生化系統(tǒng)有效性資料教學(xué)文稿

1、生化系統(tǒng)有效性資料 技術(shù)規(guī)范 管理到位 質(zhì)量達標(biāo) 傳統(tǒng)的臨床檢驗，包括生化檢驗多是手傳統(tǒng)的臨床檢驗，包括生化檢驗多是手工勞動。工勞動。 要求技術(shù)人員要求技術(shù)人員: : 技能嫻熟的，技能嫻熟的， 操作專注，操作專注， 勞動強度大，勞動強度大， 工作效率低，工作效率低， 操作結(jié)果存在明顯的個人差異操作結(jié)果存在明顯的個人差異, , 可比性和質(zhì)量受到影響?？杀刃院唾|(zhì)量受到影響。 不適應(yīng)臨床醫(yī)學(xué)的發(fā)展。不適應(yīng)臨床醫(yī)學(xué)的發(fā)展。 自動檢測起源于二十世紀的自動檢測起源于二十世紀的80年代，年代， 西方發(fā)達國家和日本西方發(fā)達國家和日本 電子學(xué)電子學(xué) 光學(xué)光學(xué) 機器人機器人全自動自動化的進程全自動自動化的進程 計

2、算機和網(wǎng)絡(luò)技術(shù)計算機和網(wǎng)絡(luò)技術(shù) 生物技術(shù)生物技術(shù) 酶和蛋白質(zhì)純化酶和蛋白質(zhì)純化 抗體制備，特別是單克隆抗體的制備抗體制備，特別是單克隆抗體的制備 加速了加速了我國我國 80年代：引進自動生化分析儀，年代：引進自動生化分析儀， 90年代：引進自動免疫分析儀年代：引進自動免疫分析儀 全自動血球計數(shù)儀全自動血球計數(shù)儀 尿液自動分析儀尿液自動分析儀 微生物培養(yǎng)與鑒定微生物培養(yǎng)與鑒定 新千年：自主研發(fā)出自動生化分析儀新千年：自主研發(fā)出自動生化分析儀 血球計數(shù)儀血球計數(shù)儀自動化遍及到醫(yī)學(xué)檢驗的所有領(lǐng)域自動化遍及到醫(yī)學(xué)檢驗的所有領(lǐng)域 如核酸的提取如核酸的提取 酶聯(lián)免疫自動加樣酶聯(lián)免疫自動加樣 流水線流水線

3、根據(jù)自動程度根據(jù)自動程度生化分析儀生化分析儀 半自動生化分析儀半自動生化分析儀 全自動生化分析儀全自動生化分析儀 第一部分第一部分 半自動生化分析半自動生化分析（一）主要技術(shù)指標(biāo)（一）主要技術(shù)指標(biāo)分析過程中的部分操作：分析過程中的部分操作：加樣加樣加試劑加試劑 手工完成手工完成混勻混勻吸入吸入 比色比色孵育孵育 自動完成自動完成結(jié)果計算結(jié)果計算 半自動生化分析儀半自動生化分析儀 特點特點 體積小體積小 結(jié)構(gòu)簡單結(jié)構(gòu)簡單 操作方便操作方便 普通檢查普通檢查 （特種蛋白檢測有困難）（特種蛋白檢測有困難） 適合診所適合診所 吸吸樣樣廢廢液液蠕蠕動動泵泵 比比 色：石英鹵素?zé)?；色：石英鹵素?zé)簦?.00

4、1Abs 比比例例泵泵Peltier控溫控溫反應(yīng)液（吸液量）：反應(yīng)液（吸液量）：500l左右左右微量流動比色池：數(shù)十微升微量流動比色池：數(shù)十微升恒溫器在數(shù)秒內(nèi)使反應(yīng)平衡到要求的溫度恒溫器在數(shù)秒內(nèi)使反應(yīng)平衡到要求的溫度溫度波動應(yīng)：小于溫度波動應(yīng)：小于0.1結(jié)果：結(jié)果： 由顯示窗顯示由顯示窗顯示 打印打印 通過接口將數(shù)據(jù)輸出通過接口將數(shù)據(jù)輸出測定方法：測定方法： 動力學(xué)動力學(xué) 兩點法兩點法 終點法檢測終點法檢測編排項目：編排項目： 30- -100（二）使用注意（二）使用注意事項事項 1.儀器穩(wěn)定：儀器穩(wěn)定： 電壓，溫度，濕度電壓，溫度，濕度 2.規(guī)定的清洗液清洗管道規(guī)定的清洗液清洗管道 實驗間隔

5、，管道用實驗間隔，管道用一般情況：去離子水清洗一般情況：去離子水清洗 堿性液清洗堿性液清洗 去離子水清洗去離子水清洗特殊情況：去離子水清洗特殊情況：去離子水清洗 酸性液清洗酸性液清洗 去離子水清洗去離子水清洗 3.3.* *基于一級反應(yīng)的動力學(xué)法測定項目基于一級反應(yīng)的動力學(xué)法測定項目 要嚴格掌握要嚴格掌握啟動反應(yīng)即刻和吸樣并開始記錄吸光度的時間啟動反應(yīng)即刻和吸樣并開始記錄吸光度的時間* *基于零級反應(yīng)的動力學(xué)法測定項目基于零級反應(yīng)的動力學(xué)法測定項目 （酶催化活性濃度）（酶催化活性濃度）控制控制啟動反應(yīng)和吸樣并開始記錄吸光度的時間啟動反應(yīng)和吸樣并開始記錄吸光度的時間不能擅自縮短延遲時間不能擅自縮

6、短延遲時間*終點法測定終點法測定注意到：顯色產(chǎn)物放置時間對測定具有影響注意到：顯色產(chǎn)物放置時間對測定具有影響*動力學(xué)測定法動力學(xué)測定法 代謝物代謝物 連續(xù)監(jiān)測法連續(xù)監(jiān)測法 酶活力濃度酶活力濃度 注意到：在測定的延遲期內(nèi)底物消耗注意到：在測定的延遲期內(nèi)底物消耗 溫度控制溫度控制 光源光源 比色杯比色杯 檢測器檢測器 數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)處理 打印輸出打印輸出 定量注加系統(tǒng)定量注加系統(tǒng) 樣本樣本 試劑試劑取樣、加試劑、混合、孵育反應(yīng)、檢測、結(jié)果計算、清洗取樣、加試劑、混合、孵育反應(yīng)、檢測、結(jié)果計算、清洗由儀器自動完成由儀器自動完成 二、二、全自動生化分析儀全自動生化分析儀連續(xù)流動式（管道式）連續(xù)流動式（管

7、道式）離心式離心式分立式分立式干式干式 分立式生化分析儀分立式生化分析儀 儀器機械手向分立的比色皿中自動定量注加樣儀器機械手向分立的比色皿中自動定量注加樣本和試劑，一定溫度下孵育反應(yīng)分別進行比色本和試劑，一定溫度下孵育反應(yīng)分別進行比色測定。測定。 “順序分析順序分析” 離心式自動生化分析儀離心式自動生化分析儀 結(jié)構(gòu)特點結(jié)構(gòu)特點: : 化學(xué)反應(yīng)器裝在離心機的轉(zhuǎn)子位置上化學(xué)反應(yīng)器裝在離心機的轉(zhuǎn)子位置上 儀器機械臂自動將樣品和試劑分別置于轉(zhuǎn)頭中儀器機械臂自動將樣品和試劑分別置于轉(zhuǎn)頭中 的樣品槽和試劑槽中。的樣品槽和試劑槽中。 離心機開動后圓盤內(nèi)的樣品和試劑受離心力的離心機開動后圓盤內(nèi)的樣品和試劑受離

