第一章_植物工廠化育苗的工廠與設(shè)備

1、植物工廠化育苗的工廠與設(shè)備2第一節(jié)第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室一一 、實(shí)驗(yàn)室、實(shí)驗(yàn)室 植物組織培養(yǎng)是在嚴(yán)格無(wú)菌的條件下進(jìn)行植物組織培養(yǎng)是在嚴(yán)格無(wú)菌的條件下進(jìn)行的。要做到無(wú)菌的條件，需要一定的設(shè)備、器的。要做到無(wú)菌的條件，需要一定的設(shè)備、器材和用具，同時(shí)還需要人工控制溫度、光照、材和用具，同時(shí)還需要人工控制溫度、光照、濕度等培養(yǎng)條件。濕度等培養(yǎng)條件。 實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)原則：實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)原則：保證無(wú)菌操作，達(dá)到工保證無(wú)菌操作，達(dá)到工作方便，防止污染。作方便，防止污染。準(zhǔn)備室準(zhǔn)備室培養(yǎng)室培養(yǎng)室溫溫 室室Text實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室接種室接種室接種室接種室實(shí)驗(yàn)室組成：實(shí)驗(yàn)室組成：4基本實(shí)驗(yàn)室布局平面圖基本實(shí)驗(yàn)室布局平面圖實(shí)實(shí)

2、驗(yàn)驗(yàn)臺(tái)臺(tái)擱擱架架培養(yǎng)架培養(yǎng)架培養(yǎng)架培養(yǎng)架培培養(yǎng)養(yǎng)架架培培養(yǎng)養(yǎng)架架藥藥品品及及儀儀器器柜柜無(wú)菌臺(tái)無(wú)菌臺(tái)無(wú)菌臺(tái)無(wú)菌臺(tái)擱擱架架拉拉窗窗冰箱冰箱 擱擱 架架水槽水槽電電爐爐門(mén)門(mén)4.5m3.0m3.5m4.0m準(zhǔn)備室準(zhǔn)備室緩沖室緩沖室無(wú)菌室無(wú)菌室培養(yǎng)室培養(yǎng)室準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)室5緩沖室緩沖室6無(wú)菌室無(wú)菌室7無(wú)菌室無(wú)菌室89 9無(wú)菌室無(wú)菌室10101111培養(yǎng)架培養(yǎng)架1212培養(yǎng)室培養(yǎng)室13溫室溫室1414第二節(jié)第二節(jié) 儀器與設(shè)備儀器與設(shè)備15冰箱冰箱酸度計(jì)酸度計(jì)電爐電爐1.基本設(shè)備基本設(shè)備17天平天平純水器純水器18攪拌器攪拌器19蒸汽壓力滅菌鍋蒸汽壓力滅菌鍋2.滅菌設(shè)備滅菌設(shè)備20212222過(guò)濾滅菌

3、裝置過(guò)濾滅菌裝置2323紫外滅菌燈管紫外滅菌燈管3、無(wú)菌操作設(shè)備、無(wú)菌操作設(shè)備 超凈工作臺(tái)超凈工作臺(tái)242525超凈工作臺(tái)超凈工作臺(tái)無(wú)菌接種箱無(wú)菌接種箱26恒溫振蕩培養(yǎng)箱恒溫振蕩培養(yǎng)箱 光照培養(yǎng)箱光照培養(yǎng)箱 4、培養(yǎng)設(shè)備、培養(yǎng)設(shè)備 27搖搖 床床285、細(xì)胞學(xué)鑒定設(shè)備、細(xì)胞學(xué)鑒定設(shè)備 光學(xué)研究顯微鏡、實(shí)體顯微鏡、倒置顯微鏡光學(xué)研究顯微鏡、實(shí)體顯微鏡、倒置顯微鏡29倒置顯微鏡倒置顯微鏡光學(xué)顯微鏡光學(xué)顯微鏡301、玻璃器皿、玻璃器皿三、培養(yǎng)器皿及實(shí)驗(yàn)用具三、培養(yǎng)器皿及實(shí)驗(yàn)用具培養(yǎng)皿培養(yǎng)皿三角瓶三角瓶培養(yǎng)瓶培養(yǎng)瓶2、金屬材質(zhì)用具、金屬材質(zhì)用具鑷子鑷子 解剖刀解剖刀接種針接種針32接種盤(pán)接種盤(pán)3333

