生物藥物分析與檢測：第七章 雜志與安全檢查

1、標(biāo)題 第七章 雜志與安全檢查第一節(jié) 藥物的雜質(zhì)和雜質(zhì)限量檢查 一、雜質(zhì)的種類和來源 雜質(zhì)（impurities）是指： 1. 有毒副作用的物質(zhì) 2. 本身無毒副作用，但影響藥物的穩(wěn)定性和療效的物質(zhì)（一）雜質(zhì)的種類 藥物中的雜質(zhì)按來源分為 1. 一般雜質(zhì)：指在自然界中分布廣泛，在多種藥物生產(chǎn)和貯藏過程中容易引入的雜質(zhì)。如酸、堿、水份、重金屬等。一般雜質(zhì)其檢查方法收載在中國藥典的附錄中。 2. 特殊雜質(zhì)：指某一個或某一類藥物的生產(chǎn)或貯藏過程中引入的雜質(zhì)。如阿司匹林中的游離水楊酸、異煙肼中的游離肼、甾體激素中的其他甾體。特殊雜質(zhì)檢查方法收載在中國藥典正文各藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。（二）藥物中雜質(zhì)的來源1.

2、 生產(chǎn)過程中引入（1）原料、反應(yīng)中間體及副產(chǎn)物 （2）試劑、溶劑、催化劑類 （3）生產(chǎn)中所用金屬器皿、裝置以及其他 不耐酸、堿的金屬工具所帶來的雜質(zhì)2. 貯藏過程中產(chǎn)生 水解、氧化、分解、異構(gòu)化、晶形轉(zhuǎn)變、聚合、潮解和發(fā)霉等 易發(fā)生水解反應(yīng)的結(jié)構(gòu)： 酯、內(nèi)酯、酰胺、鹵代烴、苷類等易發(fā)生氧化反應(yīng)的結(jié)構(gòu)： 醚、醛、酚羥基、巰基、亞硝基、雙鍵等（三）藥物的純度與化學(xué)試劑的純度 藥物的純度考慮雜質(zhì)的生理作用，藥品只有兩個等級：合格或不合格。 化學(xué)試劑有很多等級，如基準(zhǔn)試劑、優(yōu)級純（GR）、分析純（AR）、化學(xué)純（CP）、色譜純、光譜純。二、雜質(zhì)的限量檢查(一)雜質(zhì)限量檢查方法 雜質(zhì)限量指藥物中允許雜質(zhì)

3、存在的最大量。通常用百分之幾或百萬分之幾（ppm）來表示。 1. 對照法 取限度量的雜質(zhì)對照品配制成對照液，與一定量的供試品配制成的供試品溶液，在相同的條件下處理，比較反映結(jié)果，以判斷供試品中所含有的雜質(zhì)是否符合限量規(guī)定。 特點：不需知道雜質(zhì)的準(zhǔn)確含量3. 比較法 測定雜質(zhì)的絕對含量，如測定吸收度、pH值等，與規(guī)定限量值比較。 特點：準(zhǔn)確測定雜質(zhì)的量，不需對照品 2. 靈敏度法 系指在供試品溶液中加入試劑，在一定反應(yīng)條件下，不得有正反應(yīng)出現(xiàn)。 特點：不需對照品 （二）雜質(zhì)限量的計算供試品量允許雜質(zhì)存在的最大量雜質(zhì)限量=供試品量標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液體積雜質(zhì)限量=例1，檢查某藥物中的的砷鹽，取標(biāo)準(zhǔn)

4、砷溶液2ml（每1ml相當(dāng)于1g的As）制備標(biāo)準(zhǔn)砷斑，砷鹽限量為0.0001，應(yīng)取供試品的量為 A. 0.20g B. 2.0g C0.020g D. 1.0g E. 0.10g已知：c1 g/ml1106 g/mlV2ml L0.0001%一、氯化物檢查法（一）原理：對照法 第二節(jié) 一般雜質(zhì)檢查（二）檢查方法 除另有規(guī)定外，取各藥品項下規(guī)定量的供試品，加水溶解使成25ml（溶液如顯堿性，可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸10m1；溶液如不澄清，應(yīng)濾過；置50ml納氏比色管中，加水使成約40m1，搖勻，即得供試溶液。另取各藥品項下規(guī)定量的標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液，置50ml納氏比色管中，加稀硝酸10m1，

