五指毛桃藥材高效液相指紋圖譜的實(shí)驗(yàn)研究

1、五指毛桃藥材高效液相指紋圖譜的實(shí)行研究席萍黃耀海黃月純蔡慶群曹艷芳【摘要】目的創(chuàng)立五指毛桃藥材的高效液相(HPL)指紋圖譜。要領(lǐng)接納高效液相色譜法，選用XDB18色譜柱4.6250,5。柱溫25；檢測(cè)波長(zhǎng)246?；顒?dòng)相為甲醇-水。梯度洗脫：0in，甲醇-水1585；20in，甲醇-水5545，40in；甲醇-水8515；45in，甲醇-水1000；50in，甲醇-水1585。流速1l/in；運(yùn)行時(shí)間50in；檢測(cè)波長(zhǎng)為246n。結(jié)果五指毛桃藥材共有9個(gè)共有峰。結(jié)論實(shí)行要領(lǐng)可行，可為檢測(cè)五指毛桃藥材質(zhì)量操縱尺度提供參考?！娟P(guān)鍵詞】五指毛桃指紋圖譜高效液相色譜法五指毛桃RadixFii為?？浦参锎?/p>

2、葉榕FiushirtaVahl.的枯燥根。最早稱為無爪龍，紀(jì)錄于清代的?生草藥性備要?，如今臨床利用習(xí)稱五爪龍，很多當(dāng)代大型中藥東西書稱之為五指毛桃，商品名亦稱五指毛桃1。2022年版?廣東省中藥藥材尺度?將其以五指毛桃的名稱列入尺度中2。本品為華南地域常用中藥材，味甘，性平，有健脾補(bǔ)肺、利濕舒筋成效，主治脾虛浮腫、食少無力、肺癆咳嗽、冷汗、帶下、產(chǎn)后無乳、風(fēng)濕痹痛、水腫、肝硬化腹水、肝炎、跌打損傷，臨床療效明顯。梅州地域宜將其作為食療常用品，家喻戶曉。研究表白五指毛桃藥材的化學(xué)身分重要是補(bǔ)骨脂素以及佛手內(nèi)酯、油酸、亞油酸、十六酸、十八酸等身分，這些身分在沸水中煎出均能產(chǎn)生香氣,民間風(fēng)俗以其香

3、味的濃重程度來斷定其質(zhì)量的優(yōu)劣。據(jù)文獻(xiàn)檢索有關(guān)五指毛桃的種植技能研究3，構(gòu)造造就研究4、揮發(fā)油身分的闡發(fā)5，6、以及測(cè)定其身分含量的薄層掃描法研究7等均有報(bào)道。但對(duì)五指毛桃藥材指紋圖譜的研究卻未見報(bào)道，為更好地評(píng)價(jià)五指毛桃藥材質(zhì)量的勻稱性和不變性，進(jìn)步其質(zhì)量操縱尺度，我們網(wǎng)絡(luò)了差異產(chǎn)地五指毛桃藥材，接納高效液相色譜法，創(chuàng)立了五指毛桃藥材的指紋圖譜闡發(fā)要領(lǐng)。1東西1.1儀器高效液相色譜儀(HP-1100，安捷倫)；二極管陣列檢測(cè)器DAD；色譜柱：XDB184.6250,5，安捷倫。1.2試藥甲醇(色譜試劑,批號(hào)051105101,天津市四友生物醫(yī)學(xué)技能)；水為超純水；補(bǔ)骨脂素比擬品739-200