4、第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基培養(yǎng)基 培養(yǎng)基是決定植物組織培養(yǎng)成敗的關(guān)鍵因素培養(yǎng)基是決定植物組織培養(yǎng)成敗的關(guān)鍵因素之一。之一。 培養(yǎng)基的構(gòu)成要素通常可分為：培養(yǎng)基的構(gòu)成要素通?？煞譃椋核?；水分；無(wú)機(jī)鹽類(lèi)；有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分；植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物無(wú)機(jī)鹽類(lèi)；有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分；植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)；天熱物質(zhì)；質(zhì)；天熱物質(zhì)； pH；凝固劑；凝固劑等。等。 3434 構(gòu)成培養(yǎng)基的絕大部分組分為水分。構(gòu)成培養(yǎng)基的絕大部分組分為水分。 在研究上在研究上，常用蒸餾水來(lái)配制培養(yǎng)基，而最，常用蒸餾水來(lái)配制培養(yǎng)基，而最為理想的水應(yīng)該是純水。為理想的水應(yīng)該是純水。（一）水分（一）水分大量營(yíng)養(yǎng)元素大量營(yíng)養(yǎng)元素：占干物質(zhì)重量的：占干物質(zhì)重量的0.1

5、%以上；以上； C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S等等9種種微量營(yíng)養(yǎng)元素微量營(yíng)養(yǎng)元素：占干物質(zhì)重量的：占干物質(zhì)重量的0.1%以下以下 有的只含有的只含0.1mg/kg Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl等等7種種按照國(guó)際植物生理協(xié)會(huì)的建議：按照國(guó)際植物生理協(xié)會(huì)的建議： 所需濃度所需濃度 0.5mmol/L 0.5mmol/L的元素為大量元素的元素為大量元素 所需濃度所需濃度 0.5mmol/L 0.5mmol/L的元素為微量元素的元素為微量元素35（二）礦質(zhì)元素（二）礦質(zhì)元素1.大量元素大量元素N是蛋白質(zhì)、酶、葉綠素、維生素、核酸、磷脂、是蛋白質(zhì)、酶、葉綠素、維生素、核酸、磷脂、生物堿

6、等的組成成分，在植物生命活動(dòng)中占有重生物堿等的組成成分，在植物生命活動(dòng)中占有重要的位置。要的位置。P是磷脂的主要成分。培養(yǎng)基中常用是磷脂的主要成分。培養(yǎng)基中常用KH2PO4 NaH2PO4等。等。 K對(duì)碳水化合物合成，轉(zhuǎn)移，以及氮素代謝等有對(duì)碳水化合物合成，轉(zhuǎn)移，以及氮素代謝等有密切關(guān)系。密切關(guān)系。36MgMg、S S、CaCa是葉綠素的組成成分，又是激酶的是葉綠素的組成成分，又是激酶的活化劑，對(duì)核蛋白體結(jié)構(gòu)具有穩(wěn)定作用；活化劑，對(duì)核蛋白體結(jié)構(gòu)具有穩(wěn)定作用；S S是含是含S S氨基酸的蛋白質(zhì)的組成成分。氨基酸的蛋白質(zhì)的組成成分。CaCa是構(gòu)成細(xì)胞壁的成分，對(duì)細(xì)胞分裂，穩(wěn)定質(zhì)是構(gòu)成細(xì)胞壁的成分，

7、對(duì)細(xì)胞分裂，穩(wěn)定質(zhì)膜結(jié)構(gòu)有顯著作用，此外，膜結(jié)構(gòu)有顯著作用，此外，CaCa及鈣調(diào)素在細(xì)胞及鈣調(diào)素在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起重要作用。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起重要作用。2、微量元素、微量元素 在微量元素中，在微量元素中，鐵鐵的使用最大的使用最大 ： 一些氧化酶的組成成分一些氧化酶的組成成分 葉綠素形成的必要條件葉綠素形成的必要條件 使用乙二胺四乙酸鐵（使用乙二胺四乙酸鐵（EDTA-FeEDTA-Fe）鰲合）鰲合物防止鐵的沉淀物防止鐵的沉淀38 硼硼與蛋白質(zhì)合成、糖類(lèi)運(yùn)輸有著密切的關(guān)系與蛋白質(zhì)合成、糖類(lèi)運(yùn)輸有著密切的關(guān)系 銅銅是某些氧化酶的成分，能夠促進(jìn)離體根的生是某些氧化酶的成分，能夠促進(jìn)離體根的生長(zhǎng)長(zhǎng) 錳錳參與植