5、加水使成40m1，搖勻，即得對照浴液。于供試溶液與對照溶液中，分別加入硝酸銀試液1.0m1，用水稀釋使成50m1，搖勻，在暗處放置5分鐘，同置黑色背景上，從比色管上方向下觀察，比較，即得。（三）測定條件 1. 標(biāo)準(zhǔn)NaCl溶液 10gCl/ml，50ml溶液中含5080g的Cl所顯渾濁梯度明顯，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)NaCl溶液58ml。 2. 反應(yīng)需在硝酸酸性條件下進行，且以50ml供試溶液中含稀硝酸10ml為宜。（1）加速AgCl渾濁的形成； （2）產(chǎn)生較好的乳濁； （3）避免弱酸銀鹽如碳酸銀、磷酸銀以及氧化銀沉淀的形成。 3. 試劑：硝酸銀 5. 避光、暗處放置5分鐘后比濁，因氯化銀見光易分解。 4

6、. 供試液和對照液稀釋后，再加硝酸銀溶液，使生成白色渾濁而不是白色沉淀。 6. 比濁方法：同置于黑色背景上，自上向下觀察。 7. 平行操作，操作溫度一般控制在3040。例2. 中國藥典 （2005年版） 規(guī)定，檢查氯化物雜質(zhì)時，一般取用標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液（10gCl/mL）58mL的原因是（ ）A. 使檢查反應(yīng)完全B. 藥物中含氯化物的量均在此范圍C. 加速反應(yīng)D. 所產(chǎn)生的濁度梯度明顯E. 避免干擾 二、硫酸鹽檢查法（一）原理:對照法（二）測定條件 1. 標(biāo)準(zhǔn)K2SO4溶液0.1mg/mL，50mL溶液中含0.10.5mg的所顯渾濁梯度明顯，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)K2SO4溶液15mL。 2. 反應(yīng)需在鹽酸

7、酸性條件下進行，且以50mL供試溶液中含稀鹽酸2mL為宜。 3. 試劑：氯化鋇 4. 供試液和對照液稀釋后，再加氯化鋇溶液，使生成白色渾濁而不是白色沉淀 5. 比濁方法：同置于黑色背景上，自上向下觀察。 例3：藥物中硫酸鹽檢查時，所用的標(biāo)準(zhǔn)對照液是（ ） A. 標(biāo)準(zhǔn)氯化鋇 B. 標(biāo)準(zhǔn)醋酸鉛溶液 C. 標(biāo)準(zhǔn)硝酸銀溶液 D. 標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液 E. 以上都不對 三、鐵鹽檢查法1. 原理：對照法（一）硫氰酸鹽法ChP（2005）、USP（28）2. 檢查方法 除另有規(guī)定外，取各藥品項下規(guī)定量的供試品，加水溶解使成25ml，移置50ml納氏比色管中，加稀鹽酸4ml與過硫酸銨50mg，用水稀釋使成 35m

8、1后，加30%硫氰酸銨溶液3ml，再加水適量稀釋成50ml，搖勻；如顯色，立即與標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液一定量制成的對照溶液（取各藥品項下規(guī)定量的標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液，置50ml納氏比色管中，加水使成25ml，加稀鹽酸4ml與過硫酸銨50mg，用水稀釋使成35m1后，加30%硫氰酸銨溶液3ml，再加水適量稀釋成50ml，搖勻）比較，即得。3. 測定條件 （1）用FeNH4(SO4)212H2O（硫酸鐵銨）配制標(biāo)準(zhǔn)鐵貯備液（加入硫酸防止Fe3+的水解），標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液臨用前稀釋而成，標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液10g Fe3+/ml，50ml溶液中含1050g的Fe3+顯色梯度明顯，一般取標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液1.05.0ml。（2）反應(yīng)需在鹽酸酸性條

