《法醫(yī)物證學(xué)重點》word版參考模板

1、第一章 緒論法醫(yī)物證學(xué)：法醫(yī)物證學(xué)是應(yīng)用多種學(xué)科的理論知識和技術(shù)研究并解決涉及法律方面有關(guān)生物性檢材的檢驗與鑒定的一門學(xué)科。應(yīng)用的學(xué)科包括：醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、血型血清學(xué)、生物化學(xué)及分子生物學(xué)等。法醫(yī)物證學(xué)：是以法醫(yī)物證為研究對象，以提供科學(xué)證據(jù)為目的，研究應(yīng)用生命科學(xué)技術(shù)解決案件中與人體有關(guān)的生物檢材鑒定的一門學(xué)科。法醫(yī)物證學(xué)是法醫(yī)學(xué)的分支學(xué)科，其研究內(nèi)容屬于法醫(yī)學(xué)中的物證檢驗部分，是法醫(yī)學(xué)研究的主要內(nèi)容之一。法醫(yī)物證是一門應(yīng)用科學(xué)，研究的方法涉及多種學(xué)科包括：化學(xué)，物理學(xué)，電子計算機，形態(tài)學(xué)，免疫血清學(xué)，生物化學(xué)，分子生物學(xué)，遺傳學(xué)等方法。 法醫(yī)物證的特點：法醫(yī)物證的穩(wěn)定性受環(huán)境

2、條件的影響；法醫(yī)物證屬于“科學(xué)證據(jù)”。第二章 法醫(yī)物證分析的遺傳學(xué)基礎(chǔ)1、 何謂遺傳標(biāo)記？個體的單位遺傳性狀作為標(biāo)志用于法醫(yī)物證分析時，這種遺傳性狀就成為遺傳標(biāo)記GM。2、 何謂基因、基因型和表型？1) 基因型：是指個體一個或多個基因座上等位基因的組合，是生物體可見性狀的實際基因組成。2) 表型：是指生物體某特定基因所表現(xiàn)的性狀。表型由基因型決定。3、 Hardy-Weinberg平衡定律的前提條件和意義1) 前提條件：群體無限大、隨機婚配、沒有突變、沒有大規(guī)模的遷移和沒有選擇因素的影響。2) 結(jié)論：群體中的基因頻率和基因型頻率在逐代傳遞中保持不變。3) 意義：4) 反映基因頻率和基因型頻率的

3、關(guān)系（純合子基因型頻率=基因頻率的平方，雜合子=該兩基因頻率乘積的二倍）5) 群體樣本的檢驗4、 非父排除概率（P23）PE是指孩子的非親生父親的男子，能夠被某個遺傳標(biāo)記系統(tǒng)排除的概率。PE用于評估某一遺傳標(biāo)記系統(tǒng)在親權(quán)鑒定案件中的實用價值。5、 何謂個人識別概率？（P22）個人識別概率（DP）是指在群體中隨機抽取兩個體，兩者的遺傳標(biāo)記表型不相同的概率。DP是評價該遺產(chǎn)標(biāo)記系統(tǒng)識別無關(guān)個體效能大小的指標(biāo)，DP越高，效能越強。第三章 DNA多態(tài)性的分子基礎(chǔ)1、 何謂DNA多態(tài)性？（P37）1) 在基因組DNA中，由不同堿基結(jié)構(gòu)的等位基因所形成的多態(tài)性叫做DNA多態(tài)性。2) 按照DNA遺傳標(biāo)記的結(jié)

4、構(gòu)特征，DNA多態(tài)性可分為長度多態(tài)性和序列多態(tài)性。2、 何謂VNTR？（P37）小衛(wèi)星DNA中的可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列稱為VNTR。3、 何謂STR？微衛(wèi)星的可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列稱為短串聯(lián)重復(fù)序列，STR。第四章 DNA長度多態(tài)性1、 RFLP2、 Amp-FLR3、 DNA指紋圖譜的基本特征？1) 遺傳方式：孟德爾規(guī)律、所有片段獨立遺傳2) 個體的組織同一性：穩(wěn)定一致3) 群體遺傳學(xué)特征：4) 突變率：配子細(xì)胞形成時重排、重組與交換4、 DNA紋印圖譜的基本特征？1) 高多態(tài)性2) 遺傳規(guī)律：共顯性3) 個體組織同一性：一致4) 群體遺傳學(xué)特征：5) 高突變率：配子細(xì)胞形成時重排、重組、交換5

5、、 何謂擴增片段長度多態(tài)性分析？Amp-FLR：采用PCR技術(shù)擴增VNTR或STR基因座等位基因進(jìn)行DNA長度多態(tài)性分析的方法。6、 RFLP與Amp-FLP技術(shù)有何異同？（P74）7、 STR分型用于法醫(yī)物證鑒定的主要優(yōu)點？1) 高靈敏度：適用于微量降解檢材2) 高鑒別能力：節(jié)約檢材、試劑和提高效率3) 標(biāo)準(zhǔn)化分型：實現(xiàn)數(shù)字化結(jié)果，利于實驗室間數(shù)據(jù)交換，建立數(shù)據(jù)庫8、 何謂miniSTR？miniSTR分型有何法醫(yī)學(xué)應(yīng)用價值？1) miniSTR：通過重新設(shè)計引物，使其結(jié)合在更靠近核心重復(fù)區(qū)的側(cè)翼序列，從而降低擴增產(chǎn)物的大小，進(jìn)一步提高靈敏度和分型成功率，這種技術(shù)稱為短片段STR分型或min

6、iSTR分型。2) miniSTR法醫(yī)學(xué)應(yīng)用價值：Ø STR基因座的擴增片段較短，靈敏度更高，尤其適用于微量或降解生物檢材的DNA分型；Ø 等位基因片段長度范圍較窄，不易發(fā)生因小等位基因的優(yōu)勢擴增而造成的等位基因丟失現(xiàn)象；Ø 可對多個STR基因座進(jìn)行復(fù)合擴增，從而節(jié)約檢材、降低成本，提高單次檢測的信息量9、 何謂多基因座復(fù)合擴增？1) 在一個PCR體系中同時擴增多個靶基因座的方法叫做復(fù)合擴增。2) 復(fù)合擴增可提高單次檢測的信息量，提高個人識別率，也可降低成本和檢材的消耗。10、 Y-STR有何法醫(yī)學(xué)應(yīng)用特點？1) Y染色體為男性特有2) Y-STR呈父系遺傳特征3