8、心力的 作用流入盤外比色槽中，混合發(fā)生反應(yīng)，通過作用流入盤外比色槽中，混合發(fā)生反應(yīng)，通過 比色計進行檢測。比色計進行檢測。分析特點分析特點: :基于基于“同步分析同步分析”的原理而設(shè)計的原理而設(shè)計 不是隨機任選式不是隨機任選式, ,按項目順序分析按項目順序分析比色杯必須人工清洗比色杯必須人工清洗水平測光和垂直測光兩種方式水平測光和垂直測光兩種方式 A=ECL A=EC(TV/S)A=ECL A=EC(TV/S) 干化學(xué)生化分析儀干化學(xué)生化分析儀反應(yīng)在固相載體上，反應(yīng)在固相載體上，測定的是折射光測定的是折射光檢測系統(tǒng)進行檢測的一類儀器檢測系統(tǒng)進行檢測的一類儀器分為全自動、半自動生化分析儀分為全自

9、動、半自動生化分析儀檢測項目：檢測項目： 普通臨床生物化學(xué)檢驗普通臨床生物化學(xué)檢驗 藥物檢測藥物檢測 蛋白測定蛋白測定 第二部分第二部分 自動生化分析自動生化分析第二部分第二部分 自動生化分析儀自動生化分析儀主要結(jié)構(gòu)主要結(jié)構(gòu)1.1.樣品裝載裝置樣品裝載裝置 樣品盤樣品盤 弧弧 樣品架樣品架 直直 2.2.輸送裝置輸送裝置-傳送帶傳送帶靠步進馬達驅(qū)動靠步進馬達驅(qū)動將試管架依次前移將試管架依次前移再單架逐管橫移至固定位置再單架逐管橫移至固定位置樣品分配臂采樣樣品分配臂采樣 3.3.取樣單元取樣單元 組成：組成：取樣針取樣針取樣臂取樣臂取樣注射器取樣注射器前進馬達前進馬達采樣針結(jié)構(gòu)特點：采樣針結(jié)構(gòu)特

10、點：針的前端有液面?zhèn)鞲衅麽樀那岸擞幸好鎮(zhèn)鞲衅?防止空吸或深入采血管下層的凝血塊防止空吸或深入采血管下層的凝血塊 采樣單元的故障高采樣單元的故障高主要原因主要原因 血樣血樣 表面有氣泡表面有氣泡 未完全凝固就進行測定未完全凝固就進行測定 極易導(dǎo)致加樣針阻塞極易導(dǎo)致加樣針阻塞 此樣本的測定值也假性降低；此樣本的測定值也假性降低；加樣針偏離正確位置加樣針偏離正確位置 應(yīng)經(jīng)常注意觀察應(yīng)經(jīng)常注意觀察樣品杯或樣品管口徑小樣品杯或樣品管口徑小 樣品管過細樣品管過細 取樣針扎偏：破壞采樣裝置取樣針扎偏：破壞采樣裝置4.4.注加試劑單元注加試劑單元 組成：組成：試劑針試劑針試劑瓶和試劑倉試劑瓶和試劑倉試劑臂試劑

11、臂取試劑注射器取試劑注射器前進馬達構(gòu)前進馬達構(gòu)試劑取樣針試劑取樣針前端有液面?zhèn)鞲衅鳎悍乐箍瘴蜥樇馍钊朐噭┣岸擞幸好鎮(zhèn)鞲衅鳎悍乐箍瘴蜥樇馍钊朐噭┖械撞恳鹪噭┽樛獗谝后w掛淋。盒底部引起試劑針外壁液體掛淋。雙試劑有第一試劑和第二試劑取樣單元。雙試劑有第一試劑和第二試劑取樣單元。很多試劑內(nèi)具有表面活性物質(zhì)，操作不當(dāng)，如很多試劑內(nèi)具有表面活性物質(zhì)，操作不當(dāng)，如震蕩試劑瓶，或加試劑的速度過快，試劑表面會震蕩試劑瓶，或加試劑的速度過快，試劑表面會有氣泡，此時試劑取樣針前端的液面?zhèn)鞲衅饕矔袣馀荩藭r試劑取樣針前端的液面?zhèn)鞲衅饕矔`以為取到樣品，致使測定結(jié)果的偏差。誤以為取到樣品，致使測定結(jié)果的偏差。試

12、劑瓶試劑瓶形狀及大小規(guī)格不同形狀及大小規(guī)格不同應(yīng)根據(jù)工作量考慮試劑規(guī)格應(yīng)根據(jù)工作量考慮試劑規(guī)格殘留試劑反復(fù)使用會影響結(jié)果的準確性殘留試劑反復(fù)使用會影響結(jié)果的準確性要考慮試劑開蓋后在使用過程中的穩(wěn)定性要考慮試劑開蓋后在使用過程中的穩(wěn)定性不要在運行中添加、更換試劑不要在運行中添加、更換試劑封閉系統(tǒng)使用的試劑具有條形碼封閉系統(tǒng)使用的試劑具有條形碼 儀器設(shè)有條形碼檢查系統(tǒng)，對試劑的種類、儀器設(shè)有條形碼檢查系統(tǒng)，對試劑的種類、批號、規(guī)格、有效期等資料，進行核對校驗批號、規(guī)格、有效期等資料，進行核對校驗* *注意事項：注意事項：加樣臂和試劑臂的活動區(qū)不可放置任何物加樣臂和試劑臂的活動區(qū)不可放置任何物 品品

13、儀器在運行過程中不可用手調(diào)整任何部件，儀器在運行過程中不可用手調(diào)整任何部件， 以免發(fā)生穿刺傷以免發(fā)生穿刺傷 樣品和試劑的定量注加系統(tǒng)需要定期校正樣品和試劑的定量注加系統(tǒng)需要定期校正5.5.反應(yīng)單元反應(yīng)單元組成：組成：反應(yīng)盤反應(yīng)盤 混合裝置混合裝置 溫控裝置溫控裝置 反應(yīng)盤反應(yīng)盤多為轉(zhuǎn)盤式多為轉(zhuǎn)盤式按固定程序轉(zhuǎn)動按固定程序轉(zhuǎn)動反應(yīng)和檢測同在比色杯中進行反應(yīng)和檢測同在比色杯中進行比色杯：石英玻璃比色杯：石英玻璃 無紫外光吸收的塑料無紫外光吸收的塑料混合裝置混合裝置 攪拌棒攪拌棒 攪拌棒具特氟隆不沾涂層攪拌棒具特氟隆不沾涂層 超聲波超聲波6.6.孵育反應(yīng)溫控裝置孵育反應(yīng)溫控裝置孵育溫度的調(diào)控和恒定由