9、件下進行，且以50ml供試溶液中含稀鹽酸4ml為宜。 （3）試劑：硫氰酸銨。加過量硫氰酸銨，使反應(yīng)向正反應(yīng)方向進行。（4）檢查Fe2+和Fe3+ （5）鐵鹽檢查時，加氧化劑氧化Fe2+為Fe3+。加過硫酸銨可氧化Fe2+為Fe3+，同時可防止光線使硫氰酸鐵還原或分解褪色。硝酸后加熱也可氧化Fe2+為Fe3+。（6）比色方法：同置于白色背景上，自上向下觀察。4. 干擾及排除（1）為了提高靈敏度或供試管與對照管色調(diào)不一致時，可用正丁醇提取后，分取正丁醇層比色。 （2）具環(huán)狀結(jié)構(gòu)的有機藥物，需經(jīng)700800熾灼破壞處理后再依法檢查。 （二）巰基醋酸法 （BP：對照法）本法靈敏度較高，但試劑較貴 例4

10、. 中國藥典（2005年版）規(guī)定，硫氰酸銨法檢查鐵鹽時，加入過硫酸氨的目的是（ ） A. 使藥物中鐵鹽都轉(zhuǎn)變?yōu)镕e3+ B. 防止光線使硫氰酸鐵還原或分解褪色 C. 使產(chǎn)生的紅色產(chǎn)物顏色更深 D防止干擾 E便于觀察、比較 四、重金屬檢查法（以鉛為代表）中國藥典（2005年版）共收載四法。 2. 測定條件（1）用硝酸鉛配制標(biāo)準(zhǔn)鉛貯備液（加硝酸防止Pb2+水解），標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液臨用前稀釋而成，標(biāo)準(zhǔn)硝酸鉛溶液10g Pb2+/ml，適宜比色范圍為35ml溶液中含1020g的Pb2+。（2）本法用2ml pH3.5的醋酸鹽緩沖液控制溶液pH值為33.5。（3）顯色劑：從ChP（1990）開始改用硫代乙酰胺

11、做顯色劑。 （一）第一法硫代乙酰胺法1. 原理：對照法 適用于溶于水、稀酸和乙醇的藥物。 （1）供試品如有色，需經(jīng)處理后方可檢查。 A. 外消色法：在對照管中加稀焦糖溶液或其他無干擾的有色溶液。 B. 內(nèi)消色法 C. 改用第四法，微孔濾膜過濾法3. 干擾及排除 （2）若供試品中有微量Fe3+存在，會氧化硫化氫生成單質(zhì)硫，干擾比色，加入抗壞血酸或鹽酸羥胺（0.51.0g）還原Fe3+為Fe2+，可消除干擾。（3）若供試品為鐵鹽，F(xiàn)e3+在鹽酸中生成HFeCl62-，用乙醚提取除去，剩余微量鐵在氨堿性溶液中，加KCN掩蔽，然后用第三法檢查。（4）若藥物本身能生成不溶性硫化物時，可加入掩蔽劑消除干擾

12、。如ZnSO4中重金屬的檢查，要在堿性下加KCN掩蔽Zn2+后，依第三法檢查。 （二）第二法熾灼殘渣法 適用于含芳環(huán)、雜環(huán)以及不溶于水、稀酸、乙醇及堿的有機藥物。 500600熾灼后的殘渣，經(jīng)處理后，依一法檢查。 1. 原理 對照法2. 操作方法 含鈉及氟的有機藥物應(yīng)用鉑坩堝、石英坩堝或硬質(zhì)玻璃蒸發(fā)皿（因可腐蝕瓷坩堝，帶入大量重金屬）。 （三）第三法硫化鈉法 適用于溶于堿而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的藥物。如磺胺類、巴比妥類。 1. 原理：對照法 2. 測定條件 （1）NaOH堿性條件下（2）顯色劑：硫化鈉 （四）第四法微孔濾膜法 適用于含25g重金屬雜質(zhì)及有色供試液的檢查。 依一法檢查，結(jié)

