微生物學實驗PPT學習教案

1、會計學1微生物學實驗微生物學實驗實驗項目號：實驗項目號：80000039101實驗類型：實驗類型： 驗證性驗證性實驗目的實驗目的：第1頁/共77頁第2頁/共77頁第3頁/共77頁處理方法處理方法（1）（2）（3）（4）菌落數(shù)量菌落數(shù)量菌落特征菌落特征（大小、形狀、透明（大小、形狀、透明度、顏色等）度、顏色等）簡要說明簡要說明菌落數(shù)量可用菌落數(shù)量可用“+”和和“-”來表示，從多到少依次表示為來表示，從多到少依次表示為+，+，+，+，-第4頁/共77頁思考題：思考題： 通過本次實驗，在防止微生物污染通過本次實驗，在防止微生物污染與擴散方面，你學到了些什么？有何與擴散方面，你學到了些什么？有何體會？

2、體會？ 第5頁/共77頁實驗項目號：實驗項目號：80000039101實驗類型：實驗類型： 驗證性驗證性實驗目的實驗目的：第6頁/共77頁顯微鏡的構造顯微鏡的構造基本原理：基本原理：微生物的個體很小，必須要借助顯微鏡才能看清其形態(tài)微生物的個體很小，必須要借助顯微鏡才能看清其形態(tài)。第7頁/共77頁顯微鏡的放大倍數(shù)和分辨率顯微鏡的放大倍數(shù)和分辨率第8頁/共77頁油鏡使用的原理油鏡使用的原理第9頁/共77頁第10頁/共77頁主要是油鏡的使用主要是油鏡的使用第11頁/共77頁第12頁/共77頁四聯(lián)球菌四聯(lián)球菌鏈球菌鏈球菌水弧菌水弧菌枯草桿菌枯草桿菌細菌基本形態(tài)的觀察細菌基本形態(tài)的觀察 利用油鏡，觀察細

3、菌的基本形態(tài)（球狀、桿狀和螺旋狀），邊觀察邊繪利用油鏡，觀察細菌的基本形態(tài)（球狀、桿狀和螺旋狀），邊觀察邊繪圖。圖。 第13頁/共77頁分析及討論：分析及討論：菌名菌名拉丁學名拉丁學名放大倍數(shù)放大倍數(shù)繪出在油鏡下觀察到的形態(tài)圖，注意菌體的繪出在油鏡下觀察到的形態(tài)圖，注意菌體的形態(tài)、大小比例、排列形態(tài)、大小比例、排列，同時標明同時標明菌名菌名(包括拉丁學名包括拉丁學名)和和放大倍數(shù)（物鏡的放大倍數(shù)放大倍數(shù)（物鏡的放大倍數(shù)目目鏡的放大倍數(shù)）鏡的放大倍數(shù)）第14頁/共77頁用油鏡觀察時應注意哪些問題？在載玻片和鏡用油鏡觀察時應注意哪些問題？在載玻片和鏡頭之間滴加香柏油有什么作用？頭之間滴加香柏油有什

4、么作用？鏡檢標本時，為什么先用低倍鏡觀察，而不是鏡檢標本時，為什么先用低倍鏡觀察，而不是直接用高倍鏡或油鏡觀察？直接用高倍鏡或油鏡觀察？影響顯微鏡分辨率的因素有哪些？影響顯微鏡分辨率的因素有哪些？思考題：（思考題：（P47）第15頁/共77頁實驗項目號：實驗項目號：80000039102實驗類型實驗類型 ： 驗證性驗證性實驗目的：實驗目的：第16頁/共77頁基本原理：基本原理：簡單染色：簡單染色： 簡單染色法是只用一種染料使細菌著簡單染色法是只用一種染料使細菌著色以顯示其形態(tài)。染料主要有堿性染料、色以顯示其形態(tài)。染料主要有堿性染料、酸性染料和中性染料三大類，通常采用酸性染料和中性染料三大類，通