8、物的光合、呼吸代謝參與植物的光合、呼吸代謝 鉬鉬參與氮素的代謝參與氮素的代謝 氯氯是光合作用水光解的活化劑是光合作用水光解的活化劑 微量元素的主要作用是作為微量元素的主要作用是作為酶的輔助因子或激活酶的輔助因子或激活劑劑參與代謝的調(diào)節(jié)。參與代謝的調(diào)節(jié)。39（三）有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分（三）有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分 培養(yǎng)基中的有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分包括培養(yǎng)基中的有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分包括糖類(lèi)物質(zhì)糖類(lèi)物質(zhì) 、維生素類(lèi)維生素類(lèi) 和氨基酸類(lèi)。和氨基酸類(lèi)。1. 1.碳源碳源 碳源物質(zhì)包括糖類(lèi)物質(zhì)、醇類(lèi)物質(zhì)和有機(jī)碳源物質(zhì)包括糖類(lèi)物質(zhì)、醇類(lèi)物質(zhì)和有機(jī)酸，以酸，以糖類(lèi)糖類(lèi)物質(zhì)最重要。物質(zhì)最重要。 糖類(lèi)物質(zhì)特點(diǎn)：糖類(lèi)物質(zhì)特點(diǎn)： 具有熱易變的性質(zhì)具有熱易

9、變的性質(zhì) 利于吸收和利用利于吸收和利用 使用濃度一般在使用濃度一般在2%2%5%5% 提供能源和調(diào)節(jié)滲透壓提供能源和調(diào)節(jié)滲透壓412. 2.維生素類(lèi)維生素類(lèi) 以各種以各種輔酶輔酶的形式存在的形式存在 參與多種代謝活動(dòng)參與多種代謝活動(dòng) 對(duì)生長(zhǎng)，分化等有很好的促進(jìn)作用對(duì)生長(zhǎng)，分化等有很好的促進(jìn)作用 主要分為主要分為脂溶性維生素脂溶性維生素和和水溶性維生素水溶性維生素 常用維生素有常用維生素有V VB1B1和和V VB6B6 42 蛋白質(zhì)的組成成分蛋白質(zhì)的組成成分 有機(jī)氮源有機(jī)氮源 可直接被細(xì)胞吸收利用可直接被細(xì)胞吸收利用 培養(yǎng)基中常用的是培養(yǎng)基中常用的是甘氨酸甘氨酸 3. 3.氨基酸氨基酸434.

10、 4.肌醇肌醇 環(huán)己六醇環(huán)己六醇 細(xì)胞壁的構(gòu)建材料細(xì)胞壁的構(gòu)建材料 參與碳水化合物、磷脂代謝及離子平衡等參與碳水化合物、磷脂代謝及離子平衡等生理活動(dòng)生理活動(dòng) 促進(jìn)活性物質(zhì)發(fā)揮作用促進(jìn)活性物質(zhì)發(fā)揮作用44（四）植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑（四）植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑不僅可以植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑不僅可以促進(jìn)植物組織的促進(jìn)植物組織的脫分化和形成愈傷組織，還可以誘導(dǎo)不定芽、不脫分化和形成愈傷組織，還可以誘導(dǎo)不定芽、不定胚的形成。定胚的形成。 最常用的有最常用的有生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素，有時(shí)也，有時(shí)也會(huì)用到會(huì)用到赤霉素和脫落酸赤霉素和脫落酸。 1. 1.生長(zhǎng)素類(lèi)生長(zhǎng)素類(lèi) 促進(jìn)細(xì)胞伸長(zhǎng)和分裂促進(jìn)細(xì)胞伸長(zhǎng)