13、果微孔濾膜過濾后比較色斑。 例5. 中國藥典(2005年版)重金屬檢查法中，所使用的顯色劑是（ ） A. 硫化氫試液 B. 硫代乙酰胺試液 C. 硫化鈉試液 D. 氰化鉀試液 E. 硫氰酸銨試液五、砷鹽檢查法 （一）古蔡法 ChP(2005)、BP(2004)1. 原理：對照法 AsH3遇HgBr2試紙生成黃色棕色的砷斑，與2ml標(biāo)準(zhǔn)砷溶液在相同條件下生成的砷斑比較。2. 操作方法（1）標(biāo)準(zhǔn)砷斑用2ml標(biāo)準(zhǔn)砷溶液制備（2）如供試品需經(jīng)有機破壞，則標(biāo)準(zhǔn)砷溶液應(yīng)平行操作3. 測定條件 （1）標(biāo)準(zhǔn)砷溶液臨用新配，1gAs/ml。 （2）酸為反應(yīng)物，酸量應(yīng)足夠，所以加濃鹽酸5ml。 （3）酸性氯化亞錫

14、及碘化鉀的作用是：A. 還原As5+為As3+，加快反應(yīng)速度；B. 碘化鉀被氧化生成的I2又可被氯化亞錫還原為I-，I-與反應(yīng)中生成的Zn2+能形成穩(wěn)定的配位離子，有利于生成砷化氫的反應(yīng)不斷進行；C. 氯化亞錫與鋅作用，在鋅表面形成鋅錫齊，使氫氣均勻而連續(xù)地發(fā)生。 （4）醋酸鉛棉花的作用是消除鋅粒及供試品中少量硫化物的干擾，醋酸鉛棉花60mg裝管高度6080mm。 （5）鋅粒應(yīng)無砷（6）砷斑不穩(wěn)定，應(yīng)立即觀察4. 干擾及排除（1）供試品若為硫化物、亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽時，加HNO3，使氧化成硫酸鹽，以除去干擾，如硫代硫酸鈉中砷鹽的檢查。 （2）供試品若為鐵鹽，需先加酸性氯化亞錫試液，將Fe3+

15、還原為Fe2+。如枸櫞酸鐵銨中砷鹽的檢查。（3）具環(huán)狀結(jié)構(gòu)的有機藥物，要先行有機破壞后再進行檢查。 常用的有機破壞方法： 堿破壞法：石灰法、無水碳酸鈉堿融法； 酸破壞法：如葡萄糖中砷鹽的檢查。（4）本法適用于不含Sb或含Sb量小于100g的供試品。 （二）Ag-DDC法 ChP(2000)、USP（24）1. 原理：對照法 砷化氫與Ag-DDC（二乙基二硫代氨基甲酸銀）溶液作用，還原Ag-DDC為紅色膠態(tài)銀，直接比色或于510nm波長處測定吸收度，進行比較。 用有機堿吸收反應(yīng)產(chǎn)生的HDDC有利于反應(yīng)的進行。USP（28）用吡啶，ChP（2005）用三乙胺。 本法適用于含Sb量小于500g的供試

16、品，可用于砷鹽的限量檢查和微量砷鹽的含量測定。例6：古蔡氏法中，SnC12的作用有： A. 使As5+As3+ B. 除去H2SC. 除去I2 D. 組成鋅錫齊E. 除去其它雜質(zhì) 例7：Ag-DDC法檢查砷鹽的原理為：砷化氫與AgDDC吡啶作用，生成的物質(zhì)是（ ） A. 斑砷B. 銻斑 C. 膠態(tài)砷 D. 三氧化二砷 E. 膠態(tài)銀六、澄清度檢查法 檢查藥物中的微量不溶性雜質(zhì)，用作注射劑的原料藥一般應(yīng)作此項檢查。 1. 檢查方法：對照法 2. 濁度標(biāo)準(zhǔn)液的配制 中國藥典規(guī)定用濁度標(biāo)準(zhǔn)液作為澄清度檢查的標(biāo)準(zhǔn)。 反應(yīng)原理：烏洛托品在偏酸性條件下水解產(chǎn)生甲醛，甲醛與肼縮合生成甲醛腙，不溶于水，形成白色