4、209(由中國(guó)藥品生物成品檢定所提供)；樣品：五指毛桃藥材共9批見表1，均為當(dāng)年奇怪網(wǎng)羅曬干，托付廣州致信中藥飲片公司在各地網(wǎng)絡(luò)并斷定。見表1。表1五指毛桃藥材泉源略2要領(lǐng)2.1色譜條件色譜柱為Hypersi1DS(2504.0；5)；活動(dòng)相，甲醇-水；梯度洗脫條件：0in，甲醇-水1585；20in，甲醇-水5545；40in，甲醇-水8515；45in，甲醇-水1000；50in，甲醇-水1585；流速，1l/in；柱溫為室溫；進(jìn)樣量，10l；檢測(cè)波長(zhǎng)246n。2.3供試品溶液的制備稱取五指毛桃藥材粉末約5，置錐形瓶中，參加甲醇50l，浸泡留宿，超聲處置懲罰30in，濾過。濾液蒸干，殘?jiān)?/p>

5、甲醇溶解，定容至1l。2.4測(cè)定要領(lǐng)別離細(xì)密汲取比擬品溶液及供試品溶液各10l，注入高效液相色譜儀，紀(jì)錄50in的色譜圖。3結(jié)果3.1細(xì)密度實(shí)行取同一份供試品溶液，一連進(jìn)樣5次，其色譜峰保存時(shí)間的RSD均在0.3%以內(nèi)，峰面積的RSD均在5%以內(nèi)。保存時(shí)間和峰面積根本無顯著變革，切合指紋圖譜技能要求。3.2不變性實(shí)行取同一份供試品溶液，別離在0，2，4，6，12h處檢測(cè)，其色譜峰保存時(shí)間的RSD均在0.2%以內(nèi)，峰面積的RSD均在5%以內(nèi)。表白樣品溶液在12h內(nèi)不變。3.3重復(fù)性實(shí)行取同一批樣品如法制備供試品5份檢測(cè)，其色譜峰保存時(shí)間的RSD均在0.3%以內(nèi)，峰面積的RSD均在5%以內(nèi)。保存時(shí)

6、間和峰面積根本無顯著變革，表白要領(lǐng)重現(xiàn)性較好。3.4重要色譜峰的創(chuàng)立別離細(xì)密汲取比擬品溶液及供試品溶液各10l，注入高效液相色譜儀，紀(jì)錄50in的色譜圖。檢測(cè)指認(rèn)結(jié)果9批五指毛桃藥材的指紋圖譜，與參照物補(bǔ)骨脂素的色譜峰S相對(duì)應(yīng)的位置上，有一重要色譜峰，其占總峰面積的百分比約為50.2662.27。50in內(nèi)有9個(gè)色譜峰是9批五指毛桃共有的。其在5號(hào)峰和6號(hào)峰保存時(shí)間約在23.5in和27in的位置更具有特性性，為重要共有峰，5號(hào)峰對(duì)應(yīng)為補(bǔ)骨脂素的色譜峰S。因此，終極確定9個(gè)色譜峰為共有指紋峰見圖1，共有指紋峰的保存時(shí)間見表2，峰面積百分含量見表3。圖1五指毛桃藥材色譜峰圖略表29批五指毛桃樣品

7、共有指紋峰的保存時(shí)間略表3指紋圖譜重要共有峰的峰面積百分含量略3.5樣品指紋圖譜相似度闡發(fā)五指毛桃9批藥材樣品指紋圖譜與相似度盤算機(jī)軟件SPSS得出的共有形式比擬力，其相似度結(jié)果見表4。4討論由于五指毛桃藥材身分龐大，實(shí)行中選擇單一活動(dòng)相無法到達(dá)很好的分散結(jié)果，而接納梯度洗脫可以在整個(gè)闡發(fā)時(shí)間段50in內(nèi)，各色譜峰峰形鋒利，并能盡大概多地對(duì)各組分舉行很好的分散，到達(dá)較好分散結(jié)果。我們觀察了甲醇水差異比例以及差異洗脫梯度的試驗(yàn)，結(jié)果表白，本實(shí)行所接納的活動(dòng)相：0in，甲醇-水1585；20in，甲醇-水5545；40in，甲醇-水8515；45in，甲醇-水1000；50in，甲醇-水1585。

