實(shí)驗(yàn)室試劑配制知識

1、實(shí)驗(yàn)室試劑配制知識Part實(shí)驗(yàn)試劑的類型及用途按照其貯存狀態(tài)來分：試劑有已配好的即用型試劑和需要配制的試劑。前者，如：一些性質(zhì)較穩(wěn)定的、或單劑量包裝的試劑。后者，如：大多數(shù)的藥 物、試劑。當(dāng)然，要配制的占大部分。按其用途來分，可分為：藥物：通常就是我們要考察其藥效或機(jī)制的化合物或中草藥提取物。又可分為原 料藥和制劑。原料藥一般可直接應(yīng)用。制劑有的要進(jìn)行提取，有的可直接用。動物模型用試劑：如造糖尿病的STZ、造肝損傷的氨基半乳糖胺、四氯化碳、造睪 丸損傷的鎘劑、造成肺損傷的博來霉素、造成腎損傷的腺喋吟、造成炎癥的角叉菜 膠等等。動物模型用飼料：這個(gè)一般是固體狀態(tài)。也有半固體的。液體狀態(tài)的較少。如

2、： 高脂飼料中要配以膽固醇、丙基硫氧喀咤、膽酸鹽、雞蛋黃、豬油等。動物基本操作用試劑：如：麻醉用試劑、動物除毛的試劑硫化鈉、動物標(biāo)記的試 劑苦味酸、取血或插管用的試劑肝素、消毒用的75%乙醇、碘伏、新潔爾滅、動 物手術(shù)后護(hù)理的抗生素等。各類緩沖液或基礎(chǔ)分散介質(zhì)：如：PBS、生理鹽水、檸檬酸緩沖液、克氏液、任 氏液、配難溶性藥物用的0。5%CMC Na液、DMSO液、增溶劑泊洛沙姆（與 藥物混勻后再加入溶劑中）保存標(biāo)本的試劑：如：10%福爾馬林、中性福爾馬林、4%多聚甲醛、Bouints液 等。清洗液：如：稀鹽酸液、重銘酸鉀洗液。按其使用時(shí)限來分：即配即用型：如：STZ極易分解，配制后要迅速全部

3、用完，不然完全失效。一些 酶類的試劑，配制后也要盡快用完。已配好的顯色劑，通常也是較短時(shí)間內(nèi)用 完。對水不穩(wěn)定的藥物，如：青霉素。盡快用完。可在一周內(nèi)使用短效型：主要是一些亞穩(wěn)定狀態(tài)的溶液。可隨溫度、氧氣的作用 而逐漸分解而達(dá)不到使用的要求。如：蛋白電泳中的過硫酸皴，是一種促進(jìn)氧自 由基產(chǎn)生的輔助試劑，促進(jìn)凝膠的形成，時(shí)間久了就不能產(chǎn)生自由基，故而一般 在一周內(nèi)使用，最多兩周。有些緩沖液，尤其是做離體實(shí)驗(yàn)的，一般低溫保存下 盡快地用完。不然可影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。一個(gè)月以內(nèi)的中效型：許多試劑在配好后，如果能低溫保存，能用一個(gè)月以上。 三個(gè)月以上的長效型：不少性質(zhì)穩(wěn)定，且對濃度準(zhǔn)確度要求不是太高的溶液，

4、可 長期保存使川。像福爾馬林、生理鹽水、CMC Na溶液。按其純度可分為：化學(xué)純:一般化學(xué)實(shí)驗(yàn)用的，含少量雜質(zhì).純度一般應(yīng)在98%以上。分析純:做分析實(shí)驗(yàn)用的，含微量雜質(zhì)，純度一般應(yīng)在99%以上,縮寫:A.R。色譜純:液相流動相的要求。生化純:好像在一些生化試劑里有這么寫的.縮寫:B.R。要注意的是，有些廠家有標(biāo)明優(yōu)級純（G.R）的,實(shí)際上，可認(rèn)為相當(dāng)于分析純的級別。 還有就是級別最高的:標(biāo)準(zhǔn)品、對照品。其實(shí)這二者差別不大。我們通?；煊眠@兩 個(gè)詞。按藥典規(guī)定，我們通常用的基準(zhǔn)物質(zhì)稱為對照品。而抗生素類（注意，不 是合成抗菌藥）的基準(zhǔn)物質(zhì)則稱為標(biāo)準(zhǔn)品。而事實(shí)上，我們似乎總是把“標(biāo)準(zhǔn)品” 當(dāng)作最高