11、和分裂 促進(jìn)生根、抑制器官脫落、性別控制、延促進(jìn)生根、抑制器官脫落、性別控制、延長(zhǎng)休眠、頂端優(yōu)勢(shì)、單性結(jié)實(shí)長(zhǎng)休眠、頂端優(yōu)勢(shì)、單性結(jié)實(shí) 誘導(dǎo)愈傷組織形成誘導(dǎo)愈傷組織形成 溶于溶于95%95%酒精或酒精或0.1mol/L0.1mol/L的的NaOHNaOH中，后者的中，后者的溶解效果更好溶解效果更好 常用的生長(zhǎng)素：常用的生長(zhǎng)素： IAA(IAA(吲哆乙酸吲哆乙酸) ) NAA ( NAA (萘乙酸萘乙酸) ) 2,4-D(2,4 2,4-D(2,4，二氯苯氧乙酸，二氯苯氧乙酸) ) IBA( IBA(吲哆丁酸吲哆丁酸) )462. 2.細(xì)胞分裂素類(lèi)細(xì)胞分裂素類(lèi) 促進(jìn)細(xì)胞分裂和分化促進(jìn)細(xì)胞分裂和分化

12、 誘導(dǎo)胚狀體和不定芽的形成誘導(dǎo)胚狀體和不定芽的形成 延緩組織的衰老并增強(qiáng)蛋白質(zhì)的合成延緩組織的衰老并增強(qiáng)蛋白質(zhì)的合成 用于離體成花的調(diào)控用于離體成花的調(diào)控 溶于溶于0.50.5-1.0mol/L1.0mol/L的鹽酸或稀薄的的鹽酸或稀薄的NaOHNaOH中中 常用的細(xì)胞分裂素：常用的細(xì)胞分裂素： KT (KT (激動(dòng)素激動(dòng)素) ) BA(6- BA(6-卞基腺嘌呤卞基腺嘌呤) ) 2-ip( 2-ip(異戊烯氨基嘌呤異戊烯氨基嘌呤) ) ZT ZT（玉米素）（玉米素）473.赤霉素類(lèi)和脫落酸赤霉素類(lèi)和脫落酸A、赤霉素類(lèi)、赤霉素類(lèi) 組織培養(yǎng)中不常使用組織培養(yǎng)中不常使用 加速細(xì)胞的伸長(zhǎng)生長(zhǎng)加速細(xì)胞

13、的伸長(zhǎng)生長(zhǎng) 促進(jìn)細(xì)胞的分裂促進(jìn)細(xì)胞的分裂 主要是主要是GA3 B、脫落酸、脫落酸 抑制細(xì)胞分裂和伸長(zhǎng)抑制細(xì)胞分裂和伸長(zhǎng) 促進(jìn)脫落和衰老促進(jìn)脫落和衰老 促進(jìn)休眠和提高抗逆能力促進(jìn)休眠和提高抗逆能力GA3脫落酸脫落酸48 促進(jìn)某些愈傷組織和器官的生長(zhǎng)促進(jìn)某些愈傷組織和器官的生長(zhǎng) 化學(xué)成分不明、復(fù)雜化學(xué)成分不明、復(fù)雜 天然營(yíng)養(yǎng)混合物天然營(yíng)養(yǎng)混合物如：水解酪蛋白、玉米胚乳、酵母提取物如：水解酪蛋白、玉米胚乳、酵母提取物（五）天然復(fù)合物（五）天然復(fù)合物49 50（六）（六）pH 在滅菌前，培養(yǎng)基的在滅菌前，培養(yǎng)基的pH一般被調(diào)節(jié)一般被調(diào)節(jié)到到5.06.0 之間，最常用的之間，最常用的pH為為5.75.8

14、。 pH過(guò)高時(shí)，培養(yǎng)基會(huì)變硬；過(guò)高時(shí)，培養(yǎng)基會(huì)變硬；pH過(guò)過(guò)低時(shí)，則影響培養(yǎng)基的凝固低時(shí)，則影響培養(yǎng)基的凝固。50（七）凝固劑（七）凝固劑瓊脂是使用最普遍的凝固劑瓊脂是使用最普遍的凝固劑用量一般在用量一般在6-10g/L之間之間顏色以淺、透明度高好，潔顏色以淺、透明度高好，潔凈為上品凈為上品 除了瓊脂外，在組織培養(yǎng)除了瓊脂外，在組織培養(yǎng)中還可以使用瓊脂糖、結(jié)冷膠中還可以使用瓊脂糖、結(jié)冷膠等。等。51（八）其他添加物（八）其他添加物521. 1.活性炭活性炭 吸附培養(yǎng)基及培養(yǎng)物分泌物中的抑制物質(zhì)吸附培養(yǎng)基及培養(yǎng)物分泌物中的抑制物質(zhì) 抑制外植體褐變抑制外植體褐變 防止玻璃苗的產(chǎn)生防止玻璃苗的產(chǎn)生