7、) 單倍體遺傳：在減數(shù)分裂過程中，Y-特異性區(qū)不發(fā)生重組，所有Y-STR基因座均呈連鎖遺傳，等位基因頻率不能以相乘方法計算4) GD=PE5) 結(jié)果不具有唯一性，不能認(rèn)定11、 Amelogenin基因（名解）牙釉基因（AMG）：位于X染色體Xp22，編碼牙原基質(zhì)牙釉質(zhì)蛋白，故命名牙釉基因。在人Y染色體中心粒附近有一類牙釉基因（AMGL），與牙釉基因的堿基序列有90%同源性。用一對特異性引物可同時擴增AMG和AMGL序列片段，X特異性片段長度為977bp，Y為788bp。擴增后，男性可獲得兩條帶，女性只觀察到一條帶。但是其擴增產(chǎn)物較長，不適合腐敗血痕、過于陳舊血痕的性別鑒定。第五章 STR自動

8、分型1、 簡述STR自動分型技術(shù)的主要步驟1) DNA自動化提取2) PCR多色熒光標(biāo)記STR復(fù)合擴增3) PCR產(chǎn)物電泳前處理4) 自動毛細(xì)管電泳結(jié)合激光誘導(dǎo)的熒光檢測5) 自動數(shù)據(jù)采集并分型2、 何謂off-ladder1) 在STR分型圖譜中，常會遇到部分樣本的少量片段峰未被程序化數(shù)字命名，在分型圖譜中被標(biāo)識為off-ladder2) 漂移作用和新等位基因都可標(biāo)識為off-ladder3、 何謂LCNLCN：基因組含量小于100pg的樣本稱為低拷貝DNA（low copy number）。第六章 DNA序列多態(tài)性DNA多態(tài)性（DNA polymorphisms）：基因水平上的多樣性來自基

9、因的突變，當(dāng)基因突變以等位基因形式在群體中得以保留，并能夠從親代遺傳給子代，可形成個體間的遺傳差異。不同個體間的遺傳差異形式是不同的等位基因組成。等位基因之間的差異可以是點突變引起的序列不同，也可以是因為堿基的插入或缺失引起的片段長度不同，都能構(gòu)成具有個體特征的DNA遺傳標(biāo)記。DNA遺傳標(biāo)記可以出現(xiàn)在編碼區(qū)，也可以存在于非編碼區(qū)。在基因組DNA中，這種由不同堿基結(jié)構(gòu)的等位基因所形成的多態(tài)性叫做DNA多態(tài)性。DNA長度多態(tài)性（DNA length polymorphisms）：是指同一基因座上各等位基因之間的DNA片段長度差異構(gòu)成的多態(tài)性。DNA長度多態(tài)性靶序列主要是指可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列（VN

10、TR），VNTR既存在于小衛(wèi)星DNA中，也存在于微衛(wèi)星DNA中。由于命名習(xí)慣和為了便于區(qū)分，通常小衛(wèi)星DNA中的可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列稱為VNTR，而把微衛(wèi)星的可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列稱為短串聯(lián)重復(fù)序列（STR）。DNA序列多態(tài)性（sequence polymorphisms）：是指一個基因座上，因不同個體DNA序列有一個或多個堿基的差異而構(gòu)成的多態(tài)性?？梢岳斫鉃樵摶蜃纤械任换駾NA長度相同，但是它們之間的序列存在差異。在基因組DNA中，無論是編碼區(qū)或者非編碼區(qū)，單堿基替換是最基礎(chǔ)的突變形式。在人類基因組范圍內(nèi)，如果任何單堿基突變使特定核苷酸位置上出現(xiàn)兩種堿基，其中最少的一種在群體中的頻率不

11、少于1%，就形成單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphisms，SNPs）。限制性片段長度多態(tài)性（restriction fragment length polymorphism，RFLP）：RFLP分析是一種傳統(tǒng)的分子生物學(xué)檢測技術(shù)，廣泛應(yīng)用于突變分析、基因診斷、基因定位等各個方面。法醫(yī)物證鑒定應(yīng)用RFLP技術(shù)主要是對人類基因組中的VNTR基因座進(jìn)行分型，其技術(shù)核心是DNA分子雜交，決定RFLP分析圖譜個體特異性的因素是限制性核酸內(nèi)切酶的特異性和探針的特異性。檢測所用的探針多是由人類基因組DNA中篩選出的小衛(wèi)星序列，選擇特異性不同的探針，在不同的雜交條件下，可

12、以只檢出單個VNTR基因座，也可同時檢出多個VNTR基因座，前者稱為DNA紋印，后者稱之為DNA指紋，檢測所用的相應(yīng)探針分別被稱為單基因探針（single-locus probe）和多基因探針(multi-locus probe)。Southern印跡雜交：是進(jìn)行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經(jīng)限制性內(nèi)切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段轉(zhuǎn)移至尼龍膜或其他固相支持物上，經(jīng)干烤或者紫外線照射固定，再與相對應(yīng)結(jié)構(gòu)的標(biāo)記探針進(jìn)行雜交，用放射自顯影或酶反應(yīng)顯色，從而檢測特定DNA分子的含量。其基本原理是：具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條

13、件下，可按堿基互補的原則形成雙鏈，此雜交過程是高度特異的。由于核酸分子的高度特異性及檢測方法的靈敏性，綜合凝膠電泳和核酸內(nèi)切限制酶分析的結(jié)果，便可繪制出DNA分子的限制圖譜。Southern印跡雜交（Southern blot）是研究DNA圖譜的基本技術(shù)，在遺傳病診斷、DNA圖譜分析及PCR產(chǎn)物分析等方面有重要價值。Southern印跡雜交的基本方法是將DNA標(biāo)本用限制性內(nèi)切酶消化后，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分離各酶解片段，然后經(jīng)堿變性，Tris緩沖液中和和高鹽下通過毛吸作用將DNA從凝膠中轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素膜上、烘干固定后即可用于雜交。凝膠中DNA片段的相對位置在DNA片段轉(zhuǎn)移到濾膜的過程中繼續(xù)保持著