14、計算機控制孵育溫度的調(diào)控和恒定由計算機控制理想的孵育溫度波動應(yīng)小于理想的孵育溫度波動應(yīng)小于0.10.1 應(yīng)該定期檢測應(yīng)該定期檢測（水浴裝置的控溫性能可自行檢測，采用國（水浴裝置的控溫性能可自行檢測，采用國家計量院校準的溫度計測定水溫）家計量院校準的溫度計測定水溫）保持恒溫的方式有三種保持恒溫的方式有三種空氣浴恒溫：空氣浴恒溫： 在比色杯與加熱器之間隔有空氣?？赵诒壬c加熱器之間隔有空氣?？諝庠『銣氐奶攸c是方便、速度快、不需要氣浴恒溫的特點是方便、速度快、不需要特殊材料，但穩(wěn)定性和均勻性與各廠家的特殊材料，但穩(wěn)定性和均勻性與各廠家的設(shè)計有關(guān)。設(shè)計有關(guān)。水浴循環(huán)恒溫式水浴循環(huán)恒溫式 在比色杯周圍

15、充盈有在比色杯周圍充盈有水，加熱器控制水的溫度。水，加熱器控制水的溫度。水浴恒熱的特點是溫度恒水浴恒熱的特點是溫度恒定，但需特殊的防腐劑以定，但需特殊的防腐劑以保證水質(zhì)的潔凈，且要定保證水質(zhì)的潔凈，且要定期更換循環(huán)水。期更換循環(huán)水。恒溫液循環(huán)間接加熱式恒溫液循環(huán)間接加熱式 比色杯周圍流動著一種特殊的恒溫液比色杯周圍流動著一種特殊的恒溫液（具無味、無污染、惰性、不蒸發(fā)等特（具無味、無污染、惰性、不蒸發(fā)等特點）。比色杯和恒溫液之間有極小的空氣點）。比色杯和恒溫液之間有極小的空氣狹縫，恒溫液通過加熱狹縫的空氣達到恒狹縫，恒溫液通過加熱狹縫的空氣達到恒溫。與水浴式循環(huán)式相比不需要特殊保養(yǎng)溫。與水浴式循

16、環(huán)式相比不需要特殊保養(yǎng)。7.7.清洗系統(tǒng)清洗系統(tǒng)探針和攪拌棒采用激流式或瀑布式等方式探針和攪拌棒采用激流式或瀑布式等方式自動沖洗。自動沖洗。比色杯清洗裝置比色杯清洗裝置 吸液針吸液針 吐液針吐液針 擦拭刷擦拭刷 吸去杯壁上掛淋的水，吸去杯壁上掛淋的水， 刷體內(nèi)部有負壓抽吸裝置刷體內(nèi)部有負壓抽吸裝置 注意擦拭刷是否磨損注意擦拭刷是否磨損清洗工作流程清洗工作流程吸出反應(yīng)液（吸干）吸出反應(yīng)液（吸干）注入洗液（吸干）注入洗液（吸干） 堿性液沖洗堿性液沖洗 酸性液沖洗酸性液沖洗 去離子水沖洗三遍去離子水沖洗三遍擦干擦干應(yīng)用生化分析儀的重要注意事項：應(yīng)用生化分析儀的重要注意事項：啟用前：啟用前： 正確安裝

17、、調(diào)試正確安裝、調(diào)試 檢測方法學(xué)的驗證檢測方法學(xué)的驗證 攜帶和交叉污染試驗及糾正攜帶和交叉污染試驗及糾正啟用后：啟用后： 正確使用、維護和保養(yǎng)正確使用、維護和保養(yǎng) 質(zhì)量控制質(zhì)量控制攜帶（交叉）污染攜帶（交叉）污染 測試項目測試項目 A A試劑殘留（試劑針、攪拌棒、比色杯）試劑殘留（試劑針、攪拌棒、比色杯） 干擾下一個測試干擾下一個測試 B B樣本樣本1(1(高濃度高濃度) )項目項目樣本針樣本針( (攜帶攜帶) )污染污染干擾樣本干擾樣本2 2測定測定引發(fā)交叉污染的原因引發(fā)交叉污染的原因共有化共有化 ( (試劑試劑/ /樣本針樣本針/ /攪拌攪拌) )處理能力提高處理能力提高( ( 犧牲沖洗的

18、強度和時間為代價犧牲沖洗的強度和時間為代價) )使用使用/ /維護不當(dāng)維護不當(dāng) 污垢積聚污垢積聚 沖洗力低下沖洗力低下( (儀器儀器/ /配件老化配件老化/ /欠維護欠維護) )測定次序不當(dāng)測定次序不當(dāng)沖洗方式安排不當(dāng)沖洗方式安排不當(dāng)試劑組成試劑組成樣本攜帶交叉污染樣本攜帶交叉污染平均值平均值A(chǔ)平均值平均值B213579116421 2224262818314681115171020232527121929試劑攜帶交叉污染試劑攜帶交叉污染 AmylaseAmylase試劑試劑 鈣鈣 ALPALP試劑試劑 鎂鎂 鎂試劑鎂試劑 鐵鐵 含磷酸鹽的緩沖液含磷酸鹽的緩沖液 磷磷 膽固醇試劑膽固醇試劑 膽

19、汁酸膽汁酸 基于基于TrinderTrinder反應(yīng)反應(yīng) 基于基于TrinderTrinder反應(yīng)反應(yīng) 高含量測定項目高含量測定項目(Glu) (Glu) 高含量測定項目高含量測定項目(Ua)(Ua) 試劑廠家應(yīng)提供特定儀器試劑廠家應(yīng)提供特定儀器, ,一定試劑排序后一定試劑排序后, ,測定交叉污染測定交叉污染; ; 實驗室的試劑排位與試劑廠家推薦的不同實驗室的試劑排位與試劑廠家推薦的不同, ,或或試劑生產(chǎn)企業(yè)未能夠提供試劑交叉污染試驗結(jié)試劑生產(chǎn)企業(yè)未能夠提供試劑交叉污染試驗結(jié)果果, ,應(yīng)該自己應(yīng)該自己, ,或請有經(jīng)驗的技術(shù)支持做交叉污或請有經(jīng)驗的技術(shù)支持做交叉污染試驗染試驗; ; , ,杯空白

20、升高，杯間差變大杯空白升高，杯間差變大殘留成分對下一分析的影響殘留成分對下一分析的影響第第1循環(huán)循環(huán)全部項目全部項目第第2、3、4、5循循環(huán)受干擾項目環(huán)受干擾項目較大的偶然誤差較大的偶然誤差, ,一般是由一般是由于于殘留成分的影響殘留成分的影響8 8比色系統(tǒng)比色系統(tǒng)(1)(1)光源光源 鹵素?zé)酐u素?zé)? ,波長波長:325:325800nm800nm氙燈氙燈, ,波長波長: 285: 285750 nm 750 nm 壽命長壽命長發(fā)光強度不夠時，儀器會自動報警，應(yīng)及時更換發(fā)光強度不夠時，儀器會自動報警，應(yīng)及時更換 （2 2）比色杯）比色杯 比色杯也是反應(yīng)杯比色杯也是反應(yīng)杯 光徑光徑0.5-0.7

