計(jì)數(shù)第13頁(yè)/共34頁(yè)第十四頁(yè),共34頁(yè)。第14頁(yè)/共34頁(yè)第十五頁(yè),共34頁(yè)。(3)土壤中纖維素分解菌的篩選方案土壤取樣選擇培養(yǎng)梯度稀釋將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上挑選(tioxun)產(chǎn)生透明圈的菌落。選擇培養(yǎng)的目的:增加纖維素分解菌的濃度,確保能夠從樣品中分離到所需要的微生物。涉及到的微生物技術(shù)主要有:培養(yǎng)基的配制、無(wú)菌操作技術(shù)、稀釋涂布平板法、選擇培養(yǎng)基的作用、土壤取樣等。 第15頁(yè)/共34頁(yè)第十六頁(yè),共34頁(yè)。3分離纖維素分解菌的實(shí)

9、驗(yàn)過(guò)程中操作有誤的是()A經(jīng)選擇培養(yǎng)后將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上B富集培養(yǎng)這一步(y b)可省略,但培養(yǎng)纖維素分解菌少C經(jīng)稀釋培養(yǎng)后,用剛果紅染色D對(duì)照組可用同樣量的培養(yǎng)液涂布到不含纖維素的培養(yǎng)基上解析:經(jīng)選擇培養(yǎng)后,再經(jīng)稀釋,才能將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上;富集培養(yǎng)可省略;經(jīng)稀釋培養(yǎng)后,用剛果紅染色;設(shè)置對(duì)照能證明經(jīng)富集培養(yǎng)的確得到了欲分離的微生物。答案:A第16頁(yè)/共34頁(yè)第十七頁(yè),共34頁(yè)。4如圖為分離(fnl)并統(tǒng)計(jì)分解纖維素的微生物的實(shí)驗(yàn)流程,據(jù)此回答有關(guān)問(wèn)題:(1)要從富含纖維素的環(huán)境中分離纖維素分解菌,從高溫?zé)崛袑ふ夷蜔峋@說(shuō)明_。(2)接種微生物最常

10、用的是平板劃線(hu xin)法和稀釋涂布平板法,本實(shí)驗(yàn)宜采用_法,原因是_。(3)用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí),最好選擇菌落數(shù)在_間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。若統(tǒng)計(jì)出在一稀釋倍數(shù)為105的平板上的平均菌落數(shù)為30個(gè),所用稀釋液的體積為0.2 mL,則每克樣品中的菌落數(shù)為_(kāi)。答案:(1)根據(jù)目的菌株對(duì)生存環(huán)境的要求,到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找(2)釋稀涂布平板平板劃線(hu xin)法難以根據(jù)稀釋體積計(jì)算每克樣品中的細(xì)菌數(shù)(3)303001.5107個(gè)第17頁(yè)/共34頁(yè)第十八頁(yè),共34頁(yè)。 (2009年高考安徽理綜)下列是關(guān)于“檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)”實(shí)驗(yàn)操作的敘述,其中錯(cuò)誤的是()A用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培

11、養(yǎng)基,經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板B取104、105、106倍的土壤稀釋液和無(wú)菌水各0.1 mL,分別涂布于各組平板上C將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組平板倒置,37 恒溫培養(yǎng)2448小時(shí)D確定(qudng)對(duì)照組無(wú)菌后,選擇菌落數(shù)在300以上的實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)【解析】確定(qudng)對(duì)照組無(wú)菌后,選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù),D錯(cuò);A是培養(yǎng)基的滅菌方法,B設(shè)置了一系列對(duì)照實(shí)驗(yàn),C是細(xì)菌的培養(yǎng)方法,A、B、C三個(gè)選項(xiàng)均是正確的。【答案】D細(xì)菌(xjn)的分離與計(jì)數(shù)第18頁(yè)/共34頁(yè)第十九頁(yè),共34頁(yè)。分解(fnji)菌的篩選(2009年高考廣東卷)(1)商品化植酸酶主要來(lái)自微生物。在產(chǎn)酶菌株篩選過(guò)程中

