動(dòng)物組織中核酸的提取與分離實(shí)驗(yàn)方案_第1頁
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文檔簡介

1、動(dòng)物組織中核酸的提取與分離生藥1011 王瓊 1實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)材料與儀器實(shí)驗(yàn)步驟2一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)離心技術(shù)、掌握離心機(jī)的使用方法。了解本實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)思路3二、實(shí)驗(yàn)原理 核酸包括兩部分：核糖核酸（RNA）、脫氧核糖核酸（DNA）,廣泛存在于生物細(xì)胞中，本實(shí)驗(yàn)室從動(dòng)物肝組織分離提取RNA和DNA，用酸水解法使之水解產(chǎn)生基本組成成分，戊糖、磷酸、堿基，然后分離鑒定。動(dòng)物組織中細(xì)胞中的RNA和DNA大部分與蛋白質(zhì)上的之類雜質(zhì)，然后用10%Nacl溶液提取的核酸的鈉鹽，再加入乙醇使核酸鈉沉淀出。核酸鈉微溶于冷水，不溶于乙醇，加熱時(shí)和酸的鈉鹽形成清澈的溶液。RAN和RNA均可以硫酸水水解生成磷酸、嘌呤

2、、與嘧啶堿和戊糖。41）磷酸 磷鉬酸 鉬藍(lán) （顯藍(lán)色）2）嘌呤堿 嘌呤銀化合物（灰褐色、絮狀）3）脫氧核糖 -羥基-酮基戊醛 藍(lán)色化合物4）核糖 糖醛 藍(lán)色復(fù)合物鉬酸銨 Vc 或 氨基萘酚磺酸硝酸銀 硫酸 二苯胺硫酸 3，5-二羥基甲苯5三、實(shí)驗(yàn)材料與儀器1、材料 豬肝、2%三氯醋酸、95%乙醇、5%硫酸、濃氨水、鉬酸氨、3，5二羥基甲苯、二苯胺、5%硝酸銀、氨基萘酚磺酸2、器材 離心機(jī)、離心管、玻璃棒、濾紙、小燒杯、水域加熱爐、試管、沸水浴鍋6四、實(shí)驗(yàn)步驟 1、制備勻液：稱取豬肝置于研缽中加入細(xì)沙少許，充分研磨制備成勻液，加入等量的生理鹽水。 2、分離抽提: 1)將豬肝勻漿倒入離心管內(nèi)，立即加入2%三氯醋酸4ml，用玻璃棒攪拌然后靜置3min，離心3500轉(zhuǎn)每分鐘，2分鐘。 2）傾去上層酒精液，在沉淀中加入10%Nacl溶液4ml攪勻，再置于沸水中加熱8min，并用玻璃棒不斷攪拌，取出冷卻后再離心（3000轉(zhuǎn)每分鐘，兩分鐘） 7 3）將上清液倒入小燒杯中，去等量的95%乙醇，逐步滴加小燒杯內(nèi)邊加邊搖勻，即可見到白色沉淀逐漸出現(xiàn)，靜置10分鐘后，將小燒杯內(nèi)容物倒入離心管，離心（3500轉(zhuǎn)每分鐘，2分鐘） 4）傾去上清液即得到核酸鈉的白色沉淀。在含核酸的離心管內(nèi)加入5%硫酸4ml，用玻

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