15、促進(jìn)培養(yǎng)物生長(zhǎng)和分化促進(jìn)培養(yǎng)物生長(zhǎng)和分化 促進(jìn)生根促進(jìn)生根 2.抗生素抗生素 防止外植體內(nèi)生菌造成的污染防止外植體內(nèi)生菌造成的污染活性炭活性炭5353二、培養(yǎng)基的基本類(lèi)型二、培養(yǎng)基的基本類(lèi)型培養(yǎng)基形態(tài)不同：培養(yǎng)基形態(tài)不同：固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基培養(yǎng)過(guò)程不同：培養(yǎng)過(guò)程不同：初代培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基初代培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基其作用不同：其作用不同：誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基 營(yíng)養(yǎng)水平不同：營(yíng)養(yǎng)水平不同：基本培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基（一）培養(yǎng)基的種類(lèi)（一）培養(yǎng)基的種類(lèi)成分和濃度不同：成分和濃度不同：含鹽量較高的培養(yǎng)基、硝酸鉀含

16、量含鹽量較高的培養(yǎng)基、硝酸鉀含量較高的培養(yǎng)基、中等無(wú)機(jī)鹽含量的培養(yǎng)基、低無(wú)機(jī)鹽含較高的培養(yǎng)基、中等無(wú)機(jī)鹽含量的培養(yǎng)基、低無(wú)機(jī)鹽含量的培養(yǎng)基量的培養(yǎng)基54541、MS培養(yǎng)基培養(yǎng)基 無(wú)機(jī)鹽濃度高無(wú)機(jī)鹽濃度高 高含量的氮、鉀，尤其是硝酸鹽高含量的氮、鉀，尤其是硝酸鹽 含有一定數(shù)量的銨鹽含有一定數(shù)量的銨鹽 營(yíng)養(yǎng)豐富營(yíng)養(yǎng)豐富 不需要添加更多的有機(jī)附加物不需要添加更多的有機(jī)附加物（二）幾種常見(jiàn)培養(yǎng)基的特點(diǎn)（二）幾種常見(jiàn)培養(yǎng)基的特點(diǎn)2、White培養(yǎng)基培養(yǎng)基 1943年由年由White為培養(yǎng)番茄根尖而設(shè)計(jì)為培養(yǎng)番茄根尖而設(shè)計(jì) 1963年作了改良，提高年作了改良，提高M(jìn)gSO4的濃度和增加硼元素的濃度和增加硼

17、元素 無(wú)機(jī)鹽濃度較低無(wú)機(jī)鹽濃度較低 使用廣泛使用廣泛 在生根培養(yǎng)、胚胎培養(yǎng)中有良好的效果在生根培養(yǎng)、胚胎培養(yǎng)中有良好的效果大量元素大量元素含量含量微量元素微量元素含含量量鐵鹽鐵鹽含量含量有機(jī)物有機(jī)物含含量量其他其他含量含量KNO380H3BO31.5Fe2(SO4)32.5肌醇肌醇100蔗糖蔗糖30000Ca(NO3)2 4H2O300MnSO4 4H2O7.0煙酸煙酸0.3瓊脂瓊脂8000MgSO4 7H2O720ZnSO4 7H2O3.0鹽酸硫胺鹽酸硫胺素素0.1NaH2PO4 4H2O16.5MoO30.0001鹽酸吡哆鹽酸吡哆辛辛0.1KCl65CuSO4 5H2O0.001甘氨酸甘氨