17、渾濁。 級 號 0.5 1 2 3 4 濁度標(biāo)準(zhǔn)原液（ml） 2.5 5.0 10.0 30.0 50.0水（ml） 97.5 95.0 90.0 70.0 50.0. 100硫酸肼溶液與10烏洛托品溶液等量混合配制濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液 濁度標(biāo)準(zhǔn)原液 濁度標(biāo)準(zhǔn)液（5個級號）3. 判斷：藥典中規(guī)定的“澄清”，系指供試品溶液的澄清度相同于所用溶劑，或未超過0.5號濁度標(biāo)準(zhǔn)液。4. 溶劑：水、酸、堿、有機溶劑有機酸的堿金屬鹽類藥物強調(diào)用“新沸過的冷水”七、溶液顏色檢查法 控制藥物中有色雜質(zhì)限量的方法。 ChP(2005)采用三種方法檢查：目視比色法、分光光度法、色差計法。1. 目視比色法 即與標(biāo)準(zhǔn)比色液比

18、較的方法，全波長范圍定性觀察。觀察方法： 標(biāo)準(zhǔn)比色液的配制 2. 分光光度法 單一波長定量3. 色差計法 本法是通過色差計直接測定供試溶液和標(biāo)準(zhǔn)比色液與水之間的色差值，對其顏色進行定量表述和分析的方法。 測色儀器一般為光電積分型色差計。 八、干燥失重法測定 干燥失重是指藥物在規(guī)定條件下經(jīng)干燥后所減失的重量，主要是水分，也包括其它揮發(fā)性物質(zhì)。測定方法有：常溫干燥失重法、干燥劑干燥法、減壓干燥法等。 （一）常壓恒溫干燥法 適用于受熱較穩(wěn)定的藥物。干燥溫度一般為105。 干燥操作：一般在干燥溫度2干燥24hr再稱至恒重。第二次及以后各次稱重均應(yīng)在規(guī)定條件下繼續(xù)干燥1h后進行。 熾灼殘渣：第二次及以后

19、各次稱重均應(yīng)在規(guī)定條件下繼續(xù)熾灼.5h后進行。 （二）干燥劑干燥法適用于受熱易分解或揮發(fā)的供試品。干燥劑：硅膠、濃硫酸、P2O5 。（三）減壓干燥法 適用于熔點低，受熱不穩(wěn)定或水分難趕除的藥物。 除另有規(guī)定外，壓力應(yīng)在2.67kPa（20mmHg）以下。 例. 干燥失重測定的方法有（ ）A熾灼（500600）法B常壓恒溫干澡法C減壓干燥法D干燥劑干燥法E減壓干燥劑干燥法九、易炭化物檢查法 檢查藥物中遇H2SO4易炭化或易被氧化呈色的微量有機雜質(zhì)。 方法：H2SO4炭化后與對照液比較。 對照液：（1）“溶液顏色檢查”項下的標(biāo)準(zhǔn)比色液；（2）由比色用氯化鈷液，比色用重鉻酸鉀液，比色用硫酸銅液按規(guī)定

20、方法配成的對照液；（3）高錳酸鉀液 檢查不含金屬的有機藥物或揮發(fā)性無機藥物中混入的無機雜質(zhì)(金屬氧化物或無機鹽類)。1. 原理 樣品炭化后+ H2SO4濕潤700800熾灼至恒重?zé)胱茪堅蛩峄曳郑?限量一般為0.1%0.2% 十、熾灼殘渣檢查法 3. 注意事項 （1）供試品的取樣量應(yīng)根據(jù)熾灼殘渣限量和稱量誤差決定。 （3）若殘渣需留作重金屬檢查，則500600熾灼至恒重。 （2）含氟的藥物對瓷坩堝有腐蝕，應(yīng)采用鉑坩堝。（4）加硫酸處理是使雜質(zhì)轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的硫酸鹽，并幫助有機物炭化例. 熾灼殘渣檢查法一般加熱恒重的溫度為（ ） A. 500600 B. 600700 C. 700800 D. 8