5、級別，而把對照品當(dāng)作一個(gè)比“標(biāo)準(zhǔn)品”低一點(diǎn)的級別。事實(shí)并非如 此，這兩個(gè)詞應(yīng)是一樣的。只是標(biāo)準(zhǔn)品特指抗生素或其它生物制品。其中，標(biāo)準(zhǔn) 品特指用于生物檢定、抗生素或生化試劑中含量或效價(jià)檢定的基準(zhǔn)物質(zhì)，按效價(jià) 單位計(jì)，與國際標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定。動物實(shí)驗(yàn)中，用到分析純及以上級別的比較多。做 藥動學(xué)實(shí)驗(yàn)，液相檢測時(shí)要注意，要用色譜純試劑，不然嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。按其毒性分：有無毒、低毒、中等毒性、劇毒幾種。Part2試劑的溶解度這是對大多數(shù)固體試劑而言。如果是液體試劑，則就要看它能否有溶劑中混勻或 者分散。一般而言，我們可以把試劑分為易溶性和難溶性的兩大類。又可分為脂 溶性的親水性兩大類。下面我們就來談?wù)勅绾闻?/p>

6、制這些試劑。易溶性的：像絕大多數(shù)的酸、堿、鹽類試劑，都是易溶性，且一般是水溶性的。 這類試劑很多是用雙蒸水配制的。難溶性的：難溶性的有的是脂溶性比較高的，可以用油來配制。但有時(shí)候不能用 油，但又要混勻，這時(shí)我們只好加助懸劑或者增溶劑，或者用潛溶劑。助懸劑， 如：竣甲基纖維素鈉（CMC Na）;增溶劑，如:泊洛沙姆188 ;潛溶劑，如: 乙醇。也有少數(shù)用DMSO來配的。DMSO號稱萬能溶劑。但實(shí)際使用時(shí)，要考 慮可能引起一些藥理效應(yīng)，從而對實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生干擾。能不用盡量不用。在配制難溶性物質(zhì)的時(shí)候，有的可以加加熱，有的可以攪拌，有的可以用超聲。 要特別注意不要盲目加熱。一是有些物質(zhì)一加熱就變質(zhì)了，

7、產(chǎn)生了分解產(chǎn)物；二 是有些物質(zhì)加熱就失效了，如一些酶或蛋白質(zhì)類的物質(zhì)。有些物質(zhì)的溶解性是我們所熟知的。配這類物質(zhì)的時(shí)候自然就輕車熟路了。但 是，有些試劑我們并不知道。該如何弄呢？方法有三。一是查看試劑包裝的說 明。一般上面會有一些信息。二是上網(wǎng)查詢。google上找到的網(wǎng)頁或是論文都可 以。三是要試。可以用小劑量的做預(yù)試，看看溶解度如何。值得注意的是，乙醇 是一種非常好的溶劑。通常與水以不同濃度混合，有時(shí)可達(dá)到比較滿意的效果。Part3配制好的試劑的使用和保存一是配制試劑的容器的選擇。通常我們會選擇身邊一切可利用的容器。用得比較 多的是玻璃瓶。極少量的試劑可以用子彈頭型的Doff管來裝。小的有