8、其分散結(jié)果較好。在檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇中，接納二極管陣列檢測(cè)器DAD檢測(cè)，在215，246，270，290和320n中的色譜圖舉行比力，結(jié)果在246n處的色譜圖中出峰較多，峰形較好，并且是五指毛桃藥材重要身分補(bǔ)骨脂素的最大汲取波長(zhǎng),因此我們拔取246n作為其指紋圖譜的檢測(cè)波長(zhǎng)。表4與共有形式比力的五指毛桃樣品相似度評(píng)價(jià)SPSS軟件略實(shí)行中制備五指毛桃樣品液，我們選擇7種提取溶劑體系即50%甲醇，甲醇，乙醇，醋酸乙酯，乙醚，氯仿，石油醚舉行觀察。結(jié)果表如今同樣超聲30in的環(huán)境下，以甲醇的提取結(jié)果最正確。而對(duì)提取要領(lǐng)的觀察，以甲醇為提取溶媒，別離接納浸泡24h，加熱回流2h，索氏提取4h和超聲提取30

9、in等4種提取要領(lǐng)的提取服從，創(chuàng)造甲醇熱回流和甲醇超聲提取對(duì)五指毛桃藥材舉行處置懲罰所得色譜圖峰數(shù)較多，更能表現(xiàn)藥材原有的面目。顛末實(shí)行比力，用甲醇超聲提取30in的操縱相對(duì)簡(jiǎn)樸，結(jié)果較佳，末了選定其作為本實(shí)行的提取要領(lǐng)。實(shí)行結(jié)果表現(xiàn)，五指毛桃17號(hào)樣品相似度均到達(dá)95%以上，說明其指紋圖譜具有較高的相似性。89號(hào)樣品相似度偏低，與其藥材中參雜較多的莖枝部門有關(guān)。五指毛桃的藥用部位重要是根，但據(jù)市場(chǎng)環(huán)境來看，差異地域接納根莖混用的環(huán)境是存在的。測(cè)定結(jié)果表白，差異產(chǎn)地的五指毛桃藥材指紋圖譜的9個(gè)共有峰保存時(shí)間，均具有較好的重現(xiàn)性；此中，1號(hào)樣品各號(hào)峰均齊備，共有峰面積大，5號(hào)峰和6號(hào)峰的峰面積百

10、分含量高，開端以為它的質(zhì)量最好，這與有關(guān)河源產(chǎn)地的五指毛桃質(zhì)量檢測(cè)最正確的研究報(bào)道符合8；同樣源于河源產(chǎn)地的2號(hào)樣品，其各號(hào)峰也較齊備，但與樣品1比擬，其4號(hào)峰非常的高，且缺少8號(hào)峰，由于它們別離購(gòu)于差異的時(shí)間段，畢竟是何緣故原由造成這種差異，有待日后的觀察研究。因?qū)嵭袟l件限定，我們沒能在各個(gè)產(chǎn)地網(wǎng)羅多批次的樣品舉行試驗(yàn)，本實(shí)行也只是對(duì)五指毛桃藥材指紋圖譜作開端的探究研究，為進(jìn)步其質(zhì)量操縱尺度提供檢測(cè)要領(lǐng)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1鐘小清,徐鴻華.五指毛桃品種考據(jù)J.中藥材，2000,23(6)：361.2廣東省食品藥品監(jiān)視辦理局.廣東省中藥藥材尺度,第1冊(cè)S.廣州：廣東科技出書社,2022:35.3鐘小清,徐鴻華,陳安琴.五指毛桃種植技能J.中藥研究與信息，2000,2(7):17.4蔣林,黃清春,等.五指毛桃構(gòu)造造就研究J.中藥材，2022,27(8)：547.5林勵(lì),鐘小清,魏剛.五指毛桃揮發(fā)性身分的G-S闡發(fā)J.中藥材，2000,23(