18、酸3Na2SO4200附表：附表：White培養(yǎng)基培養(yǎng)基563、B5培養(yǎng)基培養(yǎng)基 1968年由年由Gamborg等為培養(yǎng)大豆根細(xì)胞而設(shè)計(jì)等為培養(yǎng)大豆根細(xì)胞而設(shè)計(jì) 含有較低的銨鹽含有較低的銨鹽 較高的硝酸鹽和鹽酸硫胺素較高的硝酸鹽和鹽酸硫胺素組成成分組成成分 數(shù)量數(shù)量(mg/l）組成成分組成成分 數(shù)量數(shù)量(mg/l) KNO3 2500 FeSO47H2O27.8 CaCl22H2O 150 CuSO45H2O 0.025 MgSO47H2O 250 蔗糖蔗糖40 (NH4)2SO4 134 pH 5.5KI 0.75 肌醇肌醇100 H3BO4 3.0 煙酸煙酸 1.0 MnSO44H2O 1

19、0 鹽酸吡哆醇鹽酸吡哆醇 1.0 ZnSO47H2O 2.0 激動(dòng)素激動(dòng)素 0.1 Na2MoO42H2O0.25 2,4D 0.11.0 CoCl26H2O0.025 鹽酸硫銨鹽酸硫銨 10 Na2-EDTA37.3 B5培養(yǎng)基的組成和配方培養(yǎng)基的組成和配方574、N6培養(yǎng)基培養(yǎng)基 1974年朱至清等為水稻等禾谷類(lèi)作物花藥培養(yǎng)設(shè)計(jì)年朱至清等為水稻等禾谷類(lèi)作物花藥培養(yǎng)設(shè)計(jì) KNO3和和(NH4)2SO4含量高，不含鉬含量高，不含鉬組成成分組成成分 數(shù)量數(shù)量(mg/l) 組成成分組成成分(mg/l) KNO3 2.3 Na2EDTA 37.3 CaCl22H2O 166 FeSO47H2O 27

20、.8 MgSO47H2O 185蔗糖蔗糖 50 KH2PO4 400 pH 5.8 (NH4)2SO4 463 煙酸煙酸 0.5 KI 0.8 鹽酸吡哆醇鹽酸吡哆醇 0.5 H3BO3 1.6 甘氨酸甘氨酸 2.0 MnSO44H2O 4.4 鹽酸硫銨鹽酸硫銨 1.0 ZnSO47H2O 1.5N6培養(yǎng)基組成及配方培養(yǎng)基組成及配方58第三章第三章 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件 為了減少工作量，減小誤差，最方便為了減少工作量，減小誤差，最方便的方法是預(yù)先配制好不同組分的培養(yǎng)基母的方法是預(yù)先配制好不同組分的培養(yǎng)基母液。液。 601.配制母液原則配制母液原則 相同類(lèi)型的試劑混合；相同類(lèi)型的試劑混

21、合； 易形成沉淀的藥品分開(kāi)；易形成沉淀的藥品分開(kāi)； 母液濃度要適宜；母液濃度要適宜； 用量要認(rèn)真計(jì)算和核對(duì)；用量要認(rèn)真計(jì)算和核對(duì)； 藥品要準(zhǔn)確稱(chēng)量。藥品要準(zhǔn)確稱(chēng)量。 61 2.MS培養(yǎng)基母液的配制培養(yǎng)基母液的配制 62 MS培養(yǎng)基母液根據(jù)試劑特性通常配成培養(yǎng)基母液根據(jù)試劑特性通常配成五種母五種母液液，即大量元素母液（即大量元素母液（10或或20倍）、微量元素母液倍）、微量元素母液（100或或1000倍）、倍）、Fe鹽（鹽（100倍）、倍）、Ca鹽（鹽（50倍）、倍）、有機(jī)物（有機(jī)物（100倍）倍）。 633.激素母液的配制激素母液的配制 64生長(zhǎng)素類(lèi)、赤霉素類(lèi)及脫落酸等用生長(zhǎng)素類(lèi)、赤霉素類(lèi)及脫

22、落酸等用95乙醇溶解；乙醇溶解；細(xì)胞分裂素類(lèi)用細(xì)胞分裂素類(lèi)用1N HCl或或1N NaOH溶解。溶解。 通常激素母液濃度生長(zhǎng)素類(lèi)為通常激素母液濃度生長(zhǎng)素類(lèi)為0.10.5 mg/ml, 細(xì)胞分裂素母液濃度為細(xì)胞分裂素母液濃度為0.21.0 mg/ml.二、培養(yǎng)基的配制二、培養(yǎng)基的配制 水水藥品藥品糖糖瓊脂瓊脂混合混合加熱加熱溶解溶解調(diào)整調(diào)整pH玻璃器皿玻璃器皿水洗水洗干燥干燥分裝分裝滅菌滅菌封口封口冷卻冷卻接種接種1、取出母液并按順序放好。將潔凈的各種玻璃、取出母液并按順序放好。將潔凈的各種玻璃器皿如量筒、容量瓶、移液管、移液槍和玻璃器皿如量筒、容量瓶、移液管、移液槍和玻璃棒等放在指定位置；棒等