5、常采用堿堿性染料性染料進行染色。因細菌在中性、堿性或進行染色。因細菌在中性、堿性或弱酸性的溶液中時常帶負電荷，而染料電弱酸性的溶液中時常帶負電荷，而染料電離后的染色部分帶正電荷，易與細胞結合離后的染色部分帶正電荷，易與細胞結合使其著色。使其著色。第17頁/共77頁第18頁/共77頁第19頁/共77頁革蘭氏染色結果革蘭氏染色結果繪圖繪圖第20頁/共77頁細胞結構細胞結構菌名菌名染色方法染色方法圖例圖例芽胞芽胞枯草桿菌枯草桿菌（Bacillus subtilis）芽胞染色法芽胞染色法鞭毛鞭毛變形桿菌變形桿菌(Proteus vulgaris)鞭毛染色法鞭毛染色法莢膜莢膜圓褐固氮菌圓褐固氮菌（褐球固

6、氮菌）（褐球固氮菌）（Azotobacter chroococcum）負染色法負染色法第21頁/共77頁u繪圖繪圖u革蘭氏染色的結果革蘭氏染色的結果牙垢中的細菌牙垢中的細菌10010枯草桿菌（示芽胞）枯草桿菌（示芽胞）拉丁學名拉丁學名放大倍數(shù)放大倍數(shù)變形桿菌（示鞭毛）變形桿菌（示鞭毛）拉丁學名拉丁學名放大倍數(shù)放大倍數(shù)圓褐固氮菌（示莢膜）圓褐固氮菌（示莢膜）拉丁學名拉丁學名放大倍數(shù)放大倍數(shù)菌名菌名形狀形狀簡圖簡圖顏色顏色革蘭氏染色結果革蘭氏染色結果大腸桿菌大腸桿菌枯草桿菌枯草桿菌第22頁/共77頁在進行細菌涂片時應注意哪些環(huán)節(jié)？在進行細菌涂片時應注意哪些環(huán)節(jié)？P75(1)進行細菌制片時為什么要進

7、行加熱固定？在進行細菌制片時為什么要進行加熱固定？在加熱固定時應注意什么？加熱固定時應注意什么？P76(2)你的革蘭氏染色是否成功？有哪些問題需要你的革蘭氏染色是否成功？有哪些問題需要注意，為什么？注意，為什么？P84(1)現(xiàn)有一株未知桿菌，個體明顯大于大腸桿菌現(xiàn)有一株未知桿菌，個體明顯大于大腸桿菌，請你鑒定桿菌是，請你鑒定桿菌是G+還是還是G-，如何確定你的，如何確定你的染色結果的正確性？染色結果的正確性？P84(2)思考題：（思考題：（P47）分析及討論：分析及討論：第23頁/共77頁實驗項目號：實驗項目號：80000039103實驗類型實驗類型 ： 驗證性驗證性實驗目的實驗目的：第24頁

8、/共77頁基本原理：基本原理：1. 放線菌（放線菌（P72-73）：）：印片法：印片法：用于觀察氣生菌絲、孢子絲的形態(tài)、孢子用于觀察氣生菌絲、孢子絲的形態(tài)、孢子的排列方式及形態(tài)。的排列方式及形態(tài)。2. 酵母菌（酵母菌（P73）：）： 用呂氏堿性美蘭染色做用呂氏堿性美蘭染色做水浸片水浸片，可區(qū)分死活細胞，可區(qū)分死活細胞： 死細胞死細胞 藍色藍色 活細胞活細胞 無色無色3. 霉菌（根霉）（霉菌（根霉）（P74）：）：挑菌做水浸片直接觀察挑菌做水浸片直接觀察。第25頁/共77頁青霉青霉根霉根霉曲霉曲霉細黃鏈霉菌（放線菌）細黃鏈霉菌（放線菌）酵母菌酵母菌第26頁/共77頁第27頁/共77頁第28頁/共