8、青霉素瓶，又 稱西林瓶。大一點(diǎn)的有輸液瓶，有100ml,25()ml,5()0ml的不等。有時(shí)也可用一些高分 子材料的瓶子裝試劑，這樣的瓶子一般我們是用來裝些有毒的試劑。因?yàn)橛猛炅司?可以丟棄。平時(shí)不妨收集各種小瓶子，很多時(shí)候能派上用場。二是標(biāo)簽。貼標(biāo)簽是個(gè)必不可少的工作。有人喜歡用記號筆寫上標(biāo)簽。要注意有 油性筆和水性筆兩種，前者寫出字較牢固，不易洗掉；而后者通常一沾水就蹤跡 全無。所以注意要用油性筆寫。但此法有個(gè)缺點(diǎn)，就是下次用此瓶配其它試劑 時(shí)，字跡不易洗掉，有些麻煩。也可以在紙上寫好，然后貼上透明膠。也可以在 醫(yī)用膠布上寫上字，貼上去。不過這種方式有時(shí)亦可被水弄得字跡不清。這幾種 方法

9、可酌情選擇。要特別指出的是，標(biāo)簽上一定要寫上日期這樣，可以讓自己能知道試劑配了多大 時(shí)間，如果出現(xiàn)問題，有一個(gè)證據(jù)。也可以讓別人知道其大致是否在有效期內(nèi)。 三是濃度的準(zhǔn)確性。濃度要準(zhǔn)確，要注意幾點(diǎn)。一是正確選擇量器。像配對照品 溶液，一般是用容量瓶，而且要選合適的規(guī)格。配一般的試劑，用量筒，切記不 要用量杯。量杯是很粗略的量器。配體積小的溶液，通常要用移液槍，或微量進(jìn) 樣器。二是有些量特別小的試劑(通常是5mg以下)，可以直接在其貯存容器里 加溶劑。如：PCR、蛋白電泳中某些試劑就是極微量的裝在Doff管中，甚至基本 看不見。有些在配之前還要高速離心，便極微量的粉末沉積于管底。不然，一打 開蓋

10、，試劑粉末就損失掉了。三是要注意配好的試劑要冷卻到室溫最終量取體積 才是準(zhǔn)確的。如：有些試劑在配制過程中要加熱至沸騰，溶劑損失不少，要待其 冷卻至室溫再加溶劑補(bǔ)足。四是有關(guān)特殊要求。有的試劑配制前要加溫。如：冰醋酸在溫度16度以下，是結(jié) 成凍塊了，要緩緩加溫后使用。DMSO也會出現(xiàn)類似現(xiàn)象。有的試劑配好后要求 遮光，可選擇黑紙或者黑塑料來包裹。有的試劑不是用水來配，而是要別的溶 劑。如：PMSF,要用異丙醇來配制。而且是用時(shí)再加入水中。因其在水中會較 快失效。有的試劑是要求配好后再過濾的。如有失誤，宜反復(fù)過濾直到符合要 求。有的試劑是極易氧化的，通常要加抗氧劑。如：6-羥基多巴胺(6-0HDA

11、), 通常是用0.2%維生素C水溶液來配。關(guān)于試劑的使用，有一些注意事項(xiàng)需要我們謹(jǐn)記。一是配好后盡快使用。配好的試劑因大多以液體形式存在，其保質(zhì)期較原料 試劑要短，易失效。因此，要規(guī)劃好實(shí)驗(yàn)后，再開始配試劑，不要把試劑配 好老長時(shí)間了，才開始做。二是要注意反復(fù)取用試劑時(shí)，不要污染。以移液槍取液時(shí)，注意更換槍頭。 以移液管取液時(shí)，注意要洗滌，多余的液體不要返回瓶內(nèi)，而應(yīng)放掉。三是在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)中不要用不同批次的試劑。因?yàn)閷?shí)驗(yàn)中，講究的就是齊同 對比。如果用不同的試劑，結(jié)果出來就不知道是什么引起的差異了。所以， 配試劑時(shí)，盡量配足量，寧愿在一次實(shí)驗(yàn)后有剩余，而不能不足。四是使用別人配制的試劑時(shí)，一定