14、，附著在濾膜上的DNA與32P標(biāo)記的探針雜交，利用放射自顯影術(shù)確立探針互補的每一條DNA帶的位置，從而可以確定在眾多消化產(chǎn)物中含某一特定序列的DNA片段的位置和大小。（瓊脂糖凝膠電泳硝酸纖維素膜吸?。Ｏ拗菩詢?nèi)切酶常見的有那些？限制性內(nèi)切酶（restriction endonuclease）：一種在特殊核甘酸序列處水解雙鏈DNA的內(nèi)切酶。型限制性內(nèi)切酶既能催化宿主DNA的甲基化，又催化非甲基化的DNA的水解；而型限制性內(nèi)切酶只催化非甲基化的DNA的水解。合成引物的要點，PCR的反應(yīng)組成：標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系 10×擴增緩沖液10l4種dNTP混合物200l引物10100l模板DNA0

15、.12gTaq DNA聚合酶2.5 lMg2+1.5mmol/L加雙或三蒸水100 lPCR反應(yīng)五要素：參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即： 模板DNA，寡核苷酸引物，dNTP，反應(yīng)緩沖液，TaqDNA聚合酶。PCR基本原理：PCR技術(shù)是模擬生物體內(nèi)DNA的半保留復(fù)制，在體外合成DNA鏈的方法，在模板、DNA、引物、dNTP、Taq酶存在的條件下經(jīng)過：“高溫變性低溫退火中溫延伸”三步循環(huán)，獲得大量擴增片段。合成引物的要點：引物合成是通過測定引物的OD值，溶解引物，最終合成引物的一個完善的過程。目前引物合成基本采用固相亞磷酰胺三酯法。亞磷酰胺三酯法合成DNA片段，具有高效、快速的偶聯(lián)以及起始反應(yīng)物

16、比較穩(wěn)定的特點。亞磷酰胺三酯法是將DNA固定在固相載體上完成DNA鏈的合成的，合成的方向是由待合成引物的3端向5端合成的，相鄰的核苷酸通過35磷酸二酯鍵連接。第一步，是將預(yù)先連接在固相載體CPG上的活性基團被保護的核苷酸與三氯乙酸反應(yīng)，脫去其5-羥基的保護基團DMT，獲得游離的5-羥基。第二步，合成DNA的原料，亞磷酰胺保護核苷酸單體，與活化劑四氮唑混合，得到核苷亞磷酸活化中間體，它的3端被活化，5-羥基仍然被DMT保護，與溶液中游離的5-羥基發(fā)生縮合反應(yīng)。第三步，帶帽(capping)反應(yīng)，縮合反應(yīng)中可能有極少數(shù)5-羥基沒有參加反應(yīng)(少于2%)，用乙酸酐和1-甲基咪唑終止其后繼續(xù)發(fā)生反應(yīng)，這

17、種短片段可以在純化時分離掉。第四步，在氧化劑碘的作用下，亞磷酰形式轉(zhuǎn)變?yōu)楦€(wěn)定的磷酸三酯。經(jīng)過以上四個步驟，一個脫氧核苷酸被連接到固相載體的核苷酸上。再以三氯乙酸脫去它的5-羥基上的保護基團DMT，重復(fù)以上步驟，直到所有要求合成的堿基被接上去。常染色體STR與性染色體STR有什么不同？常染色體STR：短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)是廣泛存在于人類基因組中的一類具有長度多態(tài)性的DNA序列。它由26 個堿基對構(gòu)成核心序列,呈串聯(lián)重復(fù)排列,其長度多態(tài)性主要由核心序列拷貝數(shù)目的變化而產(chǎn)生。一般認(rèn)為,人類基因組平均每610kb就有1個STR基因座,為法醫(yī)個人識別和親子鑒定提供了高信息基因座的豐富來源。與限制性

18、片段長度多態(tài)性產(chǎn)生的DNA 指紋相比,用聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(PCR)擴增STR 基因座產(chǎn)生的DNA紋印具有更高的靈敏度。STR擴增片段較短(100300bp),對于常見含部分降解 DNA的陳舊斑痕,PCR擴增STR比DNA指紋分析更容易成功。性染色體STR：人類Y染色體屬于近端著絲粒染色體，由長臂Yq和微小的短臂Yp組成，DNA長度約60Mb。Y-DNA中大致有五類多態(tài)性遺傳標(biāo)記：衛(wèi)星DNA、小衛(wèi)星DNA、微衛(wèi)星DNA、插入或缺失及SNP。Y染色體STR基因座（Y-STR）是其中一種重要的遺傳標(biāo)記。與常染色體STR基因座相比，大多數(shù)Y-STR基因座具有復(fù)雜的串聯(lián)重復(fù)結(jié)構(gòu)：一個基因座內(nèi)常含有兩種以

19、上不同的重復(fù)單位，恒定重復(fù)序列和可變重復(fù)序列同時存在。與常染色體STR基因座比較，Y-STR分型的法醫(yī)學(xué)應(yīng)用具有以下特點：Y染色體為男性所特有，Y-STR呈父系遺傳特征，只能有父親傳遞給兒子，在減數(shù)分裂過程中，Y-特異性區(qū)不發(fā)生重組，評估Y-STR鑒別能力的指標(biāo)是遺傳差異度，和mtDNA一樣，Y-STR分型結(jié)果不具有唯一性，其法醫(yī)學(xué)應(yīng)用價值在于排除，而不能認(rèn)定。X-STR基因座具有伴性遺傳的特征，X-STR的遺傳特征既不同于常染色體，也不同于Y染色體，表現(xiàn)為性連鎖特征。進(jìn)行分型檢測時，男性個體X-STR顯現(xiàn)一條片段，女性雜合子則顯示兩條等位基因片段。低拷貝DNA（low copy number