9、77頁第29頁/共77頁第30頁/共77頁 繪出所觀察微生物的個體形態(tài)圖繪出所觀察微生物的個體形態(tài)圖（細黃鏈霉菌、釀（細黃鏈霉菌、釀酒酵母、根霉、青霉、曲霉酒酵母、根霉、青霉、曲霉 ，注意標注清楚各部分結構，注意標注清楚各部分結構的名稱）的名稱）菌名菌名拉丁學拉丁學名名放大倍放大倍數(shù)數(shù)第31頁/共77頁類群類群菌名菌名菌落大小菌落大小干濕干濕顏色顏色表面表面邊緣邊緣厚薄厚薄致密度致密度氣味氣味細菌細菌放線菌放線菌酵母菌酵母菌霉菌霉菌四大類微生物的菌落特征四大類微生物的菌落特征第32頁/共77頁根據(jù)你的觀察結果，呂氏堿性美蘭染色的作用根據(jù)你的觀察結果，呂氏堿性美蘭染色的作用時間與酵母菌死活細胞的

10、比例的變化是否有關時間與酵母菌死活細胞的比例的變化是否有關系？試分析原因。系？試分析原因。P76-（10）黑曲霉和黑根霉在個體形態(tài)和菌落形態(tài)上有何黑曲霉和黑根霉在個體形態(tài)和菌落形態(tài)上有何區(qū)別？區(qū)別？P76-（12）思考題：思考題：分析及討論：分析及討論：第33頁/共77頁實驗項目號：實驗項目號：80000039104實驗類型實驗類型 ： 驗證性驗證性實驗目的實驗目的：第34頁/共77頁基本原理：基本原理： 每一個大方格邊長為每一個大方格邊長為1mm，則每一大方格的面積，則每一大方格的面積為為1mm2，蓋上蓋玻片后，蓋上蓋玻片后，載玻片與蓋玻片之間的高度載玻片與蓋玻片之間的高度為，所以計數(shù)室的容

11、積為為，所以計數(shù)室的容積為3。 設五個中方格中總菌數(shù)為設五個中方格中總菌數(shù)為A，菌液稀釋倍數(shù)為，菌液稀釋倍數(shù)為B， 1. 1. 顯微鏡直接計數(shù)法顯微鏡直接計數(shù)法: (P52): (P52) 第35頁/共77頁 采用目鏡測微采用目鏡測微尺和鏡臺測微尺測尺和鏡臺測微尺測量微生物細胞的大量微生物細胞的大小。鏡臺測微尺一小。鏡臺測微尺一般是將般是將1mm等分為等分為100格，因此每格長格，因此每格長10m，而目鏡測微，而目鏡測微尺在不同放大倍數(shù)尺在不同放大倍數(shù)下的每格所代表的下的每格所代表的長度是不同的，使長度是不同的，使用前須用鏡臺測微用前須用鏡臺測微尺校正，以求得在尺校正，以求得在一定放大倍數(shù)下的

12、一定放大倍數(shù)下的實際長度。實際長度。 2. 微生物大小的測定：微生物大小的測定： (P48)第36頁/共77頁第37頁/共77頁小。小。第38頁/共77頁1. 顯微鏡直接計數(shù)：顯微鏡直接計數(shù)： 計算并報告該菌懸液的濃度：計算并報告該菌懸液的濃度： （寫成科學記數(shù)法，保留（寫成科學記數(shù)法，保留2位有效數(shù)字）位有效數(shù)字）表表1：顯微鏡直接計數(shù)的結果：顯微鏡直接計數(shù)的結果A表示五個中方格中的總菌數(shù)；表示五個中方格中的總菌數(shù)； B表示菌液稀釋倍數(shù)。表示菌液稀釋倍數(shù)。各中格菌數(shù)各中格菌數(shù)A 兩室平均兩室平均A值值 B 菌液濃度菌液濃度（菌數(shù)（菌數(shù)/ml ）12345第一室第一室第二室第二室第39頁/共7