21、cm0.5-0.7cm 材料：石英、硬質(zhì)玻璃或優(yōu)質(zhì)塑料材料：石英、硬質(zhì)玻璃或優(yōu)質(zhì)塑料 要定期檢查清洗要定期檢查清洗 及時更換不合格的比色杯及時更換不合格的比色杯（3 3） 單色器單色器 各類自動生化分析儀應(yīng)用的是可見各類自動生化分析儀應(yīng)用的是可見- -紫外吸收光譜法，即監(jiān)測紫外吸收光譜法，即監(jiān)測200200700nm700nm光區(qū)光區(qū)某特定波長下發(fā)色基團吸光度的變化，輔某特定波長下發(fā)色基團吸光度的變化，輔以微機軟件系統(tǒng)的計算來完成測定以微機軟件系統(tǒng)的計算來完成測定 可見可見- -紫外吸收光譜定量的基礎(chǔ)是紫外吸收光譜定量的基礎(chǔ)是Lamber-BeerLamber-Beer定律。該定律說明的是一定

22、律。該定律說明的是一定濃度范圍內(nèi)吸光物質(zhì)對單色光吸收的定濃度范圍內(nèi)吸光物質(zhì)對單色光吸收的強弱與該物質(zhì)的濃度之間的關(guān)系強弱與該物質(zhì)的濃度之間的關(guān)系 A=-lgT=ECLA=-lgT=ECL 傳統(tǒng)的分光光度測定：傳統(tǒng)的分光光度測定： 前分光前分光 在光源燈和樣品杯之間先要用濾在光源燈和樣品杯之間先要用濾光片、棱鏡或光柵分光，通過可調(diào)的光片、棱鏡或光柵分光，通過可調(diào)的狹縫，取得與樣品狹縫，取得與樣品“互補互補”的單色光的單色光之后，照射到樣品杯，再用光電池或之后，照射到樣品杯，再用光電池或光電管作為檢測器，測定樣量對單色光電管作為檢測器，測定樣量對單色光的吸收量光的吸收量 現(xiàn)代大多生化分析儀采用：現(xiàn)

23、代大多生化分析儀采用： 后分光測量技術(shù)后分光測量技術(shù) 將一束白光（混合光）先照到樣品杯，將一束白光（混合光）先照到樣品杯，然后再用光柵分光，同時用一列發(fā)光二極管然后再用光柵分光，同時用一列發(fā)光二極管排在光柵后面作為檢測器。排在光柵后面作為檢測器。 后分光的優(yōu)點：后分光的優(yōu)點： 是不需移動儀器比色系統(tǒng)中的任何部件，是不需移動儀器比色系統(tǒng)中的任何部件，可同時選用雙波長進行測定，這樣可降低比可同時選用雙波長進行測定，這樣可降低比色的噪聲，提高分析的精確度。色的噪聲，提高分析的精確度。 單色器（分光裝置）：單色器（分光裝置）：濾光片濾光片光柵光柵光柵光柵全息反射式全息反射式 玻璃上覆蓋一層金屬膜后制成

24、，玻璃上覆蓋一層金屬膜后制成， 有一定程度的相差，易被腐蝕有一定程度的相差，易被腐蝕蝕刻式凹面蝕刻式凹面 所選波長固定地刻制在凹面玻璃上，所選波長固定地刻制在凹面玻璃上， 耐磨損、抗腐蝕、無相差耐磨損、抗腐蝕、無相差9.9.樣本條形碼識讀系統(tǒng)樣本條形碼識讀系統(tǒng) 樣本的唯一標(biāo)識清楚樣本的唯一標(biāo)識清楚 記錄樣本采集時間記錄樣本采集時間 記錄樣本接收時間記錄樣本接收時間 減少勞動強度減少勞動強度 自動化的要求自動化的要求 依賴依賴HISHIS的建設(shè)（醫(yī)生工作站）的建設(shè)（醫(yī)生工作站）急診看診門診看診 準備採血試管下醫(yī)囑令急診掛號處門診掛號處下醫(yī)囑令批價收費上傳檢驗報告值下載醫(yī)囑令下醫(yī)囑令批價收費病房看

25、診查詢檢驗報告查詢檢驗報告查詢檢驗報告急診採血 準備採血試管中央採血室(採血)病房採血 準備採血試管 送病房條形碼識讀系統(tǒng)：條形碼識讀系統(tǒng)：掃描系統(tǒng)掃描系統(tǒng)信號整形信號整形譯碼器譯碼器 以光源掃射黑條以光源掃射黑條/ /白空相間的條碼符號白空相間的條碼符號 （一維條碼）（一維條碼） 由于黑條由于黑條/ /白空對光的反射不同白空對光的反射不同 不同寬窄的條符反射光持續(xù)時間不同不同寬窄的條符反射光持續(xù)時間不同 產(chǎn)生強度不同的反射光產(chǎn)生強度不同的反射光 經(jīng)光電轉(zhuǎn)換元件接收并轉(zhuǎn)換成相應(yīng)強度的電信號經(jīng)光電轉(zhuǎn)換元件接收并轉(zhuǎn)換成相應(yīng)強度的電信號 最后通過信號整形，由譯碼器翻譯最后通過信號整形，由譯碼器翻譯用

26、于手工粘貼的普通條碼貼完條碼的試管 All-in-one 的概念條形碼格式與參數(shù)條形碼格式與參數(shù)初步規(guī)劃：大小大小直直/橫式橫式參數(shù)內(nèi)容：參數(shù)內(nèi)容：姓名姓名病歷號碼病歷號碼 性別性別年齡年齡申請科別申請科別病房病房 優(yōu)先優(yōu)先*申請單號申請單號樣本種類樣本種類 抽血量抽血量日期時間日期時間注意事項注意事項 檢驗組別檢驗組別管別索引管別索引抗凝劑抗凝劑 保存期限保存期限 條形碼提供的信息條形碼提供的信息臨床實驗室工作流程與自動化CentrifugeDecappingAliquottingReceptionlabelingSample sorting生物化學(xué)免疫學(xué)免疫學(xué)物理連接多個分析儀的系統(tǒng)樸素樸

27、素功能最大集成化的、模塊組合方式的連接系統(tǒng)（分析儀是一個模塊）發(fā)展發(fā)展生化分析模塊組生化分析模塊組物理物理連接連接多個多個分析儀的系統(tǒng)分析儀的系統(tǒng)前處理功能最大集成化前處理功能最大集成化的、的、模塊組合模塊組合方式的、方式的、物理連接系統(tǒng)（分析儀物理連接系統(tǒng)（分析儀是一個模塊）是一個模塊）模塊組合方式模塊組合方式非在線分析儀方式非在線分析儀方式第三部分第三部分 全自動生化分析儀安裝準備全自動生化分析儀安裝準備1. 1. 自動生化分析儀工作環(huán)境的要求自動生化分析儀工作環(huán)境的要求儀器工作空間儀器工作空間實驗室面積足夠大，以保證儀器的操作、保養(yǎng)、維修實驗室面積足夠大，以保證儀器的操作、保養(yǎng)、維修的方

28、便及各種配套設(shè)施（如純水機、的方便及各種配套設(shè)施（如純水機、UPSUPS不間斷電源）不間斷電源）電腦控制設(shè)備的安置。電腦控制設(shè)備的安置。 儀器工作條件儀器工作條件沒有陽光直接照射沒有陽光直接照射灰塵非常少灰塵非常少平坦沒有震動平坦沒有震動地板承重為儀器重量的地板承重為儀器重量的130%-140%130%-140%接地接地電壓波動電壓波動10%10%避免：化學(xué)腐蝕物品避免：化學(xué)腐蝕物品 灰塵灰塵 電磁輻射電磁輻射 溫度和濕度溫度和濕度 溫度應(yīng)控制在溫度應(yīng)控制在18183030，工作時波動，工作時波動小于小于22，部分儀器內(nèi)設(shè)置了允許溫度范，部分儀器內(nèi)設(shè)置了允許溫度范圍，當(dāng)溫度超過允許范圍時儀器自