20、，LCN）：是指基因組含量小于100pg的樣本。PCR循環(huán)測序的基本原理：PCR技術(shù)能夠快速、特異性地擴增靶DNA，應(yīng)用PCR技術(shù)測定DNA序列分為兩個步驟：先利用PCR擴增靶序列片段，制備測序模板，然后再利用PCR直接測定序列。PCR測序采用了熱循環(huán)高效合成DNA的特性并結(jié)合雙脫氧核苷酸終止法，使引物鏈終止的延伸產(chǎn)物數(shù)量在熱循環(huán)過程中得到增加，因此稱為循環(huán)測序。每個測序循環(huán)包括：PCR擴增制備的模板DNA變性成單鏈形式；標(biāo)記引物與其中的一條鏈上的互補序列退火；退火后的引物在耐熱DNA聚合酶催化下發(fā)生鏈延伸終止反應(yīng)。本次循環(huán)產(chǎn)生的模板鏈與延伸終止鏈形成的雙鏈的產(chǎn)物，在下一輪測序循環(huán)中，再次被變

21、性，釋放出模板鏈，作為又一輪引發(fā)反應(yīng)的模板，同時積累下一輪循環(huán)產(chǎn)生的鏈終止產(chǎn)物。上述循環(huán)步驟重復(fù)2040次，使鏈終止產(chǎn)物以線性方式獲得擴增。DNA自動測序技術(shù)：DNA自動測序技術(shù)是以4種熒光染料基團分別作為4種ddNTP終止鏈的標(biāo)記物，于20世紀(jì)80年代末期建立的一種高效、快速、自動化的序列測定技術(shù)。4種熒光染料分別作為測序反應(yīng)中4種ddNTP終止鏈的標(biāo)記物，即4種被雙脫氧核苷酸終止的DNA片段分別帶上4種不同的顏色。這些DNA片段的混合物同時加在一個樣品槽中電泳展開，相互間僅差1個堿基的DNA片段形成一條具有4種顏色的階梯分布圖像。階梯中的每- DNA片段由標(biāo)記在該片段上的特征性熒光基團發(fā)出

22、的熒光所指示。熒光染料基團作為標(biāo)記物的基本要求是經(jīng)過激光誘發(fā)的吸收光譜波長在可見光波長范圍內(nèi)，不影響延伸反應(yīng)，不影響標(biāo)記后DNA片段的電泳性質(zhì)。其次要求4種熒光的吸收和激發(fā)光波長要有足夠的差異，便于檢測。熒光染料的摻入的方式有兩種：一種是將熒光染料預(yù)先標(biāo)記在測序反應(yīng)通用引物的5端。4種熒光標(biāo)記形成4種標(biāo)記引物，測序反應(yīng)分4個反應(yīng)管進(jìn)行，特定的熒光染料與相應(yīng)的ddNTP是對應(yīng)關(guān)系，例如熒光示蹤染料JOE標(biāo)記的通用引物總是與ddATP加在同一個反應(yīng)管內(nèi)，因此由ddATP終止的所有延伸鏈都帶有JOE。這種方式被稱為Dye-Primers。另一種是將熒光染料基團連在ddNTP上，4種熒光染料分別與4種

23、ddNTP底物連接，反應(yīng)產(chǎn)生的4組DNA片段分別由特定ddNTP所終止，并且標(biāo)記有4種不同的熒光發(fā)色基團，A、C、G和T分別攜帶有綠、紅、藍(lán)、黃4種熒光。這種方式被稱為Dye-Terminators。兩種方式各有特點，不過前者要求A，G，C，T分4個反應(yīng)進(jìn)行，而后者的4組反應(yīng)可以在同一管中完成。上述兩種方法都能確定4種熒光與4種ddNTP所終止的DNA片段之間的對應(yīng)關(guān)系，這是后來從電泳中檢測標(biāo)記物信號以及最終讀序的基礎(chǔ)。自動測序儀器無論是變性PAG平板凝膠電泳還是毛細(xì)管電泳，都配置有激光束激發(fā)系統(tǒng)和熒光信號收集檢測系統(tǒng)。當(dāng)DNA片段電泳通過檢測窗口時，在激光束的激發(fā)下，片段的電泳時間和被激發(fā)熒

24、光的波長、強度等信號都被記錄，由計算機自動作數(shù)據(jù)處理，最后在屏幕上顯示每一樣品的各終止片段電泳分離的模擬圖像。不同顏色的峰標(biāo)示各自標(biāo)記的堿基及其排列順序(如圖所示)：MVP（minisatellite variant repeat）序列：稱為具有變異核心序列的小衛(wèi)星DNA，是一類既有長度多態(tài)性又有序列差異的DNA重復(fù)序列。第七章 線粒體DNA多態(tài)性1、 人類核DNA與mtDNA的比較（P179）2、 mtDNA的特點？1) 唯一的核外DNA來源2) 拷貝數(shù)多和異質(zhì)性（當(dāng)兩種不同的mtDNA序列存在同一個細(xì)胞、組織或者個體時稱之為異質(zhì)性）3) 母系遺傳4) 抗外切酶的環(huán)狀結(jié)構(gòu)有助于分子穩(wěn)定性，對

25、高度降解檢材奏效5) 瓶頸效應(yīng)和復(fù)制分離6) 閾值效應(yīng)3、 mtDNA分型的優(yōu)點？1) 高變區(qū)作為遺傳標(biāo)記用于法醫(yī)鑒定，高變區(qū)又稱D-環(huán)區(qū)2) 當(dāng)細(xì)胞核DNA量不足而無法進(jìn)行分型時，線粒體DNA技術(shù)分析是唯一可以利用的技術(shù)3) 生物檢材中的毛發(fā)、骨干、牙齒和其他嚴(yán)重降解的檢材也依賴線粒體分析4) 簡單易操作、檢材靈敏度高5) 所需模板DNA減少6) 減少DNA二級結(jié)構(gòu)干擾4、 mtDNA分型的主要方法？1) mtDNA提?。ǔ樘幔?) PCR3) 純化PCR產(chǎn)物4) 循環(huán)測序反應(yīng)原理ddNTPcore，only 1 primer 5、 mtDNA分型的特殊問題？1) mtDNA屬于母系遺傳，凡