13、7頁2. 微生物大小的測定：微生物大小的測定：接物鏡接物鏡物鏡放大倍數(shù)物鏡放大倍數(shù)目鏡測微尺格數(shù)目鏡測微尺格數(shù) 物鏡測微尺格數(shù)物鏡測微尺格數(shù)目尺每格的長度目尺每格的長度（ m ） 低倍鏡低倍鏡高倍鏡高倍鏡油鏡油鏡表表2：用鏡臺測微尺校正目鏡測微尺的結果：用鏡臺測微尺校正目鏡測微尺的結果 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 平均平均寬（格）寬（格）長（格）長（格）表表3：枯草桿菌細胞大小測定的結果：枯草桿菌細胞大小測定的結果計算出枯草桿菌的大?。簩捰嬎愠隹莶輻U菌的大小：寬= m 長長= m 表示為：寬表示為：寬長長（保留小數(shù)點后保留小數(shù)點后1位）位）第40頁/共77頁 根據(jù)你實驗的體會，說

14、明用血球計數(shù)板計數(shù)的根據(jù)你實驗的體會，說明用血球計數(shù)板計數(shù)的誤差主要來自哪些方面？應如何盡量減少誤差誤差主要來自哪些方面？應如何盡量減少誤差，力求準確？，力求準確？2. 為什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時，必為什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時，必須用鏡臺測微尺重新對目鏡測微尺進行校正？須用鏡臺測微尺重新對目鏡測微尺進行校正？思考題：思考題：分析及討論：分析及討論：第41頁/共77頁實驗項目號：實驗項目號：80000039105實驗類型實驗類型 ： 綜合性綜合性 實驗目的實驗目的：、培養(yǎng)基的配制及滅菌、培養(yǎng)基的配制及滅菌（P15-28） 第42頁/共77頁基本原理：基本原理： 培養(yǎng)基培養(yǎng)基是

15、人工配制的適合微生物生長繁殖和積是人工配制的適合微生物生長繁殖和積累代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質，包括累代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質，包括碳源、氮源、碳源、氮源、能源、礦物元素、生長因子和水能源、礦物元素、生長因子和水等生長要素等生長要素。不同微生物對營養(yǎng)物質和。不同微生物對營養(yǎng)物質和pH的要求是不同的要求是不同的。培養(yǎng)基在使用之前必須要處于無菌狀態(tài)的。培養(yǎng)基在使用之前必須要處于無菌狀態(tài)，故要先滅菌。，故要先滅菌。滅菌方法：高壓蒸汽滅菌法（滅菌方法：高壓蒸汽滅菌法（121/20min ） 烘箱干熱滅菌法烘箱干熱滅菌法（160-170/1-2h ） 原理及適用物品？原理及適用物品？ 第43頁/共77頁 培養(yǎng)基的類型

16、和用途培養(yǎng)基的類型和用途 第44頁/共77頁藥品試劑：藥品試劑：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴薯培養(yǎng)基薯培養(yǎng)基設備材料：設備材料：高壓蒸汽滅菌鍋、恒壓高壓蒸汽滅菌鍋、恒壓干熱滅菌箱、天平、藥匙、電爐、燒干熱滅菌箱、天平、藥匙、電爐、燒杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻璃棒、杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻璃棒、試管、棉塞、培養(yǎng)基、吸管、線繩、試管、棉塞、培養(yǎng)基、吸管、線繩、標簽等。標簽等。第45頁/共77頁第46頁/共77頁項目項目培養(yǎng)基名稱培養(yǎng)基名稱配制量及分裝配制量及分裝做法做法滅菌滅菌培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基的配制（每一實驗桌分成三組，每4人一組，分別配制培養(yǎng)基）1. .營養(yǎng)瓊脂營養(yǎng)瓊脂：（牛肉膏