29、動停止圍，當(dāng)溫度超過允許范圍時儀器自動停止檢測。檢測。 濕度有嚴格要求，濕度過高可能引起濕度有嚴格要求，濕度過高可能引起儀器部件的生銹發(fā)霉等情況降低使用壽命儀器部件的生銹發(fā)霉等情況降低使用壽命或儀器不工作，過于干燥則可能引起靜電或儀器不工作，過于干燥則可能引起靜電增加，灰塵吸附增加而干擾光路系統(tǒng)的穩(wěn)增加，灰塵吸附增加而干擾光路系統(tǒng)的穩(wěn)定性。定性。電源的要求電源的要求 應(yīng)根據(jù)儀器對電源的要求和總負載量應(yīng)根據(jù)儀器對電源的要求和總負載量設(shè)計專用電路設(shè)計專用電路 要求始終連接符合要求的地線要求始終連接符合要求的地線并連接并連接UPSUPS不間斷電源（最好延時不間斷電源（最好延時3030分鐘以上）。分鐘

30、以上）。 不正常狀態(tài)（如停電等）下的關(guān)機有不正常狀態(tài)（如停電等）下的關(guān)機有可能降低儀器的使用壽命和測定數(shù)據(jù)的丟可能降低儀器的使用壽命和測定數(shù)據(jù)的丟失。失。 2. 2.自動生化分析儀的用水及處理自動生化分析儀的用水及處理 臨床檢驗中必須使用純水配置試劑和臨床檢驗中必須使用純水配置試劑和淋洗容器，完善的純水或精制水的來源才淋洗容器，完善的純水或精制水的來源才能獲得良好的實驗結(jié)果。能獲得良好的實驗結(jié)果。 蒸餾水蒸餾水 蒸餾法是最早使用的純化水的方法，也是蒸餾法是最早使用的純化水的方法，也是普遍使用的方法普遍使用的方法, ,但不是純化水的理想方法。但不是純化水的理想方法。這是因為用大蒸餾器制成的蒸餾水

31、重金屬、無這是因為用大蒸餾器制成的蒸餾水重金屬、無機物、懸浮物和微生物的污染較多，機物、懸浮物和微生物的污染較多，COCO2 2不能不能去除。去除。 蒸餾水的物理化學(xué)檢查見中國藥典二部。蒸餾水的物理化學(xué)檢查見中國藥典二部。去離子水去離子水 原水通過陽離子交換柱時，原水中陽離子與柱中陰原水通過陽離子交換柱時，原水中陽離子與柱中陰離子基團結(jié)合，氫離子被置換出來，當(dāng)經(jīng)陽離子樹脂離子基團結(jié)合，氫離子被置換出來，當(dāng)經(jīng)陽離子樹脂處理過的水流過陰離子交換柱時，水中陰離子滯留在處理過的水流過陰離子交換柱時，水中陰離子滯留在柱中，柱中氫氧根被置換出來，后者與柱中，柱中氫氧根被置換出來，后者與H H反應(yīng)生成水。反

32、應(yīng)生成水。 RH + MRH + M+ + RM +H RM +H （陽離子交換柱）（陽離子交換柱） ROH + XROH + X RX + OHRX + OH （陰離子交換柱）（陰離子交換柱） H H+ + + OH + OH H H2 2O O離子交換樹脂具一定壽命，使用期限與水中離子交換樹脂具一定壽命，使用期限與水中 所含雜質(zhì)量有關(guān)。所含雜質(zhì)量有關(guān)。經(jīng)過陰陽離子交換樹脂后的水應(yīng)不含任何離經(jīng)過陰陽離子交換樹脂后的水應(yīng)不含任何離 子，電阻可達子，電阻可達18M/CM(25)18M/CM(25)，柱效高，電，柱效高，電 阻也大。阻也大。隨著使用時間的延長，純化水的電阻減少，隨著使用時間的延長，

33、純化水的電阻減少， 當(dāng)下降到一定范圍（生化用水應(yīng)當(dāng)下降到一定范圍（生化用水應(yīng)0.5 0.5 M/CM M/CM），應(yīng)更換離子交換柱。），應(yīng)更換離子交換柱。 目前多用混合式離子交換樹脂柱來純化目前多用混合式離子交換樹脂柱來純化水，即在柱內(nèi)裝有陽離子和陰離子交換水，即在柱內(nèi)裝有陽離子和陰離子交換樹脂的混合物。水通過混合床時逐步自樹脂的混合物。水通過混合床時逐步自動去除陰、陽離子。動去除陰、陽離子。離子交換樹脂不能去除水中非電離狀態(tài)離子交換樹脂不能去除水中非電離狀態(tài)的有機物，懸浮顆粒和微生物。的有機物，懸浮顆粒和微生物。離子交換樹脂純化水的方法不應(yīng)單獨應(yīng)離子交換樹脂純化水的方法不應(yīng)單獨應(yīng)用，而應(yīng)放在

34、經(jīng)蒸餾或反滲透裝備后面用，而應(yīng)放在經(jīng)蒸餾或反滲透裝備后面處理經(jīng)其初步純化過的水，以延長交換處理經(jīng)其初步純化過的水，以延長交換柱的壽命。柱的壽命。反滲透水反滲透水 反滲透是用加壓的方法使水滲透過極微反滲透是用加壓的方法使水滲透過極微 小的滲透膜小的滲透膜 反滲透膜的孔徑約為反滲透膜的孔徑約為0.001m0.001m，較細菌，較細菌 （0.40.41m1m），病毒），病毒(0.02(0.020.4m)0.4m)要小要小 可過濾可過濾95%95%以上的溶解和非溶解的無機物、以上的溶解和非溶解的無機物、 重金屬、細菌、病毒顆粒；重金屬、細菌、病毒顆粒； 裝置多放在離子交換柱前，為后者提供初裝置多放在離

35、子交換柱前，為后者提供初 級純水。級純水。4.4.純水系統(tǒng)純水系統(tǒng)-超純水的制備超純水的制備國產(chǎn)純水系統(tǒng)可替代國外產(chǎn)品國產(chǎn)純水系統(tǒng)可替代國外產(chǎn)品純水系統(tǒng)基本組成：純水系統(tǒng)基本組成：聚酯纖維過濾柱聚酯纖維過濾柱5m5m活性碳過濾匣活性碳過濾匣 去除有機物去除有機物反滲透器反滲透器 多級混合離子交換床多級混合離子交換床懸浮粒子膜過濾單元懸浮粒子膜過濾單元0.22m0.22m反滲透反滲透- -離子交換純水制備系統(tǒng)工作流程示意圖離子交換純水制備系統(tǒng)工作流程示意圖目前，對于生化分析儀用水尚無行業(yè)標(biāo)準。目前，對于生化分析儀用水尚無行業(yè)標(biāo)準。但一般可從電阻或電導(dǎo)率、氯離子含量、但一般可從電阻或電導(dǎo)率、氯離子