12、要弄清楚來源及相關(guān)信息。在同一個(gè)實(shí)驗(yàn) 室，做同一類實(shí)驗(yàn)口寸，我們通常會共用一些試劑。這時(shí)，我們一定要注意問 清楚。不然，實(shí)驗(yàn)出了問題就虧大了。如：做蛋白電泳時(shí)，所用的緩沖液， 過硫酸鏤，丙烯酰胺，都是相同的，只是臨用時(shí)的配比不同。要注意不要用 過期的試劑。五是試劑用完后，相關(guān)器具要洗滌。有些是必須取完后立即洗滌，以免別人 或自己在污染的情況下誤用。如：丙烯酰胺溶液，有毒。有些是在一小段落 后將所用器具洗滌干凈。有些殘留液體不洗，時(shí)間稍隔長一點(diǎn)，就比較難洗 了。在一些實(shí)驗(yàn)室，因有一些人要共用一些器具，尤其要注意這一點(diǎn)。就像 吃完飯要洗碗一樣。這也是一個(gè)良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣。Part4試劑保存中的常見問

13、題及解決方式。配好的試劑，在保存的過程中，或多或少會出現(xiàn)一些問題。有的稍加處理即可， 不影響使用；有的則不能繼續(xù)使用，甚至產(chǎn)生毒性。因此，了解試劑常見的一些 可能變質(zhì)的現(xiàn)象，有助于我們掌握一般規(guī)律，并能順利解決實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的問題。 A物理性質(zhì)的變化最常見的有：產(chǎn)生沉淀或結(jié)晶、產(chǎn)生絮狀物、顏色變化、黏度變化、產(chǎn)生霉菌、 產(chǎn)生氣味。產(chǎn)生沉淀或結(jié)晶：最常見的是一些緩沖液，當(dāng)溫度比較低的時(shí)候，可能有些物質(zhì) 是飽和溶液，低溫可使其析出。當(dāng)恢復(fù)至室溫時(shí)，即溶解。比如，配含氯化鋅的 多種離子的溶液，打開冰箱發(fā)現(xiàn)有沉淀，置室溫下?lián)u勻后，已澄清，不影響使 用?？捡R斯亮藍(lán)如配制不當(dāng)，即有可能出現(xiàn)藍(lán)色沉淀。一般來說，

14、酌情調(diào)整其的 中乙醇濃度可以避免。產(chǎn)生絮狀物：有些物質(zhì)在低溫下析出成絮狀，一般不影響使用。但要仔細(xì)觀察， 如絮狀物是其它物質(zhì)，或者是菌絲，則不可用。對于含水用含糖的溶液尤其要注忌。顏色變化：這一變化可能是在配制過程中加溫后，過一段時(shí)間出現(xiàn)的；也有可能 是貯存過程中受光照所引起的；也有可能是溶液中各物質(zhì)相互作用所引起的。一 般是顏色變深。黏度變化：主要是一些高分子物質(zhì)的“溶液”。其實(shí)高分子是分散在其中，不是真 正的溶解。如：明膠溶液，配制時(shí)間過長，有的就會變稀，這可能是明膠的質(zhì)量 問題。產(chǎn)生霉菌：常見于含水的，含糖分較高的一些溶液。主要是保存不當(dāng)所致。一般 而言，配制過程中注意操作，配好后置冷藏

15、，短時(shí)間內(nèi)是不會出現(xiàn)霉菌的。產(chǎn)生氣味：這主要是可能溶液中的物質(zhì)相互反應(yīng)產(chǎn)生了一些氣體，或者本身溶解 其的中氣體跑了出來，也有的是本身固有的氣味變化。如：產(chǎn)生氨氣氣味、失去 醋酸氣味等等。B化學(xué)性質(zhì)的變化如：PH的變化、失去氧化性、失去還原性。PH的變化：當(dāng)懷疑試劑出現(xiàn)問題的時(shí)候，我們可以測一下其PH。如不在正常范 圍內(nèi)，即可認(rèn)為已變質(zhì)。失去氧化性：有一次用濃硫酸做慈酮-硫酸法測多糖的含量，發(fā)現(xiàn)配好的試劑沒有 反應(yīng)，沒出現(xiàn)應(yīng)有的顏色。于是把濃硫酸取一滴滴于報(bào)紙上，發(fā)現(xiàn)根本沒有像往 常一樣將報(bào)紙?zhí)蓟?。固此硫酸已不可用。這可以說是用通過簡單的觀察來判斷試 劑有無變質(zhì)。同樣，像雙氧水等一些強(qiáng)氧化劑可通