17、蛋白胨培養(yǎng)基、細菌培養(yǎng)基）(2人）三角瓶：三角瓶：2瓶（150ml/瓶）/2人一組試管斜面：試管斜面：16支（約5ml/支）/2人一組三角瓶：三角瓶：直接稱取相應的干粉培養(yǎng)基置于三角瓶內，另加0.5%的瓊脂，加水加塞、滅菌試管斜面：試管斜面：每2人一組，稱取100ml量的干粉培養(yǎng)基置于燒杯內，另加0.5%的瓊脂，加水煮溶，分裝高壓蒸汽滅菌法（121/20min）2.馬鈴薯培養(yǎng)基馬鈴薯培養(yǎng)基（2 2人）人）無菌水無菌水試管：試管：10支/4人（4.5ml/支）大三角瓶：大三角瓶：1瓶（100ml）/4人自來水分裝、加塞、滅菌即得無菌培養(yǎng)皿無菌培養(yǎng)皿每人10套皿（5套/包）包扎滅菌高壓蒸汽滅菌法或

18、干熱滅菌法（160-170/1-2小時）無菌吸管無菌吸管每人5支1ml的吸管加過濾棉花、包扎滅菌即得第47頁/共77頁 P20-（2） P20-（8） P27-（2） P27-（3）六六. 思考題：思考題：五五. 分析及討論：分析及討論：第48頁/共77頁實驗項目號：實驗項目號：80000039105實驗類型實驗類型 ： 綜合性綜合性 實驗目的實驗目的：、微生物的分離純化及活菌計數(shù)（、微生物的分離純化及活菌計數(shù)（P28-34） 第49頁/共77頁基本原理：基本原理： 從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物的過程稱為微生物分離與

19、純化微生物分離與純化。微生物在。微生物在固體培養(yǎng)基上生長形成單個菌落，通過挑取單菌固體培養(yǎng)基上生長形成單個菌落，通過挑取單菌落而獲得一種純培養(yǎng)。落而獲得一種純培養(yǎng)。常用方法：常用方法：稀釋平板法、平板劃線法稀釋平板法、平板劃線法基本原理：基本原理：1.選擇合適的培養(yǎng)基配方；選擇合適的培養(yǎng)基配方；2.提供合適的生長環(huán)境，如酸堿度、溫度和氧氣；提供合適的生長環(huán)境，如酸堿度、溫度和氧氣；3.加入某種抑制劑，從而淘汰一些不需要的微生物。加入某種抑制劑，從而淘汰一些不需要的微生物。 第50頁/共77頁培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、細營養(yǎng)瓊脂（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、細菌培養(yǎng)基）、馬鈴薯培養(yǎng)基

20、菌培養(yǎng)基）、馬鈴薯培養(yǎng)基土壤樣品：土壤樣品：從校園采集從校園采集溶液和試劑：溶液和試劑：盛無菌水試管、盛盛無菌水試管、盛99ml無菌水三無菌水三角瓶等。角瓶等。其他用品：其他用品：無菌培養(yǎng)皿、無菌吸管、接種環(huán)、無菌培養(yǎng)皿、無菌吸管、接種環(huán)、酒精燈等酒精燈等第51頁/共77頁流程：流程：第52頁/共77頁每管各每管各4.5ml無菌無菌水水吸取吸取1ml吸取吸取1ml15-20ml融化并冷卻至融化并冷卻至45的培養(yǎng)基的培養(yǎng)基第53頁/共77頁分離的微生物分離的微生物所用培養(yǎng)基所用培養(yǎng)基稀釋液的濃度稀釋液的濃度培養(yǎng)溫度培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時間培養(yǎng)時間細菌細菌營養(yǎng)瓊脂營養(yǎng)瓊脂10-5、10-6、10-7371

21、-2天天霉菌霉菌馬鈴薯培養(yǎng)基馬鈴薯培養(yǎng)基10-2、10-3、10-4282-3天天第54頁/共77頁幾種劃線方法幾種劃線方法第55頁/共77頁1. 記錄培養(yǎng)后平板上相應微生物的的菌落記錄培養(yǎng)后平板上相應微生物的的菌落 注：注：CFU/g土樣土樣=每個平板上的菌落平均數(shù)每個平板上的菌落平均數(shù)稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)稀釋度稀釋度10-510-610-7每個平板上細菌每個平板上細菌的菌落數(shù)的菌落數(shù)1 2 3 平均平均1 2 3 平均平均1 2 3 平均平均細菌細菌CFU/g土樣土樣稀釋度稀釋度10-210-310-4每個平板上霉菌每個平板上霉菌的菌落數(shù)的菌落數(shù)1 2 3 平均平均1 2 3 平均平均1 2