21、001000 E. 10001200例. 熾灼殘渣的限量一般為（ ）A. 1B. 0.51C. 0.40.5D. 0.20.3E. 0.10.2第三節(jié) 特殊雜質(zhì)的檢查方法 一、利用藥物和雜質(zhì)在物理性質(zhì)上的差異（一）臭味及揮發(fā)性質(zhì)的差異 例如：黃凡士林中異性有機物檢查：本品2.0g,直火加熱無辛味。濃過氧化氫中不揮發(fā)性雜質(zhì)檢查：10ml水浴蒸干殘渣15mg （二）顏色差異 例如：磺胺嘧啶中有色偶氮苯化合物的檢查：取本品2.0g，加NaOH試液10ml，加水25ml，與黃色3號比色液比，不得更深。 （三）溶解行為的差異 例如：吡哌酸中堿中不溶物吡哌酸甲酯（I）和（II）檢查 （四）旋光性質(zhì)的差異

22、例如：硫酸阿托品中莨菪堿的檢查：本品溶液(50mg/ml)-0.4 （五）對光吸收性質(zhì)的差異 1. 紫外分光光度法： 例如: 地蒽酚中二羥基蒽醌的檢查 再如：苯丙醇中苯丙酮的檢查：可利用供試液的吸收度比來控制雜質(zhì);純品苯丙醇A247nm/A258nm= 0.59; 99.5% 時A247nm/A258nm= 0.79;因此規(guī)定供試品A247nm/A258nm 0.79; 即所含苯丙酮 0.5%.2. 原子吸收分光光度法： 是通過測定藥物中所含待測元素原子蒸氣，吸收發(fā)自光源的該元素特定波長的程度，以求出藥物中待測元素的 含量。 3.紅外分光光度法： 主要用于藥物中無效或低效晶型檢查，如甲苯咪唑中

23、A晶型檢查。4.熒光分析法 例如：利血平中氧化產(chǎn)物檢查利血平(無熒光)3,4-二去氫利血平(I)(黃綠色熒光)3,4,5,6-四去氫利血平(II)(藍色熒光) (六)吸附或分配性的差異 1.薄層色譜法(TLC) (1)雜質(zhì)對照品法 例如:鹽酸左旋咪唑中檢查2,3-二氫-6-苯基咪唑2,1-b噻唑鹽 硅膠G 苯:甲醇:冰HAC 樣品 對照品。（2）主成分自身對照法2.紙層析法(PC) 常用于極性大的藥物的分離、分析，如地高辛中的有關(guān)雜質(zhì)的檢查。3.高效液相色譜法(HPLC)（1）峰面積歸一化法：L% = Ai /(Ai + A主）100%（2）不加校正因子主成分對照法 對照品液為供試品的稀釋液，

24、進樣測得A主；供試品液進樣測得Ai。其Ai A主即為合格。（3）內(nèi)標(biāo)法加校正因子測定供試品中雜質(zhì)的含量 對照品+內(nèi)標(biāo) 進樣求校正因子（f)=(As/Cs)/(AR/CR) 供試品+內(nèi)標(biāo) 進樣求AX.AS,則雜質(zhì)濃度CX = f AX/(AS/CS)4.氣相色譜法(GC) 主要用于藥物中揮發(fā)性的雜質(zhì)檢查，其檢查方法與HPLC法相同。二、利用藥物和雜質(zhì)在化學(xué)性上的差異（一）酸堿性的差異 1.規(guī)定消耗滴定液體積 例如己酸羥孕酮中正己酐、對甲苯磺酸檢查：(NaOH 0.02mol/L) 取本品0.20g + 中性乙醇 + 溴麝香草酚藍，微藍色0.50ml 2.pH法 例如乙琥胺中2-甲基-2-乙基丁二