26、屬同一母系的后代，mtDNA序列都是相同的。序列一致只能說明不排除同一個體的可能；2) mtDNA能夠提供的信息量有限（單倍型）排除同一性（真正價值）3) mtDNA的異質(zhì)性違背同一個體mtDNA序列必然是一致的前提條件，給個體識別鑒定增加了變數(shù)；（如果多份檢材異質(zhì)性出現(xiàn)在同一位置的同一堿基貶義，反而對認(rèn)定同一個體檢材有利）6、 mtDNA分型的法醫(yī)學(xué)應(yīng)用局限性1) 分型技術(shù)要求高，耗時耗力耗錢2) 識別力相對較低：非個體唯一，共有單倍體（母系遺傳）3) 異質(zhì)性4) 數(shù)據(jù)庫規(guī)模：易高估其識別能力5) 無法進(jìn)行混合斑的檢測第八章 紅細(xì)胞血型1、 何謂ABO血型的正反定型？1) 正定性試驗：根據(jù)R

27、BC與特異性抗體的反應(yīng)來分型，即用抗A抗體判定A抗原，用抗B抗體判定B抗原。2) 反定型試驗：依據(jù)血清中的凝集素與標(biāo)準(zhǔn)型RBC膜上的凝集原反應(yīng)的性質(zhì)，即用標(biāo)準(zhǔn)的A型RBC判定抗A抗體，用標(biāo)準(zhǔn)的B型RBC判定抗B抗體，同時也應(yīng)用抗H抗體判定H抗原。2、 試述ABO血型的DNA分型方法1) PCR-SSP序列特異性引物PCR技術(shù)：特異性強、重復(fù)性好 2）PCR-RFLP3、 中和試驗的基本原理？1) 不完全Ab2) 遮斷作用3) 判斷不完全Ab是否與Ag凝集4、 Oh型血清學(xué)特點？1) 在RBC上及唾液中均無ABH抗原，即不被抗A、抗B及抗H所凝集2) 血清中有抗A、抗B及抗H凝集素，可分別凝集A

28、、B、O型RBC第九章 白細(xì)胞血型1、 HLA抗原的分布1) HLA-I類抗原：分布廣發(fā)，幾乎存在于所有的有核細(xì)胞表面，以淋巴細(xì)胞上的密度最高。2) 成熟RBC上沒有HLA-A、B、和DR抗原，幼稚RBC卻有。3) HLA-II類抗原：密度最高者為DC、單核細(xì)胞，一些吞噬細(xì)胞亞群及B細(xì)胞；4) II類抗原作為一種分化抗原在不同細(xì)胞上表達(dá)，大多數(shù)骨髓分化細(xì)胞具有HLA-II類抗原。2、 HLA命名原則1) 以大寫字母A、D、C.表示HLA遺傳區(qū)域中的座位2) HLA抗原特異性用數(shù)字表示3) 為防止與補體組分命名相混淆，HLA-C抗原特異性以Cw為字首命名4) HLA基因命名一般以4位數(shù)字表示，其

29、中前2位數(shù)字表示對應(yīng)最相近的HLA抗原特異性，后2位數(shù)字則用于表示亞型的等位基因，如A*01015) 如果出現(xiàn)第五位數(shù)字，則代表“沉默取代”，即該基因雖發(fā)生了個別堿基的替換，但新密碼子與原密碼子屬簡并密碼，不影響所編碼的氨基酸序列6) 第6、7位數(shù)字代表相應(yīng)的啟動子序列的多態(tài)性7) 末尾加英文字母N表示無效基因或不表達(dá)基因8) 在不能區(qū)分等位基因時，可允許最前面的2位或4位數(shù)字表示該HLA的特異性3、 HLA遺傳特征1) 共顯性遺傳：每個HLA基因座表達(dá)一對抗原，人類HLA每個基因座上有眾多等位基因。故如果血清學(xué)方法分型時，個體只檢測出了一個抗原則有三種可能：該抗原的純合子、HLA血清板不完全

30、、存在一種至今尚未發(fā)現(xiàn)的抗原。2) 單倍型遺傳：單倍體是指一條染色體上HLA各基因座的基因緊密連鎖組成的基因遺傳單位。3) 連鎖不平衡：HLA在實際群體調(diào)查發(fā)現(xiàn)，各基因座的基因并非完全隨機組成單倍型，有些單倍型觀察頻率高于期望頻率或低于期望頻率，這種現(xiàn)象稱為連鎖不平衡。處于連鎖部平衡狀態(tài)說明HLA不同基因座的基因之間存在關(guān)聯(lián)，具有一同遺傳的趨向。4) HLA高多態(tài)性4、 微量淋巴細(xì)胞毒性試驗原理（血清學(xué)分型）1) 微量淋巴細(xì)胞毒性試驗或稱補體依賴的細(xì)胞毒性試驗，其分型原理為2) Ag-Ab-C：淋巴細(xì)胞膜上的HLA抗原與已知HLA血清中相應(yīng)抗體結(jié)合后，形成抗原抗體復(fù)合物，再結(jié)合補體。3) C激

31、活、破壞Lc：被激活的補體系統(tǒng)產(chǎn)生細(xì)胞毒性，攻擊淋巴細(xì)胞，淋巴細(xì)胞膜破壞。4) 死細(xì)胞著色：經(jīng)過染色，染料進(jìn)入破損細(xì)胞內(nèi)著色，為陽性結(jié)果。5) 計數(shù)：在倒置相差顯微鏡下觀察，計數(shù)著色細(xì)胞所占細(xì)胞數(shù)目的百分比。5、 HLA抗血清與交叉反應(yīng)成功的關(guān)鍵是HLA抗血清的質(zhì)量根據(jù)與抗原決定鏃的反應(yīng)，可把HLA抗體分為2組：1) 抗體僅與一種HLA基因產(chǎn)物反應(yīng)2) 抗體能與不止一種HLA基因產(chǎn)物結(jié)合6、 斑點雜交（PCR-SSO分型方法）將PCR擴增片段制成斑點，用等位基因特異性寡核苷酸探針（ASO）雜交，通過探針放射自顯影結(jié)果進(jìn)行HLA分型。反向斑點雜交（RDB）：把探針預(yù)先固定在膜上，標(biāo)記PCR引物。