22、3 平均平均霉菌霉菌CFU/g土樣土樣第56頁/共77頁 按照按照P33和和P207-208的方法，分析上的方法，分析上面的實驗數(shù)據(jù)，報告每克土樣中所含面的實驗數(shù)據(jù)，報告每克土樣中所含的細菌、霉菌的的細菌、霉菌的CFU數(shù)。數(shù)。 描述你所純化得到的菌種的菌落形態(tài)描述你所純化得到的菌種的菌落形態(tài)和個體形態(tài)。和個體形態(tài)。第57頁/共77頁1. 怎樣判斷稀釋平板計數(shù)數(shù)據(jù)是否可靠？需要掌握怎樣判斷稀釋平板計數(shù)數(shù)據(jù)是否可靠？需要掌握哪幾個關鍵？哪幾個關鍵？P34-（3） 2. 當你的平板上長出的菌落不是均勻分散的，而是當你的平板上長出的菌落不是均勻分散的，而是集中在一起時，你認為問題出現(xiàn)在哪里？集中在一起

23、時，你認為問題出現(xiàn)在哪里？P34-（6） 3. 一個酵母菌的懸液樣品，分別用血球計數(shù)板直接一個酵母菌的懸液樣品，分別用血球計數(shù)板直接計數(shù)法和平板菌落計數(shù)法進行計數(shù)，其結果會有計數(shù)法和平板菌落計數(shù)法進行計數(shù)，其結果會有什么不同？原因是什么。試比較這兩種計數(shù)法的什么不同？原因是什么。試比較這兩種計數(shù)法的優(yōu)缺點。優(yōu)缺點。七七. 思考題：思考題：六六. 分析及討論：分析及討論：第58頁/共77頁實驗項目號：實驗項目號：80000039105實驗類型實驗類型 ： 綜合性綜合性 （一）、實驗目的（一）、實驗目的：、微生物的生理生化試驗、微生物的生理生化試驗1. 掌握進行微生物大分子物質水解試驗的原理和方法

24、掌握進行微生物大分子物質水解試驗的原理和方法；2. 掌握進行抗生素的抗菌試驗的原理和方法。掌握進行抗生素的抗菌試驗的原理和方法。實驗六實驗六 微生物的分離純化及生理生化試驗微生物的分離純化及生理生化試驗大分子物質的水解試驗及抗生素的抗菌試驗大分子物質的水解試驗及抗生素的抗菌試驗（P111） 第59頁/共77頁（二）、基本原理（二）、基本原理：1. 大分子物質的水解試驗：大分子物質的水解試驗：微生物對大分子物質如淀粉、蛋白質和脂肪不能直接利微生物對大分子物質如淀粉、蛋白質和脂肪不能直接利用，必須依靠產(chǎn)生的胞外酶將大分子物質分解后，才能被微用，必須依靠產(chǎn)生的胞外酶將大分子物質分解后，才能被微生物吸

25、收利用。胞外酶主要為水解酶，通過加水裂解大分子生物吸收利用。胞外酶主要為水解酶，通過加水裂解大分子物質為較小化合物，使其能被運輸?shù)郊毎麅?。如淀粉酶將淀物質為較小化合物，使其能被運輸?shù)郊毎麅?。如淀粉酶將淀粉水解為小分子的糊精、雙糖、單糖。蛋白酶水解蛋白質為粉水解為小分子的糊精、雙糖、單糖。蛋白酶水解蛋白質為小肽、氨基酸等，這些過程均可通過觀察微生物菌落周圍的小肽、氨基酸等，這些過程均可通過觀察微生物菌落周圍的物質變化來證實，如在淀粉平板上淀粉被水解后滴加碘液時物質變化來證實，如在淀粉平板上淀粉被水解后滴加碘液時會出現(xiàn)不呈藍色的透明圈，在會出現(xiàn)不呈藍色的透明圈，在酪蛋白平板（牛奶平板）上蛋酪蛋白平