16、過類似的檢測來判斷。失去還原性：像維生素C等還原性物質(zhì)，當(dāng)變質(zhì)時(shí)一般有顏色變化。C生物學(xué)性質(zhì)的變化如：酶失活、生物分子降解等。這種變化并不是一下就可以看出來的。往往是做實(shí)驗(yàn)中，或者是實(shí)驗(yàn)做完后結(jié)果 不如意時(shí)，才會考慮可能是試劑出了問題。如何解決試劑保存中出現(xiàn)的問題呢？一般而言，除少數(shù)不影響使用的現(xiàn)象外，試劑都得重配。Part5有毒危險(xiǎn)的試劑的配制及保存首先，我們來了解一下毒性的基本常識。按其作用時(shí)間長短，可分為：急性毒性和長期毒性按其作用的分布，可分為：局部毒性和全身毒性按其作用部位及機(jī)制，可分為：臟器毒性：如：氯仿有肝毒性；SDS粉末可沉積于肺血液毒性：如：苯有血液毒性。神經(jīng)毒性：如：丙烯酰

17、胺有神經(jīng)毒。致癌：如：漠乙錠可致癌，烏拉坦可致癌。其它毒性：如：過敏、皮膚刺激等。對我們而言，了解其毒性機(jī)制是很重要的。這樣，我們就知道如何防護(hù)，也知道 在萬一沾上有毒試劑時(shí)該如何處理。對于局部毒性和一些臟器的慢性毒性，我們往往是不會特別地?fù)?dān)心。但對于導(dǎo)致 血液、神經(jīng)系統(tǒng)的毒性，以及致癌的毒性，卻是我們感到最恐怖的。事實(shí)上，只 要我們做到了安全防護(hù)，基本上也沒有多大問題。即使對于一些致癌物，我們也 應(yīng)該膽大心細(xì)地使用。我們的身體也不是那么脆弱的，還有免疫系統(tǒng)在起作用。 做好必要的防護(hù)工作是最重要的。下面我們來具體談一談如何在配制毒性試劑過程中防護(hù)自己。1、要了解試劑的毒性機(jī)理。這是防護(hù)的一個(gè)基

18、本前提。一般標(biāo)明有毒性的物 質(zhì)，其機(jī)理大多清楚。這樣，我們對于毒性試劑心里有個(gè)底。像對于氯仿這樣的 溶劑，我們知道其長期應(yīng)用可致脂肪肝。但平常用的時(shí)候偶爾灑一點(diǎn)到皮膚上， 我們清洗即可，也就沒有多大的擔(dān)心。雙氧水，濃度不高的話，萬一有一點(diǎn)弄到 皮膚上也不是很擔(dān)心，只是可能會脫掉一點(diǎn)皮。但不至于有生命之虞。相反，如 果滴上一滴致癌的試劑，那我們就會感到很恐怖了。因此，了解其毒性機(jī)理，我 們就會面對試劑心中有數(shù)，不至于太不重視，也不至于過分擔(dān)心。2、要了解常用的毒性物質(zhì)的性狀及預(yù)防措施。針對不同毒物，我們有不同的措 施。如：毒物為揮發(fā)性物質(zhì)，我們可考慮戴上防毒的面具，在有通風(fēng)機(jī)械的地方 配制，配好后蓋緊；對易揚(yáng)起粉塵入肺的物質(zhì)，我們戴口套，并盡可能輕拿輕 放；對于易致癌及有潛在致癌物質(zhì)，可戴一次性手套。3、了解中毒的癥狀，不怕一萬，只怕萬一。我們常常不可能百分之百不接觸到 有毒物質(zhì)。了解中毒的一些癥狀是很有必要的。如：有的有紅腫、疼痛、眼刺激 性、特異性惡臭等。接觸到皮膚的話，一般情況下我們是用大量水清洗。嚴(yán)重的 話，要去醫(yī)務(wù)室或醫(yī)院處理。在了解上述知識的基礎(chǔ)之上，我們來講一下配制毒