32、7、 比較HLA血清學(xué)分型和DNA分型方法的可靠性HLA個體遺傳差異的本質(zhì)不是在于血清學(xué)方法所檢測的抗原，而是在編碼基因產(chǎn)物的DNA分子上。DNA分型優(yōu)于血清學(xué)方法在于：1) 試劑由化學(xué)合成，便于標(biāo)準(zhǔn)化和實驗室間相互比較結(jié)果2) 對檢材要求不高（血清學(xué)方法因需要活細(xì)胞而難以用于斑痕HLA分型）3) 血清學(xué)與DNA分型不完全相同的分型誤差得以解決血清學(xué)方法發(fā)生的錯誤主要集中在：1) 交叉反應(yīng)抗原2) 能否正確指定屬于A9和A19的亞型，這些抗原多在交叉組內(nèi)或是寬特異性抗原的裂解產(chǎn)物3) 未能檢出WHO命名的全部基因4) 純合子細(xì)胞中存在假陽性反應(yīng)5) HLA-C大量“空白”基因，沒有相應(yīng)的抗血清

33、檢測它們的產(chǎn)物（DNA分型技術(shù)促進(jìn)和改善了對HLA多態(tài)性的分辨率）8、 HLA在法醫(yī)學(xué)上的意義1) 高度多態(tài)性2) 出生時已完全發(fā)育，終身不變For 同一認(rèn)定、個人識別第十章 血清型1、 等電聚焦技術(shù)for 亞型2、 Hp分型原理、方法及法醫(yī)學(xué)應(yīng)用評價Ø Hp：結(jié)合珠蛋白，血清中，能與Hb結(jié)合使Hb過氧化物酶樣活性顯著的糖蛋白Ø 分型：HP1-1、Hp2-1及Hp2-2Ø 遺傳變異，Hp0（無結(jié)合珠蛋白血癥）:不能用于流產(chǎn)胚胎或4mon的新生兒的親子鑒定。Ø 原因： 1）溶血性貧血，特發(fā)性貧血，白血病，尿毒癥等，患者的血漿Hp含量明顯下降； 2）嚴(yán)重肝臟

34、疾病如急性肝炎、肝硬化，Hp合成障礙； 3）胎兒及部分新生兒（4個月后大部分能檢出）； 4）少數(shù)正常個體（注意假陰性）。Ø 分型原理：1) 型別分離：PAG圓盤電泳：利用PAG的分子篩作用和電場作用，在柱狀凝膠中分離不同型別的Hp蛋白。Hp-Hb，Hb過氧化物酶樣活性使聯(lián)苯胺氧化為聯(lián)苯胺藍(lán)顯色；（just for新鮮血清中Hp型別）2) Hp亞型等電聚焦電泳分型3) DNA分型：利用基因特異性探針進(jìn)行雜交分型、PCR擴增3、 Gc分型原理、方法及法醫(yī)學(xué)應(yīng)用評價Gc：維生素D結(jié)合蛋白DPB，也成型特異性成分，電泳屬a2球蛋白，主要生物學(xué)功能是結(jié)合和轉(zhuǎn)運維生素D分型原理：1) 免疫電泳2

35、) PAG圓盤電泳3) 等電聚焦技術(shù)4) DNA分型Gc法醫(yī)學(xué)應(yīng)用評價1) 個人識別率為0.7992) 非父排除率為34.8%3) 室溫保存4個月的血痕可檢出Gc型 4) 4條件下保存6個月的尿液可檢出Gc型5) 在血痕檢測中，優(yōu)于Hp4、 試述免疫球蛋白同種異型分型原理、方法及法醫(yī)學(xué)應(yīng)用評價同種異型：是指免疫球蛋白上具有表達(dá)個體差異的抗原決定簇，由編碼免疫球蛋白多肽鏈基因的等位基因所表達(dá)產(chǎn)生，表現(xiàn)為同一種屬不同個體的免疫球蛋白抗原性不同，具有遺傳多態(tài)性。人類免疫球蛋白同種異型的命名是根據(jù)抗原決定簇位于重鏈或是輕鏈。分型方法：1) 血凝抑制試驗2) 酶聯(lián)免疫試驗3) 膠體金免疫層析技術(shù)4) P

36、CR擴增法醫(yī)學(xué)應(yīng)用評價：1) Gm及Km系統(tǒng)DP及PE均高于已知的RBC血型、RBC酶型及其他血清型2) Gm及Km抗原在常溫下或堿性環(huán)境中頗為穩(wěn)定，溶血對抗原性無大影響5、 等位基因排斥現(xiàn)象：免疫球蛋白同種異型的遺傳，在重鏈或輕鏈的同一位置上氨基酸不相同的同種異型是由常染色體共顯性基因遺傳的。但基因的表達(dá)具有等位基因排斥現(xiàn)象。雖然雜合子的兩個等位基因同時表達(dá)，但任何一個免疫球蛋白分子只有一個同種異型。因為一個B細(xì)胞只能表達(dá)一種等位基因，稱為等位基因排斥現(xiàn)象。6、 Gm系統(tǒng)：免疫球蛋白同種異型兩個相互獨立的連鎖群基因的其中重鏈標(biāo)記，決定IgG同種異型。第十一章 酶型1、 同工酶的分型方法1)