26、板（牛奶平板）上蛋白質被分解會出現(xiàn)透明圈。白質被分解會出現(xiàn)透明圈。2. 抗生素的抗菌試驗：抗生素的抗菌試驗： 抗生素為某些微生物的次生代謝產(chǎn)物，會積累在培抗生素為某些微生物的次生代謝產(chǎn)物，會積累在培養(yǎng)基質中。把待試驗的微生物連同培養(yǎng)基塊置于加有供試菌養(yǎng)基質中。把待試驗的微生物連同培養(yǎng)基塊置于加有供試菌株的平板表面，經(jīng)培養(yǎng)，觀察菌塊周圍是否有抑菌圈出現(xiàn)，株的平板表面，經(jīng)培養(yǎng)，觀察菌塊周圍是否有抑菌圈出現(xiàn)，就可知道該菌株是否產(chǎn)生相應的抗生素。就可知道該菌株是否產(chǎn)生相應的抗生素。第60頁/共77頁培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：酪蛋白平板（牛奶平板）、淀粉平板、酪蛋白平板（牛奶平板）、淀粉平板、營養(yǎng)瓊脂平板營養(yǎng)瓊脂

27、平板菌株：菌株：前個實驗分離到的各種菌株（前個實驗分離到的各種菌株（寫明編號寫明編號）、）、大腸桿菌大腸桿菌（Escherichia coli） 、青霉、青霉(Penicillium sp.)、細黃鏈霉菌（細黃鏈霉菌（Stretomyces griseus）、枯草桿菌）、枯草桿菌溶液和試劑：溶液和試劑：路哥氏碘液路哥氏碘液其他用品：其他用品：無菌培養(yǎng)皿、無菌吸管、接種環(huán)、酒無菌培養(yǎng)皿、無菌吸管、接種環(huán)、酒精燈等精燈等第61頁/共77頁點接微生物菌種點接微生物菌種30培養(yǎng)培養(yǎng)2天天觀察透明圈大小觀察透明圈大小酪蛋白平板酪蛋白平板1. 蛋白質水解試驗：蛋白質水解試驗：（自己分離的細菌、霉菌和枯草桿

28、菌對照自己分離的細菌、霉菌和枯草桿菌對照） 2. 淀粉水解試驗：淀粉水解試驗：（自己分離的細菌、霉菌和枯草桿菌對照自己分離的細菌、霉菌和枯草桿菌對照） 30培養(yǎng)培養(yǎng)2天天加碘液，加碘液，觀察透明圈大小觀察透明圈大小（四）、實驗方法和步驟（四）、實驗方法和步驟：點接微生物菌種點接微生物菌種第62頁/共77頁加大腸桿菌懸液加大腸桿菌懸液涂布均勻涂布均勻挑取菌塊置于培養(yǎng)基表面挑取菌塊置于培養(yǎng)基表面營養(yǎng)瓊脂平板營養(yǎng)瓊脂平板37培養(yǎng)培養(yǎng)2天天觀察抑菌圈大小觀察抑菌圈大小第63頁/共77頁表表1 大分子物質水解結果記錄表大分子物質水解結果記錄表微生物類型微生物類型菌株名或編號菌株名或編號蛋白質水解試驗蛋白

29、質水解試驗淀粉水解試驗淀粉水解試驗抗生素的抑菌試驗抗生素的抑菌試驗細菌細菌-枯草桿菌枯草桿菌-放線菌放線菌細黃鏈霉菌細黃鏈霉菌-霉菌霉菌青霉青霉-將實驗結果填入表將實驗結果填入表1， “+”或或“+”表示陽性，表示陽性，“-”表示陰性表示陰性第64頁/共77頁 在選擇平板上形成的透明圈的大小是否就能作在選擇平板上形成的透明圈的大小是否就能作為產(chǎn)酶能力的直接證據(jù)？透明圈的大小還受什么因為產(chǎn)酶能力的直接證據(jù)？透明圈的大小還受什么因素的影響？素的影響？（七）、思考題：（七）、思考題：（六）、（六）、 分析及討論：分析及討論：第65頁/共77頁（一）、實驗目的（一）、實驗目的：二、糖發(fā)酵試驗、檸檬酸鹽