12、,常在基本培養(yǎng)基中添加(tin ji)不溶于水的植酸鈣制成固體平板,植酸鈣被植酸酶分解后可在平板上產(chǎn)生_,可根據(jù)其大小選擇目的菌株,所得菌株需要進(jìn)一步測(cè)定植酸酶活性。活性測(cè)定可以植酸鈉作為底物,活性可用一定條件下單位時(shí)間的_表示。(2)利用上述所得菌株制備植酸酶的流程如下圖:中的主要成分為_(kāi);中包含植酸酶等多種蛋白質(zhì)。請(qǐng)寫(xiě)出一種純化得到植酸酶的方法及其依據(jù)。(3)為構(gòu)建基因工程菌,可用PCR等技術(shù)從上述菌株中克隆植酸酶基因。PCR反應(yīng)包括多次循環(huán)(xnhun),每次循環(huán)(xnhun)包括三步:_。反應(yīng)過(guò)程中打開(kāi)模板DNA雙鏈的方法是_。(4)除植酸酶外,微生物還能應(yīng)用在哪些酶的生產(chǎn)中?(至少寫(xiě)

13、兩種)第19頁(yè)/共34頁(yè)第二十頁(yè),共34頁(yè)。【解析】(1)在含有植酸鈣的固體平板上篩選分解菌,植酸鈣被分解會(huì)產(chǎn)生透明圈。酶的活性可用底物的消耗量或產(chǎn)物的生成量表示。(2)透析可以去除小分子雜質(zhì)。由于蛋白質(zhì)分子的大小、吸附(xf)性及電荷不同,可以使用凝膠色譜法或電泳法進(jìn)行純化。(3)PCR技術(shù)的每次循環(huán)包括變性、復(fù)性和延伸三步,其中變性是利用高溫可使DNA變性而打開(kāi)雙鏈。【答案】(1)透明圈植酸鈉的消耗量(減少量)或磷酸(肌醇)的生成量(產(chǎn)量)(2)小分子雜質(zhì)凝膠色譜法:根據(jù)蛋白質(zhì)之間的分子大小、吸附(xf)性質(zhì)等差異進(jìn)行純化(或電泳法:根據(jù)蛋白質(zhì)之間的電荷、分子大小等差異進(jìn)行純化)(3)變性

14、、復(fù)性和延伸(長(zhǎng))加熱(或高溫處理)(4)蛋白酶、脂肪酶、纖維素酶第20頁(yè)/共34頁(yè)第二十一頁(yè),共34頁(yè)。微生物的培養(yǎng)(piyng)與鑒定 (2009年高考寧夏理綜)(1)在大腸桿菌培養(yǎng)(piyng)過(guò)程中,除考慮營(yíng)養(yǎng)條件外,還要考慮_、_和滲透壓等條件。由于該細(xì)菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、變異類型容易選擇、_、_等優(yōu)點(diǎn),因此常作為遺傳學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)材料。(2)在微生物培養(yǎng)(piyng)操作過(guò)程中,為防止雜菌污染,需對(duì)培養(yǎng)(piyng)基和培養(yǎng)(piyng)器皿進(jìn)行_(消毒、滅菌);操作者的雙手需進(jìn)行清洗和_;靜止空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅,其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性,還能_。(3)若用稀釋涂布平

15、板法計(jì)數(shù)大腸桿菌活菌的個(gè)數(shù),要想使所得估計(jì)值更接近實(shí)際值,除應(yīng)嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外,還應(yīng)保證待測(cè)樣品稀釋的_。(4)通常,對(duì)獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步的_。第21頁(yè)/共34頁(yè)第二十二頁(yè),共34頁(yè)。(5)培養(yǎng)大腸桿菌時(shí),在接種前需要檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染(wrn)。對(duì)于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測(cè)方法是_。(6)若用大腸桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn),使用過(guò)的培養(yǎng)基及培養(yǎng)物必須經(jīng)過(guò)_處理后才能丟棄,以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散?!窘馕觥看竽c桿菌體積小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、變異類型容易選擇、易培養(yǎng)、生活周期短,常作為遺傳學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)材料。微生物培養(yǎng)操作過(guò)程中要保證在無(wú)菌條件中進(jìn)行?!敬鸢浮?1)溫度酸堿度易

16、培養(yǎng)生活周期短(2)滅菌消毒損傷DNA的結(jié)構(gòu)(3)比例合適(4)鑒定(或分類)(5)將未接種(jizhng)的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間,觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生(6)滅菌第22頁(yè)/共34頁(yè)第二十三頁(yè),共34頁(yè)。第23頁(yè)/共34頁(yè)第二十四頁(yè),共34頁(yè)。1下表是關(guān)于對(duì)四種生物能源、碳源、氮源、新陳代謝類型(lixng)的描述,其中正確的一組是()A.硝化細(xì)菌與乳酸菌 B乳酸菌與根瘤菌C根瘤菌與衣藻 D硝化細(xì)菌與衣藻解析:乳酸菌不能直接利用N2,且能量來(lái)源為糖類;根瘤菌進(jìn)行生命活動(dòng)所需要(xyo)的能量來(lái)自于糖類等有機(jī)物分解。答案:D第24頁(yè)/共34頁(yè)第二十五頁(yè),共34頁(yè)。2下列說(shuō)法正確