36、含量、不揮發(fā)物、懸浮物和微生物、有機物幾個不揮發(fā)物、懸浮物和微生物、有機物幾個方面來檢測水的質(zhì)量。檢查方法參照中國方面來檢測水的質(zhì)量。檢查方法參照中國藥典。藥典。臨床化學(xué)實驗室主張用水超純水，以保證臨床化學(xué)實驗室主張用水超純水，以保證實驗結(jié)果的準確性和儀器的正常運轉(zhuǎn)。實驗結(jié)果的準確性和儀器的正常運轉(zhuǎn)。 純水機技術(shù)指標(biāo)：純水機技術(shù)指標(biāo)：采用單片機控制，在線檢測超純水水采用單片機控制，在線檢測超純水水質(zhì)質(zhì)當(dāng)水質(zhì)低于要求時，水質(zhì)報警器可自動當(dāng)水質(zhì)低于要求時，水質(zhì)報警器可自動報警，提示用戶更換超純水柱報警，提示用戶更換超純水柱高水位自動關(guān)機高水位自動關(guān)機低水位自動開機低水位自動開機自動監(jiān)測進水端壓力。

37、當(dāng)水壓不夠時，自動監(jiān)測進水端壓力。當(dāng)水壓不夠時，主機高壓泵自動停止工作，避免高壓泵空主機高壓泵自動停止工作，避免高壓泵空轉(zhuǎn)影響工作轉(zhuǎn)影響工作 進水壓要求0.2Mpa反滲透膜自動沖洗反滲透膜自動沖洗在線監(jiān)測反滲透水電導(dǎo)率，以提示在線監(jiān)測反滲透水電導(dǎo)率，以提示用戶及時更換反滲透膜用戶及時更換反滲透膜水質(zhì)：水質(zhì)：18.318.31 M/CM1 M/CM，2525產(chǎn)水量：產(chǎn)水量：4040140L/h140L/h進水水源：自來水進水水源：自來水電阻率儀量程電阻率儀量程0 020 M/CM20 M/CM，分辨率，分辨率0.1 0.1 M/CMM/CM第四部分第四部分 全自動生化分析儀分析參數(shù)設(shè)置全自動生化

38、分析儀分析參數(shù)設(shè)置 生化分析儀的參數(shù)即儀器工作的生化分析儀的參數(shù)即儀器工作的指令，操作者通過參數(shù)控制儀器完成指令，操作者通過參數(shù)控制儀器完成一系列復(fù)雜而有序的操作程序。一系列復(fù)雜而有序的操作程序。 參數(shù)種類很多，有些參數(shù)是在生參數(shù)種類很多，有些參數(shù)是在生產(chǎn)制造中設(shè)置好的，如分析儀的一些產(chǎn)制造中設(shè)置好的，如分析儀的一些通用操作，取樣、沖洗、檢測、數(shù)據(jù)通用操作，取樣、沖洗、檢測、數(shù)據(jù)處理等，其程序均已經(jīng)固化在存儲器處理等，其程序均已經(jīng)固化在存儲器里，用戶不能修改，只需選擇即可工里，用戶不能修改，只需選擇即可工作。作。 另外一些參數(shù)屬于測試項目的另外一些參數(shù)屬于測試項目的指令，即測定參數(shù)指令，即測定

39、參數(shù) 在我國目前臨床化學(xué)常規(guī)測定在我國目前臨床化學(xué)常規(guī)測定中，使用的分析系統(tǒng)一般有兩種。中，使用的分析系統(tǒng)一般有兩種。 一種是使用原廠家提供的試劑、校一種是使用原廠家提供的試劑、校準品和儀器，即所謂的準品和儀器，即所謂的“封閉系統(tǒng)封閉系統(tǒng)”。 這類系統(tǒng)的測定參數(shù)固化在儀器中，這類系統(tǒng)的測定參數(shù)固化在儀器中，除由于批號改變需要更改校準的定值外，除由于批號改變需要更改校準的定值外，其他測定參數(shù)一般勿需更改。其他測定參數(shù)一般勿需更改。 商品試劑帶有與之配套的校準品，商品試劑帶有與之配套的校準品，這類商品試劑規(guī)定了不同型號生化分析這類商品試劑規(guī)定了不同型號生化分析儀的測定參數(shù)，以保證測定結(jié)果的量值儀的

40、測定參數(shù)，以保證測定結(jié)果的量值溯源。溯源。 這一類測定系統(tǒng)稱為這一類測定系統(tǒng)稱為“開放的配套開放的配套系統(tǒng)系統(tǒng)”。為了保證測定結(jié)果的溯源符合。為了保證測定結(jié)果的溯源符合試劑出品商的聲明，必須嚴格按照試劑試劑出品商的聲明，必須嚴格按照試劑說明書輸入測定參數(shù)。說明書輸入測定參數(shù)。 Why?ISO 15189ISO 15189對檢驗程序的要求對檢驗程序的要求正確度(truness) 結(jié)果水平公認；結(jié)果水平公認； 因手工操作、要求高；因手工操作、要求高； 報告速度；慢無法適用于常規(guī)。報告速度；慢無法適用于常規(guī)。參考實驗室參考實驗室參考方法參考方法參考品參考品有資格的人員有資格的人員患者新鮮標(biāo)本患者新鮮

41、標(biāo)本具有參考值水平的結(jié)果具有參考值水平的結(jié)果一級參考品一級參考品參考方法參考方法常用方法常用方法新鮮患者標(biāo)本新鮮患者標(biāo)本參考值結(jié)果參考值結(jié)果常用方法結(jié)果常用方法結(jié)果標(biāo)化標(biāo)化檢測檢測檢測檢測獲得獲得可比性良好可比性良好校準品校準品獲得獲得校準校準一級參考品一級參考品參考方法參考方法常用方法常用方法新鮮患者標(biāo)本新鮮患者標(biāo)本參考值結(jié)果參考值結(jié)果常用方法結(jié)果常用方法結(jié)果標(biāo)化標(biāo)化檢測檢測檢測檢測獲得獲得可比性良好可比性良好校準品校準品獲得獲得校準校準校校準準品品試試劑劑 儀儀器器患患者者標(biāo)標(biāo)本本檢檢驗驗結(jié)結(jié)果果校校準準按按檢檢測測程程序序檢檢測測具具溯溯源源性性和和可可比比性性常規(guī)測量常規(guī)測量程序程序C

42、DC Approach to TraceabilityHuman Serum Samples Human Serum Samples Reference MethodReference MethodField MethodField MethodAssayAssayPatientPatientSpecimensSpecimensSameSameResultsResults? ?AdjustAdjustCalibrationCalibrationnonoyesyesReferenceReferenceReference methodReference method human sera huma

43、n seraRoutine Routine methodmethodReference standardisation of master calibrator(母校正品定值方案母校正品定值方案 )Routine method with Master-lot calibrator Reference method / material5 human pool sera master calibratorMaster-lot calibrator is mathematically adjustedvia the formula y = ax + b so that slope (a) = 1

44、and intercept (b) = 0Sales calibratorSales calibratorMaster calibratorMaster calibratorRoutine method concentration cRoutine method absorbance AValue assignment in calibrator sales lotsValue assignment in calibrator sales lotsThe sales lots are assigned as unknown samples with the master lot calibra