30、試驗和半固體穿刺法二、糖發(fā)酵試驗、檸檬酸鹽試驗和半固體穿刺法（P115-121） 了解糖發(fā)酵試驗、了解糖發(fā)酵試驗、檸檬酸鹽試驗檸檬酸鹽試驗的原理，掌的原理，掌握通過這些試驗鑒別不同微生物的方法。握通過這些試驗鑒別不同微生物的方法。學習半固體穿刺法觀察細菌的運動性及細菌學習半固體穿刺法觀察細菌的運動性及細菌的生長與氧的關系的生長與氧的關系第66頁/共77頁（二）、基本原理（二）、基本原理： 乳糖發(fā)酵試驗：乳糖發(fā)酵試驗：（不同的微生物對不同糖的利（不同的微生物對不同糖的利用能力是不同的）用能力是不同的）在糖發(fā)酵管中加入溴甲酚紫（在糖發(fā)酵管中加入溴甲酚紫（pH6.8 紫色）紫色）-從而判斷是否產(chǎn)酸從

31、而判斷是否產(chǎn)酸在糖發(fā)酵管中加入倒置的杜氏小盲管，觀察有無在糖發(fā)酵管中加入倒置的杜氏小盲管，觀察有無氣泡產(chǎn)生氣泡產(chǎn)生-從而判斷是否產(chǎn)氣從而判斷是否產(chǎn)氣第67頁/共77頁檸檬酸鹽試驗：檸檬酸鹽試驗： 細菌分解培養(yǎng)基中的檸檬酸鹽和磷酸銨后細菌分解培養(yǎng)基中的檸檬酸鹽和磷酸銨后產(chǎn)生堿性化合物，使培養(yǎng)基的產(chǎn)生堿性化合物，使培養(yǎng)基的pH升高。培養(yǎng)升高。培養(yǎng)基中加入基中加入1%的溴麝香草酚藍指示劑（的溴麝香草酚藍指示劑（pH7.6 藍色藍色）第68頁/共77頁細菌的運動性及細菌的生長與氧的關系：細菌的運動性及細菌的生長與氧的關系：（半固（半固體穿刺法）體穿刺法）運動性：運動性： 能運動（有鞭毛）沿穿刺線擴散生

32、長；能運動（有鞭毛）沿穿刺線擴散生長； 不運動（無鞭毛）沿穿刺線生長不運動（無鞭毛）沿穿刺線生長生長與氧的關系：生長與氧的關系：好氧性好氧性：厭氧性厭氧性：兼氧性兼氧性：第69頁/共77頁培養(yǎng)基：培養(yǎng)基： 乳糖發(fā)酵試管、乳糖發(fā)酵試管、 檸檬酸鹽培養(yǎng)基斜面、檸檬酸鹽培養(yǎng)基斜面、 營養(yǎng)肉湯半固體培養(yǎng)基營養(yǎng)肉湯半固體培養(yǎng)基菌株：菌株：前個實驗分離到的細菌菌株（寫明編號前個實驗分離到的細菌菌株（寫明編號）其他用品：其他用品：酒精燈、接種環(huán)、接種針、恒溫培酒精燈、接種環(huán)、接種針、恒溫培養(yǎng)箱等養(yǎng)箱等第70頁/共77頁培養(yǎng)基培養(yǎng)基-標記標記-接種接種-37培養(yǎng)培養(yǎng)2天天-觀觀察察-記錄結果記錄結果（五）、實驗結果（五）、實驗結果:記錄試驗結果于表記錄試驗結果于表2 表表2 試驗結果試驗結果結論：結論：乳糖發(fā)酵試驗乳糖發(fā)酵試驗檸檬酸鹽試驗檸檬酸鹽試驗細菌的