17、的是()A銨鹽、硝酸鹽可以作為自養(yǎng)微生物的氮源B凡是碳源都能提供能量C除水以外的無(wú)機(jī)(wj)物僅提供無(wú)機(jī)(wj)鹽D無(wú)機(jī)(wj)氮源不能提供能量解析: 本題考查了微生物生長(zhǎng)所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及其功能。銨鹽、硝酸鹽是最常用的無(wú)機(jī)(wj)氮源,可以被自養(yǎng)微生物利用;CO2是微生物的碳源,但不能提供能量;氨可為硝化細(xì)菌提供能量和氮源。答案:A第25頁(yè)/共34頁(yè)第二十六頁(yè),共34頁(yè)。3關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的敘述中,錯(cuò)誤的是()A操作順序?yàn)橛?jì)算、稱量、溶化、倒平板、滅菌B牛肉膏溶化并與稱量紙分離后,用玻棒取出稱量紙C待培養(yǎng)基冷卻至50 左右(zuyu)時(shí),進(jìn)行倒平板D待平板冷卻凝固約5 min1

18、0 min后,將平板倒過(guò)來(lái)放置解析:本題考查了牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的制備過(guò)程。其順序?yàn)椋河?jì)算稱量溶化滅菌倒平板,故A項(xiàng)錯(cuò)誤。答案:A第26頁(yè)/共34頁(yè)第二十七頁(yè),共34頁(yè)。4在做土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)時(shí),甲組實(shí)驗(yàn)用氮源只含尿素的培養(yǎng)基,乙組實(shí)驗(yàn)用氮源除尿素外還含硝酸鹽的培養(yǎng)基,其他成分都相同,在相同條件下操作,培養(yǎng)與觀察(gunch),則乙組實(shí)驗(yàn)屬于()A空白對(duì)照 B標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照C相互對(duì)照 D條件對(duì)照解析:上述實(shí)驗(yàn)中,甲組是實(shí)驗(yàn)組,乙組是對(duì)照組,給甲組某種處理,給乙組另一種條件的處理,則乙組應(yīng)該是條件對(duì)照。答案:D第27頁(yè)/共34頁(yè)第二十八頁(yè),共34頁(yè)。5根據(jù)你所學(xué)習(xí)的知識(shí),回答下

19、列問(wèn)題:(1)如果培養(yǎng)芽孢菌,配制固體(gt)培養(yǎng)基的基本步驟是:稱量溶化_加棉塞包扎。(2)如果檢驗(yàn)自來(lái)水中的大腸桿菌是否超標(biāo),需要在培養(yǎng)基中加入_;如果將農(nóng)田土壤表層中的圓褐固氮菌與其他細(xì)菌分離出來(lái),則需要在_的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。按照培養(yǎng)基的用途劃分,前者屬于_培養(yǎng)基,后者屬于_培養(yǎng)基。(3)在細(xì)菌的培養(yǎng)過(guò)程中,將培養(yǎng)基分裝到試管中的高度約為試管高度的X;加棉塞時(shí),棉塞在試管口內(nèi)的長(zhǎng)度是棉塞長(zhǎng)度的Y;將培養(yǎng)基擱置斜面時(shí)斜面長(zhǎng)度最多是試管長(zhǎng)度的Z。則X、Y、Z對(duì)應(yīng)的比值依次是_。第28頁(yè)/共34頁(yè)第二十九頁(yè),共34頁(yè)。(4)下列是木屑培養(yǎng)基各成分所占比例:木屑78%,米糠20%,石膏粉1%,蔗糖1%。此培養(yǎng)基加水后可用于平菇的培養(yǎng),用簡(jiǎn)易的方法對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時(shí),要重復(fù)23次,其主要目的是有利于徹底殺滅萌發(fā)的_。解析:微生物培養(yǎng)基的配制具有一定(ydng)的規(guī)范性,而且成分不一樣,用途也有一定(ydng)差別。對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時(shí),一定(ydng)要注意殺死芽孢。答案:(1)調(diào)節(jié)(培養(yǎng)基的)pH分裝(2)伊紅和美藍(lán)無(wú)氮鑒別選擇(3)1/52/31/3(4)芽孢第29頁(yè)/共34頁(yè)第三十頁(yè),共34頁(yè)。6(2011年北

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