45、tor on analyzer with the routine method主（母）校準品賦值兩條途徑主（母）校準品賦值兩條途徑 使用人混合血清，通過與參考方使用人混合血清，通過與參考方法的方法學(xué)比較的間接校準。法的方法學(xué)比較的間接校準。 使用一級標(biāo)準使用一級標(biāo)準 ( (參考物質(zhì)參考物質(zhì) 如如. . NIST)NIST)的直接校準。的直接校準。picture placeholder 用于對商品校準品和控制品的賦值用于對商品校準品和控制品的賦值。 源于常規(guī)產(chǎn)品的一個生產(chǎn)批號，與商源于常規(guī)產(chǎn)品的一個生產(chǎn)批號，與商品校準品具有相同基質(zhì)。品校準品具有相同基質(zhì)。 儲存于儲存于-80-80穩(wěn)定約穩(wěn)定約2

46、 2年。年。工廠母校準品（工廠母校準品（Master CalibratorMaster Calibrator）又：主校準品又：主校準品小結(jié)：小結(jié)：必須嚴格按照廠家提出的要求，正確輸入測定必須嚴格按照廠家提出的要求，正確輸入測定參數(shù)；參數(shù)；與特定系統(tǒng)配套的校準品不可用于其它測定系與特定系統(tǒng)配套的校準品不可用于其它測定系統(tǒng)。否則，會影響到測定的準確性。統(tǒng)。否則，會影響到測定的準確性。 測試項目參數(shù)有很多，根據(jù)功能可以測試項目參數(shù)有很多，根據(jù)功能可以將其分為三個部分將其分為三個部分 檢測參數(shù)檢測參數(shù) 校準參數(shù)校準參數(shù) 監(jiān)測性參數(shù)監(jiān)測性參數(shù) 一、分析檢測參數(shù)一、分析檢測參數(shù) 分析檢測參數(shù)是指項目分析應(yīng)

47、具備分析檢測參數(shù)是指項目分析應(yīng)具備的基本參數(shù)，包括被分析項目：的基本參數(shù)，包括被分析項目：名稱名稱單位單位檢測方法檢測方法主主/ /副波長副波長反應(yīng)方向反應(yīng)方向試劑量和樣品量試劑量和樣品量反應(yīng)時間和計時時間反應(yīng)時間和計時時間1 1被分析項目名稱被分析項目名稱 項目名稱常以項目的英文縮寫來表示項目名稱常以項目的英文縮寫來表示 ALT PchE DBil Ua TBAALT PchE DBil Ua TBA AST Glu TC Urea AST Glu TC Urea ALP HbA1C TG SCr ALP HbA1C TG SCr GGT Alb HDL-C CCr GGT Alb HDL-

48、C CCr LDH TP LDL-C hs-CRP LDH TP LDL-C hs-CRP CK preAlb ApoAI ASO CK preAlb ApoAI ASO Amylase TBil ApoB AF Amylase TBil ApoB AF Ref to Tietz Fundamentals of Clinical Ref to Tietz Fundamentals of Clinical ChemistryChemistry2.2.單位單位(Unit)(Unit) 臨床化學(xué)檢驗中的計量單位應(yīng)為法定計量臨床化學(xué)檢驗中的計量單位應(yīng)為法定計量單位。單位。 離子如鉀、鈉、氯、總碳酸氫鹽

49、以離子如鉀、鈉、氯、總碳酸氫鹽以及含量較大的代謝物如葡萄糖、總膽固及含量較大的代謝物如葡萄糖、總膽固醇、甘油三酯、尿素、醇、甘油三酯、尿素、L-L-乳酸、乳酸、-羥羥基丁酸的計量單位為基丁酸的計量單位為mmol/L.mmol/L.對于含量相對較低的代謝物，如尿酸、對于含量相對較低的代謝物，如尿酸、膽汁酸等，其計量單位為膽汁酸等，其計量單位為mol/L mol/L 。 19791979年國際生化學(xué)會為使酶活性單位與年國際生化學(xué)會為使酶活性單位與國際單位制（國際單位制（SI)SI)相一致，規(guī)定相一致，規(guī)定1 1個催量的個催量的每單位為：規(guī)定的條件下，每單位為：規(guī)定的條件下，1 1秒鐘轉(zhuǎn)化的秒鐘轉(zhuǎn)化

50、的1mol1mol底物的酶量。底物的酶量。 酶的計量單位為酶的計量單位為“katalkatal”( (符號符號kat)kat)，含量以含量以Kat/LKat/L表示。由于表示。由于katal/Lkatal/L單位較大，單位較大，臨床仍以臨床仍以U/LU/L表示，前者轉(zhuǎn)化為后者需乘以表示，前者轉(zhuǎn)化為后者需乘以16.6716.67。1 U : umol/min1kat:mol/s1kat=16.67 U1U=1umol/min =(1/1000)/(1/60) mol/s1kal=(1/60)/(1/1000) U 對于蛋白，包括總蛋白、白蛋對于蛋白，包括總蛋白、白蛋白以及其他體液中的特定蛋白的濃

51、白以及其他體液中的特定蛋白的濃度單位根據(jù)含量的大小以度單位根據(jù)含量的大小以g/Lg/L或或mg/Lmg/L等單位表示。等單位表示。2. 2. 反應(yīng)溫度選擇反應(yīng)溫度選擇 IFCCIFCC推薦的酶催化活性濃度測定溫推薦的酶催化活性濃度測定溫度為度為3737。 臨床化學(xué)實驗室所做其他項目，如臨床化學(xué)實驗室所做其他項目，如血糖、血脂等也都用血糖、血脂等也都用3737測定。測定。 1979 1979年，年，IFCCIFCC制定了酶活性測定的制定了酶活性測定的總則，提出酶測定的條件，如底物濃度、總則，提出酶測定的條件，如底物濃度、pHpH、緩沖液種類和濃度、輔酶和輔因子以及測定緩沖液種類和濃度、輔酶和輔因

52、子以及測定的延滯期、測定酶活性的時間間隔等，應(yīng)控的延滯期、測定酶活性的時間間隔等，應(yīng)控制在最適條件下，以保證酶具有最大的催化制在最適條件下，以保證酶具有最大的催化活性。此后其陸續(xù)發(fā)布了活性。此后其陸續(xù)發(fā)布了ASTAST、ALTALT、LDHLDH、CKCK、GGTGGT、ALPALP、AMYAMY等酶在等酶在3030測定參考方測定參考方法法; ; IFCC IFCC第一批發(fā)布的酶測定參考方第一批發(fā)布的酶測定參考方法規(guī)定酶反應(yīng)溫度為法規(guī)定酶反應(yīng)溫度為3030，是因為金，是因為金屬鎵的熔點為屬鎵的熔點為29.929.9容易標(biāo)化。但在容易標(biāo)化。但在實際工作中，當(dāng)室溫超過實際工作中，當(dāng)室溫超過2525

53、時，生時，生化分析儀控制酶反應(yīng)溫度有困難?；治鰞x控制酶反應(yīng)溫度有困難。 20022002年又重新發(fā)布了年又重新發(fā)布了3737新的測新的測定參考方法（見表定參考方法（見表1 1）。）。 3. 3. 波長選擇波長選擇單波長單波長 多選在指示物最大吸收波長處此時檢測具有最多選在指示物最大吸收波長處此時檢測具有最高的靈敏度和最好的穩(wěn)定性。高的靈敏度和最好的穩(wěn)定性。雙波長雙波長 由于生化分析儀多采用光電二極管陣列由于生化分析儀多采用光電二極管陣列檢測，很容易做雙波長檢測。檢測，很容易做雙波長檢測。 雙波長檢測的原理是同時檢測兩個波長雙波長檢測的原理是同時檢測兩個波長下的吸光度，即用主波長的吸光度減去副