37、同工酶的多態(tài)性采用凝膠電泳方法進(jìn)行分型Ø 區(qū)帶電泳：利用酶蛋白分子的大小和所攜帶電荷數(shù)量（酶蛋白的電荷密度的差異）RfØ 等電聚焦技術(shù)：根據(jù)酶蛋白分子的等電點不同，在pH梯度介質(zhì)中，酶蛋白分子聚焦在相應(yīng)的等電點pH位置上，形成狹窄而清晰的區(qū)帶2) 凝膠介質(zhì)上酶區(qū)帶的顯現(xiàn)及鑒定Ø 直接底物顯色法：常用于測定水解酶，無色底物被酶催化反應(yīng)轉(zhuǎn)變成有色產(chǎn)物Ø 熒光染色法：酶催化下，非熒光底物生成高度熒光的產(chǎn)物或使熒光底物轉(zhuǎn)化成非熒光產(chǎn)物（負(fù)熒光染色）Ø 電子轉(zhuǎn)移染料染色：酶催化下，同時NAD+或NADP+還原成NADH或NADPH，同時提供電子。染料還原

38、成暗藍(lán)紫色的不溶性甲月替。2、 PGM1分型原理、方法及法醫(yī)學(xué)應(yīng)用評價PGM：磷酸葡萄糖變位酶（Mg2+（+），Zn2+（-）PGM1同工酶活性很高，廣泛存在于人體和動物體內(nèi)各種組織中，esp心、肝。分型：Ø 淀粉凝膠電泳或瓊脂糖凝膠電泳，pH7.4的緩沖系統(tǒng)：從（-）（+），譜帶順序為a、b、c、d（PGM1基因產(chǎn)物，具有個體差異）、e、f、g（PGM2基因座產(chǎn)物，多態(tài)性較低）。PGM1-1=ac，PGM12-1=abcd，PGM1=ac，PGM2=bdØ 亞型使用PAG等電聚焦技術(shù)Ø DNA-RFLP分型：在PGM1的exon4和exon8中多態(tài)性堿基均涉及限

39、制性內(nèi)切酶識別序列的改變檢出時限：Ø 室溫保存的血痕樣品4-6w內(nèi)可以準(zhǔn)確分型Ø 條件較好、保存得當(dāng)：3-4monØ 低溫保存：更長時間Ø 陳舊血痕：可能在d帶區(qū)域出現(xiàn)一條擴散的譜帶，干擾正常判型3、 EsD分型原理、方法及法醫(yī)學(xué)應(yīng)用評價EsD：酯酶D，存在于RBC和組織中的水解酶EsD表型：3種表型，EsD1-1=12，EsD2-2=23，EsD2-1=123（其中1帶活性最高）分型方法：l 淀粉凝膠電泳或瓊脂糖凝膠電泳法：分辨率較好、方法簡便、較常用Ø 醋酸纖維素膜電泳法Ø PAG等電聚焦法檢出時限：室溫3-4mon，低溫0.5y

40、r；組織檢材EsD分型的檢出時限較血痕短。4、 EAP分型原理、方法及法醫(yī)學(xué)應(yīng)用評價1） EAP：紅細(xì)胞酸性磷酸酶，酶活性以前列腺最好，RBC次之。2） 分型：Ø 淀粉凝膠電泳或瓊脂糖凝膠電泳Ø 醋酸纖維素膜電泳Ø PAG等電聚焦電泳3) 檢出時限：室溫9w4) 早孕絨毛組織EAP表型能代表胎兒表型，可用于妊娠早期的親自鑒定5、 作為個人識別和親自鑒定的同工酶的條件：1) 酶型多態(tài)性程度高，鑒別能力及PE高2) 酶的催化活性易于測定3) 酶活性高而穩(wěn)定，不易受干燥和其他理化因素影響4) 電泳檢測操作簡便，結(jié)果重復(fù)性好5) 除血液外，在其他人體組織及細(xì)胞也可檢出相同

41、的型別第十二章 親子鑒定1、 何謂PEPE：非父排除概率，是指不是小孩生父的男子（簡稱非父）能被遺傳標(biāo)記排除的概率。是衡量遺傳標(biāo)記系統(tǒng)在親子鑒定中實用價值大小的指標(biāo)。不同遺傳標(biāo)記有不同PE值。2、 試述父權(quán)指數(shù)與父權(quán)相對機會1) 父權(quán)指數(shù)：是親子關(guān)系鑒定中判斷遺傳證據(jù)強度的指標(biāo)，它是判斷親子關(guān)系所需要的兩個條件概率的似然比，即具有AF遺傳表型的男子是孩子生物學(xué)父的概率（X）與隨機男子是孩子生物學(xué)父親的概率（Y）的比值，PI=X/Y。2) 父權(quán)相對機會：是兩個條件概率的比值，它的一個條件概率可以按Bayes定理換算成為另外一個條件概率，從而引出另一個參數(shù)，稱之為父權(quán)相對機會（RCP）或父權(quán)概率（

42、W=PI/（PI+1），3、 何謂排除父權(quán)的標(biāo)準(zhǔn)1) 否定父權(quán)不僅需要考慮遺傳標(biāo)記在兩代人之間是否符合遺傳規(guī)律2) 也要考慮遺傳標(biāo)記在親子鑒定中的系統(tǒng)效能（DP）Ø 遺傳標(biāo)記數(shù)，CPE，鑒定能力；由于是的遺傳標(biāo)記，遇到遺傳變異的可能性；Ø P285為了避免潛在遺傳變異的影響，排除父權(quán)至少應(yīng)根據(jù)兩個以上遺傳標(biāo)記。4、 何謂認(rèn)定父權(quán)的標(biāo)準(zhǔn)1) 父權(quán)指數(shù)：2) 父權(quán)相對機會：3) 實驗用遺傳標(biāo)記累計排除概率大于等于0.9999.4) CPI104第十三章 法醫(yī)物證檢材的提取、包裝和送檢1、 怎么提取、包裝和保存血痕(一) 提?。狠^小整件、較大刮拭；少量轉(zhuǎn)移、注意干燥；泥土避震、兇