25、酸檢查：0.01g/ml pH3.04.5. 3.指示劑法 例如苯巴比妥中苯基丙二酰脲檢查：其水溶液不得使甲基橙顯紅色。（二）氧化還原性的差異 例如：鹽酸嗎啡中阿樸嗎啡的檢查：后者可被碘氧化生成水溶性綠色化 合物。因此ChP規(guī)定：本品50mg +4mlH2O+1dI2 + 5ml乙醚，乙醚層不得顯紅色；水層不得顯綠色。（三）雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生沉淀 例一、間苯二酚中鄰苯二酚檢查：后者+Pb(Ac)2 白色 ChP規(guī)定：本品0.5g+10mlH2O+2d稀醋酸+0.5ml Pb(Ac)2 ，不得發(fā)生混濁，即為合格。（四）雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色 例一、鹽酸普萘洛爾中游離-萘酚檢查：利用后者可

26、與重氮鹽發(fā)生重氮化-偶合反應(yīng)，生成偶氮染料。 ChP規(guī)定：供試品20mg+乙醇與10%NaOH液各2ml+重氮苯 磺酸試液1ml,放置3min；如顯色，與0.3ml -萘酚對照液（20g/ml)比較不得更深。（五）雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生氣體 ChP附錄中收載氰化物的兩種檢查方法：第一法：改進普魯士藍法 原理：CN- + 酒石酸 HCN Fe(CN)64- Fe4Fe(CN)6第二法：氣體擴散-三硝基苯酚鋰法 原理：HCN擴散進入三硝基苯酚鋰試液，生成異紅紫酸鹽，在 500nm波長處測定吸收度。Fe2+Fe3+ 第四節(jié) 熱源檢查法細菌內(nèi)毒素檢查細菌內(nèi)毒素檢查法是判斷供試品中細菌內(nèi)毒素是否符合規(guī)定

27、。 內(nèi)毒素(Endotoxin)即革蘭氏陰性菌細胞壁的脂多糖，其毒性成分為類脂A。菌體死亡崩解后釋放出來。細菌內(nèi)毒素檢查包括兩種方法，即凝膠法和光度測定法，后者包括濁度法和顯色基質(zhì)法。供試品檢測時，可使用其中任何一種方法進行試驗。當(dāng)測定結(jié)果有爭議時，除另有規(guī)定外，以凝膠法結(jié)果為準(zhǔn)。無菌檢查 毒性試驗法 急性毒性一、 基本概念二、 實驗設(shè)計一、基本概念定義及試驗意義 藥物一次或24小時內(nèi)一次劑量分兩次給予試驗動物，觀察動物2-10天產(chǎn)生的毒性反應(yīng)和死亡情況。 短時間內(nèi)， 快速而劇烈的毒性反應(yīng) 試驗意義了解新藥急性毒性的強弱 通過多種動物之間毒性反應(yīng)的對比，為預(yù)測對人的毒性反應(yīng)提供參考。為長期毒性試驗及特殊毒性試驗選擇劑量提供依據(jù)。 結(jié)合測定藥物在胃腸的吸收情況。 提示急性中毒死亡機制和其它藥理活性信息。其它，新藥在研制過程中，特別是早期階段多由實驗室小量合成提供。一、基本概念LD50定義50動物死亡統(tǒng)計學(xué)劑量相關(guān)參數(shù):劑量反應(yīng)（死亡）曲線的斜率致死所需要的時間毒效應(yīng)癥狀一、基本概念 表1-1 某些化學(xué)物的半數(shù)致死量（LD50）化學(xué)物物 種LD50（mg/kg)乙醇小 鼠10,000 氯化鈉小 鼠 4,000硫酸亞鐵大 鼠 1,500硫酸嗎啡大 鼠 900苯巴