54、波下的吸光度，即用主波長的吸光度減去副波長的吸光度來計算待測物的含量。長的吸光度來計算待測物的含量。 第二波長，即副波長設(shè)置的主要作用來第二波長，即副波長設(shè)置的主要作用來補償發(fā)光燈每次閃動給結(jié)果造成的差異。補償發(fā)光燈每次閃動給結(jié)果造成的差異。副波長的選擇原則：副波長的選擇原則： 副波長應(yīng)趨近于主波長，但吸光副波長應(yīng)趨近于主波長，但吸光度應(yīng)為度應(yīng)為“0 0”。 如干擾物（內(nèi)源性色源，如溶血、如干擾物（內(nèi)源性色源，如溶血、乳糜）在主波長和副波長處吸收量相乳糜）在主波長和副波長處吸收量相同，那么副波長的設(shè)置就可以有效地同，那么副波長的設(shè)置就可以有效地減少干擾物造成的偏差。減少干擾物造成的偏差。 副波

55、長如果設(shè)置的不合適，會導(dǎo)致實驗副波長如果設(shè)置的不合適，會導(dǎo)致實驗結(jié)果出現(xiàn)系統(tǒng)偏差。結(jié)果出現(xiàn)系統(tǒng)偏差。 例如，以例如，以NADHNADH為指示物的測定項目，選為指示物的測定項目，選擇擇340nm340nm為測定波長，副波長應(yīng)選在為測定波長，副波長應(yīng)選在400nm400nm左左右合適，如選在右合適，如選在380nm380nm，因為，因為380nm380nm處處NADHNADH具具有吸收，會影響測定結(jié)果。染料結(jié)合法來測有吸收，會影響測定結(jié)果。染料結(jié)合法來測定某些物質(zhì)的含量；定某些物質(zhì)的含量； 很多染料在可見區(qū)就有吸收，此時應(yīng)觀很多染料在可見區(qū)就有吸收，此時應(yīng)觀察不同濃度待測物與染料結(jié)合后是否有等吸察

56、不同濃度待測物與染料結(jié)合后是否有等吸收的波長，如有，則應(yīng)選擇等吸收處作為測收的波長，如有，則應(yīng)選擇等吸收處作為測定的第二波長。定的第二波長。4. 4. 測定方法與讀點時間的選擇測定方法與讀點時間的選擇 （1 1）終點法：）終點法： 一定反應(yīng)條件下一定反應(yīng)條件下反應(yīng)達到平衡，反應(yīng)反應(yīng)達到平衡，反應(yīng)液的吸光度不再增加液的吸光度不再增加( (或降低或降低) )，吸光度的，吸光度的增加增加( (或降低或降低) )與被測定物的濃度成正比。與被測定物的濃度成正比。 應(yīng)用終點法測定的項目有血清總蛋白、應(yīng)用終點法測定的項目有血清總蛋白、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸、總膽固葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸、總膽

57、固醇、甘油三酯、總膽紅素、結(jié)合膽紅素、高醇、甘油三酯、總膽紅素、結(jié)合膽紅素、高密度脂蛋白密度脂蛋白- -膽固醇、鐵、鈣、鎂等。膽固醇、鐵、鈣、鎂等。 這類測定檢測的波長一般都在可見光區(qū)，這類測定檢測的波長一般都在可見光區(qū)，受樣本色源的影響小。受樣本色源的影響小。 終點測定法是最常用的分析法。優(yōu)點是終點測定法是最常用的分析法。優(yōu)點是吸光度信號變化大，吸光度穩(wěn)定，對孵浴溫吸光度信號變化大，吸光度穩(wěn)定，對孵浴溫度的精度、時間等的要求不高，所以重復(fù)性度的精度、時間等的要求不高，所以重復(fù)性好、精密度高。好、精密度高。 對于用酶作為催化劑來檢測代謝物的對于用酶作為催化劑來檢測代謝物的測定，反應(yīng)的級別為一級

58、，反應(yīng)體系中各測定，反應(yīng)的級別為一級，反應(yīng)體系中各組分的含量均較大，反應(yīng)達到平衡的時間組分的含量均較大，反應(yīng)達到平衡的時間一般為一般為2-3min2-3min。如反應(yīng)達到平衡的時間過。如反應(yīng)達到平衡的時間過長，說明試劑的質(zhì)量不高或試劑失效。長，說明試劑的質(zhì)量不高或試劑失效。 對于化學(xué)測定方法，反應(yīng)一般比較迅對于化學(xué)測定方法，反應(yīng)一般比較迅速，一般在反應(yīng)后速，一般在反應(yīng)后1-2min1-2min反應(yīng)就可以達到反應(yīng)就可以達到平衡。平衡。根據(jù)監(jiān)測讀點的不同，終點法還可以分為：根據(jù)監(jiān)測讀點的不同，終點法還可以分為：一點終點法：生物樣品與相應(yīng)的試劑在一點終點法：生物樣品與相應(yīng)的試劑在反應(yīng)系統(tǒng)（反應(yīng)杯）內(nèi)

59、充分混合，在一定反應(yīng)系統(tǒng)（反應(yīng)杯）內(nèi)充分混合，在一定溫度下，經(jīng)過一定時間的反應(yīng)，通過比色溫度下，經(jīng)過一定時間的反應(yīng)，通過比色系統(tǒng)測得反應(yīng)平衡后在特定的波長下吸光系統(tǒng)測得反應(yīng)平衡后在特定的波長下吸光度值，讀取的吸光度值由微機系統(tǒng)處理并度值，讀取的吸光度值由微機系統(tǒng)處理并計算測定結(jié)果。計算測定結(jié)果。兩點終點法：兩點終點法：生物樣品與所用雙試劑中試劑生物樣品與所用雙試劑中試劑1 1充分混合，在充分混合，在一定溫度下孵浴一定時間時，在特定波長下，一定溫度下孵浴一定時間時，在特定波長下，讀取吸光度值，然后加入啟動反應(yīng)試劑啟動讀取吸光度值，然后加入啟動反應(yīng)試劑啟動主反應(yīng)，在反應(yīng)達到平衡時，第二次讀取吸主反

60、應(yīng)，在反應(yīng)達到平衡時，第二次讀取吸光度值。兩次吸光度差值由微機系統(tǒng)處理并光度值。兩次吸光度差值由微機系統(tǒng)處理并計算測定結(jié)果。計算測定結(jié)果。 兩點終點法的優(yōu)點是可以減低樣本空白兩點終點法的優(yōu)點是可以減低樣本空白對測定的影響。對測定的影響。 但由于第一試劑的組成（如但由于第一試劑的組成（如pHpH等）和第等）和第二試劑不同，所以兩點終點法對于內(nèi)源性色二試劑不同，所以兩點終點法對于內(nèi)源性色原對測定的干擾的排除可能是有限的。要確原對測定的干擾的排除可能是有限的。要確認色原物質(zhì)對測定影響的程度仍然必須做干認色原物質(zhì)對測定影響的程度仍然必須做干擾實驗。擾實驗。 （2 2）一級動力學(xué)法：）一級動力學(xué)法： 動