23、放在指定位置；2、取一只容量瓶，放入配制培養(yǎng)基總量的、取一只容量瓶，放入配制培養(yǎng)基總量的1/3左左右純水，將母液按順序加入，并不斷攪拌；右純水，將母液按順序加入，并不斷攪拌；3、加入植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑后定容；、加入植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑后定容；培養(yǎng)基的配制的培養(yǎng)基的配制的具體步驟具體步驟：4、將定容的培養(yǎng)基倒入容器中，加入蔗糖和瓊脂，、將定容的培養(yǎng)基倒入容器中，加入蔗糖和瓊脂，并加熱使其完全溶解；并加熱使其完全溶解；5、調(diào)整、調(diào)整pH；6、將培養(yǎng)基分裝倒培養(yǎng)器皿中，封好瓶口；、將培養(yǎng)基分裝倒培養(yǎng)器皿中，封好瓶口；7、滅菌，用高壓鍋滅菌（、滅菌，用高壓鍋滅菌（121，1520min）或過(guò)）或過(guò)濾除菌；濾除菌

24、；8、滅菌后待高壓鍋溫度下降到、滅菌后待高壓鍋溫度下降到50以下時(shí)，便可以以下時(shí)，便可以取出、冷卻凝固后待用。取出、冷卻凝固后待用。 6869三、培養(yǎng)基的保存三、培養(yǎng)基的保存 配制好的培養(yǎng)基一般要在室溫、黑暗且清潔的地方配制好的培養(yǎng)基一般要在室溫、黑暗且清潔的地方放置放置35天再使用天再使用。 保存時(shí)間太久，培養(yǎng)基可能會(huì)保存時(shí)間太久，培養(yǎng)基可能會(huì)污染、脫水、易分解的污染、脫水、易分解的成分會(huì)發(fā)生分解，培養(yǎng)基成分會(huì)發(fā)生較大的變化。成分會(huì)發(fā)生分解，培養(yǎng)基成分會(huì)發(fā)生較大的變化。 每批培養(yǎng)基均必須附有該批培養(yǎng)基制備記錄副頁(yè)或明每批培養(yǎng)基均必須附有該批培養(yǎng)基制備記錄副頁(yè)或明顯標(biāo)簽。顯標(biāo)簽。 四、培養(yǎng)條件

25、四、培養(yǎng)條件71溫度溫度光照光照濕度濕度氣體氣體培養(yǎng)基的滲透壓培養(yǎng)基的滲透壓pH值值植物材料一般最適溫度在植物材料一般最適溫度在252之間之間環(huán)境條件環(huán)境條件光強(qiáng)：光強(qiáng)： 10006000 lx一般情況下，培養(yǎng)器內(nèi)相對(duì)濕度應(yīng)達(dá)一般情況下，培養(yǎng)器內(nèi)相對(duì)濕度應(yīng)達(dá)100%，培養(yǎng)室內(nèi)環(huán)境的相對(duì)濕度在培養(yǎng)室內(nèi)環(huán)境的相對(duì)濕度在70%80% 氧氣是愈傷組織生長(zhǎng)所必需的氧氣是愈傷組織生長(zhǎng)所必需的 調(diào)節(jié)滲透壓常常從糖入手調(diào)節(jié)滲透壓常常從糖入手 植物組織培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)基的植物組織培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)基的pH值大多在值大多在5.06.5光質(zhì)：光質(zhì)：影響細(xì)胞分裂和器官分化影響細(xì)胞分裂和器官分化光周期：光周期：光照光照16h，黑暗，