43、器整取。禁止裸觸、標(biāo)記錄好。當(dāng)血痕附著在1) 較小的物品或易于移動、包裝、運輸、送檢的物品上整體采取2) 可剪切或易于拆卸的大件物品上血痕部位+周邊無血痕部位的一部分/拆卸有血痕部件3) 堅硬、固定、沉重等不易攜帶搬運的大件物品上且表面光滑、血痕成痂手術(shù)刀片刮取4) 血痕稀薄紗布+蒸餾水折角，于血痕處反復(fù)擦拭轉(zhuǎn)移到紗線上，晾干5) 表面松軟的血痕+血痕周圍的相同附著物表面基質(zhì)（作為基質(zhì)對照），eg泥土（注意避震）6) 各種紡織物品小件的整件提取、不便整件提取的剪下血痕&血痕附近空白織物+記錄器所在部位7) 較大的木質(zhì)類載體切削薄片狀部分/鋸掉端、角8) 兇器：整體，but較大的話轉(zhuǎn)移血

44、痕(二) 包裝：獨立、紙袋（結(jié)實、牢固、潔凈）包裝、標(biāo)注案件編號+提取地點&時間+提取方法+樣品名稱+數(shù)量+保存方法+采集人 (三) 保存：陰涼干燥或冰箱，2、 檢材提取的三大原則和八大注意(一) 三大原則：不損失、不污染、不破壞(二) 八大注意：1) 翻動物件或是提取物證前，要先拍照、錄像、繪圖、記錄和測量，以顯示物證原始狀態(tài)和位置2) 必須戴手套持潔凈器具提取，禁止用手直接觸摸檢材3) 提取的檢材寧多勿少，盡量保持其原狀不受損傷4) 根據(jù)檢材的種類采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄌ崛?) 不同部位的檢材應(yīng)分別提取、分別包裝，并貼有唯一獨特標(biāo)記6) 根據(jù)案件的情況，應(yīng)盡量采集相關(guān)的對照樣本7) 提取的

45、檢材必須詳細(xì)登記8) 嚴(yán)格遵守有關(guān)法律法規(guī)的規(guī)定第十四章 血痕檢驗1、 聯(lián)苯胺實驗1) 血痕預(yù)試驗，靈敏度高，操作簡便快速，特異性不好2) 意義在于陰性結(jié)果可以否定血痕3) 原理：利用血痕中的Hb或正鐵血紅素具有的過氧化物酶活性，使過氧化氫釋放出新生態(tài)氧，將無色聯(lián)苯胺氧化為聯(lián)苯胺藍(lán)。4) 取材注意：刮取微量，節(jié)約檢材2、 血色原結(jié)晶實驗（高山結(jié)晶試驗）1) 確證試驗，特異性好，靈敏度不高2) 意義在于陽性結(jié)果可確證檢材為血痕3) 原理：Hb在堿性溶液中分解為正鐵血紅素和變性珠蛋白。在還原劑作用下，正鐵血紅素還原為血紅素，同變性珠蛋白和其他含氮化合物（如吡啶、氨基酸等）結(jié)合形成血色原結(jié)晶。3、

46、吸收-解離實驗1) 血痕的血型測定2) 要求Ab效價高一點好3) 原理：Ø 可逆的結(jié)合反應(yīng)血痕中的A、B、H抗原能與相應(yīng)的抗-A、抗-B、抗-H抗體發(fā)生特異性的結(jié)合反應(yīng)；Ø 加熱解離56加熱后，血痕上抗原結(jié)合的抗體可以解離下來；Ø 指示RBC檢測解離液中Ab用已知A、B和O指示紅細(xì)胞檢測解離液中抗體。Ø 結(jié)果判定凝集（+），不凝集（-）4、 血痕檢驗一般遵循的基本程序是什么？1) 肉眼檢查2) 預(yù)試驗3) 確證試驗4) 種屬鑒定5) 遺傳標(biāo)記測定6) 其他試驗等：出血部位（混有組織細(xì)胞）、出血量（重量、分光光度）、出血時間第十五章 精液斑檢驗1、 如何進(jìn)

47、行精液斑的個體識別1) ABO血型測定：中和試驗（分泌型）、酶標(biāo)抗體免疫測定法（非分泌型）、DNA分型（PCR、PCR-RFLP）2) DNA分析：DNA提?。ㄐ枰尤隓TT）2、 試述精液斑與血痕ABO血型分型方法的區(qū)別1) 精液斑：Ø 中和試驗（分泌型）Ø 酶標(biāo)抗體免疫測定法（非分泌型）2) 血痕：Ø 吸收試驗（吸收-抑制試驗）Ø 解離試驗（吸收-解離試驗）3、 試述精液斑與血痕DNA提取方法的異同1) 異：Ø 精液斑：必須要切斷二硫鍵以消化蛋白（膜）DTT（二硫蘇糖醇）Ø 血痕：有機溶劑or Chelex-1002) 同：PK、

48、SDS4、 試述Y-STR分型技術(shù)在精液斑個人識別中的優(yōu)缺點1) Y-STR呈男性伴性遺傳，不與其他染色體重組，除突變外，在父系的所有男性個體都具有相同的Y-STR單倍型，因此可利用父系親屬的參考樣本進(jìn)行犯罪嫌疑人的排除推測；2) 只具有排除同一性意義，不能認(rèn)定同一性。5、 精液斑檢驗的一般程序1) 肉眼觀察：UV（銀白色）；白、痂、鱗、硬、腥；2) 預(yù)實驗：酸性磷酸酶試驗AP（紅色醌類化合物）/預(yù)實驗陰性的檢材仍要進(jìn)行確證試驗；3) 確證實驗：精子檢出法（染色）4) 種屬鑒定：抗人精液血清沉淀反應(yīng)5) 個體識別：ABO血型（中和試驗、酶標(biāo)抗體免疫測定法、DNA分型）、DNA分析第十六章 唾液及唾液斑檢驗1、 如何進(jìn)行唾液斑的個體識別（just like 精液）1) ABO血型測定：中和試驗（分泌型）、酶標(biāo)抗體免疫測定法（非分泌型）、ABO基因分型/腦脊液無ABH抗原2) DNA分析：口腔黏膜脫落上皮細(xì)胞（nDNA and mtDNA）PCR-STR第十七章 混合斑檢驗1、 差異提取法及其優(yōu)缺點2、 輪奸案混合斑檢驗1) 注意提取多處檢材或一份檢材不同部位的斑痕分別進(jìn)行DN