26、黑暗8h 第三節(jié)第三節(jié) 基本操作基本操作一、洗滌一、洗滌1、玻璃器皿洗滌、玻璃器皿洗滌新購(gòu)置玻新購(gòu)置玻璃器皿璃器皿1%稀稀HCl浸漬浸漬12h洗衣粉洗衣粉洗滌洗滌清水清水沖洗沖洗晾干晾干備用備用已用過(guò)的已用過(guò)的玻璃器皿玻璃器皿2、塑料用品洗滌、塑料用品洗滌塑料器皿塑料器皿2%NaOH浸泡浸泡12h清水清水沖洗沖洗2%5%鹽鹽酸浸泡酸浸泡30min清水清水沖洗沖洗蒸餾水蒸餾水沖洗沖洗晾干備用晾干備用733、金屬用品洗滌、金屬用品洗滌熱洗衣粉水熱洗衣粉水洗凈洗凈沖洗沖洗擦干擦干74751. 1.滅菌方法：滅菌方法：（1 1）物理方法：）物理方法： 物理滅菌干熱、濕熱、射線(xiàn)處理、物理除菌、過(guò)物理滅菌

27、干熱、濕熱、射線(xiàn)處理、物理除菌、過(guò)濾、離心、沉淀等濾、離心、沉淀等（2 2）化學(xué)方法：）化學(xué)方法： 消毒劑、抗菌素滅菌消毒劑、抗菌素滅菌 75二、消毒滅菌二、消毒滅菌2、滅菌、滅菌（1）培養(yǎng)基滅菌：）培養(yǎng)基滅菌：高溫高壓濕熱滅菌法高溫高壓濕熱滅菌法 壓力在壓力在9.810410.8104Pa 溫度在溫度在121 滅菌滅菌2030min（2）玻璃器皿滅菌：）玻璃器皿滅菌：蒸汽高壓消毒滅菌蒸汽高壓消毒滅菌 干熱消毒滅菌干熱消毒滅菌76飽和蒸汽壓力與其對(duì)應(yīng)的溫度飽和蒸汽壓力與其對(duì)應(yīng)的溫度飽和蒸汽壓力溫度（）飽和蒸汽壓力溫度（）kg/cm21b/m2kg/cm21b/m20.00.1410.2810.

28、4420.5630.7030.8440.98402468101214100103.6106.9109.8112.6115.2117.6119.91.0001.0551.1251.2661.4061.5431.6811516182022243050121.0122.0124.1126.0127.8129.6134.5147.677（3）塑料器皿滅菌：塑料器皿滅菌： 多采用多采用高壓蒸汽消毒滅菌高壓蒸汽消毒滅菌（4）金屬用具滅菌：）金屬用具滅菌：灼燒滅菌灼燒滅菌 浸入浸入95%酒精，后置于酒精火焰上灼燒，冷卻后使用酒精，后置于酒精火焰上灼燒，冷卻后使用（5）過(guò)濾滅菌：）過(guò)濾滅菌： 一些一些生長(zhǎng)調(diào)節(jié)

29、劑生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，如，如赤霉素、玉米素、脫落酸和某些維赤霉素、玉米素、脫落酸和某些維生素生素。 78（6）接種室滅菌）接種室滅菌空氣消空氣消毒滅菌毒滅菌接種室接種室超凈工超凈工作臺(tái)作臺(tái)紫外燈紫外燈照射照射70%75%的酒精擦洗的酒精擦洗培養(yǎng)材料培養(yǎng)材料的接種的接種紫外燈紫外燈照射照射79（7）外植體滅菌）外植體滅菌流水沖洗流水沖洗1020min或更長(zhǎng)時(shí)間或更長(zhǎng)時(shí)間70%75%酒精中浸泡酒精中浸泡30s0.1%0.2%氯化汞氯化汞液中浸泡液中浸泡10min左右左右蒸餾水沖洗蒸餾水沖洗45次次在在10%的次氯酸鈉、的次氯酸鈉、飽和漂白粉浸泡飽和漂白粉浸泡30min左右左右備用備用80常用消毒劑消毒滅菌比較表常用消毒劑消毒滅菌比較表消毒劑使用濃度（%）去除難易消毒時(shí)間（min）效果次氯酸鈣次氯酸鈉漂白粉溴水過(guò)氧化氫升汞酒精抗生素硝酸銀9102飽和溶液1210120.11707545（mg/L1易易易易最易較難易中較難530530